超声联合微泡造影剂对大鼠肾脏微血管通透性的影响

目的研究高机械指数诊断超声爆破微泡造影剂对大鼠肾脏微血管通透性的影响。方法实验中以伊文氏蓝(Evans blue,EB)为示踪剂检测超声爆破微泡对正常大鼠肾脏组织微血管通透性的影响。15只健康Sprague Daw-ley大鼠,雌雄不限,随机分为A、B、C三组,每组5只,A组为单纯注射EB组;B组为注射EB后接受超声辐照组;C组为注射EB和微泡后再接受超声辐照组。使用西门子S2000超声诊断仪,4P1探头,辐照方式为连续辐照。三组采用相同的频率(2MHz)、机械指数(1.4)、微泡剂量0.5ml/kg,超声辐照时间1min。15只大鼠均在EB注射30min后灌注、取材,使用Image-Pro Plus 6.0软件测量肾脏表面EB渗出面积百分比;使用激光共聚焦显微镜观察肾脏微血管周围EB外溢情况并进行视觉评分;使用标准曲线和分光光度法测量各组大鼠肾脏组织中EB含量,作为反映血管通透性的指标。结果 A组肾脏表面无EB渗出,B组肾脏表面有微量EB渗出,面积百分比为(0.089±0.013)%,C组肾脏表面有部分EB渗出,渗出面积(17.596±0.243)%明显高于A组和B组(P<0.05);C组激光共聚焦显微镜下可见肾脏微血管周围EB外溢,视觉评分等级为2级,显著高于A组(0级)及B组(0～1级);C组肾脏组织中EB含量为(28.11±0.97)μg/g,比A组(11.48±1.05)μg/g和B组(13.18±1.28)μg/g明显增加(P<0.05)。结论高机械指数超声联合微泡造影剂可使肾脏微血管通透性增加。     

超声造影对心肌毛细血管通透性的影响

目的研究高机械指数、高剂量微泡造影剂条件下超声造影对心肌毛细血管通透性的影响并观察其恢复正常的时间。方法将30只Wistar雄性大鼠随机分为5组。A～D组采用相同的超声造影条件,但各组伊文思蓝(EB)注射时间不同:分别为超声造影前10s、造影结束即刻、造影结束后5min、造影结束后20min给予EB;E组为对照组(假造影组),即5min超声照射结束后即刻再注射造影剂微泡及EB。所有动物均在EB注射后5min处死。测定心脏EB渗出面积百分比及单位心肌内EB含量。结果A、B、C组EB渗出面积明显高于对照组(P<0.05),D组渗出面积与对照组无差异(P>0.05);A、B组心肌EB含量明显高于对照组(P<0.05),C及D组心肌EB含量与对照组无差异(P>0.05)。各组造影前后心率及心律失常数目无差异(P>0.05)。结论高机械指数超声联合高剂量微泡造影剂可使心肌毛细血管通透性增加,其恢复时间在超声造影结束后20min内。     

微泡造影剂结合超声介导绿色荧光蛋白质粒转染大鼠移植静脉的实验研究

目的 探讨微泡造影剂及超声辐照介导基因转染移植静脉桥的可行性.方法 建立SD大鼠颈外静脉颈总动脉旁路移植模型,选择增强型绿色荧光蛋白质粒(pEGFP)为报告基因.将大鼠颈外静脉段浸泡入粘附质粒的微泡中,予超声照射,再将静脉段间置植入颈总动脉,7 d后,取出静脉段行快速冰冻切片,荧光显微镜下观察血管平滑肌内荧光表达,同时进行苏木精-伊红染色行病理观察.结果 微泡造影剂结合超声辐照组的荧光强度显著高于质粒浸泡+超声辐照组、质粒+微泡造影剂组及单纯质粒浸泡组(P<0.05).苏木精-伊红染色观察血管组织并无坏死灶出现.结论 微泡造影剂结合超声辐照可以实现基因靶向转染至大鼠移植静脉桥的血管平滑肌中.     

低频脉冲超声联合微泡对在体微小血管作用的实验研究

目的 探讨低频脉冲超声联合微泡对微血管的渗出作用.方法 20只新西兰大白兔分为4组:空白组、 单纯微泡组、 单纯超声组、 超声微泡组,进行实验观察.用频率为1 MHz,声压2000 MPa的脉冲超声辐照兔肠系膜及肠壁血管,在荧光显微镜下观察辐照前后肠系膜及肠壁上微血管的损伤,并静脉注入伊文思蓝溶液,观察超声辐照后对伊文思蓝溶液的渗出.结果 空白组、 单纯微泡组、 单纯超声组在超声辐照后肠系膜及肠壁上微血管内血流通畅,注入伊文思蓝溶液后,微血管内呈蓝色染色,血管周围未见渗出;超声微泡组在超声辐照后微血管周围可见渗出,部分形成血肿.结论 低频脉冲超声联合微泡对微小血管管壁产生损伤作用,血管周围可见渗出,部分形成血肿.     

超声微泡造影剂对大鼠骨骼肌毛细血管通透性的影响

目的 研究治疗剂量超声破坏微泡造影剂对大鼠骨骼肌毛细血管通透性的影响.方法 以伊文思蓝(EB)为指示剂,18只清清级SD大鼠,随机均分为EB组(E)、EB 超声组(E U)和EB 超声 微泡组(E U M)共3组进行实验.给予相同参数条件的超声进行照射,经颈动脉输/不输入微泡造影剂,在体荧光显微镜下观察EB外溢情况并行视觉评分;使用标准曲线和分光光度法测量各组大鼠脊斜肌中EB的含量.结果 E U M组镜下可见微血管周嗣EB外溢,视觉评分等级为2级.显著高于E组(0级)及E U组(0-1级)(P<0.05).E组及E U组两者相比无显著性差异(P>0.05).E U M组脊斜肌中EB含量为(51.57±3.89)μg/g,比E组[(28.99±4.67)vg/g]及E U组[(30.99±4.11)μg/g]明显增加(P<0.05).E组及E U组两者相比无显著性差异(P>0.05).结论 超声介导微泡造影剂破坏可使脊斜肌组织毛细血管通透性增加.可能是超声微泡造影剂增强基因转染的主要机制之一.     

超声致微泡声孔效应增强兔VX2肿瘤细胞通透性的适宜声学参数

目的探讨超声治疗仪不同声强、脉冲宽度、辐照时间和不同微泡剂量下声孔效应增大肿瘤细胞膜通透性的适宜声学参数。方法将90个接种于新西兰白兔的VX2移植瘤按声强、脉冲宽度、辐照时间和微泡剂量分为4个部分,各部分设有不同水平。治疗超声直接辐照肿瘤体表处,同时经静脉通道连续、缓慢注入微泡。治疗结束后立即取材制作组织切片,利用硝酸镧示踪电镜观察肿瘤细胞通透性变化,依次得出4个因素的适宜声学参数。结果超声联合微泡辐照致声孔效应能不同程度增大毛细血管壁通透性,其适宜的声强、脉冲宽度、辐照时间及微泡剂量分别为0.43 W/cm2、2.42 ms、10 min、0.50 ml/kg。结论超声联合微泡辐照致声孔效应能透过毛细血管壁将肿瘤细胞膜"打孔",有望增强肿瘤化疗效果。     

超声微泡携MAGL-shRNA靶向释放对大鼠肝细胞肝癌转移作用的实验研究

目的观察超声微泡携单酰基甘油脂肪酶沉默基因(monoacylglycerol lipase short hairpin RNA,MAGL-shR-NA)在大鼠肝细胞肝癌(hepatocellular carcinoma,HCC)组织中转染及对HCC转移的作用。方法建立大鼠肝细胞肝癌模型,病理解剖和二维超声验证肝脏成瘤情况。40只SD大鼠完全随机分成4组,分别为PBS液组、MAGL-shRNA质粒微泡组(MAGL-shRNA+microbubble,MB)、空白质粒微泡+超声辐照组(microbubbles+ultrasound,MB+US)、MAGL-shRNA质粒微泡+超声辐照组(MAGL-shRNA+MB+US)。每只注射1 mL,对MB+US组和MAGL-shRNA+MB+US组大鼠肝区同时给予超声辐照,辐照条件为300 kHz,2 W/cm2,辐照10 s,间隔10 s,共20 min。Western blot检测大鼠HCC组织MAGL蛋白的表达,免疫组化检测MAGL和基质金属蛋白酶2(matrixmetalloproteinase-2,MMP-2)的表达。比较各组动物的肿瘤转移情况。结果 MAGL在HCC组织中表达明显高于正常肝组织(P<0.05);微泡携MAGL-shRNA可以在HCC组织被超声辐照击破后靶向释放,在各组HCC组织中均有MAGL蛋白的表达,其中MAGL-shRNA+MB+US组表达量明显低于其他组(P<0.01);免疫组化检测MAGL-shRNA+MB+US组MMP-2表达均低于其他组(P<0.01);各组动物均见肿瘤转移,但MAGL-shRNA+MB+US组转移率最低(P<0.05)。结论超声辐照可破坏携MAGL-shRNA的微泡使之靶向释放并增强了MAGL-shRNA的转染效率,MAGL-MMP-2通路可能与HCC的转移相关。     

超声联合微泡与高温热疗开放大鼠血脑屏障的对比研究

目的 探讨1MHz低频超声诱导微泡破坏和高温热疗两种方法对大鼠血脑屏障通透性的影响。方法将大鼠分为2个实验组与1个对照组,实验A组大鼠经股静脉注入微泡造影剂后,采用频率1MHz、声强1．2W／cm的超声波经大鼠颅骨照射3mm;实验B组大鼠于加温仓以36℃加温3h;对照组（C组）仅室温下静脉注射生理盐水。千湿重法测定脑水含量,伊文思蓝测定法观察大鼠血脑屏障通透性,光镜和电镜下观察脑组织、脑细胞和血脑屏障病理学改变。结果超声联合微泡组和热疗组血脑屏障通透性均显著高于对照组俨〈0．05）,电镜下微血管内皮紧密连接呈开放状态。结论超声照射联合微泡和全身热疗均可开放血脑屏障。     

微泡增强的超声空化增加兔睾丸组织伊文思蓝浓度的研究

目的：探讨微泡增强的超声空化增加睾丸组织的药物浓度的可行性。方法18只雄性8月龄性成熟新西兰兔随机分为空白对照组（C）、单纯微泡组（MB）、治疗超声组（TUS）、超声联合微泡辐照组（MEUS）4组,每组各9个。MB组给予静注微泡造影剂0.1 mL／kg ;TUS组给予超声辐照5 min;MEUS组给予静注微泡造影剂0.1 mL／kg的同时超声辐照5min;每组在治疗前5min均经耳缘静脉注射2％伊文思蓝（EB）2.5 mL／kg;治疗后1 h取各组睾丸组织制备组织匀浆测量 EB 浓度。结果 MEUS组兔睾丸组织内 EB 浓度高于其他各组（P＜0.05）,差异有统计学意义。结论微泡增强的超声空化可以明显提高睾丸组织内EB浓度。     

超声联合携抗ICAM-1微泡的双靶向载体系统增强基因转染受损内皮细胞

目的:探讨超声联合携抗细胞间黏附分子(ICAM)-1阳离子微泡的双靶向载体系统介导基质细胞衍生因子(SDF)-1α基因转染受损内皮的效果。方法:实验分组,A组:携SDF-1α基因抗ICAM-1阳离子微泡;B组:携SDF-1α阳离子微泡;C组:空白对照。体外实验:人白细胞介素-1β刺激制备大量表达ICAM-1的血管内皮细胞模型,各组联合超声辐照介导基因转染后测定基因转染率、基因和蛋白表达情况。体内实验:结扎冠状动脉前降支制备兔心肌梗死模型,超声辐照介导基因转染后取心肌组织,Western blot检测各组心肌SDF-1蛋白的表达情况,RT-PCR检测各组SDF-1 mRNA的表达情况。结果:无论是体外实验还是体内实验,A组:携SDF-1α基因抗ICAM-1阳离子微泡组超声辐照后的基因转染率、hSDF-1α基因mRNA表达和hSDF-1α蛋白表达情况均高于其他各组。结论:超声联合携抗ICAM-1微泡的双靶向载体系统能增强SDF-1α基因转染受损内皮细胞。     

超声联合超声造影剂对VEGF基因体外转染成纤维细胞转染率的影响

目的：观察诊断剂量超声联合超声造影剂对血管内皮细胞生长因子（VEGF）基因转染体外培养成纤维细胞转染率的影响。方法：将成纤维细胞分为单纯VEGF₁₆₅质粒转染组、造影剂+VEGF₁₆₅质粒转染组、超声+VEGF₁₆₅质粒转染组［机械指数(MI)为1.6］和超声+造影剂+VEGF₁₆₅质粒转染组（MI分别为 1.2、1.4和1.6）。转染后在激光共聚焦显微镜下观察各组VEGF在成纤维细胞中的转染率。结果：超声+VEGF₁₆₅质粒组、造影剂+VEGF₁₆₅质粒组与单纯VEGF₁₆₅质粒组转染率比较差异无显著性（P>0.05）;超声+造影剂+ VEGF₁₆₅质粒组（MI 1.2、1.4、1.6）转染率增加,与单纯VEGF₁₆₅质粒组转染率比较差异均有显著性（P<0.01）;其中超声+造影剂+VEGF₁₆₅质粒组（MI 1.4、1.6）转染率最高,但2组间比较差异无显著性（P>0.05）;超声+造影剂+ VEGF₁₆₅质粒组（MI 1.4、1.6）与超声+造影剂+ VEGF₁₆₅质粒组（MI 1.2）比较差异也有显著性（P<0.05）。结论:联合超声造影剂诊断剂量
的超声照射能提高VEGF基因的转染率,且随超声剂量增加转染率升高.     

超声作用下声学造影剂对大鼠血管平滑肌细胞增殖的影响

目的 观察低机械指数超声作用下声学造影剂对平滑肌细胞增殖的影响。方法6孔板培养大鼠血管平滑肌细胞，加或不加声学造影剂，超声条件为连续波，频率2MHz，机械指数0．25，照射时间1min。分别于照射后3、24、48h行锥虫蓝染色，平行孔内的细胞进行胰酶消化后，用Coulter数器计算细胞数量，应用流式细胞术测定细胞周期。结果锥虫蓝染色未观察到细胞毒性作用。与对照组相比，超声加声学造影剂组24h内大鼠血管平滑肌细胞的增殖被抑制，48h后这一作用消失。结论在低机械指数超声作用下造影剂空化对平滑肌细胞增殖有一过性的抑制作用。     

超声作用下声学造影剂对大鼠血管平滑肌细胞增殖的影响

目的观察低机械指数超声作用下声学造影剂对平滑肌细胞增殖的影响。方法6孔板培养大鼠血管平滑肌细胞,加或不加声学造影剂,超声条件为连续波,频率2 MHz,机械指数0.25,照射时间1 min。分别于照射后3、24、48 h行锥虫蓝染色,平行孔内的细胞进行胰酶消化后,用Coulter计数器计算细胞数量,应用流式细胞术测定细胞周期。结果锥虫蓝染色未观察到细胞毒性作用。与对照组相比,超声加声学造影剂组24 h内大鼠血管平滑肌细胞的增殖被抑制,48 h后这一作用消失。结论在低机械指数超声作用下造影剂空化对平滑肌细胞增殖有一过性的抑制作用。     

影响大鼠平滑肌细胞增殖的对比超声条件

目的 观察不同超声条件作用下声学造影剂对大鼠平滑肌增殖的影响。方法 96孔板培养大鼠血管平滑肌细胞，加入微泡，不同超声条件作用后48h行锥虫蓝染色，采用MTT法确定血管平滑肌细胞的增殖状态。结果 机械指数0．75以下，锥虫蓝染色未观察到细胞毒性作用；平滑肌细胞的增殖程度随超声机械指数升高而减低；照射时间60s、造影剂微泡浓度20％时，对平滑肌细胞的增殖程度达到最强。结论 声学造影剂破坏对平滑肌增殖的抑制程度与超声机械指数、微泡浓度、超声照射时间有关。     

影响大鼠平滑肌细胞增殖的对比超声条件

目的 观察不同超声条件作用下声学造影剂对大鼠平滑肌增殖的影响。方法 96孔板培养大鼠血管平滑肌细胞,加入微泡,不同超声条件作用后48h行锥虫蓝染色,采用MTT法确定血管平滑肌细胞的增殖状态。结果 机械指数0.75以下,锥虫蓝染色未观察到细胞毒性作用;平滑肌细胞的增殖程度随超声机械指数升高而减低;照射时间60 s、造影剂微泡浓度20%时,对平滑肌细胞的增殖程度达到最强。结论 声学造影剂破坏对平滑肌增殖的抑制程度与超声机械指数、微泡浓度、超声照射时间有关。     

岩藻多糖修饰的相变型造影剂体外超声显像及靶向肝癌的实验研究

  目的  制备岩藻多糖修饰的相变型造影剂（FPCA）,评价其体外超声显影和对肝癌细胞的靶向能力。  方法  采用薄膜水化-超声乳化法制备包裹全氟戊烷的纳米脂质体,之后化学接枝岩藻多糖,制备FPCA纳米粒,对其基本理化性质进行表征。使用显微镜观察FPCA在水浴加热、微波辐照后的相变情况;使用超声诊断仪观察FPCA相变后的二维超声、超声造影成像能力;使用荧光共聚焦、流式细胞仪分析验证FPCA对肝癌细胞的靶向能力。  结果  制备的FPCA平均粒径（222.1±32.5） nm,外观呈球形,分散性好,具有较好的稳定性和生物相容性。使用水浴加热、微波辐照均能使FPCA发生相变,最佳相变温度为50 ℃,最佳相变微波功率为1.5 W/cm2。并且,相变后的FPCA对二维超声、超声造影均具有显著的增强显像能力。通过使用FITC荧光标记,FPCA能够特异地与肝癌细胞靶向结合,结合率高达（96.19±1.62）%,而对正常肝脏细胞的结合率不足10%。  结论  成功制备出稳定性和生物相容性良好的新型相变超声造影剂,其不仅可通过相变增强超声显像,还能对肝癌细胞具有特异的主动靶向性能。     

聚氧乙烯蓖麻油微乳对血脑屏障通透性的影响

目的 :以伊文思蓝为指示剂 ,研究聚氧乙烯蓖麻油 (cremophor)微乳对血脑屏障通透性的影响。方法 :采用甲酰胺提取 紫外分光光度法测定小鼠各脏器中伊文思蓝的浓度 ,比较不同微乳体系中伊文思蓝在小鼠体内的组织分布情况。结果 :伊文思蓝在脑组织中的浓度依次为 :聚氧乙烯蓖麻油微乳、陈皮油微乳、(cre mophor/Tween 80为 1∶1)微乳、Tween 80微乳、胶束、伊文思蓝水溶液。其中聚氧乙烯蓖麻油微乳、陈皮油微乳组脑中伊文思蓝的浓度分别为水溶液组的 5 . 0倍、3 2倍 (P     

携抗VEGFR2抗体PLGA靶向超声造影剂的制备及体外寻靶实验

目的 制备携抗血管内皮细胞生长因子受体2（VEGFR2）抗体聚乳酸羟基乙酸（PLGA）靶向超声造影剂,并考察其体外寻靶能力与超声显像性能。方法 通过改进的双乳化溶剂挥发法制备高分子材料PLGA纳米粒子,利用扫描电子显微镜对其一般特性进行表征,并进一步用碳二亚胺法将造影剂与抗VEGFR2抗体耦联制备靶向超声造影剂,使用激光共聚焦扫描显微镜对其体外寻靶能力进行初步评估,使用高频超声诊断仪观察体外显像效果。结果 PLGA超声造影剂粒子呈规则球形、大小均一、分散性好;在体外寻靶实验中,携抗VEGFR2抗体PLGA靶向造影剂能够较多并牢固的聚集到血管肉瘤内皮细胞（SVR）表面;体外超声成像实验中,携抗VEGFR2抗体PLGA靶向超声造影剂呈点状细密高回声,后方回声无衰减。结论 本研究成功制备携抗VEGFR2抗体PLGA靶向超声造影剂,能够在体外与VEGFR2高表达的血管肉瘤内皮细胞特异性靶向结合,且体外超声显像效果良好。