中国屠宰场生猪中致病性小肠结肠炎耶尔森菌的脉冲场凝胶电泳分析

目的 对中国屠宰场生猪中致病性小肠结肠炎耶尔森菌脉冲场凝胶电泳(PFGE)带型分布进行分析,为该菌防控提供依据.方法 从11个省(直辖市、自治区)屠宰场采集猪咽拭子和猪回盲部肠内容物标本分离小肠结肠炎耶尔森菌,同时对致病性菌株进行PFGE分析.结果 采用PFGE分型用NotⅠ酶切后将763株致病性O∶3血清型菌株分为47个型别,其中K6GN11C30021带型是猪中携带的致病菌株优势PFGE型别,占56.49％(431/763);另外1株O∶9血清型菌株为K6GN11C90004型别.所有的屠宰场皆有多种PFGE带型,不同地区除具有各自的优势型别外存在交叉带型.结论 中国屠宰场生猪中致病性小肠结肠炎耶尔森菌PFGE带型多样,具有一定地域性特征.且猪咽部与回盲部肠内容物中能同时携带多种带型的小肠结肠炎耶尔森菌.应警惕猪中携带的小肠结肠炎耶尔森菌通过污染猪肉及其制品以及环境而感染人类,从而对公共卫生和食品安全构成威胁.     

浙江省部分地区小肠结肠炎耶尔森菌(动物株)分子生物学特征初探

目的：了解浙江省部分地区小肠结肠炎耶尔森菌的血清型别、毒力基因分布等情况。方法：利用常规细菌分离方法从家禽、家畜和鼠类粪便标本中分离小肠结肠炎耶尔森菌，并进行毒力基因检测，同时对血清型O：3、O：5和O：8的菌株进行脉冲场凝胶电泳分析。结果：2004～2005年，从全省各点采集的动物标本中共分离到22株小肠结肠炎耶尔森菌，分布于11个血清型，并以O：8和O：3为主。PCR检测将分离到的22株小肠结肠炎耶尔森菌毒力携带情况分为4型：Ⅰ型（ail^＋、ystA^＋、ystB^-、yadA^＋、virF^＋），Ⅱ型（ail^＋、ystA^＋、ystB^-、yadA^-、virF^-），Ⅲ型（ail^-、ystA^-、ystB^＋、yadA^-、virF^-），Ⅳ型（ail^-、ystA^-、ystB^-、yadA^-、virF^-）。脉冲场凝胶电泳分析，O：3型菌株显示有2种带型，O：5型菌株的带型完全相同，O：8型菌株的带型则存在明显差异。结论：浙江省的从动物分离的小肠结肠炎耶尔森菌以非致病性菌株居多，且存在一定的地区差异。猪是致病性小肠结肠炎耶尔森菌的重要携带者，应警惕致病性小肠结肠炎耶尔森菌通过猪感染人和其它动物以及环境的危险。     

天津蓟县致病性小肠结肠炎耶尔森菌分布调查

目的 了解天津蓟县致病性小肠结肠炎耶尔森菌菌株分布情况.方法 于2006年6月用常规方法从腹泻病患者、家畜的粪便样本中分离小肠结肠炎耶尔森菌,并进行生物化学鉴定、血清分型、相关毒力基因检测以及脉冲场凝胶电泳(PFGE)分析.结果 从腹泻病患者和猪粪便中分离到的5株致病性小肠结肠炎耶尔森菌均为O:3血清型.全部携带毒力基因(ail、ystA、radA、virF),其中4株菌经脉冲场凝胶电泳分析属于同一带型(K6GN11C30021).另有1株带型为KGGN11C30026.结论 该县从腹泻病患者与宿主动物中分离到的致病性小肠结肠炎耶尔森菌有4株属于同一个克隆系,初步推断猪为当地小肠结肠炎耶尔森菌感染人群的主要来源.     

1997-2010年宁夏回族自治区小肠结肠炎耶尔森菌致病性的基因特征

目的 了解宁夏回族自治区小肠结肠炎耶尔森菌主要毒力基因分布情况和致病性小肠结肠炎耶尔森菌分子分型特征。方法 于1997-2010年在宁夏回族自治区共分离得到283株小肠结肠炎耶尔森菌,用PCR法分析其黏附侵袭位点基因(ail)、耐热肠毒素A基因（ystA）、ystB、黏附素基因（yadA）、毒力活化因子基因（virF）;应用限制性内切酶Not Ⅰ酶切致病性小肠结肠炎耶尔森菌染色体DNA进行脉冲场凝胶电泳(PFGE),利用BioNumerics软件进行聚类分析。结果 209株O∶3、O∶9血清型小肠结肠炎耶尔森菌中ail、ystA、yadA、virF毒力基因阳性,ystB为阴性的占97.6％( 204/209);O∶8血清型和未开展血清分型的菌株5种毒力基因全部阴性;11株O∶5血清型有9株5种毒力基因全部阴性。将致病性菌株进行PFGE分型,根据染色体DNA的Not Ⅰ酶切图谱,将29株O∶3血清型分成12个PFGE带型,包含5株以上的优势PFGE带型有2种。180株O∶9血清型菌株分成13个PFGE带型,包含10株以上的优势PFGE带型有4种,各自是从同一地区猪与家鼠、猪与犬、猪与野兔分离。结论 宁夏地区O∶3、O∶9血清型小肠结肠炎耶尔森菌具有致病性,O∶3逐步成为如今的优势血清型;O∶5、O∶8与血清未分型的菌株无致病性。     

吉林省小肠结肠炎耶尔森氏菌生物学特性研究

目的 了解吉林省小肠结肠炎耶尔森氏菌生物学特性。方法 利用血清学、生物化学、分子生物学技术对78株检出菌进行分析。结果 78株小肠结肠炎耶尔森氏菌分出O：3和O：9两个血清型，生物型为3型；毒力基因分布特征为ail^＋、ystA^＋、ystB^-、yadA^＋、virF^＋占60．0％，ail^＋、ystA^＋、ystB^-、yadA^-、virF^-占26．2％，其他型占13．8％；脉冲场凝胶电泳（PFGE）分出2个克隆系7个基因型。结论 利用上述方法能很好分析吉林省小肠结肠炎耶尔森氏菌生物学特性，探讨小肠结肠炎耶尔森氏菌遗传关系，追踪传染源。     

小肠结肠炎耶尔森菌O:9血清型特异性单克隆抗体筛选及其应用

目的利用杂交瘤技术筛选出能分泌小肠结肠炎耶尔森菌O：9血清型特异性单克隆抗体的细胞株,用于该型菌株的鉴定.方法采用ELISA方法筛选克隆株,并用玻片凝集法进行单克隆抗体的特异性鉴定.结果筛选到3株能分泌小肠结肠炎耶尔森菌O：9血清型特异性单克隆抗体的杂交瘤细胞株,分泌的抗体与经鉴定的18株小肠结肠炎耶尔森菌O：9血清型菌株呈阳性反应,而与其他血清型小肠结肠炎耶尔森菌及常见肠道致病菌无交叉凝集反应;应用于小肠结肠炎耶尔森菌野生株分型鉴定时,能准确鉴定出其中的24株O：9血清型菌株,与用日本进口分型血清鉴定、PCR毒力基因检测结果相同.结论筛选获得的细胞株产生的单克隆抗体,用于小肠结肠炎耶尔森菌O：9血清型鉴定,具有很好的型特异性,避免了过去免疫血清制备中繁琐的抗原交叉吸收试验.     

小肠结肠炎耶尔森菌O∶9血清型特异性单克隆抗体筛选及其应用

目的利用杂交瘤技术筛选出能分泌小肠结肠炎耶尔森菌O∶9血清型特异性单克隆抗体的细胞株,用于该型菌株的鉴定。方法采用ELISA方法筛选克隆株,并用玻片凝集法进行单克隆抗体的特异性鉴定。结果筛选到3株能分泌小肠结肠炎耶尔森菌O∶9血清型特异性单克隆抗体的杂交瘤细胞株,分泌的抗体与经鉴定的18株小肠结肠炎耶尔森菌O∶9血清型菌株呈阳性反应,而与其他血清型小肠结肠炎耶尔森菌及常见肠道致病菌无交叉凝集反应;应用于小肠结肠炎耶尔森菌野生株分型鉴定时,能准确鉴定出其中的24株O∶9血清型菌株,与用日本进口分型血清鉴定、PCR毒力基因检测结果相同。结论筛选获得的细胞株产生的单克隆抗体,用于小肠结肠炎耶尔森菌O∶9血清型鉴定,具有很好的型特异性,避免了过去免疫血清制备中繁琐的抗原交叉吸收试验。     

我国5岁以下儿童小肠结肠炎耶尔森菌感染临床特征及病原学分析

目的 了解我国5岁以下儿童小肠结肠炎耶尔森菌腹泻病例临床与病原学特征,分析其可能的感染来源,为小肠结肠炎耶尔森菌病的防控与诊断提供科学依据。 方法 收集2010—2020年间来自全国10个省市自治区哨点医院儿童腹泻标本、调查及回访问卷;对标本进行小肠结肠炎耶尔森菌的分离鉴定;菌株进行生物分型、血清型鉴定;毒力基因检测以及脉冲场凝胶电泳(pulsed field gel electrophoresis,PFGE)分型。 结果 2010—2020年共监测11 377例,分离到致病性小肠结肠炎耶尔森菌63株,包括61株O:3血清型、2株O:9血清型菌株,5岁以下腹泻儿童感染率0.55%(63/11 377)。不同性别儿童对致病性小肠结肠炎耶尔森菌的感染率差异无统计学意义,1～5岁感染率高于≤1岁病例(χ²=44.836,P＜0.05),感染患儿中1～5岁发热比例高于≤1岁(χ²=11.508 ,P<0.05),随访病例未发现后遗症。我国儿童感染O:3血清型致病性小肠结肠炎耶尔森菌的PFGE带型存在多样性,优势带型为K6GN11C30021、K6GN11C30012。 结论 我国5岁以下儿童感染致病性小肠结肠炎耶尔森菌的生物血清型以3/O:3为主,偶有4/O:3与2/O:9。根据患儿感染特点与高发季节推测食源为主要感染来源,需进一步调查研究。     

从腹泻病人粪便中分离小肠结肠炎耶尔森氏菌的检出报告

从132份腹泻病人标本中检出小肠结肠炎耶尔森氏菌13株,分属3个血清型,O：3型6株,O：6型3株,O：9型4株。     

江苏省南通地区小肠结肠炎耶尔森菌分布特征初步研究

目的了解江苏省南通地区小肠结肠炎耶尔森菌的分布特点和毒力特征。方法用常规方法从家畜家禽粪便标本中分离小肠结肠炎耶尔森菌，PCR法检测其五种毒力相关基因，同时对国内分离到的O：8血清型菌株进行脉冲场凝胶电泳分析。结果从该地区293份家畜家禽粪便标本中分离到91株小肠结肠炎耶尔森菌，分离率为31．06％。未分离到国内主要流行血清型O：3和O：9，其中有39．57％菌株毒力基因分布特征为：ail^-、ystA^-、ystB^-、yadA^-、virF^-，有60．43％菌株为ail^-、ystA^-、ystB^＋、yadA^-、VirF^-，两株国外引进的强毒菌株具有相同的脉冲图形，与国内分离到的O：8血清型菌株存在显著的差异。结论致病性小肠结肠炎耶尔森菌的分布具有局限性，江苏省南通地区小肠结肠炎耶尔森菌的分布可能以非致病菌为主。     

安徽省 2012 年小肠结肠炎耶尔森菌分离株特征分析

目的对安徽省2012年小肠结肠炎耶尔森菌分离株进行PFGE分型,分析菌株相关性。方法对22株菌株通过血清凝集实验和生物分型了解菌株生物学特征,采用PFGE对菌株进行分子分型,并分析PFGE与血清型和生物型的关系。结果 22株小肠结肠炎耶尔森菌分为11个生物型别,K6GN11C30021为优势PFGE型。结论 PFGE与血清型和生物型有一定相关性,提示PFGE可用于分析爆发流行和常规监测,追踪传染源。     

北京市副溶血弧菌病原学和分子流行病学特征分析

目的 了解北京市副溶血弧菌腹泻病例分离株的病原学和分子流行病学特征.方法 2010年4-12月从临床收集散发腹泻病例2118份粪便标本,进行副溶血弧菌的分离培养、生化鉴定.阳性菌株进行血清分型;采用药敏纸片法对12种抗生素进行敏感性检测;用实时荧光定量PCR方法检测毒力基因tlh、tdh和trh;用脉冲场凝胶电泳(PFGE)进行分子分型.结果 2118份粪便标本分离出副溶血弧菌114株,阳性分离率为5.38％.114株副溶血弧菌分属于23种血清型,其中O3:K6为优势血清型,占63.16％.临床分离株对氨苄西林和庆大霉素产生耐药;对阿莫西林、头孢曲松、氯霉素、亚胺培南、萘啶酸和四环素等均具有较高敏感性.全部菌株tlh基因阳性;tdh存在于大部分菌株中,所占比例为93.86％;只有1株菌trh阳性.O3:K6型菌株tdh基因阳性率(98.61％)明显高于非O3:K6型菌株(85.71％)(P=0.0098).114株副溶血弧菌分成54种PFGE型别,72株O3:K6型菌株分成34种PFGE型别,带型分散,无明显聚集性.结论 北京地区感染性腹泻病例副溶血弧菌分离株以O3:K6型为主.毒力基因tlh和tdh携带率高,且O3:K6型临床分离株毒力更强.副溶血弧菌对多数抗生素均具有较高敏感性.PFGE结果提示北京地区流行的副溶血弧菌存在多克隆来源.     

Different enteropathogenic Yersinia strains found in wild boars and domestic pigs

Yersinia enterocolitica and Yersinia pseudotuberculosis strains isolated from wild boars and fattening pigs were characterized and compared with each other. In wild boars, ail-positive Y. enterocolitica strains belonged to bioserotypes 4/O:3 (36%, 5/14), 2/O:9 (29%, 4/14), and 2/O:5,27 (21%, 3/14). Additionally, two ail-positive strains were untypable. Among fattening pigs, the bioserotype 4/O:3 was dominating (91%, 71/78), and bioserotypes 2/O:5,27 (8%, 6/78) and 2/O:9 (1%, 1/78) were rare. inv-positive Y. pseudotuberculosis strains of serotypes O:1 and O:2 were isolated only from wild boars. Antimicrobial resistance patterns between wild boar and fattening pig strains differed. Most of the ail-positive Y. enterocolitica strains carried yst, hreP, and virF genes. Several genotypes of Y. enterocolitica strains were obtained by PFGE using NotI, ApaI, XhoI, and SpeI enzymes. All genotypes of wild boar strains differed from fattening pig strains. Especially strains of bioserotype 4/O:3 were clearly different with all four enzymes. These results show that wild boar strains differed from domestic pig strains. More wild boar strains should be isolated to show that wild boars and domestic pigs are reservoirs for different Y. enterocolitica and Y. pseudotuberculosis strains.     

中国C群脑膜炎奈瑟菌脉冲场凝胶电泳分析

目的对中国C群脑膜炎奈瑟菌分离株进行脉冲场凝胶电泳（PFGE）分析，了解安徽省C群流行性脑脊髓膜炎（流脑）暴发菌株及国内C群脑膜炎奈瑟菌菌株的分子流行病学特征。方法212株C群脑膜炎奈瑟菌菌株分离自流脑患者、密切接触者和健康人群鼻咽部，包括安徽省C群流脑菌株48株，其中38株与C群流脑暴发相关。脉冲场凝胶电泳选用NheI限制性内切酶，聚类分析选用BioNumerics软件。结果212株C群脑膜炎奈瑟菌菌株共分为43个PFGE带型，命名为AH1～AH43，AH1是中国C群脑膜炎奈瑟菌主要的带型，占69．3％（”=147），分布于11个省市。安徽省48株C群菌株共分为3个PFGE型别（AH1、AH2、AH3），45株（93．8％）为AH1型。安徽省38株与C群流脑暴发相关的菌株中，37株（97．4％）为AH1型。全国53株流脑患者分离菌株中，AH1型菌株占67．9％（36／53）；121株流脑病例密切接触者分离菌株中，AH1型占71．9％（87／121），38株健康人群鼻咽部分离菌株中，AH1型占63．2％（24／38）。结论AH1型C群脑膜炎奈瑟菌是中国目前C群流脑流行的主要克隆群，安徽省C群流脑暴发是由AH1型C群脑膜炎奈瑟菌引起的，已在全国呈扩散流行的趋势。     

广州地区70株副溶血性弧菌病原学特征分析

目的 了解广州地区人源性和食源性副溶血性弧菌优势血清型、携带毒力基因和分子分型情况。方法 收集2014 - 2016年广州地区腹泻患者和食源性监测中分离到的副溶血性弧菌进行血清分型、毒力基因鉴定和脉冲场凝胶电泳分型（PFGE）。结果 70株副溶血性弧菌,临床分离株48株,血清型分别为O3∶K6、O4∶K8、O1∶K1、O4∶K9、O1∶K36,其中O3∶K6为主要型别（70.8%）,其次为O4∶K8（20.8%）。食品分离株22株,血清型分散无明显优势。毒力基因检测,临床分离株46株tdh、toxRS/new、orf8全部阳性。食品分离株6株tdh阳性,toxRS/new、orf8全部阴性。所有菌株均未检出trh基因。PFGE分析70株副溶血性弧菌可分为45种带型,2种聚类,菌株间的相似值为45.6 %～100 %。结论 副溶血性弧菌临床分离株与食品分离株在血清型和毒力基因分布上具有分离现象。引起广州地区食源性疾病的副溶血性弧菌株,是主要以携带tdh、toxRS/new、orf8基因的O3:K6型菌株。PFGE图谱显示,本区域70株副溶血弧菌呈现基因多样性。     

深圳地区2002-2008年副溶血弧菌分子特征研究

目的了解深圳地区副溶血弧菌主要血清型和分子分型以及毒力因子分布,分析新O3:K6型克隆群与国际流行株的进化关系.方法对2002-2008年深圳地区1005株副溶血弧菌临床分离株进行血清型分型;采用荧光PCR方法对68种不同血清型的28 1株副溶血弧菌进行tlh、toxR、tdh和trh毒力基因检测;对281株菌株进行orf8检测;采用脉冲场凝胶电泳(PFGE)对不同分离时间的5种主要血清型菌株进行分子分型,根据有代表性的分子分型图谱选取82株副溶血弧菌菌株进行GS-PCR检测,并选取60株副溶血弧菌菌株进行toxRS基因测序;进而对41株O3:K6和O1:K25副溶血弧菌菌株进行多位点序列分型(MLST)分析,采用eBURST软件分析进化关系.结果1005株菌共得到79种不同的血清型,主要血清型为O3:K6、O4:K8、O1:K25、O1:KUT、O4:K68、O1:K56和O9:K44,所占比例分别为57.9%、8.16%、5.27%、5.87%、1.39%、1.39%和0.99%.243株为tlh+、toxR+、tdh+、trh-,37株为tlh+、toxR+、tdh-和trh-,1株tlh+、toxR+、tdh+和trh+.35株O3:K6型菌株的MLST序列类型为ST3,是同源复合体CC3,O4:K8型副溶血弧菌的序列类型为ST189,无同源复合体.结论深圳地区主要流行的副溶血弧菌为tdh+、trh-的O3:K6、O4:K8和O1:K25菌株,2006年后出现O1:K56、O9:K44、O3:K29、O4:K9新的血清型;其中O3:K6血清型属于新的O3:K6克隆群,与其他国家流行的副溶血弧菌属于同一克隆群,同时也存在新、旧克隆群.血清的多样性和新旧克隆群的存在是造成深圳地区副溶血弧菌腹泻病高发态势的主要原因之一.