实时荧光定量PCR检测痰标本中军团菌属

目的建立荧光定量PCR方法,用于检测军团菌属特异性16S rRNA基因,并探讨广州地区军团菌属感染状况。方法利用军团菌属特异性16S rRNA基因保守序列设计引物和探针,优化反应条件和反应体系,对嗜肺军团菌、非嗜肺军团菌及其他细菌进行检测,验证该方法的特异性、敏感性、重复性,对广东省中医院采集的532例肺部感染患者痰液标本进行检测。结果该方法检测军团菌属所有标准菌株均出现阳性信号,其他非军团菌属细菌检测结果均为阴性;检测灵敏度为102CFU/ml,临床检测532例肺部感染患者的痰液标本,荧光法检出军团菌阳性43例,阳性率为8.08%,16S rRNA PCR法加基因测序验证阳性率为7.71%,两者检测结果差异无统计学意义,表明其具有较好的符合性和等效性。结论 16S rRNA基因荧光定量PCR法检测患者痰液标本中军团菌属,具有快速、敏感、特异等特点,适用于临床军团菌属感染调查及快速检测。     

细菌性感染PCR诊断方法的建立及其应用研究

目的通过通用引物PCR,为建立一种实用、快速可靠细菌感染PCR检测方法奠定基础。方法收集100例疑似血流感染患者的血液进行细菌培养,同时检测细菌16S rRNA基因,测定和分析所得DNA序列,对培养结果与PCR结果进行比较;采用倍比稀释法进行PCR灵敏度检测。结果 100份血液标本中细菌培养8份阳性,阳性率为8.0%;PCR法19份阳性,阳性率为19.0%,细菌培养与PCR检测结果比较,差异有统计学意义(χ2=9.09,P<0.05);测序结果显示DNA序列与GenBank公布的基因序列同源性很高,PCR可检测范围至1.5×102CFU/ml。结论只要严格控制污染,通过16S rRNA基因PCR技术对疑似血流感染的临床诊断具有重要意义。     

荧光定量PCR基因检测在心血管病患者术后血流感染的诊断应用

目的建立16SrRNA基因荧光定量PCR方法检测心血管病患者术后血流感染的诊断技术,以提高临床细菌检测的准确性及敏感性,缩短检测细菌的时间。方法 2010年4月-2012年3月医院对411例术后疑为血流感染的标本进行常规血液培养,同时进行细菌16SrRNA基因的检测,包括DNA提取、设计引物和探针、聚合酶链反应(PCR)扩增及对扩增产物荧光定量检测,比较二者的诊断阳性率、敏感性和特异性,数据采用SPSS11.0软件进行统计分析。结果荧光定量PCR方法检测血流感染的阳性患者182例,阳性率为44.3%,明显高于血液培养的15.6%,差异有统计学意义(P<0.01);若以血液培养阳性和(或)临床诊断血流感染的标准作为对照,PCR的诊断敏感性为87.9%、诊断特异性为90.6%。结论荧光定量16SrRNA基因检测的阳性率远高于血液培养,可为心血管病患者术后血流感染提供早期、敏感的病原学诊断依据。     

荧光定量PCR基因检测在心血管病患者术后血流感染的诊断应用北大核心CSCD

目的建立16SrRNA基因荧光定量PCR方法检测心血管病患者术后血流感染的诊断技术,以提高临床细菌检测的准确性及敏感性,缩短检测细菌的时间。方法 2010年4月-2012年3月医院对411例术后疑为血流感染的标本进行常规血液培养,同时进行细菌16SrRNA基因的检测,包括DNA提取、设计引物和探针、聚合酶链反应(PCR)扩增及对扩增产物荧光定量检测,比较二者的诊断阳性率、敏感性和特异性,数据采用SPSS11.0软件进行统计分析。结果荧光定量PCR方法检测血流感染的阳性患者182例,阳性率为44.3%,明显高于血液培养的15.6%,差异有统计学意义(P<0.01);若以血液培养阳性和(或)临床诊断血流感染的标准作为对照,PCR的诊断敏感性为87.9%、诊断特异性为90.6%。结论荧光定量16SrRNA基因检测的阳性率远高于血液培养,可为心血管病患者术后血流感染提供早期、敏感的病原学诊断依据。     

新疆地区鲍氏不动杆菌氨基糖苷类修饰酶与16S rRNA甲基化酶基因研究

目的 了解新疆地区鲍氏不动杆菌的氨基糖苷类修饰酶与16S rRNA甲基化基因.方法 分离20株鲍氏不动杆菌,并对其进行抗菌药物敏感性试验,用PCR方法检测鲍氏不动杆菌的氨基糖苷类修饰酶与16S rRNA甲基化基因.结果 13株鲍氏不动杆菌检出氨基糖苷类修饰酶基因,其检出率为65%,其中aac(3)-Ⅰ基因阳性4株,阳性率为20%、aac(3)-Ⅱ基因阳性8株,阳性率为40%、aac(6')-Ⅰ ad基因阳性4株,阳性率为20%、aac(6')-Ⅰ b基因阳性0株、aac(6')-Ⅱ基因阳性0株、ant(3')-Ⅰ基因阳性4株,阳性率为20%、ant(2')-Ⅰ基因阳性1株,阳性率为5%,未检出16S rRNA甲基化基因.结论 新疆地区鲍氏不动杆菌存在氨基糖苷类修饰酶基因,未检出16S rRNA甲基化基因.     

16SrRNA基因检测在自发性腹膜炎快速诊断中的应用价值

目的探讨运用16S rRNA基因检测技术在快速诊断自发性腹膜炎的临床价值。方法针对16S rRNA区域的恒定区,设计一条通用引物,对已知病原菌、人类基因组DNA、巨细胞病毒和白色假丝酵母菌进行PCR扩增,检验方法的特异性,用倍比稀释法检测方法的灵敏性。然后用此方法检测自发性腹膜炎患者的腹水样本,并与培养法进行比较分析。结果已知病原菌均扩增出了特异产物,人类基因组DNA、巨细胞病毒和白色假丝酵母菌无相对应产物,PCR敏感性可达1 pg大肠杆菌DNA。69例腹水样本PCR方法检测阳性率为33.3%,培养法阳性率为14.5%,PCR法阳性率显著高于培养法(P0.05)。结论 16S rRNA基因检测技术具有检测时间短、敏感性高、结果准确可靠等优点,具有重要的临床应用价值。     

循环游离DNA联合16S rRNA基因检测在糖尿病烧伤脓毒症早期诊断中的作用

目的探讨循环游离DNA(cf-DNA)联合16S核糖体RNA(16S rRNA)基因检测在糖尿病烧伤脓毒症患者早期诊断中的作用。方法选择2016年3月-2018年5月山东省滨州市人民医院烧伤科收治的糖尿病烧伤可疑脓毒症患者65例,采取常规血培养及16S rRNA基因检测PCR法进行细菌分离鉴定,并检测患者外周血炎症指标及血糖变化。分析PCR、血培养结果与各指标关系。结果 16S rRNA基因检测PCR法检出65例标本,阳性30例,阳性率46.15%,血培养阳性18例,阳性率27.69%(P<0.05);PCR法检测所需时间低于常规血培养(P<0.05)。PCR法检出革兰阴性菌19株(占63.33%)、革兰阳性菌11株(占36.67%);血培养检出革兰阴性菌13株(占72.22%)、革兰阳性菌5株(占27.78%)。PCR检测阳性患者cf-DNA、C-反应蛋白(CRP)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-6(IL-6)、空腹血糖(FBG)以及餐后2 h血糖(2h PG)均高于PCR阴性患者(P<0.05)。患者cf-DNA水平与外周血CRP、TNF-α、IL-6水平呈正相关关系(P<0.05)。血培养阳性患者cf-DNA、CRP、TNF-α、IL-6、FBG以及2hPG均高于血培养阴性患者(P<0.05)。结论 16S rRNA基因PCR检测可快速诊断糖尿病烧伤脓毒血症患者感染病原菌,联合cf-DNA运用,有助于糖尿病烧伤脓毒血症患者的早期诊断。     

新疆石河子地区绵羊嗜吞噬细胞无形体的检测和16S rRNA序列分析

目的 调查新疆石河子地区绵羊嗜吞噬细胞无形体感染状况以及分析其病原16S rRNA序列特征.方法 在石河子地区采集羊血,提取DNA,巢式PCR扩增16S rRNA基因并与GenBank中相应基因序列进行比对分析.结果 在109份羊血样本中,检测出阳性样本37份,阳性率为33.94％,检测出的16S rRNA(524 bp)基因序列与部分GenBank中嗜吞噬细胞无形体16S rRNA基因序列同源性达99％.结论 新疆石河子地区绵羊中存在嗜吞噬细胞无形体的感染.     

PCR技术在前列腺液细菌检测中的应用

目的 应用聚合酶链反应(PCR)技术检测慢性前列腺炎患者前列腺液中病原菌的阳性率.方法 收集97例慢性前列腺炎患者的前列腺液,分别用16S rRNA基因PCR方法和细菌培养法进行检测,比较两种方法检测 病原菌的敏感性.结果 97例慢性前列腺炎患者前列腺液中,PCR方法检测出58例,阳性率为59.79％,培养法检出10例,阳性率为10.31％,PCR方法检出率明显高于培养法(P＜0.01).结论 16S rRNA基因PCR检测方法具有快速,特异性和敏感性高等特点.     

不同PCR引物扩增咽拭子检测在儿童肺炎支原体感染诊断中的价值

目的探讨采用普通PCR法建立检测咽拭子中儿童肺炎支原体(MP),为儿童MP感染的早期诊断提供参考依据。方法采集临床疑似MP感染儿童咽拭子并抽提基因组DNA,根据MP P1基因和16S rRNA基因设计引物扩增标本,通过琼脂糖凝胶电泳检测PCR结果。结果 P1基因引物可以扩增出209 bp大小产物,16S rRNA基因引物可以扩增出277 bp大小产物。P1基因引物检测结果优于16S rRNA基因引物结果,差异有统计学意义(P<0. 05)。结论基于MP P1基因的普通PCR可以用于临床MP感染的诊断。