消瘤平移合剂含药血清诱导肝癌H-7402细胞凋亡的实验研究

目的 :观察消瘤平移合剂含药血清对肝癌H 74 0 2细胞凋亡的诱导作用。方法 :运用血清药理学方法 ,选择不同浓度的含药血清与人肝癌H 74 0 2细胞共同孵育 ,于不同时间观察 ,并与空白血清作对照。结果 :消瘤平移合剂含药血清可显著抑制H 74 0 2细胞的增长 ;H 74 0 2细胞在显微镜下呈现典型的凋亡形态学改变 ,流式细胞仪检测可见亚G1峰 ,凋亡呈含药血清浓度、时间依赖性特点 ,对照组及 5 %、10 %含药血清作用 2 4h ,其凋亡率分别为 0 4 9%、5 5 8%、8 4 6% ,4 8h凋亡率分别为 0 83%、11 5 8%、14 2 5 % ;bcl 2基因检测显示bcl 2基因表达受抑。结论 :消瘤平移合剂可通过诱导肿瘤细胞凋亡 ,发挥其临床抗肿瘤、抗转移的作用。     

麝黄消瘤汤诱导人肝癌细胞系（Bel-7402）凋亡的研究

目的：研究麝黄消瘤汤对人肝癌细胞系(Bel-7402)的诱导凋亡作用。方法：制备含药血清，孵化人肝癌细胞系(Bel-7402)，用电子显微镜观察法、荧光显微镜观察法研究凋亡细胞超微结构．用流式细胞仪检测凋亡细胞DNA直方图及凋亡率。结果：电子显微镜及荧光显微镜下，麝黄消瘤汤含药血清诱导人肝癌细胞系(Bel-7402)出现凋亡征象，最大凋亡率为50．96％。流式细胞仪检测凋亡细胞DNA直方图上出现亚二倍体峰，细胞周期分布频率与对照组有显著区别(P≤0．05)。结论：麝黄消瘤汤对人肝癌细胞系(Bel-7402)有显著的诱导凋亡作用。     

麝黄消瘤汤诱导人肝癌细胞系(Bel-7402)凋亡的研究

目的:研究麝黄消瘤汤对人肝癌细胞系(Bel-7402)的诱导凋亡作用.方法:制备含药血清,孵化人肝癌细胞系(Bel-7402),用电子显微镜观察法、荧光显微镜观察法研究凋亡细胞超微结构,用流式细胞仪检测凋亡细胞DNA直方图及凋亡率.结果:电子显微镜及荧光显微镜下,麝黄消瘤汤含药血清诱导人肝癌细胞系(Bel-7402)出现凋亡征象,最大凋亡率为50.96%.流式细胞仪检测凋亡细胞DNA直方图上出现亚二倍体峰,细胞周期分布频率与对照组有显著区别(P≤0.05).结论:麝黄消瘤汤对人肝癌细胞系(Bel-7402)有显著的诱导凋亡作用.     

消瘤汤含药血清干扰细胞生长作用浓度的实验研究

目的:从细胞和分子水平探讨消瘤汤抑瘤机理并选择最佳含药血清浓度。方法:借鉴西药单体加药浓度梯度方法来确定用于干扰细胞生长的含药血清浓度梯度,消瘤汤高、中、低剂量含药血清12.5%、25%、50%浓度,作用于培养的人肝癌细胞Bel-7402 48h、96h。通过MTT法检测消瘤汤含药血清对人肝癌细胞Bel-7402增殖的影响,用于最佳含药血清浓度的筛选。结果:从不同含药血清浓度、不同作用时间下细胞生长OD值来分析:25%含药血清干扰96h对细胞生长抑制效果最好。结论:25%含药血清干扰96h可作为后期药物实验的含药血清加药浓度及观察时间筛选的实验依据。     

犀黄丸诱导人肝癌细胞凋亡及其机制的研究

观察犀黄丸含药血清诱导人肝癌Bel-7402细胞凋亡的作用,并对其机制进行初步的探讨,目的:研究犀黄丸含药血清诱导人肝癌Bel-7402细胞凋亡的作用,并对其机制进行初步探讨.方法:犀黄丸含药血清对肝癌细胞生长的影响,检测对肿瘤Bel-7402杀伤率.在用不同浓度犀黄丸含药血清作用Bel-7402细胞不同时间后,用TUNEL法检测凋亡,用SASB法检测细胞bcl-2、c-myc、p53蛋白表达.结果:犀黄丸含药血清能明显抑制Bel-7402细胞生长,其肿瘤细胞Bel-7402杀伤率最高达75%,与对照组比较有显著性差异(P＜0.01).TUNEL法显示,细胞凋亡率明显提高,与对照组比较有显著性差异;Bel-7402细胞的bcl-2、c-myc基因蛋白表达降低,而p53基因蛋白表达增强.     

扶正抑瘤颗粒含药血清对小鼠肝癌细胞H22凋亡及细胞内Ca2+浓度的影响

目的:观察扶正抑瘤颗粒(FYK)含药血清诱导小鼠肝癌细胞H22凋亡的作用及其对细胞内钙离子浓度的影响,探讨其抗肿瘤机制。方法:FYK含药血清孵育体外培养的小鼠肝癌H22细胞,电子显微镜观察FYK含药血清诱导H22细胞凋亡的形态学变化,流式细胞术检测细胞凋亡率,激光共聚焦显微镜测细胞内钙离子浓度的变化。结果:FYK含药血清能诱导小鼠肝癌H22细胞发生凋亡,同时使细胞内游离钙离子浓度升高,并与剂量和时间存在依赖性关系,细胞内钙离子浓度与相同时间点凋亡率呈正相关。结论:FYK含药血清可通过改变细胞内钙离子浓度诱导细胞发生凋亡,这可能是其抗肿瘤作用的机制之一。     

麝黄消瘤汤对人肝癌细胞多药耐药性逆转作用的实验研究

目的:通过观察麝黄消瘤汤对细胞内阿霉素浓度、细胞膜转运蛋白(P-gp)表达以及多药耐药基因表达的影响,探究其逆转人肝癌细胞系耐药的分子生物学机制。方法:制备麝黄消瘤汤含药兔血清,配制成15%、20%、25%、30%等不同浓度,培养人肝癌细胞系(Bel-7402),测定麝黄消瘤汤含药兔血清干预前后阿霉素诱导的细胞半数致死量,计算耐药倍数及逆转耐药倍数;应用荧光分光光度计检测细胞内阿霉素浓度,以流式细胞仪检测Pgp表达,以RT-PCR技术检测MDR1mRNA表达。结果:Bel-7402ADR细胞的耐药倍数约为93.5倍。加入20%含药血清后,其IC50降低为9.3μg/ml,由此计算出麝黄消瘤汤含药血清对Bel-7402ADR细胞的增敏倍数为8.3倍;不同浓度的含药血清作用均可降低Bcl-7402细胞的P-gp阳性细胞率,且呈明显的量效关系,与对照组比较有显著意义;麝黄消瘤汤含药血清可抑制人肝癌细胞中MDR基因的表达,且以20%含药血清浓度对MDR的抑制效果最突出,抑制作用随着作用时间的延长而增强,具有时间依赖关系。结论:麝黄消瘤汤能通过提高肿瘤细胞内化疗药物浓度,降低细胞膜转运蛋白的表达,下调多药耐药基因的表达,从而达到逆转人肝癌细胞多药耐药性产生的作用。     

扶正抑瘤颗粒对小鼠肝癌H22细胞凋亡及Fas和FasL表达的影响

目的：观察扶正抑瘤颗粒含药血清诱导小鼠肝癌H22细胞凋亡的作用和对细胞Fas、FasL表达的影响．方法：应用血清药理学方法，用不同剂量的含药血清与小氟肝癌细胞在体外共同孵育后，应用相差显微镜，流式细胞仪、电子显微镜对肿瘤细胞的生长和凋亡进行观察，用SABC法检测H22细胞Fas和FasL的表达结果：小鼠肝癌H22细胞经含药血清作用后，发生明显的形态学改变，相差显微镜下可见细胞体积缩小，折光性增强，染色质浓缩，核浆比例增大，密度增高，胞浆出现颗粒样物质。电镜下可见明显的凋亡形态变化，流式细胞仪可测到凋亡峰；SABC法显示，扶正抑瘤含药血清可上调小鼠H22细胞Fas的表达，而对FasL表达的影响不明显结论：扶正抑瘤颗粒能诱导H2：细胞发生凋亡，其机制可能与其上调H22细胞Fas的表达有关，     

蟾酥胶囊含药血清诱导人肝癌细胞凋亡的实验研究

目的:观察蟾酥胶囊含药血清对人肝癌BEL-7402细胞凋亡的诱导作用。方法:采用中药血清药理学方法,选择不同浓度含药血清作为实验组,分别与人肝癌BEL-7402细胞共同孵育24 h、48 h,显微镜下观察细胞形态学变化;锥虫蓝染色检测细胞蓝染率;流式细胞仪检测细胞凋亡率、细胞周期变化及APO 2.7蛋白的阳性表达率;均与10%无药血清组做对照。结果:实验组部分细胞变小、变圆,贴壁能力明显下降,呈漂浮状态,集落性明显降低,呈单个生长状态;锥虫蓝染色显示,细胞蓝染率无明显变化;流式细胞仪检测,可见明显的凋亡峰,细胞周期中G1、S期下降,G2/M期升高,APO 2.7蛋白表达的阳性峰明显增高,细胞凋亡率与作用时间、含药血清浓度呈一定的时效和量效关系。结论:蟾酥胶囊可以诱导人肝癌细胞BEL-7402凋亡。     

扶正抑瘤颗粒对小鼠肝癌细胞H22凋亡的影响

目的:研究中药复方扶正抑瘤颗粒药物血清对小鼠肝癌H22细胞凋亡的影响.方法:扶正抑瘤颗粒含药血清温育体外培养的小鼠肝癌H22细胞,利用光镜、电镜、流式细胞仪、原位末端标记(TUNEL)等方法观察其诱导小鼠肝癌H22细胞的凋亡作用.结果:扶正抑瘤颗粒含药血清可明显诱导小鼠肝癌H22细胞凋亡,随着培养时间的延长和用药剂量的增加,细胞凋亡率随之增加,与空白对照组比较P＜0.01或0.05.结论:扶正抑瘤颗粒药物血清可诱导肝癌H22细胞凋亡.     

右旋柠烯对不同类型人胃癌细胞的生长抑制作用

目的：探讨右旋柠烯(D-limonene)对不同类型人胃癌细胞的生长抑制作用及其机制。方法：以D-limonene作用于SGC-7901、BGC-823及AGS三种不同类型人胃癌细胞，采用噻唑蓝(MTT)比色法、流式细胞仪及电镜检测细胞生长抑制率、凋亡率以及形态学改变，免疫细胞化学法检测p53、bax和bcl-2基因表达。结果：D-limonene处理后的细胞生长抑制率与凋亡率均增加，与药物浓度呈正相关。细胞呈现核固缩、染色质边集、凋亡小体形成等典型凋亡表现。经D-limonene处理后SGC-7901、BGC-823细胞株p53、bax蛋白表达明显增加，bcl-2蛋白表达降低。AGS细胞株bax蛋白表达明显增加，bcl-2蛋白表达降低。结论：D-limonene对人胃癌细胞的抑制作用主要是通过诱导细胞凋亡，不同类型的细胞株作用途径可能不同。升提p53与bax及降低bcl-2的蛋白表达为其诱发冒癌细胞．凋亡的机制之一。     

白藜芦醇抑制胆囊癌细胞生长与诱导细胞凋亡的实验研究

目的:探讨白藜芦醇(Res)对胆囊癌细胞(GBC)和正常成纤维细胞(3T3)体外增殖的影响,进而观察Res对GBC和3T3细胞凋亡的影响.方法:MTT法测定肿瘤细胞生长抑制率;流式细胞术分析细胞周期,检测细胞凋亡;SABC法检测细胞bcl-2、c-myc、p53蛋白表达.结果:Res呈浓度依赖性抑制GBC细胞的生长与增殖(P＜0.01),抑制率最高可达54%.Res能明显诱导GBC细胞凋亡,凋亡率最高为30.52%;处理组较对照组G1期细胞由34.88%上升至55.47±3.95%,S期细胞减少8.41%～17.54%,呈明显的G0/G1期阻滞现象.GBC细胞的bcl-2、c-myc基因蛋白表达降低,而p53基因蛋白表达增强.结论:Res能通过诱导GBC细胞凋亡而抑制其生长与增殖,但对3T3细胞无此作用.     

益气健脾中药对血管平滑肌细胞凋亡及凋亡相关基因表达的影响

目的：探讨益气健脾中药血清体外诱导血管平滑肌细胞凋亡的作用及其分子机制。方法：采用缺口末端标记（terminal deoxynucleotidyl transferase mediated dUTP nicked labeling,TUNEL)分析、透射电镜、流式细胞仪分析、DNA电泳分析检测细胞凋亡；应用Northern印迹检测bcl-2、c-myc和p53基因表达活性。结果：经中药血清处理的血管平滑肌细胞（vascular smooth muscle cell,VSMC)，可出现典型的凋亡特征，DNA电泳呈梯状图谱；流式细胞仪分析显示G0／G1期细胞阻滞现象，亚二倍体凋亡细胞增多，出现典型的凋亡峰，细胞凋亡率与中药血清浓度具有量效关系。杂交结果提示，30％中药血清可抑制抗凋亡基因bcl-2的表达，上调促凋亡基因c-myc和p3 mRNA水平。结论：益气健脾中药通过影响凋亡相关基因bcl-2、c-myc和p53的表达活性而诱导VSMC凋亡。     

温阳散结中药诱导BEL-7402细胞凋亡的初步研究

目的 :探讨温阳散结中药的抗肿瘤机制 ,研究温阳散结中药诱导BEL-7402细胞凋亡作用。方法 :采用细胞形态学、原位末端标记和流式细胞技术 ,观察温阳散结中药对BEL-7402细胞的影响。结果 :BEL-740 2细胞经中药处理后 ,光镜下可见凋亡细胞的形态学特征性改变 ,TUNEL标记阳性 ,流式细胞仪分析DNA含量 ,在非凋亡细胞二倍体峰 (G1)之前细胞出现典型的凋亡细胞峰 (Ap峰 )。 0005g·ml-1中药组和001g·ml^-1中药组发生凋亡的细胞数分别为139%和 216%。结论 :温阳散结中药可诱导BEL-740 2细胞发生凋亡 ,并有随浓度升高作用增强的趋势 ,实验结果表明 ,诱导肿瘤细胞凋亡可能是温阳散结中药治疗肝癌的作用机理之一。     

冬凌草甲素对人肝癌BEL-7402细胞的增殖抑制作用及其作用机制

目的:探讨冬凌草甲素对肝癌BEL-7402细胞的增殖抑制作用及其作用机制。方法:以不同浓度的冬凌草甲素作用于体外培养的BEL-7402细胞,MTT法检测细胞生长抑制率,应用流式细胞仪检测细胞凋亡,Hoechst33258荧光染色法观察细胞凋亡时的形态学变化。应用PCR-ELISA及RT-PCR法检测细胞凋亡前后端粒酶活性及端粒酶hTERTmRNA表达水平的变化。结果:冬凌草甲素可显著的抑制BEL-7402细胞的生长,诱导细胞发生凋亡,并呈现出明显的量-效与时-效关系。冬凌草甲素作用48~60h后在Hoechst33258荧光染色图片上可见核浓缩及核碎裂等典型的细胞凋亡特征,同时端粒酶hTERTmRNA的表达水平及端粒酶活性均明显降低。结论:冬凌草甲素能抑制BEL-7402细胞的生长及诱导细胞发生凋亡;降低端粒酶hTERTmRNA的表达水平及端粒酶活性可能是其重要作用机制之一。     

瑞香狼毒诱导HL-60细胞凋亡和调节SGC-7901细胞bcl-2蛋白表达

目的：探索瑞香狼素（SC）抗肿瘤机制。方法：以HL－60和SGC－7901为靶细胞,用MTT比色法测定细胞增殖抑制,荧光显微镜观察凋亡细胞的形态学改变,DNA电泳和流式细胞仪检测DNA断裂,免疫组化检测bcl-2蛋白表达。结果：含SC药物血清处理细胞48h后,HL－60细胞增殖呈剂量依赖性抑制,并表现出典型的凋亡细胞形态学改变及DNA断裂;即染色体聚集,核固缩,断裂及阶梯状DNA电泳条带,G1期前细胞从11．7％增到57．4％;而SGC－7901细胞bcl-2蛋白表达率从78．3％下降到32．9％。结论：SC可诱导肿瘤细胞凋亡,降低bcl-2蛋白表达。     

冬凌草甲素诱导肝癌细胞凋亡中Bcl-2及端粒酶变化的研究

目的：探讨冬凌草甲素诱导人肝癌细胞BEL-7402凋亡中Bcl-2表达及端粒酶活性的变化。方法：以8,16,24,32 μmol·L^-1不同浓度的冬凌草甲素作用于体外培养的BEL-7402细胞,应用流式细胞仪检测细胞凋亡,Hoechst 33258荧光染色法。Western blot 观察Bcl-2 ,Bax 表达变化。应用PCR-ELISA及RT-PCR法检测细胞凋亡前后端粒酶活性及端粒酶hTERT mRNA表达水平的变化。结果：冬凌草甲素可诱导肝癌细胞BEL-7402发生细胞凋亡, 具有明显的量-效与时-效关系。冬凌草甲素作用60 h后,在Hoechst 33258荧光染色图片上可见核浓缩及核碎裂等典型的细胞凋亡特征。凋亡过程中Bcl-2蛋白表达的降低和 Bax蛋白上调,同时端粒酶hTERT mRNA的表达水平及端粒酶活性均明显降低。结论：冬凌草甲素在诱导肝癌细胞BEL-7402发生细胞凋亡过程中,能降低端粒酶hTERT mRNA的表达水平和端粒酶活性,同时抗凋亡蛋白Bcl-2表达的降低和促凋亡蛋白 Bax上调。     

小檗碱对人胃癌细胞株BGC-823诱导凋亡的研究

目的:研究小檗碱对人胃癌BGC-823细胞诱导凋亡的作用.方法:应用荧光显微镜、透射电镜、流式细胞仪和TUNEL染色研究小檗碱对人胃癌BGC-823细胞诱导凋亡的作用.结果:小檗碱作用人胃癌BGC-823细胞后,可看到较为典型的细胞凋亡的形态学变化,细胞核固缩、染色质凝集成新月状紧贴于核膜周边,核碎裂、染色质片断化、凋亡小体形成等.流式细胞仪上出现典型的亚二倍体凋亡峰.TUNEL染色显示,随小檗碱浓度增加和作用时间延长,细胞凋亡率增加.结论:小檗碱对人胃癌BGC-823细胞有诱导凋亡作用.     

心脑宁诱导增生VSMC凋亡及对相关基因表达的影响

目的 :探讨活血化瘀中药血清体外诱导增生血管平滑肌细胞凋亡的作用及其分子机制。方法 :采用流式细胞仪分析 ,DNA电泳分析检测细胞凋亡 ;应用Northen印迹检测bcl- 2、c-myc基因表达活性。结果 :经中药血清处理的血管平滑肌细胞 (vascularsmoothmuclecell,VSMC) ,可出现典型的凋亡特征 ,DNA电泳呈梯状图谱 ;流式细胞仪分析显示G0 /G1期细胞阻滞现象 ,亚二倍体凋亡细胞增多 ,出现典型的凋亡峰 ,细胞凋亡率与中药血清浓度具有量效关系。杂交结果提示 ,2 0 %中药血清可抑制抗凋亡基因bcl- 2的表达 ,上调促凋亡基因c -myc的mR NA水平。结论 :活血化瘀中药可通过影响凋亡相关基因bcl- 2、c -myc的表达活性而诱导VSMC凋亡。