胎鼠、新生鼠和成年鼠神经干细胞的体外增殖和分化

目的比较个体发育不同阶段所得神经干细胞的体外增殖和分化情况。方法常规的神经干细胞分离培养方法，用免疫细胞化学方法鉴定细胞。结果从胎鼠所得的神经干细胞增殖能力最强，新生鼠的次之，成年鼠的较差。神经干细胞的分化更多地决定于培养条件。结论个体发育不同阶段所得的神经干细胞有不同的生物学特性。     

人脐血间充质干细胞的培养条件比较

目的摸索人脐血间充质干细胞（mesenchymal stem cell,MSC）的培养条件。方法根据不同采血量、首次换液时间、胎龄、不同培养基对样本分组，比较不同培养条件对脐血中的间充质干细胞原代生长的影响，以流式细胞仪对培养出的间充质干细胞进行细胞表面标志检测。结果在相同条件下，取10ml的脐血能较大程度培养出间充质干细胞；观察首次换液时间在培养后96h较为合适，延长换液时间有利于数量不占优势的单核细胞充分贴壁：早产胎儿的脐血培养出的间充质干细胞成功率较高；胎牛血清的质和量决定了培养成功与否。培养出的间充质干细胞不表达造血细胞系的标志（CD34、CD45、CD14）及内皮细胞的标志（CD106），强表达CD29、CD44、CD13。结论样本量、首次换液时间、胎龄、培养基的质和量对MSCs的成活、生长有关键作用。     

神经干细胞的分离及培养方法

神经干细胞的研究是近十年来神经科学领域中最重要的发展之一，这不仅涉及人类将深入探讨大脑的功能，研究神经系统的发生学，更重要的是神经系统的干细胞在神经损伤修复和退行性疾病的治疗中存在着巨大的应用潜能。但神经干细胞又因其培养条件高、难度大，且目前分离这些神经干细胞还存在一定的困难，分离到的神经干细胞纯度低，影响实验结果。本就此简单综述了近十几年来国内外神经干细胞离散培养的一些方法。     

维持干细胞多能性关键基因被发现

健康报讯 日前，我国科学家首次发现并明确证实了决定小鼠干细胞多能性的关键基因决定簇。这是继我国科学家在国际上首次证明iPS细胞具有全能性后，在国际竞争最激烈的领域——干细胞多能性维持机制研究方面获得的又一重大突破。     

体外培养的神经干细胞的端粒和端粒酶活性

目的了解体外培养的神经干细胞端粒酶活性，观察培养不同时间神经干细胞的端粒酶活性、端粒长度的情况。方法采用无血清培养法从新生大鼠脑皮质分离培养神经干细胞，通过免疫荧光细胞染色鉴定神经干细胞；TRAP-ELISA法测定培养4～12周的神经干细胞的端粒酶活性；Southern-blot法测定培养第1代、第10代时神经干细胞的端粒长度。结果从新生大鼠脑皮质分离培养的神经干细胞具有端粒酶活性；体外培养12周内神经干细胞的端粒酶活性未见变化；神经干细胞具有较长的端粒（23．8～24．3kb），且不随细胞传代而变化。结论大鼠脑神经干细胞具有端粒酶活性，在体外培养过程中，未见活性变化并能维持端粒的长度。     

德国科学家首次从体细胞中获取胚胎干细胞

本刊讯在最近德累斯顿举行的第二届国际干细胞会议上，德国明斯特马普分子生物医学研究所所长汉斯·舒勒宣布，他领导的研究小组利用实验鼠的睾丸细胞，通过实验室人工培养获得胚胎干细胞，这是国际上首次不用遗传细胞的直接介入，而从体细胞中获得胚胎干细胞。     

难以遏制的干细胞研究热

干细胞研究热仍在持续着,这一紧随美国总统布什允许有限的人类胚胎干细胞研究的决定而来的热潮,实现了从成人大脑和皮肤上获取干细胞这两大进步。然而,这些细胞在组织修复方面的潜力目前仍不清楚。     

胶质瘤中肿瘤干细胞的分离、培养及鉴定

目的在胶质瘤中分离，培养及鉴定脑肿瘤干细胞，观察脑肿瘤干细胞的生长特性，建立脑肿瘤干细胞分离、培养及鉴定的方法，为脑肿瘤干细胞的进一步研究打下基础。方法术中取胶质瘤细胞，接种于含生长因子的无血清培养基中培养，使其中的脑肿瘤干细胞增殖，并进行有限稀释实验确定肿瘤比例及增值能力；利用细胞免疫荧光及组织免疫组化法检测脑肿瘤干细胞在细胞培养或组织切片中CD133和Nestin的表达。结果在胶质瘤中，只有大约1％的细胞能在无血清培养基中存活并悬浮生长，并增殖形成克隆性脑肿瘤干细胞球，传代后脑肿瘤干细胞仍保持很强的自我更新和增殖能力；体外培养中脑肿瘤干细胞表达神经干细胞的特异性标志物Nestin和CD133，在肿瘤组织切片中表达CD133阳性细胞。结论胶质瘤组织中存在极少数的脑肿瘤干细胞（大约为1％），并能在体外将其分离，培养；神经干细胞可能是脑肿瘤干细胞的起源细胞。     

不同培养体系培养的间充质干细胞成骨再生相关 基因的比较

目的 比较血小板裂解物和胎牛血清培养的骨髓间充质干细胞、脐带间充质干细胞和胎盘间充质干细胞成骨再生相关基因的表达情况.方法 采用a-MEM+胎牛血清和a-MEM+血小板裂解物+抗坏血酸培养骨髓来源间充质干细胞、脐带来源间充质干细胞和胎盘来源间充质干细胞.CCK8法检测两种培养体系培养的三种间充质干细胞的增殖能力;流式鉴定两种培养体系培养的P3代间充质干细胞表型;RT-qPCR法检测P3代间充质干细胞骨再生关键因子(RUNX2、Osterix、OPN)的基因表达情况.结果 两种培养体系培养的P3代间充质干细胞流式鉴定阳性率均高于98%,阴性率均低于2%;a-MEM培养液+血小板裂解物+抗坏血酸培养出的间充质干细胞,其决定成骨再生相关基因的表达均显著性高表达.结论 a-MEM培养液+血小板裂解物+抗坏血酸培养体系培养出的间充质干细胞可作为骨组织再生的种子细胞应用于骨缺损修复.     

神经干细胞定位及干细胞克隆

干细胞的研究是当前生命科学的热点 ,《Science》将干细胞研究评为 2 1世纪最重要的十项研究领域之首 ,为世界瞩目。我国国家科技部及自然科学基金委员会也把“人干细胞的研究”作为 2 0 0 1年《国家重点基础研究发展规划》的重要支持方向。神经干细胞的研究目前在神经科学方面展示了其广阔的前景 ,国内在这方面的工作才刚刚开始 ,国外在这方面的工作集中在干细胞的基因修饰及基因工程干细胞移植治疗脑损伤性疾病的安全性问题上。但干细胞的克隆培养、纯化培养方面的资料还较少。本文仅就神经干细胞的定位、鉴定及克隆培养简要阐述。1　神…     

壳聚糖与神经干细胞生物相容性的研究

目的 探讨生物降解材料壳聚糖与神经干细胞的生物相容性。方法 取SD大鼠胚胎（孕14-16d)大脑皮层组织制成单细胞悬液在无血清培养液中进行培养，获得大量的神经干细胞，再将所获神经干细胞在不同条件下移植接种至壳聚糖膜上联合培养1周，在倒置显微镜下观察神经干细胞生长增殖情况及形态变化，并对其分别进行免疫组化染色，电镜观察，了解壳聚糖对神经干细胞生长，增殖，分化的影响。结果 在无血清联合培养条件下，神经干细胞仍然维持其原有的干细胞特性；在含血清的培养液中，神经干细胞能分化成多种形态的神经细胞，并且在壳聚糖膜上生长良好。结论 壳聚糖与神经干细胞具有良好的生物相容性。     

脂肪组织是干细胞最佳培养环境

据生物谷报道，美国斯坦福大学医学院的研究人员发现抽出的人体脂肪是培养干细胞的最佳“温室”，利用从脂肪培育的干细胞，可以迅速转为其它身体细胞，用以修复皮肤、内脏、肌肉、骨骼。而且这种脂肪细胞并不需要小鼠纤维原细胞，这可能有助于减少在人类患者身上使用时导致并发症的因素。这一研究成果公布在《美国国家科学院院刊》上。     

人骨髓基质干细胞克隆对脐血造血干细胞体外扩增作用的研究

目的：探讨人骨髓基质干细胞的克隆化培养及其对体外造血干细胞扩增的影响。方法：取正常肋骨分离骨髓，制备单个核细胞贴壁培养，约5d后取集落样生长的梭形细胞扩增培养，传代、将分选的脐血造血干／祖细胞接种到克隆培养的人骨髓基质干细胞及其他培养条件液上，比较不同培养条件及不同代次骨髓基质干细胞对造血干／祖细胞扩增能力及集落形成能力的影响。结果：人骨髓基质干细胞能扩增达20代以上，经流式细胞仪检测证实基质干细胞，单纯细胞因子组和细胞因子加基质干细胞组能有效扩增造血细胞，而后者有维持长期造血的作用。结论：该克隆培养方法能有效扩增骨髓基质干细胞，培养的细胞有体外支持长期造血的作用。     

兔骨髓间充质干细胞的提取与体外培养

目的 通过提取兔骨髓中间充质干细胞(Mesenchymal stem cells，MSCs)并加以纯化，在体外培养条件下研究其增殖及生长特性。方法 从骨髓中提取间充质干细胞，体外培养扩增，再以相差显微镜、电镜观察并绘制生长曲线。结果 原代培养及传代培养显示，兔自体骨髓间充质干细胞具有活跃的增殖倍增能力；骨髓间充质干细胞内细胞器与其生物活性变化相一致。结论 骨髓间充质干细胞体外培养成功，为今后利用自体间充质干细胞通过组织工程学方法修复软骨、骨、肌肉系统的组织缺损奠定了基础。     

胎鼠胃上皮细胞增殖和分化的电镜和免疫组化观察

用电镜和免疫组化的方法观察了１５￣１６天胎龄的胚胎大鼠胃上皮组织在体外培养过程中增殖及分化的情况。结果表明未分化的上皮细胞在培养过程中大量增殖，并分化出粘液细胞，壁细胞等功能细胞。并初步表明氢化可的松可以促进这一分化过程的进行。实验为在体外研究胃粘膜未分化的干细胞的增殖和分化这一重要生理活动建立了方法，所得结果初步提示皮质激素可能会影响胃粘膜干细胞的增殖分化。     

神经干细胞球和单层贴壁神经干细胞的培养及鉴定

目的：探讨小鼠大脑皮层源性神经干细胞（NSCs）体外培养的两种方法并对培养的细胞进行鉴定。方法：分别取孕14-16d的昆明小鼠胚胎脑皮质并用细胞球悬浮培养和单层贴壁培养两种方法进行体外培养，用光学显微镜观察NSCs的生长情况，并用免疫细胞化学鉴定NSCs特异性抗原的表达，经过血清对NSCs分化诱导后进行胶质纤维酸性蛋白及微管相关蛋白．2的检测。结果：①培养出来的细胞可以扩增生长；②这两种方法分别培养的神经干细胞球和单层神经干细胞经抗巢蛋白免疫细胞染色均呈阳性；③两种培养方法培养出的NSCs经诱导分化后，免疫细胞化学染色显示微管相关蛋白-2、神经胶质酸性蛋白染色阳性。结论：采用无血清培养基中加入特定生长因子的神经干细胞球培养和单层贴壁两种培养技术，可培养出在体外稳定增殖并有多向分化潜能的NSCs。     

神经干细胞的分离培养及超微结构研究

目的研究神经干细胞分离培养及其超微结构特征。方法从胚胎大鼠的大脑皮质、室管膜下区等神经组织分离神经干细胞，用无血清培养技术在体外进行培养、扩增和传代。采用免疫荧光技术，鉴定神经干细胞和分化的神经细胞，同时进行电镜结构观察。结果从胚胎大鼠的大脑皮质、室管膜下区等组织获得了大量神经干细胞，可自我增殖并多向分化。神经球表面呈微绒毛结构，内层细胞结合较为松散．可见凋亡小体。部分细胞分化为具有突起和轴突样结构的细胞。结论分离培养的神经干细胞具有自我增殖和多向分化潜能，并具有与功能相对应的超微形态结构。     

骨髓间充质干细胞的分离、培养、鉴定及生物学特性研究

目的 通过体外细胞培养和贴壁筛选法将骨髓间充质干细胞由骨髓中分离纯化并加以鉴定，观察该细胞的生物学特性，为其用于组织工程提供实验基础。方法 提取骨髓，通过离心和贴壁筛选培养获取骨髓间充质干细胞，原位杂交检测骨髓间充质干细胞的表面标志CD44对培养细胞进行鉴定；测定其生长曲线和贴壁率。结果 通过体外培养和贴壁筛选可获得骨髓间充质干细胞，该细胞在体外培养条件下可在短时间内贴壁生长，增殖速度迅速，适应性强，长期传代不改变其生物学特性。结论 体外细胞培养和贴壁筛选能有效分离纯化免骨髓间充质干细胞，细胞扩增稳定。     

造血干细胞体外培养成功

武汉医学院第一附属医院血液病研究室在为“四化”作贡献的号召下,通过艰巨的努力,在动物造血干细胞的体外培养获得成功的基础上,人体造血干细胞体外培养法相继成功。造血干细胞是各种血细胞的始祖,能更新与增殖各种血细胞,没有造血干细胞这一“种子”,就没     

自体角膜缘干细胞培养移植研究进展

随着角膜缘干细胞概念的确立，临床和实验证实角膜上皮干细胞位于角膜缘，角膜上皮病变是由于角膜缘干细胞功能缺陷或数量不足而引起。解决这些角膜疾病的根本方法是采取含有角膜缘干细胞的组织移植术。目前认为最有前途的治疗方法应是自体角膜缘干细胞培养后自体移植。作就这一方面的研究进展做一综述。