VGX-1027抑制PM_(2.5)介导的小鼠肺部炎症和气道高反应

目的探讨VGX-1027能否抑制PM_(2.5)介导的小鼠肺部炎症和气道高反应。方法将成年健康C57BL/6小鼠随机分为对照组、VGX-1027(50 mg·kg~(-1))+PBS组、PM_(2.5)组、VGX-1027(12.5 mg·kg~(-1))+PM_(2.5)组、VGX-1027(25 mg·kg~(-1))+PM_(2.5)组和VGX-1027(50 mg·kg~(-1))+PM_(2.5)组。小鼠在鼻腔滴入PBS或PM_(2.5)混悬液(7.8 mg·kg~(-1))前1 h,腹腔注射PBS或相应剂量的VGX-1027,每天1次,连续2 d。24 h后,测定小鼠气道高反应,支气管肺泡灌洗液(BALF)细胞计数,HE染色评估肺部炎症积分,ELISA检测BALF炎性因子水平,Western blot测定肺组织NF-κB蛋白的磷酸化水平,以及NLRP3和caspase-1的表达水平。结果 PM_(2.5)鼻腔滴入引起明显的肺部炎症和气道高反应。12. 5 mg·kg~(-1)VGX-1027不能抑制PM_(2.5)介导的气道高反应和肺部炎症浸润;而25、50 mg·kg~(-1)的VGX-1027明显抑制PM_(2.5)介导的气道高反应和肺部炎症浸润,降低BALF中炎症细胞数量和炎性因子的水平;下调NF-κB蛋白的磷酸化水平,以及NLRP3和caspase-1的表达水平。结论VGX-1027可抑制PM_(2.5)介导的小鼠肺部炎症和气道高反应。     

热打击通过活化NLRP3炎性小体增加肺毛细血管的通透性

目的 验证热打击通过活化 NLRP3炎性小体增加肺毛细血管通透性的机制。方法 C57BL/6小鼠和肺微血管内皮细胞,用 42 ℃热打击。体内实验分组包括：对照组和热打击组,每组 12只小鼠;体外实验分组包括：对照组、热打击组、热打击+2,2,6,6-四甲基哌啶氧化物（TEMPO）组、热打击+半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶（caspase）抑制剂（Z-VAD-FMK）组、热打击+白细胞介素-1受体拮抗剂（IL-1Ra）组,每组 4例。检测肺组织和肺微血管内皮细胞活性氧（ROS）表达;Western blot 和（或）免疫荧光检测 caspase-1、白细胞介素-1β（IL-1β）、紧密连接蛋白 ZO-1、occludin、claudin-5的表达;用伊文氏蓝检测小鼠肺毛细血管的通透性。结果 体内实验结果显示,与对照组比较,热打击组小鼠肺组织伊文氏蓝浓度明显升高、ROS表达上调、NLRP3炎性小体活化、IL-1β表达上调和紧密连接蛋白的表达下调（P＜0.01）。体外实验结果显示,用 TEMPO 清除 ROS 后,NLRP3炎性小体活化被抑制（P＜0.01）;用 ZVAD-FMK抑制 caspase-1作用后,IL-1β表达显著下调（P＜0.01）;用 IL-1Ra阻断 IL-1β作用后,紧密连接蛋白表达显著上调（P＜0.01）。结论 热打击可通过活化 NLRP3炎性小体促进 IL-1β的表达,进而下调紧密连接蛋白的表达,导致肺微血管通透性增加。     

川芎嗪通过下调JNK磷酸化抑制PM_(2.5)诱导的血管平滑肌细胞增殖

目的探讨川芎嗪(TMP)对PM_(2.5)诱导的大鼠血管平滑肌细胞(VSMC)增殖的影响及作用机制。方法以PM_(2.5)20,200和400 mg·L~(-1)染毒培养VSMC 24 h,MTT法检测VSMC存活,ELISA法检测细胞黏附分子1(VCAM-1)含量,放射免疫分析(RIA)法和硝酸还原酶法分别检测内皮素1(ET-1)和一氧化氮(NO)含量,Western蛋白印迹法检测VSMC中成纤维细胞生长因子受体1(FGFR-1)蛋白表达。分别加入TMP 20,200和2000 mg·L~(-1)及JNK抑制剂SP600125 10μmol·L~(-1)检测TMP对PM_(2.5)的干预作用及机制。结果与正常对照组比较,PM_(2.5)200和400 mg·L~(-1)处理组A_(570 nm)显著升高,VCAM-1和ET-1分泌增加,NO分泌降低,p-JNK及FGFR-1蛋白表达显著增加(P<0.01);PM_(2.5)20 mg·L~(-1)处理组上述指标无显著变化。与PM_(2.5)200 mg·L~(-1)处理组比较,PM_(2.5)200 mg·L~(-1)+TMP 200和2000 mg·L~(-1)预处理组A_(570 nm)显著降低,VCAM-1及ET-1分泌降低,NO分泌增加,p-JNK和FGFR-1蛋白表达显著降低(P<0.01);PM_(2.5)2 00 mg·L~(-1)+TMP 20 mg·L~(-1)预处理组无显著变化。与PM_(2.5)200 mg·L~(-1)+TMP 2000 mg·L~(-1)预处理组比较,PM_(2.5)200 mg·L~(-1)+TMP 2000 mg·L~(-1)+SP600125 10μmol·L~(-1)抑制剂组可进一步增强TMP对上述指标的影响(P<0.05,P<0.01)。结论 TMP可能通过下调JNK磷酸化,并调节VSMC内FGFR-1蛋白表达及VCAM-1,ET-1和NO含量,抑制PM_(2.5)诱导的VSMC增殖。     

EGCG通过调控胱天蛋白酶介导的NLRP3炎症小体激活抑制LPS+Aβ诱导BV2细胞的炎症反应

目的从离体水平研究胱天蛋白酶11介导的NLRP3炎症小体激活在表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)对LPS+Aβ诱导的BV2细胞炎症反应的抑制作用及其可能机制。方法应用LPS+Aβ诱导的BV2细胞建立MG活化模型,建立空白对照组,LPS+Aβ组,LPS+Aβ+EGCG组。实时PCR、Western印迹和ELISA检测EGCG对BV2细胞Iba-1表达及相关炎性因子IL-1β,IL-18的转录、表达和分泌水平。与SH-SY5Y进行条件培养,流式细胞术和CCK8检测SH-SY5Y细胞的存活率。Western印迹、免疫荧光等检测EGCG对BV2细胞胱天蛋白酶1与Iba-1的共定位、胱天蛋白酶1活性、胱天蛋白酶1 P20和胱天蛋白酶11 P26的蛋白表达水平。应用胱天蛋白酶11抑制剂wedelolactone处理LPS+Aβ诱导的BV2细胞。结果 (1) EGCG在降低LPS+Aβ诱导的BV2细胞Iba-1表达,抑制炎性因子IL-1β,IL-18的转录、表达和分泌水平,提示EGCG可抑制MG活化及其介导的炎症反应。(2) EGCG显著增加与LPS+Aβ诱导的BV2条件培养的SH-SY5Y细胞的存活率,提示EGCG可通过抑制MG内炎症反应改善神经元存活,发挥神经保护作用。(3) EGCG可显著降低LPS+Aβ诱导的胱天蛋白酶1与Iba-1共定位,胱天蛋白酶1活性及胱天蛋白酶1 P20、胱天蛋白酶11 P26蛋白的表达水平,提示EGCG抑制MG活化与其抑制胱天蛋白酶11表达和NLRP3炎症小体介导的炎症反应有关。(4)与EGCG处理一致,wedelolactone可降低LPS+Aβ诱导的胱天蛋白酶11 P26及胱天蛋白酶1 P20,IL-1β,IL-18和Iba-1的蛋白表达水平,提示胱天蛋白酶11可促进LPS+Aβ诱导的NLRP3炎症小体激活,而EGCG可抑制胱天蛋白酶11介导的NLRP3炎症小体激活。结论 EGCG通过抑制胱天蛋白酶11介导的NLRP3炎症小体激活抑制LPS+Aβ诱导BV2细胞的炎症反应,发挥神经保护作用。     

PM2.5致大鼠肺损伤模型中肺巨噬细胞NLRP3 炎性小体活化研究

摘要： 目的 探讨肺巨噬细胞NLRP3炎性小体活化在大气细颗粒物 （PM2.5） 所致肺炎症损伤中的作用。方法 采用中流量采样器收集PM2.5颗粒物制成混悬液, 经气管滴注给予高、 中、 低剂量 （分别为15、 10、 5 mg/kg） 制成大鼠肺损伤模型, 3 d后麻醉动物进行肺泡灌洗, 收集支气管肺泡灌洗液 （BALF） 中的巨噬细胞, 中性红法测定其吞噬功能, 并采用免疫荧光双染色观察肺巨噬细胞内NLRP3的表达; 处死大鼠解剖取肺组织, HE染色观察肺损伤严重程度并评分, 免疫组化法检测肺组织NLRP3表达, ELISA法测定肺组织内IL-18、 IL-1β及Caspase-1的表达情况。结果 大鼠经气管滴注PM2.5染毒后, BALF内巨噬细胞吞噬功能下降。实验组大鼠肺损伤明显, 表现为间质性肺炎; 肺泡间隔明显增宽, 部分肺泡壁断裂, 尤以高剂量组表现明显; 各实验组大鼠的肺组织病理学评分均明显高于对照组 （均 P＜0.05）。低、 中、 高剂量组大鼠肺组织内NLRP3表达均高于对照组。肺组织内IL-18、 IL-1β及Caspase-1的表达不同程度上调。结论 大鼠气管滴注PM2.5引起的肺损伤和炎症反应与肺巨噬细胞内NLRP3炎症小体的活化有关。     

NLRP3炎症小体激活及调节机制的研究进展

炎症小体是一种由Nod样受体(NLR)家族成员与PYHIN (pyrin and HIN domain)家族成员组成的胞浆多蛋白复合物,能被多种病原相关分子模式或损伤相关分子模式激活。炎症小体的功能是激活半胱天冬酶1(Caspase-1),进而引起促炎细胞因子白细胞介素(IL)-1β和IL-18的成熟和分泌,并诱导细胞焦亡。NLR家族蛋白3(NLRP3)炎症小体是由NLRP3、接头蛋白ASC和效应蛋白Caspase-1组成的大分子多蛋白复合体。与其他炎症小体不同,NLRP3炎症小体可以被多种刺激物活化,包括微生物组分和内源性分子。NLRP3炎症小体在免疫系统和人类疾病中的重要性显而易见,但其激活及调节的机制仍不清楚。在此,主要对NLRP3炎症小体活化和调节的机制进行综述。

     

吸入胰岛素通过NLRP3炎症小体改善散发性阿尔茨海默病小鼠的认知功能

目的 探究吸入胰岛素对散发性阿尔茨海默病(sporadic Alzheimer’s disease, sAD)小鼠认知功能的影响及机制。方法 采用链脲佐菌素(streptozotocin, STZ)侧脑室注射法构建散发性AD模型。C57BL/6 J小鼠随机分成3组：对照组(Con)、模型组(STZ-NS)和治疗组(STZ-INS),每组12只。治疗组经鼻吸入胰岛素0.87 U·d^-1,对照组和模型组吸入同体积生理盐水。4周后行水迷宫实验检测小鼠的认知功能;免疫荧光实验检测小鼠海马区Iba1表达;Western blot检测各组小鼠海马GFAP、CD11b及NLRP3炎症小体通路相关蛋白的表达。另以脂多糖(lipopolysaccharide, LPS)刺激BV2细胞诱导其活化,不同浓度胰岛素预处理,Western blot检测NLRP3炎症小体通路相关蛋白的表达。结果 与对照组小鼠相比,模型组小鼠的学习和记忆能力明显下降,海马区Iba1阳性细胞数量明显增加,GFAP、CD11b和NLRP3炎症小体通路相关蛋白的表达明显升高;吸入胰岛素后,小鼠的学习和记忆功能明显改...     

MYR通过NF-κκB信号通路改善LPS诱导小鼠纹状体炎症反应

目的研究MYR对LPS诱导小鼠纹状体内神经炎症的作用及机制。方法雄性BALB/c小鼠随机分为正常对照组、LPS模型组、MYR 20和50 mg·kg~(-1)给药组。连续给予MYR 7 d,于末次给药后,模型组和给药组小鼠采用腹腔注射LPS5 mg·kg~(-1)诱导小鼠急性神经炎症的发生,LPS注射6 h后,ELISA法检测小鼠纹状体中IL-1β,IL-6,TNF-α,MCP-1以及ICAM-1等炎症因子的变化;Western印迹法检测小鼠纹状体中NF-κB信号通路相关蛋白的表达变化。结果与正常对照组比较,LPS诱导组小鼠纹状体中炎症因子IL-1β,IL-6,TNF-α,MCP-1以及ICAM-1显著增加(所有P<0.01),NF-κB信号通路相关蛋白表达显著增加。而给予MYR 20和50 mg·kg~(-1)可显著抑制LPS诱导的小鼠纹状体炎症因子的释放,抑制NF-κB,IκB蛋白的磷酸化,抑制胞浆内NF-κB的核转位。结论 MYR可有效抑制LPS诱导的神经炎症,保护小鼠纹状体中多巴胺神经元,其抗炎保护作用与抑制NF-κB信号通路密切相关。     

山奈酚通过抑制NLRP3炎症小体介导的脂肪组织炎症改善db/db小鼠胰岛素抵抗发生

目的：探讨山奈酚能否通过调控肥胖小鼠脂肪组织炎症改善胰岛素抵抗发生并研究作用机制。方法：db/m小鼠作为对照组,db/db雄性小鼠随机分为模型组、二甲双胍组(0.15 g·kg^-1·d^-1)和山奈酚组(50 mg·kg^-1·d^-1)。连续灌胃给药6周,每周记录小鼠体重,6周后进行葡萄糖耐量试验、胰岛素耐量试验、皮下和附睾白色脂肪组织质量测定;HE染色观察脂肪组织形态学变化,免疫组化法观察巨噬细胞向脂肪组织的浸润程度及巨噬细胞标志物F4/80的表达,实时荧光定量PCR检测TNF-α和IL-18以及Arg-1和IL-10的mRNA表达,蛋白质免疫印迹试验检测NLRP3、pro-caspase1、cle-caspase1和IL-1β表达。结果：与模型组相比,山奈酚能够显著抑制db/db小鼠脂肪质量增加,抑制脂肪细胞肥大。山奈酚组小鼠脂肪组织巨噬细胞浸润减少,TNF-α和IL-18 mRNA表达减少,Arg-1和IL-10 mRNA表达增加;山奈酚治疗能够抑制小鼠附睾脂肪组织NLRP3、caspase1以及...     

PM_(2.5)对肺泡Ⅱ型上皮细胞MLE-12的毒性研究

目的研究大气细颗粒物(PM2.5)对体外培养的肺泡Ⅱ型上皮细胞MLE-12的生物学效应,探讨大气细颗粒物对呼吸系统的损伤及其机制。方法采集北京市2008年春季大气中的细颗粒物PM2.5,处理后得到的水溶组分、水不溶组分以及颗粒物总悬浮液作为实验材料,MLE-12细胞暴露于不同浓度的各组分处24h,用噻唑蓝(MTT)法测定细胞存活力,并选择0.05mg/ml为后续实验的暴露剂量,测定细胞暴露后培养液上清中乳酸脱氢酶(LDH)、胞内过氧化酶(CAT)的活性和谷胱甘肽(GSH)的含量,以及胞内活性氧(ROS)的生成量,评价大气颗粒物及其不同组分对细胞的损伤效应。同时,采用实时定量PCR技术测定暴露细胞中SP-C基因水平表达变化。结果颗粒物的不同组分均对MLE-12细胞活力具有显著的抑制作用,存在剂量-效应关系,暴露后LDH漏出显著增多,CAT活性和GSH含量无明显改变,可溶组分以及总悬浮液染毒可显著升高胞内H2O2,CAT预处理后H2O2的生成量与对照组差异无统计学意义(P0.05);颗粒物染毒细胞中SP-C mRNA的表达低于正常组,CAT预处理后SP-C mRNA无显著改变。结论在本试验条件下,大气细颗粒物及各组分对肺泡Ⅱ型上皮细胞具有细胞毒性作用,并且可溶成分诱导的氧化应激以及不溶成分造成的机械性损伤在细颗粒物对MLE-12细胞的损伤过程中具有协同作用。     

丹酚酸B通过抑制NLRP3炎症小体priming阶段减轻缺氧诱导大鼠心肌细胞损伤

目的探究丹酚酸B(Sal B)能否通过调控NLRP3炎症小体priming阶段减轻缺氧诱导大鼠心肌细胞损伤。方法CCK8法检测不同浓度丹酚酸B对大鼠H9C2细胞生长的影响,并挑选出合适的丹酚酸B实验浓度;微孔板、ELISA法检测缺氧造模后实验组,不同浓度给药组,以及抑制剂组LDH/cTn/IL-1β的分泌水平;qPCR以及蛋白质免疫印迹法检测造模后实验组,不同浓度给药组以及抑制剂组TLR4/Myd88/IRAK1/NF-κB/NLRP3基因以及蛋白表达水平。结果经过缺氧处理后,H9C2细胞活性下降,LDH/cTn/IL-1β分泌量升高,TLR4/Myd88/IRAK1/NF-κB/NLRP3在mRNA水平以及蛋白表达上调;与模型组相比,丹酚酸B预处理24h后,H9C2细胞活性增加,LDH/cTn/IL-1β分泌量下降,TLR4/Myd88/IRAK1/NF-κB/NLRP3 mRNA水平以及蛋白表达水平降低。结论丹酚酸B可以通过调控NLRP3炎症小体priming阶段,减轻缺氧诱导的大鼠心肌细胞损伤。     

PM_(2.5)的细胞毒性及机制研究进展

<正>大气污染是影响公众健康的重要危险因素之一。近年来,我国许多地方出现严重灰霾天气,而灰霾天气的发生与大气中细颗粒物(Particulate Matter 2.5,PM2.5)浓度存在着密切的关联。PM2.5因其颗粒小、比表面积大,吸附的重金属和有毒物质较多,在大气中的停留时间长、输送距离远,且可直接到达终末肺泡,在呼吸系统中易于溶解吸收等特点,使其对人体健康危害和大气环境质量的影响更为严重。所以世界卫生组织推荐使用PM2.5浓度来作为检测空气质量的指     

环境PM_(2.5)致神经系统损伤机制研究进展

细颗粒物(PM_(2.5))指环境中空气动力学直径≤2.5μm的大气颗粒物,其组成成分复杂,粒径小,数量多,可随人体呼吸到达肺泡并沉积,甚至渗透至循环系统进入全身,引起相应的病理改变。流行病学研究结果表明,PM_(2.5)暴露可增加神经退行性疾病的发病风险。本文从PM_(2.5)诱导神经炎症反应、氧化应激、细胞凋亡与自噬、细胞DNA损伤和DNA甲基化等方面阐述环境PM_(2.5)造成中枢神经系统损伤的分子机制。     

炎性递质在慢性阻塞性肺疾病气道炎症反应中的作用

慢性阻塞性肺疾病(COPD)是一种具有气流受限特征的可以预防和治疗的疾病,其气流受限不完全可逆、呈进行性发展,与肺部对香烟烟雾等有害气体或有害颗粒的异常炎症反应有关.COPD累及肺脏,但也可引起全身(或称肺外)的不良效应.     

参百益通过诱导自噬和抑制NLRP3炎症小体保护顺铂诱导的HK-2细胞损伤

目的：考察参百益的有效成分人参皂苷Rg3对顺铂诱导人肾小管上皮细胞（HK-2）损伤的保护作用和作用机制。方法：利用MTT法检测参百益和顺铂对HK-2细胞存活率的影响,通过Western blot法和荧光免疫检测法对HK-2细胞内炎症和自噬相关蛋白的表达进行检测。结果：参百益抑制了顺铂诱导的HK-2细胞凋亡,使HK-2细胞的存活率显著升高。参百益与顺铂联合作用,使NLRP3、p-p65和p62的表达显著降低,LC3II/I和Becline-1的表达明显升高。结论：参百益与顺铂联用,可以通过抑制炎症小体激活和诱导细胞自噬,减弱顺铂的肾毒性,为参百益的临床应用提供了理论依据。     

片仔癀对酒精诱导的急性肝损伤小鼠自噬和NLRP3炎症小体活化的影响

目的 研究片仔癀（Pien-Tze-Huang,PTH）对酒精（alcohol）诱导小鼠急性肝损伤的保护作用及可能机制。方法 将C57BL/6小鼠随机分为空白组、酒精组、PTH低（75 mg·kg^-1）、中（150 mg·kg^-1）、高（300 mg·kg^-1）剂量组,连续灌胃给药3 d（2次/天）。除空白组外,其余各组小鼠于末次给药2 h后灌胃酒精（0.12 mg/10 g）进行造模;24 h后各组小鼠摘眼球取血以测定ALT、AST和TG水平;并取肝组织进行HE检查;qRT-PCR检测肝组织中IL-6、IL-1β和TNF-α mRNA表达水平;Western blot检测NLRP3、Caspase-1 p20、IL-18、Beclin1、LC3蛋白表达水平。结果 与模型组相比,PTH可明显减轻酒精诱导的小鼠急性肝损伤病理情况,降低血清中ALT、AST和TG的含量（P<0.05或P<0.01）;PTH可明显降低酒精诱导的急性肝损伤小鼠肝组织中IL-6、IL-1β和TNF-α mRNA的表达水平（P<0.05或P<0.01）;PTH可明显上调酒精诱导急性肝损伤小鼠肝组织中LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ比值以及Beclin1的蛋白表达水平（P<0.05或P<0.01）,下调NLRP3、Caspase-1 p20、IL-18蛋白表达水平（P<0.05或P<0.01）。结论 片仔癀可能通过调控自噬和NLRP3炎症小体活化而减少炎症介质释放,进而改善酒精诱导的小鼠急性肝损伤。     

纤维状α-突触核蛋白聚集体激活NLRP3炎症小体的机制研究

目的 探索纤维状α-突触核蛋白（α-synuclein）聚集体激活NLRP3炎症小体诱导神经炎症的机制。方法 构建纤维状α-synuclein聚集体,采用纤维状α-synuclein聚集体刺激BV-2小胶质细胞,检测白介素（IL）-1β、IL-18、IL-6和肿瘤坏死因子α(TNF-α)等相关炎症因子和NLRP3、caspase-1、ASC等蛋白的表达和mRNA水平评价NLRP3炎症小体激活;采用乳酸脱氢酶释放（LDH）实验检测细胞焦亡的发生。机制研究部分,检测Toll样受体（TLR）2和TLR4的激活,并分别加入TLR2和TLR4抑制剂C29和TAK-242检测对纤维状α-synuclein聚集体诱导的NLRP3炎症小体激活的影响及核转录因子-κB(NF-κB)的入核情况。结果 Westernblot和硫黄素T染色实验结果显示,纤维状α-synuclein聚集体成功制备。纤维状α-synuclein聚集体刺激BV-2小胶质细胞24 h后可激活NLRP3炎症小体,表现为IL-1β释放增加,相关蛋白NLRP3、caspase-1表达升高,N LR P3、ASC和I L-1β的m R NA...