红树林淡紫拟青霉胞外多糖体外抗HSV-1 的实验研究

目的 探讨红树林淡紫拟青霉胞外多糖体外抗单纯疱疹病毒Ⅰ型（HSV-1）感染的活性,为开 发新型抗病毒药物提供实验基础。方法 以Vero 细胞为病毒感染靶细胞,以不同浓度淡紫拟青霉胞外多糖 作用于HSV-1 感染的各个阶段,以细胞病变程度测定病毒半数感染量,MTT 法检测淡紫拟青霉胞外多糖对 Vero 细胞的毒性作用、对HSV-1 的直接灭活作用、对病毒吸附和生物合成的影响。结果 淡紫拟青霉胞 外多糖对Vero 细胞的半数有毒浓度（CC50）为1 724.2μg/ml,该多糖浓度<900μg/ml 时,细胞存活率仍> 90%,且对细胞无增殖作用;在25 ～ 1 000μg/ml 浓度范围内,该多糖可在一定程度上抑制病毒吸附,并表 现出一定的量效关系,半数抑制浓度（IC50）为650.7μg/ml ;该多糖还具有抑制HSV-1 生物合成的作用, 其IC50 为547.7μg/ml,在25 ～ 1 000μg/ml 浓度范围内,抑制率与药物浓度呈量效关系,未发现该多糖对 HSV-1 有直接灭活作用。结论 淡紫拟青霉胞外多糖对Vero 细胞毒性较小,是一种非常安全的多糖;该多 糖具有一定的抗病毒作用,在一定浓度范围内可抑制HSV-1 吸附和生物合成,且表现出一定的量效关系。     

五种药物对汉坦病毒的体外抑制作用的比较

目的 比较利巴韦林等五种药物对汉坦病毒（HV）的体外抑制作用。方法 利用HV76—118株感染传代培养的Vero—E6细胞,采用免疫荧光法分别评价五种药物的抗病毒效果。结果 五种药物均对汉坦病毒的入侵无阻断作用;利巴韦林对汉坦病毒增殖有明显的抑制作用,其最大无毒浓度（TD0）为500μg／ml、最小有效浓度（MTC）为31．2μg／ml,干扰素α-1b（赛若金）TD0为10万U／ml、MTC为0．5万U／ml,阿昔洛韦TD0为625μg／ml、MTC为156μg／ml,更昔洛韦、膦甲酸钠各浓度均未见对病毒增殖有抑制作用。结论 在一定浓度范围内利巴韦林、赛若金、阿昔洛韦对出血热病毒均具有抑制作用。     

防风等11种中药体外抗真菌活性研究

目的 对可能应用于浅表性皮肤真菌感染的中药进行横向筛选，寻找具有抑制或杀灭真菌能力的中药。方法 采用培养基药物浓度稀释法对11种中药提取物进行体外抗真菌实验。结果 丁香（100μg／ml、5μg／ml）对3株皮肤真菌敏感。其余10种中药不敏感。结论 丁香（50μg／ml）对絮状表皮癣菌、石膏样小孢子菌和红色毛癣菌有体外抑菌活性，其余中药无活性。     

大黄乙醇提取物的体外抗新城疫病毒作用

目的：研究大黄乙醇提取物的抗新城疫病毒（NDV）作用。方法：采用体外细胞培养的方法研究大黄乙醇提取物对NDV感染的拮抗作用。结果：20g/L剂量大黄乙醇提取物对BHK21细胞未有任何毒性作用；0.5g/L大黄对NDV所致CPE有明显的抑制作用；大黄可预防NDV感染，并对NDV的复制动力学有明显影响。结论：大黄乙醇提取物具有明显的抗NDV作用。     

大黄乙醇提取物的体外抗新城疫病毒作用

目的：研究大黄乙醇提取物的抗新城疫病毒（ＮＤＶ）作用。方法：采用体外细胞培养的方法研究大黄乙醇提取物对ＮＤＶ感染的拮抗作用。结果：２０ｇ／Ｌ剂量大黄乙醇提取物对ＢＨＫ２１细胞未有任何毒性作用；０．５ｇ／Ｌ大黄对ＮＤＶ所致ＣＰＥ有明显的抑制作用；大黄可预防ＮＤＶ感染，并对ＮＤＶ的复制动力学有明显影响。结论：大黄乙醇提取物具有明显的抗ＮＤＶ作用。     

甘肃省麻疹野病毒流行株分离鉴定研究

目的应用Vem,sLAM细胞培养技术,分离鉴定麻疹病毒。方法Veto／SLAM细胞形成单层后接种标本,于5％CO2条件下培养,出现典型融合性细胞病变（CPE）者为阳性,盲传3代后仍无病变者,为病毒分离阴性。应用RT-PCR（逆转录－聚合酶链反应）对麻疹病毒株进行基因型别检测、研究、分析。结果应用Veto／SLAM细胞,首次分离鉴定出的甘肃省麻疹野病毒流行株,其基因测序属H1a基因型,是本土麻疹野病毒流行株。结论Veto／SLAM细胞对麻疹病毒高度敏感,应在麻疹病毒分离中推广使用。     

玉竹提取物C对子宫内膜异位症在位细胞增生的作用

目的对比研究玉竹提取物C（Extraction of poly—gonaturm Odoratum,EC—PAOA）对正常妇女子宫内膜细胞（Normal Endometrium,NE）和子宫内膜异位症患者在位内膜细胞（Eutopic Endometrium,EE）增生的作用。方法对NE细胞和EE细胞进行体外分离培养,细胞免疫组化鉴定细胞类型及纯度;加入10μg／ml、100μg／ml、1000μg／ml三种浓度的EC—PAOA连续培养24h、48h和72h,应用MTT比色法观察EC—PAOA对NE和EE子宫内膜细胞增生的作用。结果EC—PAOA对NE细胞无作用（P〉0．05）,EC—PAOA对EE细胞作用48h、72h浓度为100μg/ml 1000μg/ml均能抑制细胞增生。结论由此得出ECPAOA对EM患者的子宫内膜细胞增生有抑制作用。     

吉西他滨在胰腺癌的放射治疗中增敏机制研究

目的探讨吉西他滨在胰腺癌PC－2细胞体外放疗增敏相关基因谱的影响。方法体外培养胰腺癌PC－2细胞,MTT法检测不同放射剂量（0cGy,50cOy,100cGy,150cOy,200cOy,250cGy）下,不同浓度吉西他滨（空白组,10μg／ml,20μg／ml,50ug／ml,40μg／ml,50μg／ml,60μg／ml,70ug／ml,80μg／ml,90ug／ml及100μg／ml吉西他滨组）对PC－2细胞体外生长的影响。流式细胞仪检测单纯放疗组（空白组,150cGy）和放疗增敏组（40μg／ml吉西他滨,150cGy）对胰腺癌细胞周期及凋亡影响。HumanlA基因表达谱芯片分析2组间基因谱差异表达。结果胰腺癌PC-2细胞的凋亡分数与吉西他滨的浓度成剂量依赖关系,在40μg／ml时对PC-2细胞有体外放射增敏作用。对PC-2细胞的G1／S阻滞作用明显,加药放疗组（90．11％）细胞的早期凋亡率较单纯放疗组（71.72％）明显提高。细胞表达谱芯片结果显示,差异表达基因（差异表达两倍以上）共差异表达基因1030条。其中主要包括表达上调的基因548个,下调基因682个。结论吉西他滨主要通过诱导细胞凋亡,抑制细胞周期转化,以及激活肿瘤坏死因子及细胞炎性因子等多种途径阻止放疗问期细胞的修复、杀死瘤细胞发挥其辐射增敏的作用。     

口虾蛄抗鼻咽癌活性成分的筛选及其对细胞周期的影响

目的筛选口虾蛄乙醇提取物抗鼻咽癌活性成分,并探讨其对细胞周期的影响。方法采用系统溶剂法,对口虾蛄乙醇提取物进行分离,以MTT法筛选出对人低分化鼻咽癌CNE-2Z细胞作用最明显的活性成分,然后应用流式细胞术进一步检测其对细胞周期的影响。结果3种提取物对CNE-2Z细胞均有不同程度的抑制作用,且呈明显的剂量依赖性,作用48小时后的乙酸乙酯提取物IC50（239μg/ml）明显低于其余2种（正丁醇提取物IC50：833μg/ml,石油醚提取物：1550μg/ml）;流式细胞术检测结果显示,随着乙酸乙酯提取物浓度的增加,G1期和G2/M期细胞所占的百分比逐渐降低,S期细胞所占百分比逐渐增加（P〈0.01）。结论口虾蛄抗鼻咽癌活性成分主要存在于乙酸乙酯提取物中,其作用机制可能与引起细胞周期阻滞于S期有关。     

4-苯乙烯磺酸马来酸酐共聚物抑制HIV-1的初步研究

目的：研究4‐苯乙烯磺酸马来酸酐共聚物（PSM）对HIV‐1的抑制作用。方法通过Luciferase检测不同浓度的PSM对易感细胞GHOST（3）X4／Hi5中HIV‐1的抑制作用,观察PSM对北美HIV‐1毒株JR‐FL、HXB2和中国临床分离株CNE6、CNE30、CNE50和CNE55的抑制作用;利用CCK8试剂盒测定PSM对VK2／E6E7生长的抑制率来观察PSM的体外细胞毒性。通过逆转录荧光实时定量PCR（qRT‐PCR）检测生殖道上皮细胞HEC‐1‐A的紧密连接蛋白ZO‐1、E‐cadherin和Occludin的表达,观察PSM对生殖道上皮细胞HEC‐1‐A表达的紧密连接蛋白的影响从而间接评价其对局部黏膜完整性的影响。结果PSM对北美HIV‐1毒株JR‐FL、HXB2以及中国常见临床分离株CNE6、CNE30、CNE50和CNE55的抑制EC50分别为5．78、0．77、1．85、3．15、1．70和2．27μg／mL,具有抗HIV‐1感染的活性;PSM对VK2／E6E7细胞具有低毒性;PSM不明显抑制ZO‐1的表达且增加了E‐cadherin和Occludin的转录水平。结论PSM可以抑制HIV‐1感染,具有作为杀微生物剂的潜能。     

利福平对兔脂肪干细胞增殖、成骨及黏附支架的影响

目的探讨利福平（rifampicin,RFP）对兔脂肪干细胞（rabbitadipose-derivedstemcells,rADSCs）增殖、成骨及黏附支架的影响,为后期RFP缓释系统与rADSCs的复合奠定实验基础。方法分离培养rADSCs,检测细胞周期及表面抗原CD44,成骨、成脂诱导后分别行茜素红及油红O染色。用利福平生长液干预rADSCs,按浓度分为0、10、20及30μg／ml4组,分别绘制细胞生长曲线、检测细胞凋亡率及碱性磷酸酶（alkalinephosphatase,ALP）含量。制备同种异体脱钙骨支架,并复合各组rADSCs,计算细胞黏附率,扫描电子显微镜观察复合情况。结果rADSCs呈长梭形生长,G0／G1期占78．3％±4．2％,表面抗原CD44阳性表达。成骨诱导后茜素红染色及成脂诱导后油红O染色均为阳性。生长曲线示30μg／ml组第4-11天增殖能力较其他3组弱（P〈0．01）,细胞凋亡示30μg／ml组凋亡率高于其他3组（P〈0．01）,ALP检测示成骨诱导后第14天30μg／ml组ALP含量较其他3组少（P〈0．01）,细胞黏附率示30μg／ml组较其他3组低（P〈0．01）。扫描电镜观察30μg／ml组黏附的细胞数量少,形态松散。结论不影响rADSCs增殖、成骨及黏附支架的RFP临界浓度约为20μg／ml。     

猴耳环水提取物抗流感病毒的实验研究

目的研究猴耳环水提取物体内外抗流感病毒的活性。方法体外抗病毒试验采用CPE法，按Reed—Muench方法计算TC50、IC50和TI，观察猴耳环水提取物体外对流感病毒引起的细胞病变的影响和在体内采用小鼠经滴鼻感染流感病毒造成肺炎模型，以肺部炎症、死亡率和生命延长率为指标，观察猴耳环水提取物体内抗流感病毒的活性。结果猴耳环水提取物在体外对流感病毒引起的细胞病变有明显抑制作用，其IC50生药为3．33mg／ml，TI为7．48；在给生药药剂量为8～20g／kg时，对流感病毒所致的小鼠肺部炎症有明显抑制作用，并能明显降低流感病毒感染小鼠的死亡率和延长其存活时间。结论猴耳环水提取物在体内外均具有明显抗流感病毒的作用。     

LPS预激神经胶质细胞培养上清对神经元的影响

目的探讨神经胶质细胞经过脂多糖（Lipopolyssacride,LPS）预激后,其培养上清对神经元功能的影响。方法体外培养神经元与神经胶质细胞,免疫荧光法进行纯度鉴定。神经胶质细胞分为4组：未刺激对照组、0.01μg/ml LPS单次刺激组、1μg/ml LPS单次刺激组、预刺激组（先采用0.01μg/ml LPS刺激18h后,再用1μg/mlLPS刺激24h）。经过相应处理后收获各组条件培养上清,分别加入到神经元中,与神经元共同孵育24h后收集细胞与培养上清。采用CCK-8试剂盒与ELISA法检测神经元的存活率和分泌TNF-α、IL-6水平。结果星形胶质细胞预刺激组条件培养上清作用于神经元后,细胞存活率下降,与0.01μg/ml、1μg/ml LPS单次刺激组比差异均具有统计学意义（P〈0.05）;小胶质细胞各组条件培养上清作用于神经元后,细胞存活率变化不明显（P均〉0.05）;在星形胶质细胞各刺激组上清作用下,神经元产生TNF-α的水平,各LPS处理组培养上清刺激下水平升高,其中1μg/ml LPS单次刺激组升高明显,与对照组和0.01μg/ml LPS单次刺激组比差异具有统计学意义（P均〈0.05）;产生IL-6的水平亦升高,与对照组比亦均具有统计学差异（P〈0.05或P〈0.01）;并且,预刺激组较1μg/mlLPS单次刺激组上清作用后,产生IL-6水平较低（P〈0.05）。各组小胶质细胞条件培养上清作用于神经元后,产生TNF-α的水平,预刺激组水平升高明显,与对照组比差异具有统计学意义（P〈0.01）;对于IL-6水平,变化趋势同TNF-α,但各组间差异无统计学意义（P〉0.0.5）。结论 LPS预激参与重新调配了神经胶质细胞分泌活性介质的作用,培养上清中这些分子相互制约或是协同,对神经元产生有可能是保护或是损伤效应。     

积雪草甙、羟基积雪草甙对体外培养人胚胎成纤维细胞的影响

目的研究积雪草甙（asiaticoside,Ad）和羟基积雪草甙（madecassoside,Md）对体外培养人胚胎成纤维细胞（Human embryonic skin fibroblasts,HESFb）增殖过程的影响。方法在不同浓度（0μg/ml、10μg/ml、50μg/ml、100μg/ml、200μg/ml、400μg/ml）Ad和Md的环境下对人胚胎细胞进行体外培养,用CCK-8试剂盒通过酶标仪检测不同培养时间（0、1、2、3、4、5d）HESFb的OD值,用SPSS13.0统计软件进行统计分析。结果在实验时间内Ad和Md在10μg/ml、50μg/ml、100μg/ml、200μg/ml浓度时均对人胚胎成纤维细胞的增殖有促进作用,200μg/ml浓度时最明显,且Ad比Md作用强。两组在400μg/ml浓度时均有抑制作用。结论在一定浓度和培养时间内一定剂量的Ad和Md对体外培养的HESFb增殖有促进作用,同剂量相比Ad比Md明显。而较高剂量的时候均可出现抑制作用。     

杜仲抗炎镇痛作用的实验研究

目的研究杜仲水提物的镇痛和抗炎作用,为该药的临床研究提供基础。方法采用二甲苯所致的小鼠耳廓肿胀、蛋清所致大鼠足跖肿胀等炎症模型;热板法、乙酸诱导小鼠疼痛反应等疼痛模型,观察杜仲水提物的抗炎镇痛作用。实验动物每天灌胃一次,小鼠持续7d,大鼠持续15d。对照组给予蒸馏水,阿司匹林组给予阿司匹林（小鼠给予0.25g/kg、大鼠0.18g/kg）,盐酸曲马朵组给予盐酸曲马朵0.15g/kg,高、中、低剂量组分别给予杜仲水提物（小鼠给予163.80、81.90、40.95g生药/kg;大鼠给予114.66、57.33、28.67g生药/kg）。分别在末次给药后进行镇痛和抗炎作用的观察。结果杜仲能显著的延长醋酸所致小鼠的疼痛扭体首次出现的时间,减少扭体次数和提高扭体抑制率和镇痛百分率,延长热板致痛小鼠的痛阈值;高剂量组的作用与阿司匹林相当,但镇痛效果不如盐酸曲马朵,呈现良好的剂量依赖关系。同时,在一定程度上杜仲能明显的抑制蛋清所致大鼠的足肿胀和二甲苯致小鼠耳廓肿胀,减轻小鼠因炎性物质刺激导致的炎性渗出,作用依然呈现良好的量效趋势,高剂量组的作用与阿司匹林相当。结论杜仲具有显著的抗炎作用和镇痛作用,这些药理作用为其临床治疗疼痛和炎症性疾病提供了实验依据。     

杜仲总黄酮对体外培养大鼠成骨细胞增殖的影响

目的通过观察杜仲总黄酮对新生大鼠颅盖骨体外培养成骨细胞增殖的影响，筛选杜仲防治骨质疏松的药效成分。方法乙醇分段法提取杜仲皮中总黄酮，以25μg/ml、50μg/ml、100μg/ml浓度分别加入新生Wistar大鼠颅骨分离培养的成骨细胞中，用MTT法评价对成骨细胞增殖的影响。结果50、100μg/ml杜仲总黄酮剂量组的OD570吸光值明显增高，与对照组比较，差异显著（P〈0．05）。结论杜仲总黄酮能直接促进体外成骨细胞的增殖。     

黄芪提取物对乙型肝炎病毒抗原表达的抑制作用

目的探讨黄芪提取物对乙型肝炎病毒（HBV）病毒抗原表达的抑制作用。方法用MTT法测定黄芪提取液在不同浓度下对HepG2．2．15细胞的细胞毒性,ELISA法检测黄芪提取物对HepG2．2．15细胞分泌HBsAg、HBeAg颗粒的影响。结果黄芪提取物对HepG2．2．15细胞4d和8d的半数毒性浓度（TC50）分别为88．914μg／ml和85．209μg／ml（P〉0．05）,对HBeAg4d和8d的治疗指数（TI）分别为1．018和1．342（P〉0．05）,对HBsAg4d和8d的治疗指数分别为0．065和0．089（P〉0．05）。结论黄芪提取物抑制HepG2．2．15细胞分泌HBeAg的作用为低效有毒,黄芪提取物对HBsAg抗原分泌无明显抑制作用。     

叶下珠复方在体外细胞培养中抗HBV活性的研究

目的体外观察叶下珠复方抗HBV作用。方法以不同．农度的药物作用HePG2．2．15细胞，收集培养上清，用ELISA法测定HBsAg、HBeAg，并计算药物对抗原的抑制率、半数有效浓度（IC50）和治疗指教（TI），用荧光定量PCR测定HVB—DNA。结果在半数毒性浓度下，叶下珠复方浓度为250μg／ml、125μg／ml、62．5μg／ml、31．25μg／ml、15．6μg／ml时对HePG2．2．15细胞分泌HBsAg的抑制率分别为54．8％、43．6％、37．4％、26．7％、14．6％，其Ⅱ值为6．1；对HBeAg的抑制率分别为78．6％、72．9％、67．1％、56．8％、51．5％，其11值为24．6。叶下珠复方对HePG2．2．15细胞分泌的HBV—DNA有直接抑制作用，随着药物浓度的增加，HBV—DNA定量逐渐降低。结论叶下珠复方在体外显示具有抗HBV作用。     

杜仲总黄酮对人肺腺癌细胞H1299细胞增殖的影响

目的通过观察杜仲总黄酮对人肺腺癌细胞H1299细胞增殖的影响,筛选杜仲抗肿瘤的药效成分。方法乙醇分段法提取杜仲皮中总黄酮,以25μg/ml、50μg/ml、100μg/ml、200μg/ml浓度分别加入H1299细胞中,用MTT法检测H1299细胞的增殖情况。结果杜仲总黄酮为25μg、50μg、100μg、200μg/ml剂量组的OD490吸光值均降低,与对照组相比,有统计学意义（P〈0.05）。结论杜仲总黄酮能直接抑制体外培养的人肺腺癌细胞H1299细胞增殖。