Gadd45g基因对垂体瘤AtT-20细胞的增殖、凋亡和自噬的影响

目的 探讨生长阻滞及DNA损伤诱导基因45g(Gadd45g)过表达及靶向沉默对垂体瘤AtT-20细胞及小鼠原代星型胶质细胞的增殖、凋亡及自噬等影响.方法 构建 Gadd45g 基因的CDS区序列克隆至真核表达质粒 p3XFLAG-Gadd45g及其shRNA真核表达质粒pLKO .1-sh-Gadd45g ,将p3XFLAG-Gadd45g转染至小鼠垂体瘤AtT-20细胞中.其shRNA真核表达质粒pLKO .1-puro-sh-Gadd45g进行慢病毒包装,病毒感染小鼠星形胶质细胞;Western blot检测FLAG-Gadd45g融合蛋白的表达及RT-PCR检测shRNA沉默效率,CCK-8检测细胞增殖活力 ,Western blot检测其对凋亡蛋白、自噬蛋白的影响.结果 Gadd45g及其特异性shRNA真核表达质粒构建成功.构建的p3XFLAG-Gadd45g质粒在垂体瘤AtT-20细胞中能够表达;Gadd45g shRNA具有沉默效率.在垂体瘤AtT-20细胞中过表达Gadd45g ,可明显抑制细胞增殖 ,并能诱导Caspase-3表达,降低Beclin 1表达及LC3-Ⅱ/Ⅰ的比值(P＜0 .05).与之相反,在原代培养的星形胶质细胞中,shRNA干扰Gadd45g表达,可促进细胞增殖,并降低Caspase-3表达,而增加Beclin 1表达及LC3-Ⅱ/Ⅰ的比值(P＜0 .05).结论 垂体瘤中Gadd45g的表达缺失可能使得垂体瘤A t T-20细胞凋亡受阻及自噬作用增强 ,从而促进垂体瘤的发生、发展.恢复垂体瘤细胞中Gadd45g的表达及抑制垂体瘤细胞自噬作用有望成为垂体瘤治疗的新方法.     

靶向诱导DNA甲基化与肿瘤治疗研究进展

DNA甲基化是表观遗传调控的重要方式之一,它能在转录水平上抑制相关基因的表达,从而引起基因沉默。近年来的研究表明,DNA的甲基化不仅在生物体内自然发生,而且可通过特异的RNA、DNA等靶向诱导产生。肿瘤的细胞中存在癌基因的异常低甲基化,而且这种异常被认为是肿瘤的发病机制之一。因此,通过靶向诱导癌基因甲基化来抑制癌基因的表达、抑制肿瘤生长的方法,为肿瘤治疗提供了一种新的思路。本文就靶向诱导DNA甲基化与肿瘤治疗的临床前研究进展作一简述。     

土贝母皂苷诱导人鼻咽癌细胞株CNE-2Z细胞凋亡的研究

目的　研究土贝母皂苷 (下称皂苷 )对人鼻咽癌细胞株CNE 2Z细胞凋亡的影响。方法　MTT法检测皂苷对CNE 2Z细胞生长的影响 ;形态学方法 (荧光显微镜和透射电镜 )、流式细胞仪和DNA琼脂糖凝胶电泳观察和分析在皂苷作用下CNE 2Z细胞形态、DNA含量的变化和DNA断裂的情况 ;蛋白免疫印迹法检测凋亡相关基因bcl 2、bax和cas pase 3表达的变化。 结果　皂苷抑制CNE 2Z细胞的生长 ,其效果与皂苷的浓度和作用时间相关 ;诱导CNE 2Z细胞发生典型程序性死亡 ;凋亡抑制基因bcl 2表达逐渐减少 ;而凋亡诱导基因bax和caspase 3在 1、3、5h表达增高。 结论　诱导细胞凋亡是皂苷发挥抗瘤效果的一种重要机制 ;皂苷诱导的CNE 2Z细胞凋亡与bcl 2、bax和caspase 3基因有关     

真核细胞筛选系统快速检测环境水样的DNA损伤效应

目的利用含生长抑制和DNA损伤诱导基因153(gadd153)启动子和荧光素酶报道基因真核细胞株GADD153-Luc,建立快速检测环境水样中有机提取物的DNA损伤作用的新方法。方法RT-PCR方法检测内源性gadd153基因mRNA表达;生物发光和彗星试验分别检测环境水样对稳定转染细胞和HepG2细胞的DNA损伤效应。结果RT-PCR结果表明,在100ml/ml培养基剂量组,源水和氯化消毒饮用水中有机提取物可诱导gadd153基因mRNA表达显著增加(P<0.05),并与荧光素酶活性呈正相关;荧光素酶表达在源水和氯化消毒饮用水有机提取物各剂量组均显著高于对照组(P<0.01),并有良好的剂量反应关系;彗星试验显示,在10、100ml/ml培养基剂量组源水和氯化消毒饮用水有机提取物处理后,OTM(Olive尾距)显著高于对照组(P<0.01);相关分析表明,各剂量组诱导荧光素酶活性和DNA损伤程度(OTM)呈正相关(P<0.01)。结论真核细胞gadd153-Luc检测体系可用于快速检测环境水样的DNA损伤效应,并具有较高的灵敏性。     

细胞因子和趋化因子作为DNA疫苗基因佐剂的研究进展

1990年第1次报道了编码外源抗原的裸露质粒DNA（naked plasmid DNA）注射小鼠后可以在体内表达抗原基因。尔后，一系列动物实验证明DNA疫苗能诱导针对其所编码抗原的体液或细胞免疫。由于DNA疫苗免去了烦琐的蛋白质表达与纯化步骤，更重要的是，基因在体内的表达及诱导免疫的过程，模拟了自然状态下机体感染外源病原生物表达抗原及诱导免疫的过程。因此，DNA疫苗系统一经建立，便很快成了抗感染、抗肿瘤免疫等领域的研究热点。     

FK228对人肝癌细胞HepG2凋亡及细胞周期基因表达的影响

目的：探讨FK228对人肝癌细胞HepG2凋亡及细胞周期基因p 21,cdk4表达的影响。方法：培养HepG2,应用四氮唑蓝(MTT)比色法观察FK228对HepG2的生长抑制作用,琼脂糖凝胶电泳分析细胞DNA特征,流式细胞术分析细胞周期,以RT-PCR检测HepG2细胞中p 21,cdk4基因表达水平。结果：组蛋白去乙酰化酶抑制剂FK228能抑制人肝癌细胞HepG2生长,并具有时间和剂量依赖性；FK228引起细胞周期G1期阻滞并诱导凋亡；FK228能明显促进p21mRNA转录,同时抑制cdk4mRNA的转录。结论：FK288能抑制HepG_2细胞增殖,诱导HepG_2细胞凋亡和周期阻滞；调节p21和cdk4基因的表达可能是FK228抑制HepG_2细胞生长的重要机制。     

青蒿素及其衍生物的抗肿瘤作用及其最新进展

青蒿素类药物是治疗疟疾的主要药物,其衍生物有青蒿琥酯、蒿甲醚和二氢青蒿素等,主要的作用机制是通过铁离子介导的细胞损伤。近年来研究发现,青蒿素类药物还具有更广泛的药理作用,它可以通过阻滞细胞周期、诱导细胞凋亡、抗血管生成、调节肿瘤相关基因的表达以及损伤细胞线粒体等机制从而发挥抗肿瘤作用,其抗肿瘤作用日愈受到人们的重视。     

能阻断Hdm2：p53复合物形成的抗肿瘤药物

肿瘤抑制转录因子p53在DNA损伤的细胞响应、细胞周期阻滞和凋亡中具有关键作用。在近一半的癌症中，出现p53基因的功能缺失性突变，导致肿瘤细胞的迅速生长和耐药性产生。Hdm2蛋白是主要的p53负性调节子，通过两种不同机制起作用：（1）直接与p53结合，抑制其正常结合功能，使之不能形成转录复合物。（2）通过蛋白体途径靶向p53，使其泛素化并降解。野生型p53的肿瘤抑制作用会因为Hdm2的过度表达而减弱，因而抑制Hdm2与p53相互作用，已成为近年肿瘤药物研究的一个主要领域。     

EI24在肿瘤中的研究状况

EI24(etoposide-induced gene 24)是一种由依托泊苷以依赖于p53的方式诱导的DNA损伤应答基因,可通过p53介导的凋亡途径抑制细胞生长,在多种恶性肿瘤中通过促进癌细胞凋亡发挥抑癌作用。EI24基因编码的位于内质网膜上的EI24蛋白,是一种重要的自噬蛋白,参与自噬小体的形成,促进自噬通量,从而在多种恶性肿瘤中发挥抑癌作用,但这也有利于促进依赖自噬维持生存的胰腺癌的生长。该基因定位于11q23-q24,是人类癌症中一个频繁突变的区域,其突变与肿瘤的恶性和侵袭性相关,在不同类型的肿瘤中。EI24的表达水平和所发挥的功能不同,EI24在乳腺癌、非小细胞肺癌、胰腺癌等大多数肿瘤中表达水平较正常组织低,并通过诱导凋亡、激活自噬、抑制上皮间质转化等功能以及基因突变在肿瘤的发生发展中发挥抑癌基因的作用。但在皮肤癌中,EI24的表达水平较正常组织高,并能促进皮肤癌的癌变,发挥癌基因的作用,其机制可能是与EI24结合的互作蛋白不同有关。本文就EI24的生物学功能及其在肿瘤中的作用做一综述。     

ING4基因与肿瘤研究新进展

ING4基因是肿瘤抑制因子家族的新成员,近来研究发现,ING基因在正常组织中表达丰富,但在多种恶性肿瘤组织,如乳腺癌、胶质瘤、肺癌等中表达明显下调,ING4可通过增强p53基因的活性、恢复细胞间接触抑制、抑制肿瘤血管生成、抑制HIF的活性而抑制肿瘤的生长,还能诱导细胞凋亡,增加肿瘤细胞对放化疗的敏感性,本研究对ING4基因与肿瘤研究的新进展进行综述。     

伊达比星在MCF-7乳腺癌细胞系中对DNA及c-myc的作用

本文评价了伊达比星(idarubicin)对DNA合成、c-myc表达及MCF-7乳腺癌细胞生长的作用。进一步证明了在不存在DNA断裂和凋亡现象时乳腺癌细胞也能发生死亡。采用MTT四唑蓝染色试验来评价DNA生长抑制;采用碱洗脱方法来检测诱导DNA链断裂;对DNA合成的抑制是通过测量掺入DNA的标记胸腺嘧啶来确定的;由Northern印迹法来检测对致癌基因c-myc表达的调控;由碱解链、静电场凝胶电泳、末端标记和细胞形态学研究来评价诱导细胞凋亡。实验结果表明,伊达比星对MCF-7乳腺癌细胞有浓度依赖性的抑制生长作用,其IC50值约为0.01μmol·L-1。只有当…     

P53促凋亡蛋白家族和p53的相互作用与细胞凋亡的研究进展

肿瘤的形成是原癌基因和抑癌基因遗传性变化如增加、丢失、突变，逐步积累的过程。同时，肿瘤又是遗传因素和后天因素共同作用的多因子疾病。p53是一个肿瘤抑制蛋白，它首先可通过影响编码细胞周期相关蛋白质的基因表达来调控细胞周期的G1停滞．同时它还会因为DNA的损伤增多．诱导细胞发生细胞凋亡。但p53诱导细胞凋亡的机制多年来一直不太清楚．而最近发现的ASPP(apoptosis stimulating protein of p53)蛋白家族对p53诱导细胞凋亡的机制的研究有了新的进展。本文就此作一综述。     

4′,5′,7-三羟基异黄酮对NB4人急性早幼粒白血病细胞生长和分化的影响

目的：研究4′,5′,7-三羟基异黄酮（genistein）对NB4白血病细胞生长和分化的影响,揭示其诱导细胞凋亡作用。方法：分别用NBT还原力分析、DNA电泳分析观察药物诱导分化和凋亡作用;Northern杂交分析和质粒DNA断裂分析检测bcl-2基因表达和DNA拓扑异构酶II活性。结果：Genistein可明显抑制NB4细胞生长,并致细胞大量死亡。在浓度高于40 μmol.L^-1时,可诱导典型的凋亡形态,同时,细胞bcl-2基因表达受到抑制。Genistein可促进DNA拓扑异构酶II介导的DNA断裂, 但诱导NB4细胞分化作用较弱。结论：Genistein通过诱导细胞凋亡来杀伤和抑制NB4细胞的生长,其机制与抑制DNA拓扑异构酶II活性有关。     

腺病毒介导的p21基因联合顺铂对胃癌的作用

目的 探讨腺病毒介导的p21基因在人胃癌细胞株SGC-7901中的表达及其对肿瘤细胞生长和荷瘤小鼠的作用。方法 采用腺病毒载体携带周期控制基因p21转染人胃癌细胞株，用流式细胞仪技术测定p21基因对SGC-7901细胞周期的影响，并与CDDP联合应用，观察p21基因和／或CDDP对SGC7901细胞株和荷瘤小鼠的作用。结果 腺病毒介导的p21基因可在胃癌细胞株SGC-7901中过度表达，使胃癌细胞株S期含量下降，抑制其生长(抑制率为80％)，并可诱导胃癌细胞的凋亡；p21基因联合CDDP作用使SGC-7901细胞G2／M含量明显下降，并可抑制荷瘤小鼠肿瘤细胞的生长，且联合作用比单一用药作用更明显。结论 腺病毒介导的p21基因可抑制人胃癌细胞株的生长，抑制瘤体的生长，结合化疗药物作用更强，为临床应用提供了依据。     

宫颈癌相关基因甲基化研究

DNA甲基化属于表观遗传修饰的一种,是真核细胞DNA最普遍的修饰方式,可以通过影响基因突变、表达调控、细胞增殖等调节基因转录活性和表达.研究发现基因启动子甲基化的程度直接影响基因的转录活性,并且呈负相关.由于肿瘤的形成从本质上讲就是细胞原癌基因的激活和抑癌基因的失活所致,所以异常的DNA甲基化在致癌作用上扮演了重要角色.     

细胞周期检测点激酶1在结直肠癌中的表达及其预后意义

<正>结直肠癌是消化系统常见的恶性肿瘤,由于其发病较为隐匿,多数患者在就诊时已经到了中晚期,其死亡率仅次于肝癌和肺癌。结直肠癌的发生发展是多基因多因素共同作用的结果,其中细胞周期的调控对细胞的增殖起着重要的作用,细胞周期检测点激酶1(CHK1)是细胞周期检测中关键的蛋白激酶,主要在S期和G2/M期进行调控,是保证细胞周期正常运行和基因蛋白完整性的重要调节因子,与DNA损伤修复、凋亡及转录等有关~([1])。抑癌基因NPRL2也称肿瘤抑制候选基因4,广泛存在于人类组织中,NPRL2基因具有DNA错配修饰、调控细胞周期及诱导细胞凋亡的功能~([2,3])。本文通过检测结直肠癌中CHK1和NPRL2蛋白的表达情况,探讨     

Livin基因和Survivin基因联合靶向siRNA抑制大肠癌细胞增殖的作用

采用1个载体编码2个shRNA技术, 构建Livin基因和Survivin基因联合靶向的siRNA重组表达载体, 研究其对人大肠癌细胞生长协同抑制的增效作用。构建Livin基因和Survivin基因联合靶向的siRNA重组表达载体并转染大肠癌细胞, 通过RT-PCR和Western blotting方法检测Livin基因与Survivin基因的表达, 利用流式细胞仪检测处理后细胞的凋亡效应。经酶切鉴定和测序分析证实Livin基因和Survivin基因联合靶向的siRNA重组表达载体构建成功, 它对大肠癌细胞Livin和Survivin mRNA的抑制率分别为27.90%和32.24%, 对Livin和Survivin蛋白表达的抑制率分别为22.28%和40.86%, 诱导肿瘤细胞凋亡率为 (11.69 ± 1.37) %, 但协同干扰作用比单独干扰Livin基因或Survivin基因弱。Livin基因和Survivin基因联合靶向的siRNA重组表达载体构建成功并能抑制Livin基因和Survivin基因的表达, 但协同抑制作用比单独干扰Livin基因或Survivin基因弱。     

肿瘤抑制因子：老卫士的终结？

基因组卫士p53在DNA损伤时能够迅速诱导细胞周期停滞和凋亡，从而防止肿瘤形成。最近这一观点受到挑战，Evan和Serrano等研究表明，DNA损伤的早期反应并非必需的，癌基因介导的p19^ARF激活进而激活p53才是抑制肿瘤的关键环节。     

BRCA1基因与乳腺癌的研究进展

乳腺癌是女性最常见的恶性肿瘤。BRCA1是重要的乳腺癌易感基因,亦是一种抑癌基因。它参与了细胞周期的调节,DNA损伤修复,基因的转录调控等功能。BRCAl基因的突变与家族性乳腺癌的发生密切相关,而BRCA1蛋白在散发性乳腺癌中的表达水平降低,提示其在散发性乳腺癌中也有重要作用。该文将对BRCA1的基因突变,甲基化和多态性等遗传学改变与乳腺癌的易感性,治疗和预后作了综述。了解BRCA1与乳腺癌的发生、发展及预后,对于最终发现治疗乳腺癌的新方法有着重要价值     

异黄酮对前列腺癌细胞及PTEN基因的影响

目的 通过大豆异黄酮抑制前列腺癌PC-3和LNCaP细胞生长和相关基因表达的影响，探讨大豆异黄酮类抑制前列腺癌的机制。方法 对染料木黄酮和大豆甙元作用后的雄激素非依赖型前列腺癌(PC-3)、雄激素依赖型前列腺癌LNCaP细胞的存活率、细胞毒作用、细胞周期和PTEN基因的mRNA表达等进行了研究。结果 染料木黄酮和大豆甙元对PC-3、LNCaP细胞抑制效应具有时间和剂量依赖性，具有诱导凋亡和引起坏死效应；染料木黄酮能诱导PC-3和LNCaP细胞的(PTEN)表达，而大豆甙元只能诱导LNCaP细胞PTEN表达。结论 PTEN基因表达的变化可能在染料木黄酮和大豆甙元抑制PC-3和LNCaP细胞中具有重要的意义。染料木黄酮和大豆甙元抑制PC-3和LNCaP细胞可能存在多种作用途径。