转化生长因子β1对大鼠原代肾小球系膜细胞血管内皮生长因子表达的影响

目的：探讨原代培养的大鼠肾小球系膜细胞血管内皮生长因子（vascular endothelial growth factor，VEGF）的表达及转化生长因子-β1（transforming growth factor-β1，TGF-β1）对其表达的影响。方法：采用RT-PCR和Westernblot方法检测大鼠原代培养的肾小球系膜细胞VEGF表达及不同浓度、不同时间的TGF-β1刺激对VEGF表达的作用。结果：原代培养的大鼠肾小球系膜细胞表达VEGF164、120mRNA，TGF-β1呈时间依赖性增加其表达，在12h表达最高，分别为刺激前3．17、2．925倍，有统计学差异（P〈0．001）。在剂量反应曲线上，2ng／ml TGF-β1刺激作用最强，VEGF164、120mRNA表达分别为未刺激组的2．82、2．45倍，有统计学差异（P〈0．001）。与VEGF mRNA表达一致，大鼠原代肾小球系膜细胞仅见VEGF164蛋白表达，2ng／ml TGF-β1呈时间依赖性的增加VEGF 164蛋白表达，24h达高峰，为刺激前的2．37倍。结论：促进肾小球系膜细胞VEGF表达可能是TGF-β1介导肾脏损害发生、发展的机制之一。     

转化生长因子-β1介导的足细胞损伤

肾小球足细胞既是免疫介导,也是非免疫介导损伤耙点,足细胞的损伤是导致大量蛋白尿和肾小球硬化的关键,机制十分复杂.转化生长因子-β1是多功能的细胞因子,近年来的研究发现其在介导足细胞凋亡、脱落及功能异常等方面发挥着重要作用.     

输精管阻断对大鼠睾丸转化生长因子β1表达的影响

目的　了解大鼠输精管阻断和阻断解除后睾丸内TGFβ1表达状况。　方法　大鼠 90只 ,随机分为输精管阻断 (VG)组 35只 ,输精管阻断解除 (VOG)组 2 0只 ,假手术组 (SOG) 35只 ,采用免疫组织化学染色和原位杂交技术检测TGFβ1的表达。　结果　VG组从实验第 8周起近基底膜的管周细胞和精原细胞TGFβ1表达较SOG组增强 ,其中 8、16、2 0、2 4周与SOG组相比差异有显著性意义 (P <0 .0 5 )。表达量在 8周后并不随结扎时间延长而改变 ,而是维持在相对稳定的水平。VOG组TGFβ1表达亦较SOG组显著增高。　结论　输精管阻断后TGFβ1表达升高可能是导致睾丸细胞凋亡的原因 ,而阻断解除后TGFβ1水平无明显下降可能是导致生精功能恢复不完全的原因。     

阻断转化生长因子-β受体信号转导降低瘢痕疙瘩细胞转化生长因子-β1自分泌的研究

目的 研究瘢痕疙瘩成纤维细胞转化生长因子－β1（TGF－β1）的自分泌现象和阻断TGF－β受体信号转导对TGF－β1自分泌的调控。方法 组织块法体外培养瘢痕疾疙瘩成纤维细胞，加入重组人源（rh）TGF－β1（5mg/L）或含缩短型TGF－βⅡ型体的重组腺病毒（50pfu/cell），并用Northern印迹观察它们对TGF－β1极其Ⅰ、Ⅱ型受体的基因调控。结果 rhTGF－β1能上调TGF－β1（30％－50％）和Ⅰ型受体（30％－90％）的基因表达，但不影响Ⅱ型受体的基因表达。短型TGF－βⅡ型受体在瘢痕疙瘩细胞的过度表达减少细胞TGF－β1（50％－65％）和Ⅰ型受体（21％－55％）的基因表达，但不影响Ⅱ型受体的基因表达。结论 瘢痕疙瘩细胞存在TGF－β1的自分泌现象，而缩短型TGF－βⅡ型受体的过度表达可以通过阻断TGF－β的信号转导来降低TGF－β1的自分泌。     

转化生长因子β1对系膜细胞内1型纤溶酶原激活物抑制物基因组蛋白乙酰化修饰的影响

目的 探讨转化生长因子β1(TGF-β1)对1型纤溶酶原激活物抑制物(PAI-1)基因启动子及转录区域内组蛋白尾部乙酰化修饰的影响.方法 采用染色质共免疫沉淀与实时定量PCR技术,观察高糖及TGF-β1对PAI-1基因启动子及转录区组蛋白H3赖氨酸残基9位乙酰化(H3K9Ac)修饰的影响;并应用共免疫沉淀方法探讨转录因子CREB结合蛋白(CBP)与Smad3、Sp1蛋白之间的相互作用.结果 在PAI-1基因启动子的4个区域内,TGF-β1(10 μg/L)刺激显著增加了P1、P2、P3区域的H3K9Ac修饰(均P＜0.05),而在距离转录起始点较远的P4区域,H3K9Ac修饰水平没有明显改变;而在PAI-1基因的转录区,TGF-β1刺激显著增加了T1区域的H3K9Ac修饰(P＜0.05),而T2区没有明显改变.高糖刺激引起系膜细胞内PAI-1基因的表达水平及其启动子P1区域H3K9Ac修饰显著增加(P＜0.05),应用TGF-β1中和性抗体预处理显著抑制了高糖引起的PAI-1基因启动子区H3K9Ac修饰(P＜0.01).TGF-β1刺激能够显著诱导Smad3、CBP蛋白结合在P1、P2、P3区域(均P＜0.05);同时,TGF-β1刺激能够诱导CBP、Sp1与Smad3蛋白的结合,进而引起H3K9Ac修饰.结论 TGF-β1能够诱导PAI-1基因启动子与转录起始区发生H3K9Ac修饰,促进Smad3与Sp1及CBP蛋白相互结合,促进PAI-1基因的转录表达.     

转化生长因子β1及其Ⅱ型受体在慢性胰腺炎大鼠中的表达

目的 建立大鼠慢性胰腺炎模型,检测模型大鼠胰腺组织转化生长因子β1(transforming growth factor-β1,TGFβ1)及转化生长因子β1Ⅱ型受体(transforming growth factor-β1 type Ⅱ receptor,TβRⅡ)mRNA的表达.方法 24只健康雄性Wistar大鼠,随机分为2组:模型组大鼠尾静脉注射二丁基二氯化物(dibutyltin dichlo-ride,DBTC)溶液7 mg/ks,对照组仅注射相同体积的溶剂,28 d时剖杀动物,采用HE染色和Masson染色观察两组大鼠胰腺组织病理变化,采用荧光定量PCR检测TGFβ1和TβRⅢmRNA在胰腺组织的表达.结果 模型组大鼠胰腺组织镜下可见纤维组织增生明显,胰腺小叶结构破坏或消失,腺泡萎缩;与对照组相比,模型组大鼠胰腺组织TGFβ1和TBRⅡmRNA表达均升高(P<0.05).结论 TGFlβ1和TβRⅡ在DBTC诱导的大鼠慢性胰腺炎胰腺组织表达升高.     

转化生长因子-β_1对前列腺基质细胞基因表达的调节作用

目的　探讨转化生长因子 β1(TGF β1)对前列腺基质细胞基因表达的调节作用。　方法　原代培养人前列腺基质细胞 ,并传代至 4～ 6代。分别将浓度为 0 .0 1、0 .10、1.0 0、10 .0 0 μg/L的TGF β1加入细胞培养液中。孵育 48h后收集细胞。用内参照半定量RT PCR方法检测前列腺基质细胞雄激素受体 (AR)、TGF β1、bFGF和平滑肌特异性标记蛋白smoothelin基因的转录水平。　结果　与对照组相比 ,低浓度 (0 .0 1μg/L)的TGF β1可增强体外培养的前列腺基质细胞内AR表达 (P <0 .0 1) ,差别有显著性意义。随TGF β1浓度增加 ,促AR表达作用减弱。随TGF β1浓度增加基质细胞TGF β1、bFGF和smoothelin基因的转录增加 (P <0 .0 1) ,并且随着应用浓度增加促各基因转录的作用增强。　结论　TGF β1对前列腺基质细胞基因表达具有广泛的调节作用 ,在前列腺增生发病中具有重要作用     

孕激素调节人成有细胞转化生长因子—β1、β2的表达

目的　研究孕激素对正常成人成骨细胞转化生长因子 (TGF) β1、TGF β2表达的调节作用 ,探讨孕激素治疗绝经后骨质疏松症 (OP)的作用机制。方法　鉴定成人成骨细胞 (hOB) ,测定碱性磷酸酶 (ALP)活性、骨钙素分泌 ,VanGieson氏苦味酸酸性复红染色法进行Ⅰ型胶原染色。hOB用孕酮干预。Northern杂交、ELISA分别检测hOBTGF β1、TGF β2mRNA和蛋白质分泌。结果　观察到hOB分泌的ALP活性为 (74 3± 4 7)mU/mg蛋白 ,培养上清液骨钙素含量为 (3 84± 0 3 9)ng/ml蛋白 ,Ⅰ型胶原染色呈红色。观察到孕酮增强hOBTGF β1、TGF β2mRNA表达呈剂量依赖性 (P <0 0 0 1) ;10 -9mol/L孕酮诱导 12～ 2 4h促进TGF β1、TGF β2mRNA表达 ,呈时间依从性。孕酮促进hOBTGF β1、TGF β2蛋白质分泌呈剂量依赖性 (P <0 0 0 1) ;10 -9mol/L孕酮诱导 12～ 2 4h促进TGF β1、TGF β2蛋白质分泌 ,呈时间依从性。结论　孕激素可能通过诱导成骨细胞TGF β1、TGF β2表达 ,促进成骨细胞增殖与分化 ,增强成骨功能及骨基质合成 ,促进骨形成     

转化生长因子—β1对前列腺基质细胞基因表达的调节作用

目的探讨转化生长因子-β1(TGF-β1)对前列腺基质细胞基因表达的调节作用.方法原代培养人前列腺基质细胞,并传代至4～6代.分别将浓度为0.01、0.10、1.00、10.00μg/L的TGF-β1加入细胞培养液中.孵育48h后收集细胞.用内参照半定量RT-PCR方法检测前列腺基质细胞雄激素受体(AR)、TGF-β1、bFGF和平滑肌特异性标记蛋白smoothelin基因的转录水平.结果与对照组相比,低浓度(0.01μg/L)的TGF-β1可增强体外培养的前列腺基质细胞内AR表达(P<0.01),差别有显著性意义.随TGF-β1浓度增加,促AR表达作用减弱.随TGF-β1浓度增加基质细胞TGF-β1、bFGF和smoothelin基因的转录增加(P<0.01),并且随着应用浓度增加促各基因转录的作用增强.结论TGF-β1对前列腺基质细胞基因表达具有广泛的调节作用,在前列腺增生发病中具有重要作用.     

类胰岛素生长因子1对转化生长因子β1诱导前列腺增生间质细胞类胰岛素生长因子结合蛋白3生成的抑制作用

目的　探讨类胰岛素生长因子（ＩＧＦ１） 和转化生长因子（ＴＧＦβ１） 在调节前列腺间质细胞ＩＧＦ结合蛋白———类胰岛素生长因子结合蛋白３（ＩＧＦＢＰ３） 中的作用。方法　前列腺增生组织原代培养分离间质细胞。分别用ＴＧＦβ１（５ μｇ／Ｌ）、ＩＧＦ１（５００ μｇ／Ｌ） 及ＴＧＦβ１＋ ＩＧＦ１ 处理间质细胞。Ｗｅｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔ检测间质细胞内的ＩＧＦＢＰ３ 水平。结果　间质细胞用ＴＧＦβ１ 处理２ 小时后,ＩＧＦＢＰ３ 比对照组增加１３２ ％ ,４ 小时后比对照组高出２５１％ ,８ 小时后接近原来水平。ＩＧＦ１ 可以明显逆转ＴＧＦβ１ 诱导增加的ＩＧＦＢＰ３,而单纯ＩＧＦ１ 则对间质细胞的ＩＧＦＢＰ３ 水平没有明显的影响。结论　ＩＧＦ１ 有抑制ＴＧＦβ１ 诱导前列腺间质细胞ＩＧＦＢＰ３ 表达的作用。     

大鼠原位移植肝脏中细胞凋亡与转化生长因子-β1 mRNA表达的实验研究

本实验旨在探讨大鼠原位肝移植免疫特惠的机制 ,研究肝脏移植移植物中肝实质细胞和浸润细胞凋亡及肝脏移植移植物中转化生长因子 β1 (ＴＧＦ β1 )ｍＲＮＡ的表达变化。一、材料与方法1 .实验动物分组 :肝移植模型用改良Ｋａｍａｄａ[1 ] 方法进行。Ａ组ＳＤ大鼠原位肝移植假手术对照组 ,(ｎ =30 ) ;Ｂ组Ｗｉｓｔａｒ→ＳＤ原位肝移植组 ,(ｎ =30 )。肝脏移植大鼠分别于术后 1、3、5、7、1 4ｄ各引颈处死 6只 ,获取移植物 ,迅速用液氮降温 ,- 80℃低温冰箱保存备用。2 .细胞凋亡的动态检测 :用ＴＵＮＥＬ法标记过氧化物酶显色检测细胞凋亡…     

转化生长因子-β1在脑血管畸形中的表达

转化生长因子 β(TGF β)具有细胞生长与分化、细胞黏连与细胞外基质的形成、修复损伤、免疫调节以及胚胎发育等多种生物学功能[1,2 ] 。小鼠体内实验显示TGF β能快速诱导血管形成,在体外实验中也观察到促进胶原蛋白的形成[3 ] 。我们采用TGF β1RNA狭缝杂交观察TGF β1在脑血管畸形(AVMs)中的作用。一、材料和方法1.标本来源:取自我院和华山医院神经外科(陈衔成教授提供部分标本)手术切除14例脑AVMs及其周围脑组织标本和8例正常脑血管和脑组织标本液氮速冻,-70℃保存。2 .总RNA提取、RNA电泳:用Trizol试剂提取总RNA电泳…     

转化生长因子β1对人腹膜间皮细胞结缔组织生长因子的影响

目的 观察转化生长因子(TGF)β1对人腹膜间皮细胞(HPMCs)结缔组织生长因子(CTGF)的mRNA和蛋白表达影响并探讨其可能的机制。方法 原代培养HPMCs，用5ng／ml TGF-β1刺激第3代细胞，采用免疫组织化学染色、Western印迹、ELISA和RT-PCR等方法，观察CTGF的mRNA和蛋白表达、纤连蛋白(FN)和Ⅰ型胶原(ColⅠ)的mRNA和蛋白表达，细胞内磷酸化Smad2／3(p-Smad2／3)的蛋白表达以及在细胞内的迁移。结果 (1)刺激组CTGF的mRNA表达与对照组比均显著增加，其中48h为峰值；对照组细胞内仅有少量CTGF的蛋白表达，在TGF-β1刺激后24h表达明显增加，48h达峰值。(2)刺激组FN和ColⅠ的mRNA表达与对照组比均呈时间依赖性显著增加，上清液FN和细胞内ColⅠ的蛋白表达与对照组比也呈时间依赖性显著增加。(3)对照组细胞内几乎不表达p-Smad2／3(阳性细胞率3％)，在刺激后15min表达增加(29％)，细胞着色主要分散在胞质中；1h增加最明显(84％)，细胞着色加深且集中在胞核及周边；2h明显回落(37％)，细胞着色转淡并又分散至胞质中。结论TGF-β1在致腹膜纤维化过程中诱导了HPMCs内CTGF的转录和蛋白表达，可能与TGF-β1激活了HPMcs内Smad信号通路有关。     

环孢素A对大鼠肾转化生长因子β1、肾素mRNA的影响

目的：探讨环孢素A（CsA)慢性肾毒性的发生机理。方法：给予进正常饮食或低盐饮食的大鼠灌服CsA 30mg.kg^-1.d^-1,采用逆转录聚合酶链反应（RT－PCR）研究CsA对大鼠肾内转化生长因子β1（TGF－β1）及肾素mRNA表达的影响。结果：给予CsA的大鼠均有肾内TGF－β1 mRNA,肾素mRNA表达的增加，给予低盐饮食的大鼠这些改变更为明显。结论：CsA的慢性肾毒性与肾内TGF－β1 mRNA，肾素mRNA表达的增加有关。β     

韧带愈合过程中转化生长因子β1及其Ⅰ型受体表达的实验研究

目的：探索TGFβ1及TGFβRI在韧带愈合过程中的作用机制。方法：应用大白鼠膝MCL损伤模型,通过免疫组化的方法,研究TGFβ1及TGFβI在韧带愈合过程中的表达特点。结果：TGFβ1及TGFβI的表达具有一定的规律性;表达主要分布于成纤维细胞和血管内皮细胞中,呈带状分布,越靠韧带断端,表达越丰富,表达高峰期在伤后9d,其中TGFβ1的峰值较TGFβRI略早些,表达强度的下降也更快。结论：韧带愈合过程中TGFβ1及TGFβRI的规律性变化与韧带关系密切,TGFβ1对韧带愈合具有调节作用,结合其变化规律,合理应用外源性的TGFβ1可能促进韧带愈合。     

金雀异黄素对晚期蛋白氧化产物刺激大鼠系膜细胞转化生长因子β1分泌的影响

目的观察金雀异黄素（Gen）对晚期蛋白氧化产物（AOPPs）刺激下SD大鼠肾小球系膜细胞（MC）分泌转化生长因子β1（TGF-β1）的影响,从而了解作为大豆蛋白质主要成分的Gen对糖尿病肾脏病（DKD）系膜细胞的影响,进而探讨大豆蛋白饮食对DKD的治疗意义。方法以体外培养的SD大鼠MC为研究对象,分为正常培养的对照组（C组）、培养液中加入AOPPs的A组和加入10、50、100、200umol／LGen的G（10）、G（50）、G（100））、G（200）组以及培养液中同时加入AOPPs和Gen的A＋G（10）、A＋G（50）、A＋G（100）、A＋G（200）组。酶链免疫吸附（ELLSA）法检测各组细胞培养液中TGF-β1的浓度。结果培养后第12h、24h、48h,A组细胞培养液TGF-β1含量较C组升高（P〈0．05或P〈0．01）;G（10）、G（50）组与C组无差异（P〉0．05）,G（100）、G（200）组较C组升高（P〈0．05或P〈0．01）;A＋G（50）、A＋G（100）、A＋G（200）组较A组和G组降低（P〈0．05或P〈0．01）。A＋G（50）、A＋G（100）、A＋G（200）组培养后第24h较培养后第12h升高;而培养后第48h较培养后第24h升高（P〈0．05或P〈0．01）。结论Gen能减少AOPP刺激下系膜细胞TGF-β1的分泌,提示大豆蛋白饮食可能对DKD患者有益。     

转化生长因子-β1对大鼠同种胰岛移植物的影响

目的　研究转化生长因子 β1 (TGF β1 )对大鼠同种胰岛移植物体内外的内分泌功能及存活的影响。方法　构建TGF β1的真核表达载体 pcDNA3 TGF ,并将其转染纯化后的Wistar大鼠胰岛 ,逆转录 聚合酶链式反应 (RT PCR)检测TGF β1和大鼠胰岛素 (Ins1 )在实验组和对照组胰岛中的表达 ,放射免疫法 (RIA)检测体外培养液中的胰岛素含量 ;链脲霉素 (STZ) 60mg/kg体重腹腔内注射制作SD大鼠模型 ,分别将实验组和空白对照组Wistar胰岛移植到受体SD大鼠的肾包囊下 ,观察其在体内逆转糖尿病的作用以及作用时间的长短 ,并检测受体大鼠的糖耐量。结果　实验组胰岛有TGF β1和Ins1的表达 ,而对照组仅有Ins1的表达 ;实验组体外培养液中的胰岛素含量在基础相和刺激相分别为 (3 .86± 1 .2 4 ) μg/L和 (8.43± 1 .59) μg/L ,对照组体外培养液中的胰岛素含量在基础相和刺激相分别为 (4.1 3± 1 .45) μg/L和 (8.95± 1 .74) μg/L ,组间差异无显著性 (P>0 .0 5) ,而组内差异有显著性 (P <0 .0 5) ;实验组平均正常血糖维持时间 (2 6 .8± 2 .9)d比对照组的 (1 3 .2± 4 .5)d显著延长。对照组糖耐量曲线均明显高于实验组。结论　TGF β1对胰岛移植物的内分泌功能无损害作用 ,但是可以延长胰岛移植物体内存活时间     

转化生长因子-β1基因修饰未成熟树突状细胞诱导大鼠肝移植免疫耐受

目的 观察转化生长因子-β1 (TGF-β1)基因转染未成熟树突状细胞(imDC)对大鼠肝移植免疫耐受的诱导作用.方法 利用大鼠骨髓细胞诱导培养imDC,以脂质体介导的pIRES2-EGFP-hTGF-β1转染imDC,于移植前5d输注受体Lewis大鼠体内,移植后分别于3、7、10d抽血检测肝功能[总胆红素( TBIL)和谷丙转氨酶(ALT)]、酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测白细胞介素-12(IL-12)水平、肝组织苏木素-伊红(HE)染色急性排斥反应病理评分、原位末端转移酶标记(TUNEL)法检测肝脏淋巴细胞的凋亡及观察各组大鼠肝移植后的生存时间.结果 TGF-β1组移植后肝功能(TBIL和ALT)优于各对照组(P＜0.05);TGF-β1组移植后3、7d血清IL-12浓度分别为71.03±10.70、80.88±14.23均低于各对照组(P＜0.05);TGF-β1组移植后7d出现交界性排斥反应,移植10 d后出现轻度排斥反应(P＜0.05);TGF-β1基因转染组移植后3、7、10d汇管区淋巴细胞凋亡指数分别为6.75±1.93、14.00±2.19、18.25±1.38,较各对照组均明显增高(P＜0.05);TGF-β1组大鼠移植后中位生存期为58 d,明显长于各对照组.结论 TGF-β1基因改造的imDC能诱导大鼠移植免疫耐受,在诱导器官移植耐受中有良好的应用前景.     

脑胶质瘤增殖活性与转化生长因子-β1的关系

目的 探讨胶质瘤中转化生长因子-β1（TGF-β1）蛋白与增殖细胞核抗原（PCNA）蛋白在胶质瘤中的表达及相互关系。方法 根据WHO标准进行分类，采用免疫组织化学方法对35例胶质瘤和7例正常脑组织石蜡标本中TGF-β1与PCNA蛋白的表达水平进行检测，并比较两者的相关性。结果 TGF-β1和PCNA蛋白在胶质瘤细胞中有不同程度的表达，两者呈正相关（r=0．78，P＜0．01），且它们在正常脑组织，低、高级别胶质瘤之间两两比较差异均有统计学意义（P＜0．05）。结论 人脑胶质瘤TGF-β1蛋白的阳性表达与细胞增殖活性和组织学分级密切相关，它可能参与了人脑胶质瘤细胞的恶性转化。     

双黄补和转化生长因子β1对牙周膜细胞的增殖分化的调控作用的比较

目的：探讨传统中药双黄补（黄连，黄岑，骨碎补）和转化生长因子β1对体外培养的人牙周膜细胞增殖和分化功能的影响。方法：本研究通过体外培养人牙周膜细胞（periodontal ligament cell，PDLCs），应用双黄补（黄连，黄芩，骨碎补）提取液作为辅助因子及转化生长因子β1作为生长因子，分成四组（A）双黄补（B）转化生长因子β1（C）双黄补加转化生长因子β1（D）对照组，采用噻唑蓝（MTT）比色法测定细胞增殖情况，羟脯氨酸法测定胶原蛋白占总蛋白比值。结果：双黄补组与对照组及其他各组比较，明显促进人牙周膜细胞增殖，增加胶原蛋白的比值，有显著性差异（P〈O．05）。A，B，c各组组间比较无显著性差异。随着作用时间的延长，细胞的OD值逐渐增大，在第5天达到最大。结论：双黄补水提液对比转化生长因子β1有明显促进人牙周膜细胞增殖，明显提高胶原蛋白在总蛋白中的比值的作用，可作为人牙周膜细胞增殖的理想的辅助因子。