限制性内切酶酶切及限制性内切酶酶切图谱分析

限制性核酸内切酶(restriction endonuclease)是一类能够识别DNA的特异序列并在识别位点剪切双链DNA的核酸内切酶。主要存在于原核生物中，大多数来自于细菌体内，与相伴存在的甲基化酶共同构成细菌的限制一修饰体系，限制外源DNA、保护内源DNA。1970年Smith等分离到第一种限     

EcoRⅡ限制性内切酶和甲基化酶基因克隆,表达和缺失突？…

目的 同时克隆ＥｃｏＲⅡ限制性内切酶基因和ＥｃｏＲⅡ甲基化酶基因,初步探讨该限制－修饰系统的协同表达机制。方法 采用外切酶Ⅲ删除法构建单向缺失亚克隆,根据亚克隆的酶活性对上述两种基因进行初步定位,经核酸序列测定确定亚克隆的缺失部位,再以Ｓ１核酸酶保护分析法测定基因的转录起始点。     

琼脂糖凝胶电泳的条件优化——质粒DNA重组片段的限制性内切酶谱鉴定

随着质粒构建,转染,扩增等基因表达相关的分子生物学技术在科研中的广泛开展,DNA的琼脂糖凝胶电泳技术由于其操作简单、快速、灵敏等优点,已成为分离和鉴定生物大分子（核酸）的重要手段和常用方法。影响DNA在琼脂糖凝胶中迁移速率的因素很多,包括DNA分子大小和构象,琼脂糖浓度,所加电压,电泳缓冲液的离子浓度,     

霍乱弧菌染色体DNA限制性内切酶分析

目的 探讨冬季分离的霍乱弧菌与非冬季分离的霍乱弧菌在染色体基因组织构上的差异。染色体酶切位点的差异与菌株生物学性状及变异的关系。方法 采用10％SDS裂解细菌，酚和氯仿抽提染色体及纯化。分别用限制性内切酶BamHI、HindIII、EcoRI和PstI进行染色体DNA酶切。结果 冬季分离的与非冬季分离的霍乱弧菌标本染色体DNA经限制性内切酶酶切后酶切图谱基本一致。流行菌株与非流行菌株染色体DNA酶切图谱差异较大，酶谱明显不同。结论 冬季分离的霍乱弧菌标本与非冬季分离的霍乱弧菌标本生物学性状上的差异不能反映细菌染色体基因组上的差异。流行菌株与非流行菌株在细菌染色体基因结构组上存在明显的差异。     

两种家鼠蚤DNA提取方法的探讨及酶切分析初步研究

两种家鼠蚤ＤＮＡ提取方法的探讨及酶切分析初步研究研究生：陈景龙专业：寄生虫学导师：王敦清教授采用常规的苯酚、氯仿抽提ＤＮＡ的技术与方法，利用实验室生化培养箱繁殖的家鼠２种寄生蚤为材料，进行抽提和制备蚤类基因组ＤＮＡ简明流程如下：成蚤鉴定、称重、洗涤、...     

不同酶切体系对胶回收纯化DNA浓度的影响

目的 通过建立不同的酶切体系,找寻酶切效果好、胶回收试剂盒纯化DNA得率高的实验设计.方法 使用XhoⅠ单酶切重组质粒pcDNA3-P2X4,酶切体系的体积分别为:150μl、160μl、170μl、180μl;酶切体系组成为:dddH2O(补足体积)、Buffer R(应用浓度是酶切体积的10%)、质粒DNA(无论所得质粒浓度如何,琼脂糖凝胶电泳胶回收的DNA上样量统一为23μg),XhoⅠ10μl(6μl、4μl两次加入);反应温度为:37℃ ;酶切的时间为2～3h.结果 酶切体系越大,所需要的酶切时间越短、酶切效果越好、酶切条带越接近Marker标准条带(通过电泳拍照观察所得),但是胶回收纯化后DNA的浓度却越低:150μl体系 DNA的浓度=308.96±8.71μg/ml,160μl体系 DNA的浓度=286.62±8.37μg/ml,170μl 体系DNA的浓度=245.80±15 64μg/ml,180μl体系 DNA的浓度=198.00±16.54μg/ml(方差分析,P<0.05,n=5).结论 将酶切的体系放大,杂质将相对稀释,不需增加酶的用量就能取得较好的酶切效果;提取质粒的浓度和纯度也决定着酶切效果.     

几株结核杆菌DNA的限制性内切酶谱比较

改良了一种从结核杆菌中提取高分子量ＤＮＡ的方法，并将所获得的三株人型结核杆菌（两株地方株、一株标准株），一株牛型结核杆菌的ＤＮＡ用于ＢａｍＨＩ、ＰｓｔＩ、ＥｃｏＩ、ＨｉｎｄⅢ四种不同的限制性内切酶的消化，经电泳后产生了它们各自的酶谱。结果显示出，牛型结核杆菌的四种酶谱均显著区别于三株人型结核杆菌，说明它作为独立的型别存在；人型结核杆菌标准的ＰｓｔＩ酶谱与两株人型结核杆菌地方株存在显著差异；而两株人     

03型假结核菌毒力质粒的限制性内切酶分析

应用计算机程序计算PstI和Sma1对03型假结核杆菌毒力质粒酶解电泳可见片段的分子量。BamHI、SalI、Xba1单酶和SalI-Xba1双酶酶解该毒力质粒,其指纹图谱与美国YPIII株假结核杆菌的毒力质粒的物理图谱比较推测两者DNA序列基本一致。双酶切结果提示:假结核菌毒力质粒的外膜蛋白I基因应位于SalI-Xda1双酶切的第二片段上。本研究为今后分子克隆毒力质粒的PI基因研究提供了重要数据。     

用限制性核酸内切酶分析钩端端螺旋体DNA的研究

For the application of restriction endonuclease analysis in typing and identifying leptospira, we selected some serovars and isolates, and analysed preliminarily their DNA with four restriction enzymes, EcoR I, Bgl II, Hha I, and Hind III. The DNA samples were isolated from the reference strains and isolates as follows: Serovar lai 56601, 017 (the virulent strain for PDH model of guinea pig), Serovar autumnalis 56606, Serovar manhao II 67020, and isolates 87112 and 87369. Each 2 micrograms of DNA was digested with 20mu of restriction enzyme at 37 degrees C for 2h and electrophoresed in 0.8% agarose gel. The gels were stained in ethidium bromide and photographed with UV light. In our experiments, apparently different restriction patterns of serovar lai 017 were observed with four restriction enzymes. Serovar lai, serovar autumnalis and serovar manhao II showed different patterns with EcoR I, especially in high molecular regions. We also observed in serovar lai 017 a distinct 10.5kb band which was obscure in 56601, the reference strain of serovar lai, after EcoR I digestion. The three serovars showed some delicate differences in Hind III restriction pattern. The two isolates from Apodemus agrarius in Sichuan (1987) 87112 and 87369 had patterns identical to those of serovar lai 56601, 017 with EcoR I, and 87112 also had a pattern identical to 56601, 017 with Hind III. Our results indicate that selected three serovars can be identified by analysis of their DNA with EcoR I and Hind III. It is suggested that restriction endonuclease analysis be a good method in typing and identify leptospira and in studying the differences of special DNA molecules.     

限制性内切酶和甲基酶识别顺序及序列组建数据库管理系统

DNA分子的顺序测定和分析是分子生物学中的一个基本问题,其序列测定虽有很大进展,但长链DNA分子的序列分析仍比较困难。采用手工方式进行片段序列的分析,既费时费力,又不能保证分析结果的准确性,甚至可能无法实现。为此,人们利用电子计算机对DNA序列分析做了一定的尝试。本文数据库管理系统软件,建立了分子生物学的限制性     

用限制性核酸内切酶分析钩端螺旋体DNA的研究

作者选用钩体赖型56601株、017株、秋季型56606株、曼耗2型67020株、1987年分离株87112、87369株,用内切酶EcoR Ⅰ、Bgl Ⅱ、Hha Ⅰ和Hind Ⅲ消化分析其DNA,结果表明:钩体017株的四种内切酶图谱明显不同,在EcoR Ⅰ酶切图谱上,赖型、秋季型、曼耗2型钩体DNA的主要差别在高分子区带,赖型强毒力株017较同型弱毒力株56601在10.5kb处染色较深;三型钩体的Hind Ⅲ酶切图谱仅有细小差异;分离株87112和87369的EcoR I 酶切图谱与赖型56601和017基本一致。在HindⅢ酶切图谱上,分离株87112与赖型56601株、017株相似。提示:限制性核酸内切酶分析可以作为钩体分型和鉴定的手段。     

DNA限制性内切酶分析应用于伴放线放线杆菌的鉴定和分型

本文用限制性内切酶分析(REA)作伴放线放线杆菌(Aa)的鉴定和分型研究,提取Aa染色体DNA,井分别用BamHI、HindⅢ,Sal Ⅰ和Xho Ⅰ消化,作琼脂糖凝胶电泳。结果显示,Aa和嗜沫嗜血杆菌的DNA片段图谱明显不同;分属于两种不同血清型的两株Aa菌株,其DNA片段图谱也明显不同。这表明,REA可用于Aa菌的鉴定和分型,在所用的4种酶中,以Sal Ⅰ和Xho Ⅰ消化的DNA片段图谱差异最明显。     

用限制性内切酶分析溶组织内阿米巴的致病性

用ＳＨ－３，ＳＨ－５，ＳＨ－６，ＳＨ－７和ＳＨ－８５株溶组织内阿米巴的ＤＮＡ增殖３５个周期，将其基因ＤＮＡ用内切酶ＨｉｎｆＩ和ＥｃｏＴ２２Ｉ进行消化后，作琼脂糖凝胶电泳分析，显示，５株虫株ＤＮＡ经３５个循环周期后产生５３１－ｂｐ的产物；经ＨｉｎｆＩ消化后，ＳＨ－３，ＳＨ－５，ＳＨ－６和ＳＨ－７的基因ＤＮＡ产生３个相同的片段，而显示其均与非致病性虫株ＳＡＷ１４２的电泳谱完全相同；而ＳＨ－８基因ＤＮ…     

HSV临床分离株的限制性核酸内切酶酶切分析与鉴定

采用三种方法从感染细胞中分离HSV DNA。同时对用三种方法提取的HSV DNA的量以及与细胞DNA分离程度的差别作了比较。采用其中一种方法对10株流行病学上无关的、分别来自疱疹性角膜炎和口唇疱疹病人的分离病毒株,用限制性核酸内切酶BglⅡ、HindⅢ和BamHⅠ进行了酶切分析与鉴定,BglⅡ和HindⅢ可明显区分HSV的型间差别,BamHⅠ可对10株HSV进行株间的鉴定。     

耐辐射球菌基因组DNA酶切条件的优化

目的研究耐辐射奇球菌Deinococcus radiodurans R1基因组DNA酶切的优化条件,从而获得构建基因文库所需的DNA片段,旨在构建DR菌基因组DNA表达文库,进一步筛选文库中与其有相互作用的蛋白。方法培养耐辐射奇球菌,提取基因组DNA,用Sau3AI酶切DR菌基因组DNA,分别从酶浓度、酶切时间等选择酶切产生的DNA片段集中在0.5-5.0 kb的最佳条件,最后通过琼脂糖凝胶电泳进行检测。结果Sau3AI酶切DR菌基因组DNA的最佳酶浓度为0.125 u/10μL,最佳作用时间为3 h,此条件下DR菌基因组DNA片段主要集中于0.5-5.0 kb。结论优化了DR菌基因组DNA的酶切条件,为进一步构建DR菌基因组DNA表达文库,筛选与高抗辐射相关基因产物的互作蛋白奠定了基础。