白细胞介素基因多态性与乳腺癌遗传易感的相关性分析

目的：探讨白细胞介素‐10（IL‐10）基因多态性（SNPs）与乳腺癌遗传易感的相关性。方法采集齐齐哈尔医学院附院乳腺癌患者血样156例作为病例组,抽取健康者血样156例作为对照组。经过基因组DNA提取、PCR扩增等一系列反应,使用时间飞行质谱对IL‐10‐592、‐1082位点进行基因分型及多态性分析。最终通过统计学分析乳腺癌患者与健康者之间的差异。结果两组的IL‐10‐592位点均存在C／C、C／A、A／A 3种基因型,比较分布不存在显著差异无统计学意义（χ2＝3．26,P＞0．05）。两组的IL‐10‐1082位点均存在G／G、G／A、A／A基因型,比较分布存在差异,病例组G／G、G／A基因型多于对照组,差异有统计学意义（χ2＝14．07,P＜0．01）。在Logistic多元回归分析中发现,与IL‐10‐592 A／A基因型比较,携带IL‐10‐592 C／A、C／C基因型的群体发生乳腺癌的危险性分别为 OR＝1．039（95％ C I：0．484～2．233）,P＝0．922,OR：1．635（95％ C I＝0．683～3．915）,P＝0．270,差异均无统计学意义。与IL‐10‐1082 A／A比较,表达IL‐10‐1082 G／A、G／G基因型的群体发生乳腺癌的危险性分别为OR＝0．424（95％ CI：0．210～0．855）,P＝0．016,OR＝0．455（95％ CI：0．178～1．163）,P＝0．100。结论 IL‐10‐592位点基因多态性可能与乳腺癌遗传易感不相关。IL‐10‐1082 G／A基因型的表达可能是乳腺癌遗传易感的一个保护因素。     

PCR-CTPP在DNA 碱基切除修复基因SNP分型中的应用

目的：分析两对引物‐聚合酶链式反应（PCR‐CTPP）在碱基切除修复（BER）途径基因单核苷酸多态性（SNP）分型中的应用,为发现新的SNP检测方法提供实验依据。方法采用PCR‐CTPP扩增BER途径关键蛋白OGG1、XRCC1及APE14个常见SNP位点OGG1 Ser326Cys、XRCC1 Arg399Gln、APE1 Asp148Glu及‐141T／G（位于启动子区域）的DNA片段,凝胶电泳显像后判读基因型,同时与DNA测序的方式比对各基因位点的准确性。结果 PCR‐CTPP方法基因分型结果与DNA测序得到的基因分型结果完全一致。结论 PCR‐CTPP技术可靠、快速,其广泛应用能够有助于基因SNP的分型研究。     

异基因造血干细胞移植术后患者血CM V-DNA 的定期监测及危险因素分析

目的：观察异基因干细胞移植术（allo‐HSCT ）后患者血液巨细胞病毒DNA （CM V‐DNA ）阳性率,探讨巨细胞病毒感染的危险因素。方法收集30例在2012年7月至2014年9月行allo‐HSCT患者,用PCR方法定量检测患者移植术后第1个月（1次／周）、第2～3个月（1次／2周）、第4～6个月（1次／月）静脉血中CM V‐DNA的拷贝数,统计各时期的阳性率。结果30例患者有13例感染巨细胞病毒,感染率为43．3％。第1个月内阳性患者有4例（13．3％）,第2个月有11例（36．7％）,第3个月有2例（6．7％）,第4个月0例,第5个月有2例（6．7％）,第6个月0例。异基因干细胞移植术后半年内第2个月患者CM V‐DNA阳性率较高。相关分析提示CMV‐DNA阳性率与兔抗人胸腺细胞免疫球蛋白（ATG）、巴利昔单抗（CD25单抗）的使用、急性移植物抗宿主病（GVHD）的发生程度有关,与性别、年龄、原发病危险分层、人类白细胞抗原（HLA）相合情况、预处理方案、中性粒细胞恢复时间等无关。结论定期监测allo‐HSCT后患者血液CM V‐DNA可及时干预,减少巨细胞病毒感染并发症。     

INSIG1基因SNPrs9769506位点的多态性与2型糖尿病的关系

目的：探讨胰岛素诱导基因1（INSIG1）单核苷酸多态性（SNP）rs9769506位点的多态性与2型糖尿病（T2DM）的相关性,以期为 T2DM 的防治提供潜在的分子靶点。方法选择河南省南阳市中心医院2013年1月至2014年3月收治的 T2DM患者98例,另选取体检中心的健康体检者90例作为对照组,INSIG1基因 SNP rs9769506位点多态性检测使用实时荧光定量PCR（RT‐PCR）Taqman 分析。结果 T2DM 组 rs9769506位点 A 等位基因频率为54．1％,G 等位基因频率为45．9％,对照组 A等位基因频率为47．8％,G 等位基因频率为52．2％,两组之间差异无统计学意义（P ＞0．05）。 T2DM 组患者 rs9769506位点 A/A 、A /G 和 G/G 基因型频率分别为41．8％、24．5％和33．7％,对照组 rs9769506位点 A/A 、A/G 和 G/G 基因型频率分别为32．2％、31．1％和36．7％,A/A 基因型频率在对照组和 T2DM 组之间差异有统计学意义（P＜0．05）,而 A/G 和 G/G 基因型频率在对照组和 T2DM 组之间差异则无统计学意义（P＞0．05）。 T2DM 患者中三酰甘油（TG）、总胆固醇（TC）、低密度脂蛋白胆固醇（LDL‐C）、高密度脂蛋白胆固醇（HDL‐C）表达水平在 A /A 、A/G 、G/G 基因型患者之间差异有统计学意义（P ＜0．05）,而 A/G 、G/G 基因型患者之间差异无统计学意义（P＞0．05）。结论 INSIG1基因 SNP rs9769506位点 A/A 基因型在 T2DM 患者中检出率高,对 T2DM 早期筛查及基因治疗具有临床指导意义。     

自发性破裂肝癌组织 CD16突变结构基因检测

目的：检测肝癌自发性破裂中 CD16结构基因突变,从分子水平更深入地探讨肝癌自发性破裂的机制。方法收集肝癌自发性破裂及非破裂患者各22例资料。患者肝癌组织中 CD16结构基因 S1、EC1和 EC2 DNA 突变情况应用PCR 法及基因测序技术进行检测。结果 EC1内第1483位、1533位及1605位出现 G/ A、G/ A 及 A/ G 等错义突变, EC2内在第5223位及5277位出现 T/ C 及 T/ G 等错义突变。Y5223H 及 Y5277F 两个错义位点突变率（54.54% vs 0）在两组之间差异有统计学意义（P <0.05）,非破裂组 EC1及 EC2总的突变发生频率显著低于破裂组（ P <0.05）。结论FcγRⅢA 结构基因突变表面与肝癌巨噬细胞受体 CD16合成下降有关,是肝癌自发性破裂的可能机制。     

贵阳地区新生儿G6PD缺乏症分子筛查结果分析

目的：了解贵阳地区葡萄糖‐6‐磷酸脱氢酶（G6PD ）缺乏症的发生率及基因突变分布情况。方法选取新生儿脐血DNA样本515例,采用基质辅助激光解吸／电离飞行时间质谱系统检测G6PD基因15种突变类型和1种多态位点。结果515份样本检出G6PD基因突变10例,检出率为1．94％。检出5种突变类型：1388G＞ A 4例（40．0％）,1024C＞ T 和519C＞ T各2例（20．0％）,1376G＞ T和95A＞G各1例（10．0％）。多态位点1311C＞T的等位基因频率为12．79％。结论贵阳地区是G6PD缺乏症的高发区,1388G＞A是该地区最常见的G6PD基因突变类型。     

Gli抑制剂GANT61对肺癌细胞上皮-间质转化作用的研究

目的：研究GANT61对人肺癌细胞 H1703和 A549的上皮‐间质转化（EMT）的影响,并初步探讨其作用机制。方法以二甲基亚砜（DMSO）作为对照（DMSO组）,用GANT61处理H1703和A549细胞24 h后,采用实时荧光定量PCR法检测Gli‐1、Gli‐2、E‐cadherin和Vimentin基因变化;蛋白质印迹法（Western blotting）观察GANT61作用于 H1703和A549细胞后对E‐cadherin和Vimentin蛋白表达的影响,划痕愈合实验观察GANT61作用于H1703和A549细胞后对肿瘤细胞侵袭能力的影响。结果与DMSO组比较,实时荧光定量PCR结果显示GANT61可下调H1703和A549细胞Gli‐1、Gli‐2及Vimentin mRNA的表达,升高E‐cadherin mRNA的表达（P＜0．01）;Western blotting显示,GANT61可以下调H1703和A549细胞Vimentin蛋白表达,升高E‐cadherin蛋白表达（P＜0．01）;划痕愈合实验显示,GANT61处理组 H1703和A549细胞的侵袭能力明显下降（P＜0．01）。结论肺癌的EMT与 Hedgehog信号转导通路中Gli‐1和Gli‐2的异常激活有关,GANT61通过下调Gli‐1和Gli‐2的表达影响肺癌细胞的EM T能力,Gli可能成为抑制肺癌细胞转移的新的分子靶点。     

基于等温滴定量热技术的清开灵注射液临床联合用药相互作用表征研究

目的 建立一种揭示中西药注射剂临床联合用药相互作用表征的新方法。方法 以清开灵注射液为模式药,分别加入注射用头孢唑肟钠与5%葡萄糖注射液（简称葡糖液）,采用等温滴定量热法（ITC）分别考察药物间相互作用,以热力学参数吉布斯自由能（ΔG）、焓变（ΔH）、熵变（ΔS）判断溶合反应类型,通过对比不同注射剂混合前后化学指纹图谱特征信息对结果进行佐证。结果 清开灵注射液与头孢唑肟钠滴定过程中测得|ΔH|＞T |ΔS|,为焓驱动反应,且释放热量较大,提示两者之间的相互作用以化学反应为主,内在物质发生改变。清开灵注射液与5%葡糖液溶合时|ΔH|＜T |ΔS|,为熵驱动反应,且反应活性谱显示放热较少,提示两者之间的相互作用以物理反应为主,活性成分仅被溶解稀释,未发生质变。上述结果也得到了化学指纹图谱的佐证。结论 ITC具有简便快捷、高灵敏度等优势,可用于清开灵注射液临床联合用药相互作用表征的研究,也为其他中西药注射剂联合用药的相容性评价提供了参考。     

基质金属蛋白酶-1、3启动子基因多态性与卵巢癌易感性的Meta分析

目的：应用Meta分析研究基质金属蛋白酶（MMP）‐1‐1607bp1G／2G、MMP‐3‐1171bp5A／6A启动子基因多态性与卵巢癌易感性的关系。方法检索数据库中符合纳入MMP‐1‐1607bp1G／2G、MMP‐3‐1171bp5A／6A启动子基因多态性与卵巢癌易感性关系的病例对照研究,基因多态性与易感性的关系用比值比（OR）及95％可信区间（CI）表示,应用RevMan5．0对数据进行分析。结果共纳入8项研究,涉及MMP‐1的5项,MMP‐3的3项。Meta分析发现,MMP‐1‐1607bp1G／2G在1G／1G∶1G／2G＋2G／2G模型下OR（95％CI）＝0．95（0．74～1．21）,P＝0．67,1G／1G∶2G／2G模型下OR（95％CI）＝0．93（0．70～1．23）,P＝0．60,1G∶2G模型下OR（95％CI）＝0．99（0．87～1．14）,P＝0．91,MMP‐3‐1171bp5A／6A在5A／5A＋5A／6A∶6A／6A模型下OR（95％CI）＝0．97（0．68～1．38）,P＝0．85,差异无有统计学意义。结论目前的文献尚不能证实MMP‐1‐1607bp1G／2G、MMP‐3‐1171bp5A／6A启动子基因多态性与卵巢癌易感性有关。     

TNFRSF4基因 rs17568多态性与2型糖尿病的相关性

目的：探讨四川南充地区汉族人 TNFRSF4基因 rs17568多态性与2型糖尿病（T2DM ）的相关性。方法应用聚合酶链反应－限制性片段长度多态性技术检测186例健康体检者和220例 T2DM 患者 rs17568多态性。酶法测定血糖（Glu ）、血清甘油三酯（TG ）、总胆固醇（TC ）及高密度脂蛋白胆固醇（HDL‐C ）。结果TNFRSF4基因 rs17568位点等位基因频率和基因型频率分布均符合 Hardy‐Weinberg 平衡定律。rs17568多态位点G等位基因频率为28.2％。两组rs17568位点G等位基因的频率差异无统计学意义（ P＞0.05）。rs17568多态位点在T2DM组和对照组中,GG、AG基因型携带者血清 HDL‐C水平较 AA基因型携带者明显升高（P＜0.05）。结论 TNFRSF4基因 rs17568多态性与T2DM无关联,但其G等位基因与血清HDL‐C水平密切相关。     

咪唑斯汀与牛血清白蛋白的作用研究

目的研究咪唑斯汀与牛血清白蛋白(BSA)的相互作用机制和作用类型。方法用荧光光谱法检测Stern-Volmer猝灭常数,用紫外分光光度法(UV)和圆二色谱法(CD)检测咪唑斯汀对牛血清白蛋白构象的影响。结果用上述检测方法获得不同温度下咪唑斯汀与牛血清白蛋白的猝灭常数和热动力学参数。结论静态猝灭是咪唑斯汀导致BSA荧光猝灭的主要原因。不同温度下计算的热动力学参数表明,咪唑斯汀与牛血清白蛋白分子间的结合力以疏水作用力为主。上述二者的结合导致BSA的构象发生改变。     

61例朝鲜族老年2型糖尿病患者胰岛β细胞功能

[目的]观察朝鲜族老年2型糖尿病患者的胰岛素抵抗(IR)及胰岛β细胞功能.[方法]检测61名新诊断的老年2型糖尿病患者、16例糖调节受损及19例糖耐量正常者的临床指标及血脂水平,并进行口服葡萄糖-胰岛素释放试验.计算胰岛素敏感性指数、HOMA-IR、胰岛β细胞功能指数(HOMA-β)及ΔI30/ΔG30.[结果]与糖耐量正常及糖调节受损组相比较,新诊断的2型糖尿病组患者ΔI30/ΔG30差异无统计学意义(P=0.733,P=0.068),HOMA-β差异有统计学意义(P=0.000,P=0.014);与糖耐量正常组相比较,糖尿病组HOMA-IR及胰岛素敏感性指数差异有统计学意义(P=0.001,P=0.000);与糖调节受损组相比较,糖尿病组HOMA-IR及胰岛素敏感性指数差异无统计学意义(P=0.148,P=0.078).[结论]朝鲜族老年2型糖尿病患者的IR在糖调节受损时期就比较明显,胰岛β细胞功能障碍从糖调节受损到2型糖尿病逐渐加重.     

阳离子金属卟啉与四螺旋DNA相互作用的研究

目的探讨金属阳离子卟啉的合成方法及与四螺旋DNA的相互作用方式。方法采用紫外可见吸收光谱、圆二色谱和荧光光谱等方法对一系列阳离子卟啉与四螺旋DNA的结合模式、结合常数及稳定四螺旋DNA情况进行研究。结果自由阳离子卟啉及金属铜卟啉可以插入到四螺旋DNA的碱基序列中,与四螺旋DNA的结合常数分别达到8.2×10^4和7.4×10^4,锌卟啉和锰卟啉分别采用堆积和沟面结合方式与四螺旋DNA相结合,结合常数分别为3.3×10^4和2.9×10^4。结论金属阳离子卟啉与四螺旋DNA的作用情况受到配位金属离子的影响;四配位的金属卟啉具有更高的DNA亲和力,有望作为潜在的抗肿瘤药物。     

1-苯基-3-甲基-4-苯甲酰吡唑啉酮-5-苯甲酰肼腙的Pd（Ⅱ）Pt（Ⅱ）配合物与牛血清白蛋白的相互作用

目的合成1-苯基-3-甲基-4-苯甲酰吡唑啉酮-5-苯甲酰肼腙（HL）的Pd（Ⅱ）、Pt（II）配合物PDL：和PtL2,研究其对牛血清白蛋白（BSA）的影响。方法利用紫外吸收光谱和静态荧光光谱定性讨论了HL以及PDLz和PtLz对BSA构象的影响。结果HL以及PDL2和PtL2以静态猝灭的方式猝灭了BSA的内源荧光,并计算出了不同温度下这3种化合物与BSA的键合常数（Ka）以及热力学参数焓变（AH）及熵变（AS）。结论HL和PDL2与BSA的作用力主要是静电相互作用,而对于PtL2,除了静电相互作用外还包括疏水相互作用。     

DNA靶向手性钌(Ⅱ)配合物的合成、表征及其抗肿瘤作用

目的 设计合成2个手性钌(Ⅱ)多吡啶配合物Λ-[Ru(bpy)2(P-NPIP)](PF)2·2H2O(1)和Λ-[Ru(bpy)2(p-tFPIP)](PF6)2·2H2O(2),评价其体外抗肿瘤活性,并对配合物2与DNA分子的识别机制及其光裂解作用进行初步探讨.方法 采用MTT方法评价手性钌(Ⅱ)配合物1和2对肿瘤...     

大鼠TCF4和ΔTCF4重组腺病毒载体的构建和鉴定

目的：构建腺病毒表达载体Ad-TCF4和Ad-ΔTCF4（缺失了β-catenin结合位点）,并初步鉴定其在间充质干细胞（mesenchymal stem cells,MSCs）中的表达,为进一步研究Wnt/β-catenin信号通路在MSCs中的功能以及应用MSCs进行干细胞移植和基因治疗奠定基础。方法：以MSCs的cDNA为模板,扩增TCF4和ΔTCF4基因,将基因序列定向克隆至穿梭质粒载体pShuttle-CMV后,转化含pAdEasy-1的BJ5183感受态细胞进行同源重组,获得重组腺病毒载体Ad-TCF4和Ad-ΔTCF4。PCR以及PacⅠ酶切鉴定后,Ad-TCF4和Ad-ΔTCF4转染QBI-293A进行包装和扩增。检测重组载体的病毒滴度以及感染MSCs的最适病毒复数（multiplicity of infection,MOI）,并探讨Ad-TCF4和Ad-ΔTCF4在MSCs中的表达以及对迁移的影响。结果：成功构建Ad-TCF4和Ad-ΔTCF4,病毒滴度分别为1.1×107pfu/mL和1.3×107pfu/mL,150 MOI病毒感染MSCs的效率达到90%以上;蛋白质印迹和TOPFlash/FOPFlash报告基因检测显示TCF4在MSCs中表达增加,并具有调节下游靶基因转录的活性;Boyden小室迁移实验发现感染Ad-ΔTCF4能显著抑制MSCs向LiCl的迁移能力,而感染Ad-TCF4并不能提高MSCs的迁移能力。结论：成功构建Ad-TCF4和Ad-ΔTCF4,能高效感染MSCs并正确表达。     

PiCCO血流动力学监测在肺移植患者中的应用

目的评价脉搏指示连续心排出量（PiCCO）技术在肺移植术中血流动力学监测的作用。方法20例终末期肺病患者行肺移植术,同时运用PiCCO和Swan-Ganz肺动脉漂浮导管（PAC）对术中6个时间点的血流动力学指标进行监测。分别比较胸腔内血容量指数（ITBVI）、肺动脉嵌顿压（PAWP）与每搏量指数（SVIpa）的相关性,以及相邻时间点变化值间（分别用Δ1～Δ5表示）的相关性,并运用Bland-Altman法对两种方法测得的心排指数（CI）进行一致性检验。结果ITBVI与SVIpa呈正相关（r=0.654,P〈0.05）,而PAWP与SVIpa无显著相关性（P〉0.05）。术中相邻时间点ITBVI的变化也与SVIpa变化成正相关（Δ1,r=0.621;Δ2,r=0.784;Δ3,r=0.713;Δ4,r=0.740;Δ5,r=0.747;P均〈0.05）,PAWP的变化与SVIpa变化无明显相关性（P〉0.05）。两种方法测得的CI平均偏离度为（0.09±0.5）L·min-1.m-2,一致性界限为（-0.89～1.07）L·min-1.m-2。结论在肺移植手术中PiCCO和PAC监测心脏前负荷的变化具有较好的相关性,PiCCO能够反映肺移植中血流动力学的变化。     

伯氏疟原虫红细胞膜相关蛋白1缺失突变体的构建和鉴定

目的:研究伯氏疟原虫输出蛋白——红细胞膜相关蛋白1(EMAP1)在疟原虫生长发育和侵染中的作用,构建EMAP1缺失的伯氏疟原虫突变体.方法:以pL0035质粒为载体,PCR扩增EMAP1编码区上游和下游序列作为同源臂,用酶切连接和无缝克隆的方法将两条同源臂分别插入pL0035,获得重组质粒pL0035-ΔPbEMAP1...     

微波辐射对苦参碱提取的影响及其动力学和热力学机理研究

目的 研究微波辐射功率、时间等因素对苦参碱提取的影响以及提取机理.方法 利用微波辐射后再用溶剂回流法提取苦参中的苦参碱,并与溶剂回流提取法作比较,从动力学和热力学角度探讨了微波辐射对苦参碱提取过程的影响及其作用机理.结果 微波辐射可强化苦参碱的提取过程,使其表观提取速率常数增大,提取活化能降低,从而利于苦参碱的提取;苦...     

后路顶椎区多节段水平式脊柱截骨术治疗强直性脊柱炎后凸畸形

目的 通过后路多节段顶椎区水平式截骨治疗强直性脊柱炎（AS）后凸畸形,观察并评价这一手术方法的疗效。方法对14例AS后凸畸形患者[年龄平均33岁;身高（156．64±6．78）cm;矢状面不同节段Cobb角：T5-1283．00°±10.29°,T11～L237．00°±10.51°,L1-514．000±4．85°;后凸Cobb角：T10～L248．60°±15.62°;躯干后凸角（WBKA角）：53．30°±11.09°]采用顶椎区多个节段水平式脊柱截骨的方法来矫正后凸畸形。内固定均采用椎弓根螺钉技术。结果术后患者身高平均增长（8．70±2．05）cm（P〈0．01）。矢状面不同节段Cobb角：T5-1243．20°±9．04°,矫正39．80°±4．17°（P〈0．01）;T11～L23．80°±1．53°,矫正33．20＋4.74°（P〈0．01）;L1-5 32.80°±6．81°,矫正18．79°±6．99°（P〈0．01）。后凸Cobb角：T10-L25．60°±1．68°,矫正43.00°±10．09°（P〈0．01）。WBKA角8．30°±3.10°,矫正44．18°＋7．17°（P〈0．01）。均无明显神经症状。术后随访0．5～2年,截骨部位在6～12个月时出现椎体间和椎板的骨性融合,外形明显改善,心肺功能好转。结论顶椎区多节段水平式脊柱截骨治疗脊柱后凸畸形疗效良好,同传统的Lt以下椎体楔形截骨比较,有明显的优点,但不适用于椎体前缘有明显骨性融合的患者。