实时荧光定量PCR检测大鼠肝癌组织中MEF2及ⅡHDACs的表达

[目的]检测大鼠肝脏组织中MEF2A/2C mRNA及HDAC4/10 mRNA表达水平,并分析MEF2A/2C mRNA与HDAC4/10 mRNA表达的相关性。[方法]采用0.01%二乙基亚硝胺饲喂Wistar大鼠,建立大鼠肝癌模型,提取大鼠肝组织中的总RNA并逆转录为cDNA,应用Real-timePCR检测MEF2A/2C mRNA与HDAC4/10 mRNA表达量。[结果]18周后,大鼠致癌率为100%,总死亡率为35%,MEF2A/2C mRNA在第4、8周表达量显著增加（P〈0.01）,HDAC4/10mR-NA在第4周大量表达（P〈0.01）,随后都逐渐趋于正常水平。MEF2A/2C mRNA与HDAC4/10 mRNA表达水平在时间上不存在相关性。[结论]大鼠肝癌发生过程中,MEF2与肝癌组蛋白乙酰化有关,但MEF2A/2C mRNA与HDAC4/10 mRNA表达量在时间上无明显的关联性。     

实时荧光定量PCR在肿瘤研究中的应用

聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)的出现使得人们对微量甚至单个细胞DNA的分析成为可能,并且显示出了前所未有的敏感性和特异性.但开始阶段PCR只局限于对DNA的定性研究,随着科技的发展,定量PCR应运而生.然而,所谓的"定量PCR",其精确性与特异性也不是绝对的,直到实时荧光定量PCR(quantitative real timePCR)的出现,人们才真正在技术上实现了PCR从定性到定量的飞跃.本文试就其原理、特点、在肿瘤研究中的应用及其发展前景作一简要叙述.     

胃癌石蜡包埋组织的miRNA实时荧光定量PCR表达

目的:研究miRNA在胃癌石蜡包埋组织和新鲜组织的表达. 方法: 应用实时荧光定量PCR检测6例石蜡包埋胃癌组织及其正常胃黏膜组织、新鲜胃癌组织及其正常黏膜组织的miRNA表达(let-7a,miR-21,miR-155),以U-6为内参对照. 结果: 胃癌石蜡包埋组织与胃癌新鲜组织中miRNA表达呈平行性高表达. 结论: 可以利用石蜡组织进行miRNA相关指标表达研究.     

胃癌石蜡包埋组织的miRNA实时荧光定量PCR表达

目的：研究miRNA在胃癌石蜡包埋组织和新鲜组织的表达。方法：应用实时荧光定量PCR检测6例石蜡包埋胃癌组织及其正常胃黏膜组织、新鲜胃癌组织及其正常黏膜组织的miRNA表达（let-7a,miR-21,miR-155）,以U-6为内参对照。结果：胃癌石蜡包埋组织与胃癌新鲜组织中miRNA表达呈平行性高表达。结论：可以利用石蜡组织进行miRNA相关指标表达研究。     

实时荧光定量PCR检测CK18对胃癌淋巴结微转移的诊断价值

[目的]建立细胞角蛋白18（CK18）实时荧光定量PCR（RTFQ-PCR）检测系统,定量检测CK18在胃癌淋巴结中的表达水平．发现淋巴结微转移,从而提高胃癌淋巴结转移诊断的阳性率。[方法]应用TaqMan探针实时荧光定量PCR方法,以CK18作为淋巴结微转移的标志基因,制备CK18表达序列的标准品,并建立标准曲线。定量检测24例病理证实无淋巴结转移的胃癌患者199枚淋巴结的CK18 mRNA拷贝数。[结果]RTFQ—PCR检测CK18 mRNA的95％CV值为2．38％,敏感性达10个拷贝。24例病理无淋巴结转移的胃癌患者,15例CK18 mRNA阳性。阳性率为62．5％（15,24）。RTFQ-PCR检测CK18 mRNA的量值水平,最小值为2．57×10^2,最大值1．08×10^8。[结论]应用RTFQ-PCR方法,以CK18作为淋巴结微转移的标志基因．可提高胃癌淋巴结转移的检出率．能够发现组织病理学检查不能发现的微转移灶,并可能对微转移分级有益。     

实时荧光定量PCR检测结直肠癌hPTTG1的表达及其意义

背景与目的:虽然人垂体瘤转化基因1(human pituitary-tumortransforming gene 1,hPTTG1)在结直肠癌等恶性肿瘤中高表达,然而hPTTG1mRNA与结直肠癌临床病理参数之间的关系及其能否作为结直肠癌诊断和预后判断的分子标志尚不清楚.本研究检测hPTTG1 mRNA在结直肠癌中的表达.分析其与临床病理参数之间的关系,探讨hPTTG1 mRNA作为结直肠癌诊断和转移复发的分子标志的可能性.方法:采用实时荧光定量PCR检测结直肠癌组织与对应癌旁组织hPTTG1 mRNA,并分析其与临床病理指标的关系.结果:结直肠癌组织hPTTG1mRNA表达较止常癌旁组织显著增高(0.42±0.07 vs.0.03±0.01.P<0.001).hPTG1 mRNA与肿瘤大小、血清CEA水平有关,肿瘤直径≥3.5 cm较<3.5 cm显著增高(15.80±8.80 vs.10.91±5.22.P<0.05).血清CEA>5 ng/mL较<5ng/mL显著增高(22.79±7.42 vs.9.39±2.61,P<0.001).hPTTG1 mRNA在Dukes'C、D期显著高于Dukes'A、B期(15.88±8.09、25.69±7.67 vs, 9.03±0.35、9.58±2.93,P<0.001).伴有淋巴转移、肝转移或其他器官转移者(17.63±8.47、31.07±4.10和22.78±6.39)较无转移者(11.15±6.65)显著增高(P<0.001).hPTTG1 mRNA与患者的性别、年龄和病理分型无关(P>0.05).结论:hPTTG1 mRNA在结直肠癌中高表达.与结直肠癌的疾病进展密切相关,有助于对患者病情进展的预测.     

干细胞转录因子SOX2、OCT4在不同分化程度胃癌组织中的表达及其临床意义

背景与目的：肿瘤组织的分化程度是决定胃癌预后的重要因素,本研究检测胃癌组织中性别决定相关基因簇2(sex determining region Y-box 2,SOX2)、八聚体结合蛋白-4(octamer binding factor 4, OCT4)的表达,探讨SOX2、OCT4的表达与胃癌患者临床病理因素及预后的关系及意义。方法：通过实时定量PCR(quantitative real-time PCR,qRT-PCR)、蛋白[质]印迹法(Western blot)和免疫组化检测了60例分化程度不同的胃癌组织与正常黏膜组织中SOX2和OCT4的mRNA及蛋白的表达量,并分析SOX2和OCT4基因的表达水平与患者临床病理参数的关系。结果：qRT-PCR、Western blot检测显示,高分化胃癌组织SOX2 mRNA和蛋白的相对表达量与正常胃黏膜组织比较差异无统计学意义(t=0.1033,P>0.05;t=0.116,P>0.05),但显著高于中分化胃癌组织(t=12.48,P<0.05;t=22.78,P<0.05)和低分化胃癌组织(t=17.56,P<0.05;t=30.00,P<0.05),差异有统计学意义。与SOX2相反,高分化胃癌组织OCT4 mRNA的相对表达量与正常胃黏膜组织比较差异无统计学意义(t=2.436,P>0.05;t=1.064,P>0.05),但显著低于中分化胃癌组织(t=13.23,P<0.05;t=25.56,P<0.05)和低分化胃癌组织(t=12.10,P<0.05;t=69.48,P<0.05),差异有统计学意义。免疫组化显示,高分化胃癌组织中SOX2的阳性表达率(10/21)高于中分化胃癌组织(7/20)和低分化胃癌组织(2/19,P<0.05),高分化胃癌组织中OCT4的阳性表达率(2/21)低于中分化胃癌组织(6/20)和低分化胃癌组织(12/19,P<0.05),与临床病理参数相比较,胃癌中SOX2和OCT4蛋白的表达与患者的性别、年龄无关,差异无统计学意义(P>0.05)。与病理分期、浸润程度、淋巴结转移相关(P<0.05)。结论：SOX2基因的低表达水平和OCT4的高表达水平促进胃癌的发生、发展和侵袭,有望成为胃癌诊断、治疗和预后判断的一个指标。     

实时定量PCR检测VEGF在子宫内膜癌及外周血中的表达及其临床意义

目的:检测血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)基因在子宫内膜癌、癌周组织、正常子宫内膜及外周血循环中的表达情况,分析其在肿瘤生长、转移中的作用.方法:采用荧光实时定量PCR方法检测51例子宫内膜癌患者的癌组织和癌周组织、40例正常子宫内膜组织及其对应的患者外周血中的VEGF表达情况,分析其与临床病理参数之间的关系.结果:子宫内膜癌组织中VEGF表达水平显著高于癌周组织及正常子宫内膜组织(P<0.05) ;与临床分期、组织学分级、淋巴结转移、肌层浸润深度密切相关 (均P<0.05),但与肿瘤病理类型及患者是否绝经无明显相关性(P>0.05).子宫内膜癌患者外周血中VEGF的表达明显高于正常对照(P>0.05),且与临床分期、组织学分级、病理类型及淋巴结转移有显著相关(均P<0.05),但与肌层浸润程度及患者是否绝经无明显相关性.结论:荧光实时定量PCR可以敏感、特异性地检测子宫内膜癌组织及外周血中VEGF的表达,VEGF在子宫内膜癌的发生、侵袭、转移过程中可能起重要作用.     

实时荧光定量PCR检测大肠癌腹腔微转移及其临床意义

[目的]应用实时荧光定量PCR技术检测大肠癌腹腔内游离癌细胞并探讨其临床意义。[方法]2003年5月至2004年1月，收集在日本爱知癌症中心手术81例大肠癌病例的腹腔冲洗液．每个样本的cDNA均应用两种引物合成（随机引物和寡核苷酸引物），并在罗氏实时荧光定量PCR（LightCyckr）上进行定量分析。每个样本同时进行常规细胞学检查。所有病例术后经过平均为1年的随访。[结果]CEA mRNA和CK-20 mRNA的阳性率和阳性值均与肿瘤的浸润深度（T）、分期以及淋巴结转移相关。在一个合理界定值上，CEA和CK-20检测的敏感度与特异度均为100％，而常规的细胞学检查则为33％和100％。[结论]CEA和CK-20 mRNA定量分析是检测大肠癌腹腔微转移的敏感和特异的方法，CEA和CK-20 mRNA水平的异常与术后的无瘤生存率显著相关。     

胃癌组织中SOX2表达及其临床病理特征的Meta分析

目的 探讨性别决定区Y框蛋白2（SOX2）在胃癌组织中的表达及其与临床病理特征的关系,为临床提供参考。方法 计算机检索PubMed、EMBASE以及中国知网、万方、维普等数据库中有关SOX2表达与胃癌研究的文献,检索年限为各数据库建库起至2016年10月1日。按照纳入和排除标准筛选文献、提取资料并评价质量,采用RevMan 53软件进行Meta分析,计算合并OR值及其95%CI,并进行发表偏倚评估。结果 共纳入13篇文献包括胃癌组织1492例,正常胃组织724例。Meta分析结果显示,SOX2在胃癌与正常胃组织（OR=0.16,95％CI：0.11～0.23）、胃癌高中分化组与低分化组（OR=2.66,95％CI：1.54～4.59）中的表达差异均有统计学意义（P＜0.05）;SOX2在淋巴结转移组与无淋巴结转移组（OR=0.54,95％CI：0.26～1.11）、临床Ⅰ+Ⅱ期与临床Ⅲ+Ⅳ期（OR=2.23,95％CI：0.82～6.09）、浸润深度T1+T2与T3+T4（OR=1.44,95％CI：0.64～3.22）、男性与女性（OR=1.10,95％CI：0.82～1.47） 中的表达差异均无统计学意义（P＞0.05）。结论 SOX2的表达与胃癌及其临床病理特征有关,但受纳入研究数量和质量限制,上述结论尚待开展更多高质量研究加以验证。     

RFT2在胃癌中的表达及其临床意义

目的 探讨胃癌组织中核黄素转运蛋白2(riboflavin transporter-2,RFT2)表达及其与胃癌临床病理参数之间的关系.方法 取胃癌石蜡包埋组织标本及癌旁胃黏膜组织标本各60例,用免疫组织化学方法检测癌组织RFT2蛋白表达水平.结果 RFT2蛋白在胃癌组织中的表达水平低于癌旁正常胃黏膜组织(P＜0.05).胃癌组织中RFT2蛋白表达水平在胃癌的分化程度、TNM分期、Lauren组织学分型方面差异有统计学意义(均P＜0.05),在患者性别、民族、年龄、有无淋巴结转移、肿瘤大小方面差异无统计学意义(均P＞0.05).结论 RFT2蛋白表达在人胃癌组织中表达显著下降,其表达与肿瘤组织分化程度及TNM分期密切相关.     

Claudin-4在胃癌中的表达及临床病理意义

目的探讨Claudin-4在胃癌中的表达及其临床病理意义。方法收集福建医科大学附属厦门第一医院2007年9月至2009年9月部分胃癌手术标本共68例。其中20例分别制成石蜡切片和留取新鲜冰冻标本,分别应用免疫组织化学染色方法和实时定量PCR方法检测该20例胃癌标本中Claudin-4蛋白和mRNA在胃癌组织、正常胃组织中的表达情况。另48例胃癌手术标本仅制成石蜡切片,采用免疫组织化学染色方法检测Claudin-4蛋白在胃癌组织中的表达情况。分析Clau-din-4表达情况与胃癌分化、浸润、转移和组织分型间的相关性。结果胃癌组织中Claudin-4的表达显著高于正常胃上皮组织（P〈0.05）;Claudin-4在Lauren分型肠型胃癌和BorrmannⅠ型、Ⅱ型胃癌组织中的表达分别显著高于弥漫型胃癌和BorrmannⅢ型、Ⅳ型胃癌（P〈0.05）;Claudin-4的表达与胃癌分化相关,胃癌分化越好,Claudin-4表达越高（P〈0.05）。结论 Claudin-4与胃癌的发生、发展及胃癌的生物学行为密切相关,并可能成为预测胃癌生物学行为的重要指标。     

甲状腺乳头状癌组织中SOX2和 CyclinD1的表达及相关性

目的：探讨甲状腺乳头状癌组织中性别决定区 Y 框蛋白（SOX2）和细胞周期素 D1（CyclinD1）的表达及相关性。方法采用免疫组化 S-P 法检测100例甲状腺乳头状癌和50例癌旁正常甲状腺组织中 SOX2和 CyclinD1的表达,并分析两者与甲状腺乳头状癌患者临床病理参数的关系。结果甲状腺乳头状癌组织中 SOX2和 CyclinD1的阳性率分别为80.0%和73.0%,均高于癌旁正常甲状腺组织的10.0%和4.0%,差异有统计学意义（P <0.05）。甲状腺乳头状癌组织中 SOX2和 CyclinD1的表达与其临床分期、淋巴结转移关系密切（P <0.05）。甲状腺乳头状癌组织中 SOX2和 CyclinD1的表达呈正相关（r =0.597,P <0.05）。结论甲状腺乳头状癌组织中 SOX2和 CyclinD1存在表达,两者可能共同参与了甲状腺乳头状癌的疾病进展。     

子宫颈癌SOX9基因甲基化早期诊断价值探讨

目的检测宫颈癌和宫颈上皮内瘤变（cervical intraepithelial neoplasia,CIN）脱落细胞中SOX9基因甲基化水平,为子宫颈癌的早期诊断提供新的分子标志。方法收集2010-03-01-2011-06-30就诊于首都医科大学附属北京妇产医院肿瘤科患者的宫颈脱落细胞156例,采用双探针实时定量聚合酶链式反应（polymerase chain reaction,PCR）技术,定量检测正常宫颈组（48例）、CINⅠ组（30例）、CINⅡ-Ⅲ组（30例）和宫颈癌组（48例）的宫颈脱落细胞中SOX9基因甲基化水平,分析SOX9基因甲基化与各级别宫颈病变的关系。结果正常宫颈组SOX9基因甲基化水平（甲基化评分）17.93±4.33,CINⅠ组为10.35±4.06,CINⅡ-Ⅲ组为33.17±15.19,宫颈癌组为48.04±24.03。SOX9基因甲基化水平随宫颈病变级别的增加而升高,且在CINⅡ-Ⅲ组和宫颈癌组中显著升高。CINⅠ组和正常宫颈组脱落细胞甲基化水平差异无统计学意义,P=0.062;SOX9基因甲基化水平在其余任意两组间差异均有统计学意义,P〈0.001。SOX9基因甲基化评分可有效区分宫颈癌/CINⅡ-Ⅲ和CINⅠ/正常宫颈,受试者工作特征曲线下面积（area under the receiver operating characteristic curve,AUC）为0.961（95%CI：0.933-0.990）,P〈0.001。在最佳临界值,SOX9基因甲基化评分检测宫颈癌/CINⅡ-Ⅲ的敏感度为92.3%,特异度为89.7%。结论甲基化SOX9基因能够有效诊断宫颈癌/CINⅡ-Ⅲ,可以作为子宫颈癌早期诊断的分子标志。     

转录因子 SOX7 基因在贲门腺癌中的异常表达及其甲基化状态

目的：检测贲门腺癌（gastric cardia adenocarcinoma,GCA）组织及相应癌旁非肿瘤组织中Y性别决定区基因7（sex determining region Y-box 7, SOX7 ）的甲基化状态及其对 SOX7 mRNA表达、Wnt通路中心因子β-catenin异质表达的影响及与临床病理特征之间的相关性。方法：选择河北医科大学第四医院胸外科2006-2012年手术切除的GCA及癌旁组织各130例,应用甲基化特异性PCR（methylation specific PCR, MSP）、RT-PCR分别检测130例GCA及癌旁组织中 SOX7 基因的甲基化状态及其mRNA表达情况,应用免疫组织化学方法检测标本中β-catenin蛋白的表达。分析 SOX7 的甲基化状态与临床病理特征、 SOX7 mRNA表达、β-catenin蛋白的异质表达及上消化道肿瘤家族史（upper gastrointestinal cancers,UGIC）的关系。 结果 ：GCA组织中 SOX7 的甲基化率显著高于癌旁组织为\[57.7%（75/130） vs 30.8%（40/130）, P <0.01\],其高甲基化仅与肿瘤患者的淋巴结转移情况有关（ P <0.05）,与肿瘤组织的病理分级及临床分期均无关（ P >0.05）。GCA组织中 SOX7 mRNA的表达量明显低于癌旁非肿瘤组织\[(0.414±0.054) vs (0.695±0.034), P <0.01]\],其β-catenin蛋白的异质表达率显著高于癌旁组织（85.4% vs 43.1%, P <0.01）;GCA组织中 SOX7 基因mRNA表达情况及β-catenin蛋白的异质表达率均与该基因的甲基化状态有关（ P <0.05）,并且 SOX7 基因的甲基化状态与贲门癌患者的上消化道家族史密切相关（ P <0.01）。结论： CpG岛甲基化是 SOX7 基因表达下调的机制之一,并可能通过Wnt/β-catenin信号转导通路的激活在贲门腺癌的发生中扮演着重要的角色。     

急性淋巴细胞白血病骨髓细胞血管生成素2mRNA表达及其临床意义

Objective To study the expression levels and its clinical significance of angiopoietin 2 (Ang-2) gene in acute lymphatic leukemia(ALL). Methods The qualitative detection method was established with SYBR Green Ⅰ by real-time fluorescent quantitative PCR, and Ang-2 mRNA was measured in 51 cases of pre-therapeutic ALL. In addition, the expression of Ang-2 gene was also analyzed in 20 cases of non-malignant hematological diseases. Results The expression of Ang-2 gene was found in all the patients, and Ang-2 expression level in ALL patients was significantly higher than that of the controls (P<0.05). No significant relationship was found between Ang-2 expression level and clinical characteristics (age, haematogloblin, WBC count, platelet count, LDH, blast cells in peripheral blood, blast cells in bone marrow). The expression level of Ang-2 have no effect on one year replase rate and survival rate in ALL. Conclusion Ang-2 expression level in ALL patients was higher than that in non-malignant hematological diseases, and there may be no relationship with clinical manifestation, treatment and prognosis.     

急性淋巴细胞白血病骨髓细胞血管生成素2mRNA表达及其临床意义

Objective To study the expression levels and its clinical significance of angiopoietin 2 (Ang-2) gene in acute lymphatic leukemia(ALL). Methods The qualitative detection method was established with SYBR Green Ⅰ by real-time fluorescent quantitative PCR, and Ang-2 mRNA was measured in 51 cases of pre-therapeutic ALL. In addition, the expression of Ang-2 gene was also analyzed in 20 cases of non-malignant hematological diseases. Results The expression of Ang-2 gene was found in all the patients, and Ang-2 expression level in ALL patients was significantly higher than that of the controls (P<0.05). No significant relationship was found between Ang-2 expression level and clinical characteristics (age, haematogloblin, WBC count, platelet count, LDH, blast cells in peripheral blood, blast cells in bone marrow). The expression level of Ang-2 have no effect on one year replase rate and survival rate in ALL. Conclusion Ang-2 expression level in ALL patients was higher than that in non-malignant hematological diseases, and there may be no relationship with clinical manifestation, treatment and prognosis.     

急性淋巴细胞白血病骨髓细胞血管生成素2mRNA表达及其临床意义

Objective To study the expression levels and its clinical significance of angiopoietin 2 (Ang-2) gene in acute lymphatic leukemia(ALL). Methods The qualitative detection method was established with SYBR Green Ⅰ by real-time fluorescent quantitative PCR, and Ang-2 mRNA was measured in 51 cases of pre-therapeutic ALL. In addition, the expression of Ang-2 gene was also analyzed in 20 cases of non-malignant hematological diseases. Results The expression of Ang-2 gene was found in all the patients, and Ang-2 expression level in ALL patients was significantly higher than that of the controls (P<0.05). No significant relationship was found between Ang-2 expression level and clinical characteristics (age, haematogloblin, WBC count, platelet count, LDH, blast cells in peripheral blood, blast cells in bone marrow). The expression level of Ang-2 have no effect on one year replase rate and survival rate in ALL. Conclusion Ang-2 expression level in ALL patients was higher than that in non-malignant hematological diseases, and there may be no relationship with clinical manifestation, treatment and prognosis.