颅脑外伤后亚低温治疗对Calpain表达的影响

目的 探讨亚低温治疗对颅脑外伤后Calpain基因和蛋白表达的影响.方法 将27只SD大鼠按随机数字表法分为正常对照组、常温脑损伤组和亚低温脑损伤组.脑损伤组分别接受右顶部侧方中度液压损伤打击,其中亚低温组在伤后即刻接受持续4 h的亚低温治疗[肛温(32±0.5)℃].在伤后6,12,24和72 h四个时间点分别通过荧光PCR、Western blot定量检测各组打击伤灶周围皮层钙蛋白酶Calpain基因转录和蛋白分子表达的水平,同时运用免疫荧光观察Calpain蛋白分布情况.结果 与常温组比较,亚低温使颅脑外伤后12 h及24 h Calpain基因的转录较正常对照和同时间点常温脑损伤组显著增加(P<0.05).然而,伤后6,12,24和72 h亚低温治疗均使Calpain在蛋白水平较同时间点常温脑损伤组表达升高的程度显著抑制(P<0.05).结论颅脑外伤后亚低温治疗的脑保护机制可能与其在Calpain基因转录后明显抑制Calpain蛋白水平的表达有关.     

重组人肝再生增强因子对肝星状细胞基质分解素-1及其抑制因子基因表达的调节

肝再生增强因子(ALR)是Hagiya等[1]1994年从新生大鼠肝组织中克隆的一种理化性质与肝刺激物( HSS)相似的促肝细胞增殖因子.新近,我国学者克隆了大鼠ALR的人类同源分子[2],并通过构建原核表达载体,获高效表达菌株,进而获得重组hALR.初步研究表明hALR对四氯化碳中毒性及①免疫损伤性大鼠肝纤维化均有明显的防治作用[3、4].本文拟通过观察hALR对肝星状细胞基质分解素-1( MMP3 )及金属蛋白酶组织抑制因子-1(TIMP1) 基因表达的影响,从细胞外基质降解代谢的角度探讨hALR抗肝纤维化的机制.     

Calpain抑制剂Ⅰ对大鼠脑非断离性轴索损伤继发断离的影响

目的　研究Calpain抑制剂Ⅰ对非断离性轴索损伤 (NDAI)继发断离的影响 ,探讨NDAI的治疗途径。　方法　将 16只雄性SD大鼠随机分为Calpain抑制剂Ⅰ组和对照组各 8只 ,液压冲击致大鼠脑弥漫性损伤 ,比较两组伤后 2 4 ,72h胼胝体区、间脑中脑区、桥脑延脑区和小脑区肿胀轴索及轴索球最大密度变化。　结果　大鼠致伤后 ,NF6 8免疫组化显示肿胀的轴索及轴索球。伤后 2 4h ,Calpain抑制剂Ⅰ组桥脑延脑区、小脑区肿胀轴索及轴索球最大密度明显减少 (P <0 .0 1) ;伤后 72h ,Calpain抑制剂Ⅰ组小脑肿胀轴索及轴索球减少 (P <0 .0 5 ) ,而胼胝体区、间脑中脑区、桥脑延脑区变化不明显 (P >0 .0 5 )。　结论　Calpain抑制剂Ⅰ可减轻NDAI的继发断离 ,主要是减少损伤较轻的NDAI的继发断离。     

碱性成纤维细胞生长因子对辐射诱导的小鼠胸腺细胞凋亡的抑制作用

碱性成纤维细胞生长因子 (ｂＦＧＦ)作为一种多肽类生长因子 ,有着广泛的生理功能。对中胚层和神经外胚层来源的细胞具有促有丝分裂的作用 ,在胚胎发育和组织分化中 ,是形态形成、促细胞分裂和诱导细胞分化不可缺少的因子[1 ] 。近年来 ,许多实验结果表明体外许多因素 ,如化学药物、细胞因子、辐射等都可诱导细胞凋亡[2 ] 。本研究ｂＦＧＦ对辐射诱导的免疫系统胸腺细胞凋亡的调节作用 ,旨在从一个侧面探讨ｂＦＧＦ作用于免疫系统的机理及其在辐射防护中的意义。一、材料和方法1 ｂＦＧＦ :由暨南大学生物工程研究所提供。2 动物照射 :昆明…     

斯钙素1在氟中毒大鼠肾损伤中的作用及其与高钙的关系研究

目的观察斯钙素1(STC1)在大鼠氟中毒肾损伤中的作用,并探讨高钙对大鼠肾脏STC1的影响。方法 42只雄性SD大鼠按体重分层分为对照组、低氟组、中氟组、高氟组、低氟加钙组、中氟加钙组、高氟加钙组,每组6只。对照组按体重比注射5ml/kg生理盐水,低、中、高氟组按体重比分别给予5、10、20mg/kg的氟化钠腹腔注射,每48h注射1次,常规自由饲食(含钙量0.87%);低、中、高氟加钙组除按以上方法染氟外,给予高钙饮食(含钙量5.49%)。建模16周后处死动物,肾脏取材,行免疫组化及RT-PCR检测STC1的定位及表达,以荧光探针标记后采用荧光分光光度仪检测肾细胞内[Ca2+]i水平,并检测肾组织脂质过氧化产物的活力。结果 STC1主要定位于肾脏皮髓交界的近曲小管,染氟大鼠的STC1表达量及肾细胞[Ca2+]i水平显著高于对照组。高钙可增强STC1的表达,使谷胱甘肽过氧化物酶(GSH)、超氧化物歧化酶(SOD)值上升,并抑制[Ca2+]i水平,使丙二醛(MDA)含量下降,且上述改变随染氟剂量增加更加明显。结论氟中毒肾损伤时STC1可反应性增高,高钙能拮抗氟中毒肾损伤,并促进STC1的表达。STC1可能参与了氟中毒大鼠的肾损伤机制。     

动脉平滑肌细胞和心肌细胞钾通道的膜片钳全细胞记录技术

目的：介绍一种动脉平滑肌、心室肌细胞急性酶分离方法，并在该分离技术的基础上采用膜片钳全细胞记录方式研究细胞钾离子通道的特性。方法：采用胶原酶Ⅰ(1mg／ml)、木瓜蛋白酶(5mg／ml)消化分离大鼠肺内动脉平滑肌细胞；用链霉蛋白酶E(1mg／ml)、胶原酶Ⅰ(1mg／ml)消化分离大鼠尾动脉平滑肌细胞；用链霉蛋白酶E(0．5mg／ml)灌流消化、分离得到豚鼠心室肌细胞。结果：以上分离的细胞数量多，形态正常，胞壁光滑完整，活性好。于4℃无钙液中保存，8h内可用于膜片钳全细胞记录。记录出的外向电流可被钾通道阻断剂CsCl及TEA所阻断。结论：用酶急性分离的动脉平滑肌和心室肌细胞应用于膜片钳研究中具有快速、经济、简便易行等优点。     

甲硫腺苷磷酸化酶与肿瘤关系的研究进展

甲硫腺苷磷酸化酶 ( 5’ MethylthioadenoninePhosphorylase ,MTAP) ,EC∶2 4.2 .2 8,最初缩写为MSAP或MTAPase ,是嘌呤和甲硫氨酸合成补救途径中一个关键的酶[1] ,属于嘌呤核苷磷酸化酶 (PNP)家庭 2的成员之一 ,其活性形式是同源三聚体 ,有碱基、甲硫核糖和巯基 /磷酸结合位点。MTAP在正常细胞和组织中表达很丰富 ,但在人或鼠来源的多种恶性细胞系和人类多种肿瘤如乳腺癌[2 ] 、白血病[3 ] 、骨肉瘤[4] 、口腔癌[5] 、子宫癌[6] 和肺癌[7] 等中有较高频率的纯合性缺失现象。利用MTAP在多种肿瘤中表达缺失的特点 ,通过甲硫氨酸饥…     

高压氧对干细胞促增殖、激活性和催分化等作用的研究进展

高压氧(hyperbaric oxygen,HBO)作为一种安全、非侵袭性的治疗方法已广泛应用于医疗实践中,主要用于治疗急性一氧化碳中毒[1]、气体栓塞症[2]、缺血缺氧性脑损伤[3]、促进伤口愈合[4]、脊髓损伤[5]、急性末梢循环障碍以及心肌梗死[6]等.HBO有许多作用,如促进细胞增殖和血管形成、调节干细胞及免疫抑制等.众所周知,HBO能促使内皮细胞和纤维原细胞增殖、新血管形成及基质生物合成[7-8].随着干细胞生物学的不断发展,HBO与干细胞的基础及临床研究也成为研究热点.本文试就HBO对神经干细胞(neuralstem cells,NSCs)、外周血CD34~+细胞、内皮祖细胞及间充质干细胞等不同类型干细胞的促增殖、激活性和催分化等作用作一综述.     

长期运动对老龄雄性大鼠睾丸组织NO含量与SOD活性的影响

一氧化氮(NO)对人体具有广泛的生物学效应,影响着机体的衰老进程[1]。研究表明,体内自由基含量随增龄而积累,清除自由基的各种酶(如SOD等)的防御功能随增龄而衰减[2]。本研究就大鼠衰老进程中睾丸组织NO含量和SOD活性进行测定,观察长期有氧运动对上述指标的影响,探讨有氧运动延缓衰老的机制。1材料与方法1.1运动与实验方法青年雄性SD大鼠8只,鼠龄10周;老年雄性SD大鼠16只,鼠龄20个月,均由山西医科大学动物实验中心提供。大鼠购回后,适应性饲养1周,分为3组(老年组随机分为2组),即青年对照组8只、老年对照组8只及老年运动组8只。老年运…     

新型光敏剂罗他泊芬的研究进展

20世纪70年代末问世的光动力学疗法(photodynamic therapy,PDT)[1]目前已广泛应用于肿瘤[2](如肺癌、皮肤癌、食管癌、膀胱癌、头颈部癌等)以及非肿瘤性疾病(如鲜红斑痣[3,4]、年龄相关的黄斑病变[5]、银屑病[6]、类风湿性关节炎[7]、血管成形术后再狭窄[8])的治疗,应用前景十分可喜.……     

改良明胶酶谱测定明胶酶活性

基质金属蛋白酶 (ＭＭＰｓ)是能降解细胞外基质和基底膜成分的酶家族成员之一。这个蛋白家族包括胶原酶、明胶酶、基质素和膜型基质金属蛋白酶 (ＭＴ ＭＭＰ)等 5大类。ＭＭＰｓ家族成员目前已鉴定出 2 8种[1] 。ＭＭＰ的基因表达水平和酶活性的高低与许多生理或病理过程及其恶性程度相关 ,如肿瘤转移、血管浸润、骨质疏松、组织纤维化等 ,尤其是明胶酶Ａ和Ｂ(ＭＭＰ 2 ,9)在肿瘤的转移和血管生成方面起重要的作用[2 ] 。目前 ,测定明胶酶活性的方法多用明胶酶谱法 ( ｇｅｌａｔｉｎｚｙｍｏｇ ｒａｐｈｙ) ,即收集待测样本 ,处理后在含有明…     

严重烧伤休克期切痂对巨噬细胞活化及吞噬功能的影响

巨噬细胞 (ＭΦ)是一个异质性多功能的细胞群体 ,通过其本身及其产生的各种介质 ,在机体免疫防御系统中发挥其始动和调节作用。以往研究结果表明 ,严重烧伤后ＭΦ很快被激活 ,并释放大量的炎症介质 ,可能是伤后血浆中介质含量增多的重要来源[1] 。烧伤后ＭΦ吞噬功能降低 ,则可能是导致严重感染、多器官功能紊乱乃至死亡的主要因素之一[2 ] 。休克期切痂植皮可明显降低全身性炎症反应综合征 (ＳＩＲＳ)和多器官功能不全综合征 (ＭＯＤＳ)的发生率 ,提高大面积深度烧伤的治愈率[3 ] 。笔者以 30 %Ⅲ度烫伤大鼠为模型。伤后 3ｈ切除全部焦痂 ,…     

胍丁胺对谷氨酸和高钾诱发海马神经元细胞内钙离子浓度升高的影响

目的观察胍丁胺对原代培养的大鼠海马神经元细胞内钙离子浓度([Ca2 ]i)的影响及其对谷氨酸和高钾诱发[Ca2 ]i升高的影响,探讨胍丁胺对N-甲基-D-天冬氨酸(NMDA)受体和电压依赖性钙通道(VDCC)的作用。方法原代培养的新生大鼠海马神经元,在细胞外液中加入1、10、100、1000μmol·L-1胍丁胺,再用300μmol·L-1谷氨酸诱发NMDA受体通道的开放,或用50mmol·L-1KCl诱发VDCC的开放,应用激光共聚焦扫描技术,动态观察胍丁胺对[Ca2 ]i的影响。结果1~1000μmol·L-1胍丁胺对细胞内基础钙荧光强度无影响,1、10、100、1000μmol·L-1胍丁胺使谷氨酸引起的[Ca2 ]i升高最大变化率由对照组的372%分别降至349%、327%、297%、233%。其中100、1000μmol·L-1胍丁胺对谷氨酸引起的[Ca2 ]i升高的抑制作用与对照组相比有显著性差异(P<0.01)。仅1000μmol·L-1胍丁胺能抑制KCl诱发的[Ca2 ]i升高(P<0.01),低剂量组对KCl诱发的[Ca2 ]i的变化无影响。结论胍丁胺可以阻断NMDA受体耦联钙离子通道而抑制钙离子的内流,高浓度时也抑制VDCC。     

正常人牙釉ESR信号强度水平及其影响因素

最近电子共振自旋(ＥＳＲ)方法越来越多地被用于事故剂量的估算,所应用的材料很广泛,如人和某些动物的骨[1,2]、牙齿、头发、佩带的手表[3]、环境材料(如水泥、花岗岩、石英、玻璃、陶瓷等)、贝壳、鸡蛋壳[4]等。但应用最多的是用牙釉作剂量估算,如广岛和长崎的原爆幸存者[5]、切尔诺贝利核事故周边居民及救灾人员[6]、前苏联Ｍａｙａｋ核设施的工作人员[7]。对事故人员的危险度估计以及受照剂量在低剂量范围时,事故剂量就需要进行准确估算。准确可靠而具有代表性的本底信号水平是进行剂量估算的基础;在慢性低水平辐射剂量范围内,本底的准确…     

MR扩散加权成像在上腹部的应用

扩散加权成像(diffusionweightedimaging ,DWI)是在活体上进行水分子扩散测量与成像的唯一方法,对中枢神经系统特别是脑缺血的临床价值已被广泛肯定[1 ,2 ] 。随着磁共振技术的发展,DWI也从神经系统向其它系统推广[3 5] 。本文着重阐述DWI在上腹部的应用。DWI的基本原理扩散指     

干细胞研究进展

干细胞是近年来医学研究的最热门课题之一 ,由于它对疾病防治潜在的重要性 ,特别是用于组织器官移植的可能性 ,以及伦理上的争议 ,因此引起了社会各界广泛的关注。 1981年Ｅｖａｎｓ等[1] 首次成功地从小鼠胚泡内层细胞团中分离培养出胚胎干细胞(ｅｍｂｒｙｏｎｉｃｓｔｅｍｃｅｌｌ) ;1998年 ,Ｔｈｏｍｓｏｎ等[2 ] 首次培养出人的胚胎干细胞 ;同年 ,Ｓｈａｍｂｌｏｔｔ等[3 ] 首次从 5～10周胎儿的性腺嵴中培养出人的胚胎生殖细胞 ,目前正研究在体外培养胚胎干细胞并使其直接分化成人类组织 (如胰岛、心肌等 ) ,从而为器官或组织移植的长…     

Morel-Lavallée 损伤：磁共振影像诊断

Morel-Lavallée lesion(MLL)是外伤性皮下脂肪组织层与肌肉表面深筋膜的闭合性脱套伤，肌筋膜-皮下形成1个聚集血液、淋巴液及坏死脂肪的囊性腔隙。影像检查对于评价 MLL 损伤至关重要。MLL 是法国Morel-Lavallée 医生于1863年首次在髋臼骨折病例中用来描述大腿近端的软组织挫伤导致筋膜间隙内血性淋巴液的积聚，简称为 MLL[1]。随后此名称也被应用到其他部位类似的损伤，如“MLL 渗出物”、“脱套伤”、“假性囊肿”、“外伤后软组织囊肿”和“慢性增大的血肿”等。临床典型的 MLL 常伴骨折，主要见于交通伤及挤压伤[2-3]，最常见于转子粗隆及髋部(30.4%)，但也存在于运动性损伤，如踢足球、摔跤等[4-5]。本文就MRI 在 MLL 中的研究现状及存在的问题进行综述。     

感染与动脉粥样硬化

Ｖｉｒｃｈｏｗ曾提出动脉粥样硬化 (Ａｔｈｅｒｏｓｃｌｅｒｏｓｉｓ,ＡＳ)是一种炎症过程 ,但一直未被广泛接受 ,近年来随着研究的深入 ,已在动脉粥样硬化的病灶中检出了细胞因子、化学因子及病原体等。Ｒｏｓｓ[1] 认为ＡＳ的病理变化也具有变质、渗出和增生性改变 ,符合炎症的病理改变 ,且炎症过程中最具标志性的因子Ｃ 反应蛋白 (Ｃ ＲｅａｃｔｉｖｅＰｒｏｔｅｉｎ ,ＣＲＰ)在ＡＳ的发生发展过程中成为一种极敏感的检测指标[2 ,3 ] 。 1998年在法国Ａｎｎｅｃｙ举办的“感染与动脉粥样硬化研讨会”[4] 上对动脉粥样硬化的感染学说达成…     

细胞外囊泡在肿瘤液体活检诊断中应用价值

<正>细胞外胞囊(extracellular vesicles,EVs)是由活细胞释放到微环境中的直径30~1 000 nm的小囊泡,通过旁分泌等方式介导细胞与细胞之间的信息传递[1]。不同来源的EVs由于其携带的分子不同,生物学功能也不同~[1-2],如免疫细胞来源的EVs携带的分子,可调节微环境中的免疫功能;肿瘤来源的EVs可诱导肿瘤细胞增殖、改变肿瘤的微环境、促进肿瘤侵袭与转移。尽管,目前也存在一些问题,比如如何有效分离肿瘤患者体液中的EVs。然     

脊髓损伤的细胞凋亡及其调控

脊髓损伤后 ,除神经细胞坏死外 ,还存在细胞凋亡 ,并在继发性脊髓损伤中起重要作用。笔者对近年来脊髓损伤后细胞凋亡及其分子调控机制作如下综述。一、细胞凋亡在继发性脊髓损伤中起重要作用脊髓损伤包括原发性损伤和继发性损伤 ,而神经细胞的凋亡是继发性脊髓损伤的重要组成部分。在不同脊髓损伤模型中的许多研究证实 ,继发性脊髓损伤广泛存在着神经细胞凋亡[1～ 1 0 ] 。Ｌｉ等[1 ,4] 观察大鼠脊髓压迫损伤后 4～ 9ｄ ,在损伤部位 (Ｔ8,9)及相邻节段 (Ｔ7、Ｔ1 0 )白质有大量的胶质细胞凋亡 ,细胞主要是少突胶质细胞 ,而灰质的神经元不表…