牛心细胞色素C氧化酶的纯化

本文应用硫酸铵分级沉淀、Ｐｈｅｎｙｌ－Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ ＣＬ－４Ｂ疏水层析和Ｃｙｔｏｃｒｏｍｅ Ｃ－Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ ４Ｂ亲和层析的方法，从牛心肌中分离纯化了细胞色素Ｃ氧化酶。产品Ｈｅｍｅａ含量为１６．３２ｎｍｏｌ／ｍｇ Ｐｒ，铜原子含量为１５．２４ｎ ａｔｏｍｓ／ｍｇ Ｐｒ。活性实验表明，去脂的细胞色素Ｃ氧化酶活性下降，加入Ｔｗｅｅｎ８０可使活性明显提高，说明疏水环境对酶催化功能有保护作用。     

牛心细胞色素C氧化酶的纯化

本文应用硫酸铵分级沉淀、Phenyl-Sepharose CL-4B 疏水层析和 Cytocrome C-Sepharose 4B亲和层析的方法,从牛心肌中分离纯化了细胞色素C氧化酶。产品Heme a含量为16.32nmol/mg Pr,铜原子含量为15.24n atoms/ms Pr。活性实验表明,去脂的细胞色素 C氧化酶活性下降,加入Tween 80可使活性明显提高,说明疏水环境对酶的催化功能有保护作用。     

细胞色素C评价心肌细胞凋亡的研究进展

细胞色素C(Cyt C)是呼吸链的电子载体,线粒体释放的Cyt C不仅进入细胞质诱导凋亡,而且也由凋亡细胞释放到细胞外。缺氧、缺血可致心肌细胞线粒体中Cyt C大量释放导致心肌细胞凋亡,心肌细胞凋亡加重时,Cyt C胞质表达增多,抑制心肌细胞凋亡时Cyt C胞质表达也同时减少。血清Cyt C含量的变化可以反映心肌细胞凋亡程度的改变。     

线粒体、细胞色素C、Caspase与细胞凋亡

细胞凋亡是机体在生长、发育和受到外来刺激时,清除多余、衰老和受损伤的细胞,以保持机体内环境平衡和维持正常生理活动的自我调节机制。研究表明,线粒体、细胞色素C的释放在细胞凋亡过程中起着非常重要的作用。细胞色素C释放到细胞浆后会诱导Caspase的激活,引起细胞凋亡。随着昆虫细胞培养技术的发展,对多种昆虫细胞凋亡的过程亦有了进一步的认识,但凋亡过程的确切机制尚存在许多未知领域。     

细胞色素C在糖尿病心肌病大鼠心肌细胞凋亡的作用

目的 探讨链脲佐菌素（STZ）制备的糖尿病心肌病（DCM）大鼠心肌细胞凋亡中的信号转导机制.方法 40只雄性Wistar大鼠随机分为正常对照组（CON,15只）,糖尿病心肌病组（DCM,25只）.CON组喂养标准饲料,DCM组给予高脂高糖饮食.7周后检测空腹血糖（FBG）、血浆胰岛素（INS）、胰岛素抵抗指数（ISI）,证实DCM组产生胰岛素抵抗后给予腹腔注射STZ 30mg/kg,72h后断尾取血测定FBG≥16.7mmol/L确定2型糖尿病模型成功,继续高脂高糖饮食8周后采用TUNEL法检测大鼠心肌细胞的凋亡;以比色法检测caspase8和caspase-3的相对活性;Western Blotting检测胞浆及线粒体内细胞色素C（Cyt C）漏出情况.结果 与CON组相比,6周的高脂高糖饮食后DCM组FBG无明显差异（P＞0.05）,INS及ISI均明显升高（p均＜0.01）;15周时,与CON组相比,心肌组织中凋亡指数明显升高（P＜0.01）;caspase-3活性显著升高（P＜0.01）,但caspase-8没有明显变化;糖尿病心肌病大鼠心肌细胞线粒体中Cyt C表达降低而胞浆中的表达增加.结论 糖尿病心肌病大鼠心肌中存在明显的细胞凋亡现象,细胞凋亡的机制可能与线粒体过度释放Cyt C激活caspase-3有关.     

糖尿病大鼠胃粘膜细胞色素C表达的变化

目的:探讨糖尿病胃粘膜变化的相关机制.方法:SD大鼠随机分为两组:对照组和糖尿病模型组,造模成功10周后免疫组织化学检测胃粘膜细胞色素C(cytC)的表达情况.结果:①模型组大鼠于造模后出现糖尿病症状;平均体重明显低于对照组(P<0.05);平均血糖浓度显著高于对照组(P<0.05).②糖尿病大鼠胃粘膜细胞cytC蛋白阳性表达显著高于对照组(P<0.05).结论:糖尿病大鼠胃粘膜细胞高表达cytC蛋白,引起粘膜细胞死亡,特别是凋亡增加,导致胃粘膜功能异常,这可能是糖尿病胃病的重要发病机制之一.     

甲基苯丙胺诱导神经元凋亡及细胞色素C的表达

目的　探讨甲基苯丙胺 (MA)所致神经元凋亡及细胞色素 C(Cyt C)的表达。方法　建立 MA不同给药时间的动物模型 ,实验组给予 MA,对照组给予等量生理盐水。采用 TU NEL法检测神经元凋亡 ,免疫组织化学方法检测 Cyt C的表达。结果　给予 MA后 ,大鼠各脑区有凋亡细胞形成 ,Cyt C有不同程度的表达。结论　 MA可导致神经元的凋亡 ,在凋亡过程中可能有相关因子 Cyt C的参与。     

芸香诱导K562细胞凋亡时细胞色素C表达变化

【目的】研究芸香诱导白血病K562细胞凋亡过程中细胞色素C的表达。【方法】体外培养K562细胞,Hoechst33342/PI双荧光染色后,荧光显微镜下观察细胞核形态,分离细胞线粒体和胞浆,经SDS-PAGE电泳分离蛋白,Western Bloting检测线粒体、细胞浆细胞色素C表达。【结果】芸香浓度为2×10-5、4×10-5、8×10-5mol/L时,细胞生长受到显著抑制,并呈剂量依赖性;Hoechest33342/PI双荧光染色可观察到明显核固缩、凝集等细胞凋亡表现,Western Bloting检测4×10-5mol/L药物处理细胞后线粒体细胞色素C表达水平下调,细胞浆出现明显细胞色素C蛋白条带。【结论】芸香诱导白血病细胞发生凋亡,可能与线粒体途径有关。     

小鼠脑组织细胞色素Ｃ氧化酶活性、线粒体细胞色素含量与年龄关系

目的：研究小鼠脑细胞色素C氧化酶（Cytochrome C oxidase,CCO）活性、线粒体细胞色素C（Cytochrome C,Cyt C）含量与年龄的关系,为法医学年龄推断提供新的思路。方法：利用紫外分光光度法检测了1、3、6、9、12月龄昆明小鼠的脑组织CCO活性及线粒体Cyt C含量。结果：小鼠脑组织CCO活性、线粒体Cyt C含量,随着年龄增大而逐渐降低。结论：脑组织CCO活性及线粒体Cyt C含量有望用于年龄推断。     

OPA1与细胞色素C释放的关系及其在细胞凋亡中的作用

细胞凋亡（apoptosis）是细胞内外各种因素触发细胞内预存的死亡程序而导致细胞死亡的过程。细胞表现出连续的不伴有炎症反应的变化，最终细胞自主有序的死亡。细胞凋亡被认为是精确的基因调控执行的结果，是生物体更新正常细胞和清除异常细胞的重要手段，对维持生物体正常发育和行使功能有重要意义。线粒体在细胞凋亡中的核心作用已经得到广泛认可，在凋亡信号的刺激下，线粒体膜结构发生变化，将膜间隙（Intermemberance Space，IMS）多种可溶性蛋白质释放入细胞浆，其中包括细胞色素C、凋亡诱导因子（Apoptosis—inducing Factor，AIF）和caspase酶原等，而细胞色素C的释放是凋亡发生的关键事件，也是线粒体参与凋亡的主要方式。参与细胞色素C释放调控的因素有很多种，目前认为Bcl-2家族蛋白与细胞色素C释放直接相关。该家族的BAX、BAK蛋白能与该家族另一类被称为“唯BH3域蛋白”的蛋白质形成跨线粒体外膜通道，释放细胞色素C。另一类与细胞色素C释放有重要关系的蛋白被称为“线粒体塑形蛋白”家族，该家族蛋白以调节线粒体的融合分裂的方式参与细胞色素C释放的调控。OPA1是该家族的重要成员，位于线粒体内膜及膜问隙，介导线粒体融合和内膜变化，是控制细胞色素C释放的重要环节，是目前凋亡研究中引起广泛关注的重要分子。     

Xaf1通过胱冬肽酶非依赖机制释放细胞色素C诱导凋亡

[目的]利用基因开关调节Xaf1-Saos诱导细胞株,检测Xaf1对肿瘤坏死因子受体(TNFR)(外源性)以及线粒体(内源性)凋亡信号通路的影响,研究Xaf1诱导肿瘤细胞凋亡的机制.[方法]流式细胞术DNA含量检测Xaf1诱导的细胞凋亡和Bcl2对Xaf1-Saos细胞凋亡的影响,Gel Mobility Shift Assay检测NFkB的DNA结合活性,激酶分析法检测SAPK/JNK激酶的活性,细胞色素C流式细胞术检测Xaf1对细胞色素C释放的调节.[结果]Xaf1与TNFα显著协同诱导细胞凋亡,凋亡峰值49%,Xaf1的表达抑制TNFα介导的NFkB的DNA结合活性(50%)和JNK/SAPK的活性,Xaf1可释放细胞色素C,而且不被胱冬肽酶抑制剂所抑制(Z-VAD).[结论]Xaf1通过胱冬肽酶非依赖机制释放细胞色素C而诱导肿瘤细胞凋亡.     

普鲁卡因及细胞色素C佐治百日咳痉咳窒息

普鲁卡因及细胞色素Ｃ佐治百日咳痉咳窒息（３６５１００）福建省尤溪县医院陈忠光百日咳痉咳窒息系临床急症，重者危及生命。１９７８年至１９９３年共收住１２例，联合应用普鲁卡因、细胞色素Ｃ辅佐治疗，获得较好疗效，报告如下。１临床资料诊断依据：当地有百日咳流行...     

Livin和细胞色素C在舌鳞状细胞癌组织中的表达及其临床意义

目的：研究舌鳞状细胞癌（TSCC）组织中Livin和细胞色素C（Cyt-C）的表达,
观察其表达水平与TSCC临床病理特征的关系,并探讨TSCC组织中Livin和Cyt-C蛋白表达的相
关性。方法：采用免疫组织化学SP法检测48例TSCC和10例正常舌黏膜组织中Livin和Cyt-C蛋
白的表达,并分析其与患者的性别、年龄、组织学类型和淋巴结转移等临床病理特征的相关性。结果：Livin主要表达在细胞浆中,TSCC和正常舌黏膜组织中Livin蛋白阳性表达率分别为66.67%和0%,二者比较差异有统计学意义（P<0.01）;Livin的高表达与TSCC组织
学分化程度有关联（P<0.05）,并与颈淋巴结转移有关联（P<0.05）。Cyt-C主要表达在细胞
浆中,TSCC和正常舌黏膜中Cyt-C蛋白阳性表达率分别为70.83%和10.00%,二者比较差异有统计学意
义（P<0.01）;Cyt-C蛋白阳性表达率与组织学分化程度有关联（P<0.05）。Spearman等级相关分
析,TSCC组织中Livin和Cyt-C蛋白表达呈正相关关系（r=0.553,P<0.001）。结论：TSCC组织中L
ivin和Cyt-C蛋白表达呈正相关关系,二者的联合检测有助于临床判断TSCC恶性程度和评估
预后。
     

细胞色素C亚细胞分布和Caspase-3活性改变在丝裂霉素C诱导膀胱癌细胞凋亡中的作用

目的:探讨丝裂霉素C(MMC)诱导人膀胱癌细胞凋亡的分子机制。方法:不同浓度MMC作用于膀胱癌BIU-87细胞,四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法检测细胞存活率,吖啶橙(AO)荧光染色、流式细胞术(FCM)检测细胞凋亡,并对半胱氨酸蛋白酶3(Caspase-3)活性、细胞色素C亚细胞分布变化进行检测。结果:BIU-87细胞存活率与MMC浓度呈负相关(r=-0.97,P<0.05)。对照组和16、32、64、128μg/ml的MMC处理组凋亡率分别为(1.10±0.20)%、(10.93±1.51)%、(22.51±2.49)%、(31.71±3.39)%、(53.2±3.81)%,Caspase-3活性分别为0.152±0.009、0.201±0.010、0.275±0.009、0.479±0.012、0.594±0.013,MMC处理组与对照组相比差异均有统计学意义(P<0.05)。MMC处理组线粒体内细胞色素C含量显著低于对照组(P<0.05)。结论:促进线粒体细胞色素C释放和Caspase-3激活可能是MMC诱导膀胱癌细胞凋亡的重要机制。     

微波对大鼠脑线粒体细胞色素C氧化酶亚基转录水平的影响

目的 观察微波辐照对大鼠大脑皮层和海马组织线粒体编码基因COX I和核编码基因COXⅣmRNA表达水平的影响，探讨微波辐照是否影响线粒体能量代谢。方法 平均功牢密度为3mW／cm^3和30mW／cm^2微波急性辐照大鼠1h后，应用RT-PCR检测大鼠大脑皮层和海马组织COXI和COXⅣ基因转录水平的变化。结果 3mW／cm^2微波辐照后0、3、24h，大鼠脑海马和大恼皮层COXI、COXⅣ mRNA表达无显著变化。30mW/cm^2微波辐照后0、3、24h，大鼠脑海马和大恼皮层COXI mRNA表达均明显降低，而COXⅣ mRNA表达无显著变化。结论 微波辐照下调大鼠大脑皮层和海马线粒体编码基因COXI mRNA表达，并存在剂量依赖关系，表明微波辐照可能会引起线粒体能量代谢障碍。