转染肿瘤坏死因子-α及MDR1反义RNA逆转乳腺癌多药耐药的研究

目的:转染肿瘤坏死因子-α(TNF-α)cDNA和多药耐药基因(MDR1)的反义RNA到乳腺癌耐药细胞株MCF-7/ADR中进行表达,并观察它们在乳腺癌耐药逆转中的作用.方法:应用RT-PCR和DNA重组技术构建反义绿色荧光蛋白pEGFP-MDR1融合蛋白表达载体和红色荧光蛋白pDsRed2-TNF-α融合蛋白表达载体,分别和同时导入乳腺癌耐药细胞株MCF-7/ADR中进行表达,检测转染前后细胞的生长曲线、细胞凋亡程度、MDR1-mRNA和P糖蛋白(P-gp)表达情况及对ADR敏感性的变化.结果:转染后的细胞生长明显减慢,凋亡率显著增加,MDR1-mRNA和P糖蛋白(P-gp)表达明显降低,对ADR的耐药性明显下降,敏感性增加.结论:联合运用不同的逆转耐药机制,将TNF-αcDNA及MDR1反义RNA分别或同时导入乳腺癌耐药细胞中,能有效达到逆转耐药的目的.     

乳腺癌多药耐药机制研究进展

乳腺癌癌细胞表现多药耐药性 (ｍｕｌｔｉｄｒｕｇｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ ,ＭＤＲ)往往是导致临床化疗失败的主要原因之一。ＭＤＲ有两种不同的表型 ,一种是对第一次化疗就产生耐药 ,称天然性耐药 (ｎａｔｕｒａｌｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ)或称内源性耐药 (ｉｎｔｒｉｎｓｉｃｒｅｓｉｓ ｔａｎｃｅ) ;另一种是在化疗过程中产生耐药 ,故称获得性耐药(ａｑｕｉｒｅｄｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ)。ＭＤＲ的特点是一旦对某种化疗药物产生耐药 ,对其他结构上无关、作用靶点和机制不同的抗癌药物产生交叉耐药。目前研究认为 ,肿瘤产生ＭＤＲ的分子机制主要…     

负向调节多药耐药基因1转录逆转肿瘤细胞多药耐药

目的　研究负向调节肿瘤细胞多药耐药基因 1(mdr 1)转录激活部位对其多药耐药的逆转作用。方法　多种ASODN/质脂体复合物转染乳腺癌耐药细胞株后 ,逆转录 聚合酶链反应 (RT PCR)检测细胞的多药耐药 1mRNA、免疫组织化学标记链霉素卵白素生物素法 (LSAB)检测细胞P 糖蛋白表达、罗丹明 12 3外排实验检测P 糖蛋白的转运功能。结果　转染反义寡核苷酸 (ASODN ) 4 8h后 ,封闭MA区 (主要转录起始部位 )、MI区 (次要转录起始部位 )、C区 (CAAT盒子 )、G区 (GC盒子 )实验细胞的mdr 1指数分别为 1 4、1 9、1 6、2 1,P 糖蛋白表达阳性率分别为 14 %、4 3%、2 6 %、39% ,罗丹明相对荧光强度分别为 12 5 %、83%、10 2 %、77%。其中封闭MA区和C区实验细胞与耐药细胞的差异有显著性P <0 0 5。结论　封闭mdr 1启动子的主要转录起始部位和启动子上游的CAAT盒子可降低肿瘤细胞mdr 1mRNA和P 糖蛋白含量 ,抑制其转运功能。负向调节肿瘤细胞的这些转录调节部位可通过抑制mdr 1mRNA的转录逆转其多药耐药。封闭mdr 1启动子的次要转录起始部位和上游的GC盒子则无明显作用。     

肿瘤多药耐药机制及其逆转

肿瘤多药耐药(multidrug resistence,MDR)是制约肿瘤成功化疗的重要因素之一.人恶性肿瘤对化疗的耐药性可分为先天性耐药和获得性耐药;根据耐药谱又分原药耐药(primary drug resisance,PDR)和多药耐药(multidrug resis-tence,MDR).PDR只对诱导的原药产生耐药,而对其它药不产生产交叉耐药;MDR是指肿瘤细胞对一种抗肿瘤药物产生耐药性的同时,对结构和作用机制完全不同的其他抗肿瘤药物产生交叉耐药性的现象[1].本文主要向大家简单介绍MDR的机制及其逆转的部分研究进展,以供大家参考.     

多药耐药相关蛋白及其介导的肿瘤多药耐药

多药耐药相关蛋白与P－糖蛋白均属ABC转运蛋白超家族,但它们的结构、功能、耐药机制等并不完全相同。     

肿瘤多药耐药基因与表达的分子生物学研究进展

随着抗癌药的广泛应用，肿瘤耐药性问题逐渐引起重视。肿瘤细胞的耐药是肿瘤化疗的主要障碍，造成肿瘤治疗困难和复发。耐药细胞一旦对一种天然药物耐受，对其它多种结构不同作用方式也不同的抗肿瘤药物产生交叉耐药，即多药耐药（ｍｕｌｔｉｄｒｕｇｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ...     

RNA干扰沉默缺氧诱导因子-1α逆转乳腺癌的耐药性

目的观察RNA干扰缺氧诱导因子（HIF）-1α逆转乳腺癌耐药性的作用.方法构建靶向缺氧诱导因子-1α的短发夹状小干扰RNA基因并转染到人乳腺癌耐阿霉素细胞株MCF-7/ADR中.常规MTY法检测细胞存活率,外排实验检测细胞的P-糖蛋白转运功能,逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）检测细胞的HIF-1α、多药耐药基因1（mdr-1）mRNA变化,Western印迹法观察干扰前后HIF-1α、P-糖蛋白的变化.结果测序证实成功构建HIF-1α的短发夹状siRNA真核表达载体pSilencer-HIF,转染空质粒ADR/neo不影响肿瘤细胞的耐药性.MTT法检测ADR/shRNA组细胞存活率由76%下降到43%,Rh123荧光强度由22.0%升为86.6%,ADR/shRNA组中HIF-1α、mdr-1mRNA、蛋白水平显著降低（P＜0.05）,且Spearman相关分析HIF-1α和mdr-1指数在三组中显示呈正相关（r=0.816,P＜0.01）.结论成功构建了HIF-1α的短发夹状siRNA真核表达载体pSilencer-HIF,可显著降低乳腺癌MCF-7/ADR细胞中HIF-1α表达从而起到逆转肿瘤耐药的作用.     

HIF-1与肿瘤多药耐药关系的研究进展

缺氧是许多肿瘤的特性,缺氧诱导因子1(HIF- 1)在多种肿瘤中广泛存在,可调控一系列靶基因的转录,对于肿瘤多药耐药(MDR)的形成有着多方面的作用。     

Pgp介导的肿瘤多药耐药逆转研究进展（文献综述）

肿瘤是困扰现代人健康的一大顽症,它发病率高、死亡率高、复发率高、治疗难。而多药耐药 (Multipledrugresist ance, MDR)正是肿瘤难治疗、易复发的主要原因之一。肿瘤多药耐药(MDR),即获得性和原发性多药耐药,指癌细胞发生对许多结构不相关的化疗药交叉抵抗的现象,它是有效化疗的主要障碍之一。肿瘤耐药性分为先天性和获得性,先天性是指化疗前就存在的耐药;获得性是指化疗药物诱导产生的耐药性 [1]。肿瘤多药耐药的机制复杂,有P-糖蛋白(P-glycoprotein, Pgp)增高、多药耐药相关蛋白 (mul tidrugresistance-associatedprotein, MR…     

多药耐药相关蛋白及其介导的肿瘤多药耐药

多药耐药相关蛋白与P-糖蛋白均属ABC转运蛋白超家族,但它们的结构、功能、耐药机制等并不完全相同.     

肿瘤多药耐药机制研究进展

肿瘤多药耐药(MDR)是目前临床肿瘤化疗失败的主要原因之一.关于肿瘤多药耐药产生的机制有多种,针对这些不同的机制来研发相应的逆转药物则是目前解决临床耐药现象的主要途径.就目前国内外肿瘤多药耐药机制的研究进展作一综述.     

不明原因习惯性流产与肿瘤坏死因子水平及肿瘤坏死因子α-308基因多态性的相关性初步研究

目的 研究肿瘤坏死因子（TNF）水平及肿瘤坏死因子α-308基因多态性与不明原因习惯性流产的关系。方法 用放免法测定50例不明原因习惯性流产患者及50例健康对照者血清TNF水平，用聚合酶链反应扩增TNF-α-308基因片段，NcoI内切酶进行限制性酶切反应。结果 50例妊娠高血压综合征患者及50例正常对照TNF-α-308基因型及等位基因频率均无显著性差异，而血浆中TNF水平，不明原因习惯性流产组明显高于对照组（P〈0．05）。结论 炎性反应在不明原因习惯性流产病程中有重要作用，TNFα-308基因多态性与不明原因习惯性流产无关联。     

动脉硬化性脑梗死与肿瘤坏死因子α-238及肿瘤坏死因子α-308基因多态性的关系

目的 探讨肿瘤坏死因子(TNF)α-238及TNFα-308基因多态性与动脉硬化性脑梗死的关系.方法 运用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)技术检测97例动脉硬化性脑梗死(CI组)及141例正常人(对照组)的外周血TNFα-238、TNFα-308基因多态性AA、AG、GG的基因型.结果 CI组TNFα-238 GG、GA和AA基因型频率分别为88.66%、11.34%和0;对照组分别为95.74%、4.26%和0.CI组TNFα-238 G、TNFα-238 A基因频率分别为94.33%、5.67%;对照组分别为97.87%、2.13%.TNFα-238各种基因型频率在CI组与正常对照组之间的差异有统计学意义(均为P<0.05).CI组TNFα-308 GG、GA和AA基因型频率分别为77.32%、8.25%和14.43%;对照组分别为92.20%、5.67%和2.13%.CI组TNFα-308 G、TNFα-308 A基因频率分别为81.44%、18.56%;对照组分别为95.04%、4.96%.TNFα-308各种基因型频率在CI组与正常对照组之间的差异有统计学意义(均为P<0.05).结论 TNFα-238和TNFα-308基因多态性AA、AG、GG基因型与CI有关联.     

肿瘤坏死因子α-308基因多态性与牙周病相关性

目的探讨肿瘤坏死因子-α308位点基因多态性与牙周炎易感性的关系。方法采用序列特异引物PCR方法 （SSP-PCR）方法检测了78例重度慢性牙周炎（CP）患者和70例健康对照组的TNFα-308（G/A）位点基因多态性。结果 CP患者TNFα-308各基因型（GG,GA,AA）频率分别为70.5%、0%和29.5%,在对照者中分别为67%,3%和30%二组之间的基因型频率分布的比较,差异没有显著性（χ2=2.29,P〉0.05）;GG和AA的等位基因频率在CP中分别85.3%和14.7%,在对照者中分别为82%和18%,二者之间比较,差异没有显著性（χ2=0.526,P〉0.05）。结论 TNF-α-308基因多态性位点可能不是中国人患牙周病的主要易感位点基因。     

不明原因习惯性流产与肿瘤坏死因子水平及肿瘤坏死因子α-308基因多态性的相关性初步研究

目的研究肿瘤坏死因子(TNF)水平及肿瘤坏死因子α-308 基因多态性与不明原因习惯性流产的关系.方法用放免法测定50例不明原因习惯性流产患者及50例健康对照者血清TNF水平, 用聚合酶链反应扩增TNF-α-308 基因片段,NcoI内切酶进行限制性酶切反应.结果 50例妊娠高血压综合征患者及50例正常对照TNF-α-308基因型及等位基因频率均无显著性差异, 而血浆中TNF水平,不明原因习惯性流产组明显高于对照组(p<0.05).结论炎性反应在不明原因习惯性流产病程中有重要作用,TNFα-308基因多态性与不明原因习惯性流产无关联.     

雄黄对乳腺癌MCF-7/ADM细胞多药耐药的逆转及机制研究

目的　探讨中药雄黄对乳腺癌多药耐药细胞系 (MCF 7/ADM )的逆转作用及可能的逆转机制。方法　药物敏感试验采用四氮唑蓝 (MTT)比色法 ,细胞内药物浓度测定采用荧光分光光度法 ;基因表达水平检测采用RT -PCR法。结果　雄黄在 0～ 2 5 μg/ml浓度范围内对MCF 7/ADM细胞未见明显毒副作用 ;15 μg/ml、2 5 μg/ml雄黄逆转倍数分别为 2 0倍和 2 8倍 ,并能明显抑制mdr 1基因的转录水平。 结论　雄黄可以逆转MCF 7/ADM细胞的多药耐药性 ,并呈剂量依赖性 ;可能的逆转机制为下调mdr 1基因的表达     

乳腺癌新辅助化疗对耐药基因MDR1和MRP表达的影响

目的:探讨乳腺癌新辅助化疗对耐药基因MDR1和MRP表达的影响。方法:采用半定量RT-PCR方法检测20例乳腺癌病人新辅助化疗前、后肿瘤组织中耐药基因MDR1和MRP的表达情况,并采用自身对照研究新辅助化疗对耐药性的影响。结果:化疗前20例乳腺癌组织中有15例(75%)MDR1表达,18例(90%)MRP表达。化疗后,经自身对照检测发现,MDR1的表达无显著差异,而MRP的表达与化疗前相比有显著差异。结论:在乳腺癌中新辅助化疗对耐药基因MDR1的表达无影响,但可增加MRP的表达.     

肿瘤坏死因子-α致胰岛素抵抗

胰岛素抵抗（ｉｎｓｕｌｉｎｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ，ＩＲ）是指胰岛素作用的靶器官、组织（主要为肝脏、肌肉、脂肪组织）对胰岛素生物学效应的反应性降低或丧失，因而产生一系列病理和临床表现。ＩＲ的病因复杂，一般认为有关基因突变所造成的极端ＩＲ很少见，而遗传易感性基础上的环境因素可能起着重要影响，但对其产生的具体机制并不明了。近年来，肿瘤坏死因子（ＴＮＦα）在ＩＲ发生机制中的作用受到了很大关注。本文对ＴＮＦα与ＩＲ的关系作一简要综述。一、ＩＲ时ＴＮＦα过度表达：Ｈｏｔａｍｉｓｌｉｇｉｌ等［１］发现，ｏ…     

肿瘤坏死因子α转化酶的性质及其作用

体内成熟的TNF为 17KD ,其由 2 6KD之前体蛋白在Ala76 ～Val77之间断裂产生 ,催化此过程的酶称为肿瘤坏死因子α转化酶 (TumorNecrosisFactorαConvertingEnzyme ,TACE) ,其确切性质及作用意义 ,目前尚未完全明了 ,本文就此作一简要综述。     

肿瘤坏死因子-α诱导红细胞衰亡的研究

目的 探讨肿瘤坏死因子-α（TN F-α）在红细胞衰亡中的作用.方法 将分离的小鼠红细胞经TNF-α（1 ng/ml）处理6、12、24、48、72 h或在不同质量浓度（0.1、1、10 ng/ml）处理24h后,利用流式细胞仪检测红细胞前向散射（FSC）值的变化、红细胞膜磷脂酰丝氨酸（PS）和神经酰胺的标记率.结果 经TNF-α处理后的小鼠红细胞较对照组于24h后出现FSC减小（（81.5±1.02）％比（87.6±0.55）％,P＜0.05）,膜的PS外露水平和神经酰胺含量增加（（5.5±1.07）％比（2.7±0.17）％,（2.1±0.23）％比（0.7±0.26）％）,差异均有统计学意义（P＜0.01）,且随着时间的推移变化趋势更加明显.结论 TNF-α可诱导红细胞体积缩小,促进红细胞膜PS外露以及神经酰胺的增加,是红细胞衰亡的触发因素.