PKC-α、PKA-Ⅰ反义核酸对鼻咽癌CNE-2Z细胞生长增殖的影响

目的 :探讨PKC -α和PKA -Ⅰ反义核酸 (asODN)对鼻咽癌CNE - 2Z细胞生长增殖的影响。方法 :分别用脂质体 (lipofectin ,LP)介导asODN转染鼻咽癌CNE - 2Z细胞。实验组 :① 0 0 1- 1 0 0 μmol/LPKC -αasODN ;②0 0 1- 1 0 0 μmol/LPKA -ⅠasODN ;③ 0 5 0 μmol/LPKC -αasODN +0 5 0 μmol/LPKA -ⅠasODN。对照组 :相应浓度的随机序列 (rODN)。用免疫组化法检测CNE - 2Z细胞PKC -α和PKA -Ⅰ的表达 ,MTT法检测其生长指数 (growthin dex ,GI) ,软琼脂克隆形成率检测其体外增殖能力。结果 :PKC -αasODN或 /和PKA -ⅠasODN均可阻断其相应PKC-α或PKA -Ⅰ的表达 (P <0 0 5 )。PKC -αasODN或PKA -ⅠasODN均能显著降低CNE - 2Z细胞GI和软琼脂克隆形成率 (P <0 0 5 ) ,且具有量效依赖关系。PKC -αasODN +PKA -ⅠasODN共同作用可使其GI和软琼脂克隆形成率非常显著降低 (P <0 0 1) ,无明显量效依赖关系 ,两者对CNE - 2Z生长抑制作用强于PKC -αasODN或PKA -Ⅰa sODN(P <0 0 5 ) ,对其软琼脂克隆形成率的抑制作用与PKC -αasODN或PKA -ⅠasODN无显著差异 (P >0 0 5 )。结论 :PKC -αasODN和PKA -ⅠasODN均可抑制CNE - 2Z细胞体外生长和增殖 ,两者具有协同作用。     

PKC—α、PKA—I反义核酸对鼻咽癌CNE—2Z细胞生长增殖的影响

目的：探讨PKC—α和PKA—I反义核酸(asODN)对鼻咽癌CNE—2Z细胞生长增殖的影响。方法：分别用脂质体(lipofectin,LP)介导asODN转染鼻咽癌CNE—2Z细胞。实验组：①0．01—1．00μmol/L PKC-α asODN；②0．01—1．00μmol/L PKA-I asODN；③0．50μmol/L PKC-α asODN。对照组：相应浓度的随机序列(rODN)。用免疫组化法检测CNE—2Z细胞PKC-α和PKA-I的表达，MTT法检测其生长指数(growth in-dex,GI)，软琼脂克隆形成串检测其体外增殖能力。结果：PKC-α asODN或/和PKA-I asODN均可阻断其相应PKC-α或PKA-I的表达(P＜0．05)。PKC-α asODN或PKA-I asODN均能显著降低CNE—2Z细胞GI和软琼脂克隆形成率(P＜0．05)，且具有量效依赖关系。PKC-α asODN PKA-I asODN共同作用可使其GI和软琼脂克隆形成率非常显著降低(P＜0．01)，无明显量效依赖关系，两者对CNE—2Z生长抑制作用强于PKC-α asODN或PKA-I a-sODN(P＜0．05)，对其软琼脂克隆形成率的抑制作用与PKC-α asODN或PKA-I asODN无显著差异(P＞0．05)。结论：PKC-α asODN和PKA-I asODN均可抑制CNE—2Z细胞体外生长和增殖，两者具有协同作用。     

三种反义c—mycRNA对成纤维细胞NIH3T3的体外生物学效应

目的　了解反义c myc基因稳定整合对正常细胞的影响。　方法　将分别载有c myc第 1、2和 3外显子的反义片段的 3种反义c myc重组逆转录病毒表达载体aM1、aM2和aM3,导入c myc正常表达的正常小鼠成纤维细胞系NIH3T3,并在基因稳定表达后进行各项检测。　结果　 3种反义载体导入明显抑制了NIH3T3c myc表达(抑制作用aM2 >aM3>aM1)、PCNA表达 (aM2 >aM1>aM3) ,使细胞体外生长增殖活性下降 (下降程度aM2 >aM1>aM3) ,aM2、aM3还使细胞周期出现了延长和DNA合成减少 ,并使NIH3T3软琼脂集落形成能力下降 (aM2 >aM3)。　结论　反义c mycRNA的导入对正常细胞的生长增殖能力有抑制作用 ,提示局部治疗和靶向治疗在反义c myc基因治疗中的必要性     

蛋白激酶C对鼻咽癌CNE-2Z细胞蛋白酪氨酸磷酸化的影响

利用细胞培养、蛋白激酶C(PKC)的抑制剂和免疫细胞化学法 ,探讨PKC对人低分化鼻咽癌细胞CNE 2Z中磷酸化酪氨酸蛋白分布的影响。结果发现 :磷酸化酪氨酸蛋白主要在胞膜 (6 5 2 % )与胞浆 (85 % )表达。作用于PKC调节区的抑制剂sphingosine(SS) (2× 10 -5mol/L)与作用于催化区的staurosporine(ST) (2× 10 -6mol/L)使其表达减弱、胞膜阳性率分别降低至 12 8%和 9 0 %。提示PKC对CNE 2Z细胞蛋白酪氨酸磷酸化具有调控作用     

子宫颈癌中癌基因产物c—Fos、c—Jun的表达及意义

目的 :探讨癌基因c fos、c jun表达产物与子宫颈癌的发生 ,发展及预后的关系。方法 :用免疫组化SABC法 ,以兔抗c fos、c jun抗体标记 6 0例子宫颈癌和 30例子宫颈上皮不典型增生 ,观察其分化程度和组织学类型 ,子宫颈癌的表达及阳性率比较。结果 :c fos、c jun阳性反应见于不典型增生上皮和子宫颈癌组织 ,不典型增生上皮c fos、c jun阳性率分别为 70 0 %和 5 0 0 %癌组织为 5 6 6 %和 4 8 3% ;在子宫颈癌表达的阳性率与癌组织分化程度和组织学类型有关 (P <0 .0 5 )。结论 :提示c fos、c jun过量表达可发生在不典型增生的子宫颈上皮和子宫颈癌组织     

genistein对人卵巢癌细胞系SKOV3及其裸鼠移植瘤中表皮生长因子受体介导的信号转导通路的影响

目的　通过 genistein对人卵巢癌细胞系SKOV3 及其裸鼠移植瘤中表皮生长因子受体(EGFR)介导的肿瘤信号转导系统的影响 ,探讨其抑制增殖作用的机制。方法　应用免疫细胞化学链霉素抗生物素蛋白过氧化物酶 (SP)法检测c erbB 2蛋白的表达 ;Western印迹检测细胞c jun和c fos蛋白的表达 ;逆转录 聚合酶链反应 (RT PCR)检测c erbB 2 ,c raf 1,c jun和c fosmRNA的表达。结果　 2 0 μmol/Lgenistein处理组c erbB 2、c raf 1及其下游基因c jun、c fosmRNA表达减弱。2 0 μmol/Lgenistein处理SKOV3 细胞 4 8h后 ,c erbB 2蛋白表达减弱 ,平均吸光度 (A)值减低 ,为0 4 2± 0 0 2 (P <0 0 5 )。Western印迹检测结果表明 :2 0 μmol/Lgenistein处理SKOV3 细胞 12～ 72h后 ,c jun、c fos蛋白表达水平逐渐减弱。结论　genistein下调SKOV3 中EGFR介导的肿瘤信号转导通路中两个关键基因c erbB 2和c raf 1之mRNA及蛋白及其下游核转录因子c jun和c fos的mRNA及蛋白的表达水平 ,提示genistein干预EGFR介导的肿瘤信号转导系统中主要信号分子的表达可能是其抑制卵巢癌增殖的分子基础。     

白藜芦醇诱导CNE-2Z细胞凋亡过程中caspase-3的活化

目的　探讨白藜芦醇 (Res)诱导鼻咽癌细胞CNE 2Z凋亡过程中是否有caspase 3的活化。方法　用Western blot分析caspase 3酶原的变化 ,半定量RT PCR检测caspase 3mRNA水平的改变 ,比色法测定caspase 3的相对活性。结果　用0、2 5、5 0、10 0、2 0 0 μmol LRes处理CNE 2Z细胞 2 4h ,随药物浓度的增加 ,caspase 3酶原的蛋白水平减少 ,caspase 3的mRNA水平增加 (P <0 .0 1)。用 10 0 μmol LRes分别处理细胞 1、2、4、8、12、2 4h ,caspase 3活性于 2h开始升高 ,12h达高峰 (为对照组的6 .6倍 ,P <0 .0 1) ,2 4h仍高于对照组 (P <0 .0 1) ;用不同浓度的Res处理细胞 12h ,caspase 3活性呈浓度依赖性的升高。结论　Res诱导CNE 2Z细胞凋亡过程中有caspase 3的活化     

hTR反义寡核苷酸对不同鼻咽癌细胞生长分化的影响

目的 :研究端粒酶反义寡核苷酸对鼻咽癌细胞生长分化的影响。方法 :脂质体介导反义寡核苷酸转染鼻咽癌CNE1和CNE2Z细胞株 ,用细胞体外增殖实验、免疫组织化学S P法 ,观察细胞生长分化的变化情况。结果 :针对端粒酶RNA模板区的反义寡核苷酸可抑制CNE1和CNE2Z细胞的增殖并呈剂量和时间依赖性 ,反义寡核苷酸组细胞角蛋白表达高于其它处理组及空白对照组 (P <0 0 1) ,细胞形态趋向分化成熟。结论 :端粒酶反义寡核苷酸可抑制鼻咽癌CNE1和CNE2Z细胞的生长 ,并促进细胞分化。     

人IL-4基因修饰诱导肝母细胞瘤细胞凋亡及分化的研究

目的　研究人白细胞介素 4(IL 4)基因修饰对肝母细胞瘤细胞凋亡及分化的影响及可能机制。方法　以逆转录病毒为载体将人IL 4基因导入人肝母细胞瘤细胞系 (HepG2 )细胞。台盼蓝拒染、瑞氏染色、放射免疫测定、流式细胞仪细胞周期分析、原位杂交等方法检测人IL 4基因修饰后细胞形态、甲胎蛋白合成以及原癌基因c fos、c jun、c myc表达的变化。流式细胞仪AnnexinⅤ /PI双染色法及间接免疫荧光染色法检测凋亡细胞及凋亡调控基因p5 3、bcl 2的蛋白表达。结果　 (1)人IL 4基因修饰较空载体修饰及野生型HepG2细胞的细胞周期发生G0 /G1期阻滞 ,甲胎蛋白分泌量及原癌基因c fos、c jun、c myc表达降低 (P <0 .0 0 1)。细胞在形态及功能上趋向正常肝细胞转化 ;(2 )较空载体修饰及野生型HepG2细胞 ,IL 4基因修饰后部分细胞形态上出现核固缩等典型凋亡细胞的特征 ,流式细胞仪亦检测到 18.5 %± 4.7%的凋亡细胞 ;(3)人IL 4基因修饰增加p5 3而抑制bcl 2表达 (P <0 .0 5 )。结论　人IL 4基因修饰可诱导肝母细胞的凋亡及分化 ,诱导凋亡细胞可能与上调p5 3蛋白及抑制bcl 2蛋白表达有关。     

子宫内膜癌中β-连环素表达及与预后的关系

目的　探讨 β 连环素 (β catenin ,β Cat)在子宫内膜癌中的表达及与预后的关系。 方法　应用免疫组化S P法检测 2 0例正常子宫内膜 ,36例子宫内膜癌标本中 β Cat及靶基因c myc产物的表达。 结果　β Cat、c myc在子宫内膜癌组中阳性表达率分别为 5 2 8%、4 7 2 % ,显著高于正常子宫内膜组 (P <0 0 5 ) ;随着组织学分级的增加 ,β Cat阳性率显著上升 ,c myc表达也平行上升。G1级与G2 级间、Ⅰ期与Ⅱ期间差异有显著统计学意义 (P <0 0 5 ) ,且两者在子宫内膜癌中表达呈正相关 (r =0 4 990 ,P =0 0 0 6 ) ;有肌层浸润和淋巴结转移组 β Cat阳性率显著高于无肌层浸润和淋巴结转移组 (P <0 0 1) ;而c myc表达与肌层浸润和淋巴结转移无明显相关。结论　β Cat表达与预后呈负相关 ,是评估预后的有效参数     

HHT对鼻咽癌细胞caspase-8蛋白和mRNA表达的影响

为探讨高三尖杉酯碱 (homoharringtonine,HHT)对鼻咽癌细胞CNE 2Z的caspase 8蛋白和mRNA表达的影响 ,分别用HHT 0 (对照 )、0 12 5、0 2 5、0 5和 1mg/L处理CNE 2Z细胞 8h ,采用Westernblot分析caspase 8的蛋白表达变化 ,半定量RT PCR检测caspase 8mRNA的表达改变。结果显示 :随HHT处理浓度的增加 ,caspase 8酶原 (32ku)的表达水平具有统计学意义的降低 (P <0 0 1) ,而caspase 8mRNA的表达水平具有统计学意义的增高 (P <0 0 1) ,当HHT浓度为1mg/L时出现活性裂解片段 (2 0ku)。结果提示 :HHT可使caspase 8酶原裂解 ,浓度依赖性地下调caspase 8酶原的蛋白表达和上调caspase 8mRNA的表达 ,HHT处理CNE 2Z细胞可能有caspase 8的活化     

反义c-fos寡脱氧核苷酸对hCG诱导大鼠睾丸间质细胞睾酮分泌的影响

在睾酮合成过程中 ,细胞色素P4 5 0 17α 羟化酶 (P4 5 0c17)的作用非常重要 ,其主要催化孕酮生成雄烯二酮 ,雄烯二酮作为雄激素的前体物质 ,最终生成睾酮。近年来研究显示hCG对睾丸间质细胞P4 5 0c17合成及其信使核糖核酸表达均有调节作用。资料也证实 ,hCG引起间质细胞睾酮分泌同时伴有c fos原癌基因表达增强[1] 。然而 ,有关c fos与睾酮生成及其合成过程中限速酶的变化研究报导甚少。本研究拟通过反义技术观察反义c fos寡脱氧核苷酸 (c fosASODNs)对hCG诱导大鼠睾丸间质细胞睾酮生成的影响及睾酮合成过程中限速酶表达水平的变化。1…     

端粒酶逆转录酶和c-myc基因在子宫内膜样癌及子宫内膜增生中的表达

目的　探讨端粒酶逆转录酶 (hTERT)及c myc基因在子宫内膜增生及癌变过程中的作用、意义及二者相关性。方法　所用标本包括 14例子宫内膜单纯增生 ,8例复合增生 ,10例不典型增生 ,42例内膜样癌 ,用原位杂交法检测hTERT和c mycmRNA表达。结果　 (1)hTERT在子宫内膜单纯、复合、不典型增生病变和内膜样癌中阳性结果分别 2 / 14、4/ 8、8/ 10和 92 9% (3 9/ 42 ) ,前两组均为弱阳性表达 ,后两组多为中度和强阳性 ,统计分析表明不典型增生病变和内膜样癌中hTERT表达高于单纯和复合增生 (P <0 0 5)。c myc在子宫内膜单纯、复合、不典型增生病变和内膜样癌中阳性结果分别 3 / 14、1/ 8、5/ 10和 54 8% (2 3 / 42 ) ,后两组c myc阳性率显著高于前两组 (P <0 0 5) ;不典型增生病变的c myc阳性水平高于单纯及复合增生 (P <0 0 5)。(2 )hTERT阳性水平与内膜样癌分化相关(P <0 15) ;c myc阳性率随内膜样癌浸润深度增加而递增 (P <0 0 5)。 (3 )子宫内膜增生和内膜样癌各组中hTERT与c myc表达均不相关 (P >0 0 5)。结论　hTERT及c myc基因过表达与子宫内膜不典型增生及恶性转化相关 ,并与内膜样癌演进以及不良预后有关 ,但其两者表达之间无相关性     

小檗胺逆转MCF7/ADR细胞耐药性及其机制探讨

目的　探讨钙调素拮抗剂小檗胺 (BBM)逆转多药耐药的可能性及其机制。　方法　乳腺癌细胞MCF7及其耐阿霉素 (ADR)MCF7 ADR细胞与ADR及不同浓度BBM共培养 ,经四唑盐 (MTT)比色法计算半数抑制浓度 (IC50 )、耐药倍数和增敏倍数 ;流式细胞仪检测细胞内ADR相对含量和P糖蛋白 (P gp)表达水平 ;半定量RT PCR检测mdr1基因mRNA表达。　结果　ADR对MCF7和MCF7 ADR的IC50 分别为 (0 98± 0 0 6 ) μmol L和 (10 1 2 0±5 72 ) μmol L ;MCF7 ADR对ADR的耐药倍数为 10 3。MCF7 ADR细胞 5 μmol L、10 μmol L和 2 0 μmol LBBM时对ADR呈剂量依赖性增敏作用 ,增敏倍数分别为 2 76、5 88和 2 8 2 6倍 (均P值 <0 0 1)。用 10 μmol 或 2 0 μmol LBBM处理MCF7 ADR细胞 2h ,细胞内的ADR相对含量增加 2 4 9和 2 81倍 (P <0 0 1) ;处理 72h使P gp表达分别下降10 0 9%和 6 2 82 % (均P值 <0 0 1) ,且mdr1基因mRNA相对表达值也呈下调趋势。　结论　BBM提高耐药细胞MCF7 ADR胞内的ADR浓度 ,下调mdr1基因及P gp的表达 ,使其对ADR的敏感性显著增高。     

吗啡对人中性粒细胞p65蛋白含量的影响

观察吗啡对中性粒细胞NF κB亚单位p6 5及其抑制蛋白I κBmRNA表达、p6 5蛋白含量的影响。分离提取 2 0例健康人外周血中性粒细胞 ,以RPMI16 4 0培养液悬浮细胞 ,将细胞按照每孔 1× 10 6个置入培养板。每份细胞分为正常对照组、TNF α组 (2 0 μg/L)、吗啡组 (5 0nmol/L)、芬太尼组 (10 0nmol/L)、丁丙诺啡组 (2nmol/L)、吗啡 5 0nmol/L+TNF α 2 0 μg/L组和芬太尼 10 0nmol/L +TNF α 2 0 μg/L 组、丁丙诺啡 2nmol/L +TNF α 2 0 μg/L组。置CO2 孵箱孵育3h后提取细胞总RNA ,采用RT PCR方法检测中性粒细胞NF κB亚单位p6 5及其抑制蛋白I κBmRNA表达 ;采用免疫蛋白印迹法 (Westernblot)测定p6 5蛋白含量。结果示TNF α组p6 5mRNA表达明显增强 ,约增加 31 3% (P <0 0 1) ,而I κBmRNA的表达减弱约 12 6 % (P <0 0 5 )。单纯吗啡组及吗啡 +TNF α组对p6 5mRNA的表达均显示出抑制作用 ,且吗啡对I κBmRNA的表达有增加趋势 (P <0 0 5 )。芬太尼组、丁丙诺啡组及加TNF α刺激后p6 5及I κBmRNA的表达均无影响 (P <0 0 5 ) ;Westernblot结果亦显示吗啡明显降低p6 5蛋白含量 (P <0 0 5 ) ,而芬太尼和丁丙诺啡则无效果。结果提示 ,吗啡具有抑制中性粒细胞NF κB激活的作用     

端粒酶RNA反义核酸降低鼻咽癌细胞p53蛋白表达水平

目的:研究端粒酶活性抑制后鼻咽癌细胞p53蛋白表达水平的变化。方法:脂质体介导端粒酶反义寡核苷酸转染鼻咽癌CNE1和CNE2Z细胞株,MTT法检测细胞增殖能力,流式细胞术检测细胞凋亡,免疫组化法检测端粒酶逆转录酶(hTRT)和p53蛋白表达水平。结果:端粒酶RNA反义寡核苷酸可抑制CNE1和CNE2Z细胞的增殖并呈剂量依赖性,流式细胞仪检测出现凋亡峰,反义寡核苷酸组hTRT和p53蛋白表达水平显著低于其它处理组及空白对照组(P＜0.01)。结论:端粒酶RNA反义寡核苷酸抑制鼻咽癌细胞端粒酶活性后可降低p53蛋白表达水平。     

β—淀粉样蛋白31—35和载脂蛋白E4对大鼠海马神经元存活和生长的影响

目的 :研究 β 淀粉样蛋白 (Betaamyloidpritein ,Aβ)与载脂蛋白E4(ApolipoproteinE ,ApoE4)对神经元的共同作用 ,探讨老年性痴呆发病的细胞分子机制。材料与方法 :体外培养神经细胞 ,采用MTT比色法和免疫组化标记 ,结合图像分析技术 ,研究Aβ3 1 3 5和ApoE4对海马神经元存活和生长的作用。结果 :(1 )Aβ3 1 3 5(1 0 0 μmol/L) +ApoE4(1 0 μg/ml)和Aβ3 1 3 5(2 0 μmol/L) +ApoE4(1 0 μg/ml)的OD值 ,分别为 0 .1 97± 0 .0 2 1和 0 .1 91± 0 .0 2 4,明显低于对照组 0 .2 2 9± 0 .0 0 3 μm(P <0 .0 5 )。 (2 )这两组神经元胞体的最长径分别为 1 0 .0 7± 1 .98μm和 1 0 .0 1± 1 .68μm ;最短径分别为 6.40± 0 .77μm ,6.2 8± 0 .89μm ,明显低于对照组 1 2 .73± 3 .0 0 μm、7.0 5± 1 .0 4μm ,Aβ3 1 3 5组 1 2 .0 9± 2 .45 μm、7.0 1± 1 .0 2 μm ,最长径和最短径 (P <0 .0 5 ) ;(3 )两组神经元突起平均长度分别为 2 6.3 6± 7.73 μm和2 3 .86± 7.2 9μm ,明显低于对照组 3 0 .88± 9.79μm、2 8.3 4± 4.40 μm ,P <0 .0 5。 (4 )Aβ3 1 3 5(2 0 μmol/L)组的平均突起长度 (2 6.81± 5 .42 μm) ,明显低于对照组和ApoE4组 3 0 .60± 7.3 0 μm(P <0 .0 5 )。ApoE4对海马神经元的存     

基于CRISPR/Cas9技术构建SETD2基因敲除鼻咽癌细胞株并分析其增殖特性

目的:基于CRISPR/Cas9技术构建SETD2基因敲除鼻咽癌(NPC)细胞株,并对该细胞株的增殖特性进行分析。方法:采用RT-PCR及Western blot检测永生化鼻咽黏膜细胞系NP-69及不同分化NPC细胞系CNE1、CNE2Z和C666-1中SETD2的表达情况,筛选出SETD2高表达细胞系CNE1。应用CRISPR/Cas9技术敲除CNE1细胞中的SETD2基因,筛选SETD2稳定敲除细胞株。采用CCK-8和平板集落形成实验分析SETD2基因敲除前后CNE1细胞的增殖能力,流式细胞术检测细胞周期的分布,Western blot检测细胞周期相关蛋白的表达。结果:与NP-69细胞相比,随着细胞分化程度的降低,SETD2在CNE1、CNE2Z和C666-1细胞中的表达逐渐下降(P 0. 01)。基于CRISPR/Cas9方法成功地从15个转染了小向导RNA(small guide RNA,sgRNA)的CNE1细胞单克隆中筛选出2个SETD2稳定敲除的细胞株CNE1-SETD2-KO-#5和#9。CCK-8及平板集落形成实验结果证实,相对于CNE1-WT细胞,CNE1-SETD2-KO-#5和#9细胞的增殖能力增强(P 0. 05);流式细胞术分析表明,CNE1-SETD2-KO-#5和#9细胞G1期减少而G2/M和S期均增加(P 0. 05); Western blot证实,SETD2敲除后增殖细胞核抗原(PCNA)、细胞周期素D1(cyclin D1)、cyclin B1、cyclin A2、cyclin E1、细胞周期素依赖性激酶2(CDK2)和CDK4表达增加,p21表达减少(P 0. 05)。结论:基于CRISPR/Ca9技术成功构建SETD2基因敲除NPC细胞株。NPC细胞中SETD2表达与细胞分化程度有关; SETD2表达缺失通过上调cyclin D1、cyclin B1、cyclin A2、cyclin E1、CDK2和CDK4并下调p21表达而促进细胞增殖。     

高三尖杉酯碱通过激活Caspase-3诱导鼻咽癌细胞凋亡

目的　了解高三尖杉酯碱 (HHT)是否可通过激活Caspase 3诱导鼻咽癌细胞CNE 2Z凋亡。方法　将细胞分为 4组 :对照组、1mg/LHHT处理组 (HHT组 ) ,以及分别用Caspase抑制剂 (z VAD fmk)和Caspase 3抑制剂 (DEVD fmk)预处理 2h后 ,再用 1mg/LHHT处理的z VAD fmk +HHT组和DEVD fmk +HHT组。采用流式细胞术及荧光染色法 ,检测 4组细胞的凋亡率 ,以比色法检测它们中Caspase 3的相对活性。结果　流式细胞术和荧光染色均发现 ,HHT组的凋亡率明显高于其它各组 (P <0 .0 1) ;Caspase 3的活性于 2h开始升高 ,8h达高峰 ,明显高于其它各组 (P <0 .0 1) ,2 4h时同其它各组的差异无显著性 (P >0 .0 5 )。结论　HHT可通过激活Cas pase 3诱导CNE 2Z细胞凋亡 ,Caspase 3的活性升高具有时间依赖性     

过表达PTEN抑制丙泊酚对过氧化氢诱导H9c2心肌细胞凋亡的保护作用

目的探讨第10号染色体同源缺失性磷酸酶-张力蛋白(PTEN)对H_2O_2或丙泊酚诱导的大鼠胚胎心肌细胞系(H9c2)凋亡的影响。方法将H9c2心肌细胞分为对照组(正常培养细胞)、H_2O_2组(100μmol/L H_2O_2孵育24 h)、丙泊酚5、10和30μmol/L干预组,其中丙泊酚5、10和30μmol/L干预组细胞分别经H_2O_2处理24 h后加入不同浓度丙泊酚(5、10、30μmol/L)预处理1 h。MTT法检测细胞的活力;流式细胞计量术检测细胞凋亡率;RT-qPCR检测PTEN mRNA;检测过表达PTEN对丙泊酚处理的H_2O_2诱导的心肌细胞活力、凋亡、乳酸脱氢酶(LDH)和活性氧(ROS)的影响。结果与对照组相比,5和10μmol/L丙泊酚能提高H_2O_2诱导的心肌细胞活力、降低其凋亡率、抑制PTEN的表达量(P0.05)。30μmol/L丙泊酚显著抑制细胞活力、促进细胞凋亡和PTEN的表达量(P0.05);过表达PTEN可抑制丙泊酚对H_2O_2诱导的H9c2细胞的保护作用(P0.05),促进LDH和ROS的表达量(P0.05)。结论 PTEN抑制丙泊酚对H_2O_2诱导的心肌细胞凋亡的保护作用。