HNE1细胞株光动力学治疗前后形态学的动态变化

目的 探讨体外光动力学治疗（ＰＤＴ）引起鼻咽癌（ＮＰＣ）细胞死亡的作用机制。方法对鼻咽癌细胞株ＨＮＥ１体外光动力学治疗前后形态学变化进行动态观察。结果 对照组ＨＮＥ１细胞培养３ｈ,６ｈ,１２ｈ,２４ｈ和４８ｈ后细胞形态与正常培养组ＨＮＥ１细包开始变形皱缩,细胞界限模糊,细胞透光度和立体感较差,治疗２４～４８ｈ后细胞发生凋亡。结论 体外光动力学治疗对ＨＮＥ１具有明显的杀伤效应并ＨＮＥ１细胞凋亡。ＰＤ     

鼻咽癌多种耐药基因的表达

目的 探讨鼻咽癌对化疗药物耐药基因的表达.方法 应用单克隆抗体多药耐药基因蛋白(P-glycoprotein,P-gp),多药耐药相关蛋白(multidrug resistance relation protein,MRP),肺耐药相关蛋白(lung-resistance related protein,LRP),拓朴异构酶Ⅱ(topoisomeeraseⅡ,Topo Ⅱ),胸腺肽合成酶(thymidylate synthase,TS)和谷胱甘肽转移酶(glutathione-S-transferase,GST-π)对56例鼻咽癌患者的肿瘤组织进行免疫组化检测.48例是鼻咽部原发灶组织,其中28例患者用顺氯氨铂(Cisplatin,DDP) 5-氟脲嘧啶(Fluorouracil,5-FU)另20例用卡铂(Carboplatin) 5-FU进行2个疗程化疗,8例是鼻咽癌治疗后颈部淋巴结复发,进行颈淋巴结廓清术.结果 各项多药耐药指标在56例患者中均有不同程度表达,它们之间差异有统计学意义,P＜0.001,TopoⅡ高表达.鼻咽部原发灶大小T1～T2和T3～T4比较,GST-π的阳性表达差异有统计学意义,P＜0.05.初诊患者有无远处转移,P-gP阳性表达比较差异有统计学意义,P＜0.01.鼻咽部原发灶和颈部复发淋巴结比较,MRP的阳性表达差异有统计学意义,P＜0.05.而患者的性别、年龄和颈部淋巴结大小(N0～N3)比较,各项多药耐药阳性表达差异均无统计学意义,P值均＞0.05.P-gp、GST-π和TS阳性组和阴性组用DDP 5-FU化疗,GST-π阳性组和阴性组用卡铂 5-FU化疗,阳性组疗效低于阴性组,P值均＜0.05,差异有统计学意义.而TopoⅡ高表达,其阳性组化疗疗效均优于阴性组.对DDP 5-FU和卡铂 5-FU的疗效进行比较,P值均＜0.05,差异有统计学意义.结论 鼻咽癌组织存在多种多药耐药基因表达,是鼻咽癌的化疗主要的障碍.进一步研究鼻咽癌多药耐药基因的表达和对化疗的反应是必要的.     

人喉癌紫杉醇耐药细胞株的建立及其生物学特性

目的:探讨紫杉醇诱导筛选的喉癌Hep-2耐药细胞的多药耐药特性,为逆转喉癌的多药耐药提供理论依据。方法:以浓度逐渐递增法诱导筛选喉癌Hep-2细胞的耐药细胞株Hep-2T,比较2种细胞的形态和倍增时间。以ATP酶检测法确定细胞的IC50和细胞的耐药倍数。流式细胞仪检测2种细胞的周期分布情况、细胞凋亡以及2种细胞内的罗丹明聚集情况。以实时定量RT-PCR法检测MDR1和MRP1基因,Western-botting法检测相应的蛋白表达情况。结果:耐药细胞株的耐药倍数是非耐药株的104倍。耐药株对多柔吡星、吉西它宾、5-Fu及顺铂的耐药倍数分别是非耐药株的46.78,1.95,2.50和1.05倍。与非耐药株比,耐药细胞G0/G1期的细胞较后者升高(P<0.05),而G2/M和S期细胞则较后者明显降低(P<0.05)。当作用于Hep-2的IC50浓度时,Hep-2细胞的凋亡细胞数较Hep-2T明显高。罗丹明染色显示,Hep-2细胞内的罗丹明较Hep-2T明显增高。Hep-2T细胞MDR1/GAPDH表达在基因和蛋白水平明显高于Hep-2细胞。MRP1/GAPDH在基因和蛋白水平的表达前者亦高于后者,但增高程度不如MDR1/GAPDH明显。结论:在寻找逆转喉癌多药耐药的方法时,应着重于MDR1/P-gp,当应用化疗药时,应考虑非P-gp作用底物的药物。并选择应用周期特异性作用的药物。     

人鼻咽癌紫杉醇耐药细胞株CNE-1/Taxol的建立及其机制初探

目的建立耐紫杉醇的人鼻咽癌细胞株,并对其生物学特性及耐药机制进行初步探讨。方法采用大剂量冲击和逐步增加剂量相结合的方法,建立耐紫杉醇鼻咽癌细胞株。检测两种细胞的形态差异、生长曲线及倍增时间;用集落形成实验检测它们对紫杉醇、顺铂和长春新碱化疗药的敏感性;使用RT-PCR比较两种细胞β-微管蛋白Ⅲ,鸟苷酸结合蛋白1的表达差异。结果成功建立了耐药指数为8.43的CNE-1/Taxol耐药细胞株,其增殖速度减慢,倍增期延长,体积变小,且对长春新碱低度耐药,耐药指数为1.33;但与亲本细胞株比较,其对顺铂的敏感性明显增加(P<0.01);β-微管蛋白Ⅲ和鸟苷酸结合蛋白1的表达在耐药细胞株中均升高,并与耐药指数呈正相关(p<0.05)。结论CNE-1/Taxol是一株对紫杉醇耐药的细胞株,是研究紫杉醇耐药机制的重要实验模型;CNE-1/Taxol逆向增加了对顺铂的敏感性;β-微管蛋白Ⅲ和鸟苷酸结合蛋白1表达增强可能是鼻咽癌细胞产生获得性耐药的主要机制之一。     

Survivin和MRP表达的相关性及与鼻咽癌耐药的关系研究

目的:探讨Survivin、多药耐药蛋白(MRP)表达相关性及与鼻咽癌耐药之间的关系。方法:本研究首先采用免疫组织化学法检测Survivin和MRP在45例鼻咽癌和24例正常鼻咽黏膜上皮组织中的表达,分析其表达与鼻咽癌临床病理特征之间的关系;其次,检测Survivin和MRP在31例鼻咽癌紫杉醇耐药患者与20例紫杉醇非耐药患者中的表达,分析它们的表达相关性及其与鼻咽癌耐药的关系;最后采用浓度递增法持续诱导建立鼻咽癌化疗耐药细胞株5-8F-PTX(+),Western blot检测Survivin和MRP在5-8F-PTX(+)和5-8F中的表达情况。结果:Survivin在鼻咽癌组织中的阳性率为71.1%(32/45),明显高于正常鼻咽黏膜组织8.33%(2/24)(P<0.05);Survivin表达与鼻咽癌的分化程度、淋巴结和远处转移以及临床分期有关,与年龄、性别无关;低分化鼻咽癌中Survivin表达阳性率为79.5%(31/39),明显高于中分化鼻咽癌的16.7%(1/6),二者比较差异有统计学意义(P<0.05);Survivin在鼻咽癌化疗耐药患者中表达阳性率为83.9%(26/31),明显高于非耐药患者45.0%(9/20),二者比较差异有统计学意义(P<0.05);MRP在鼻咽癌化疗耐药患者中表达阳性率为87.1%(27/31),明显高于非耐药患者40.0%(8/20),二者比较差异有统计学意义(P<0.05);31例鼻咽癌化疗耐药患者中Survivin和MRP的表达呈正相关;Survivin和MRP在5-8F-PTX(+)中表达水平明显高于非耐药的5-8F;5-8FPTX(+)耐药细胞株中,紫杉醇、顺铂、5-FU、长春新碱耐药的IC50值均明显高于亲本5-8F组。结论:Survivin表达与鼻咽癌的分化、转移和临床分期有关,可作为鼻咽癌发生、发展的分子标记物;Survivin和MRP高表达与鼻咽癌细胞的耐药性增加有关。     

新型重组人肿瘤坏死因子抗荷鼻咽癌裸鼠的实验研究

目的 寻找理想的鼻咽癌生物治疗及联合治疗的新方法。方法 利用国内建株的鼻咽癌细胞株（ＣＮＥ－２）制造了裸鼠鼻咽癌模型，用新型重组人肿瘤坏死因子（ＮｒｈＴＮＦ－α），通过不同的用药途径（局部、全身）和模式（单独、联合）观察治疗荷鼻咽癌裸鼠的疗效。并在光镜和透射电镜下观察ＮｒｈＴＮＦ－α作用后肿瘤组织细胞组织病理学及超微结构，探讨其作用机理。结果和结论 ①荷鼻咽癌裸鼠经ＮｒｈＴＮＦ－α作用后肿瘤组织细     

血卟啉衍生物配合放射治疗鼻咽癌患者三项免疫功能的检测

观察在放射治疗鼻咽癌时血卟啉衍生物（hematoporphyrinderivative，HPD）对患者免疫功能的影响，选择病理确诊的初诊鼻咽癌78例，分成单纯放疗组和血卟啉衍生物（HPD）＋放疗组，各39例，采用自身配对方法，分别测定各组放疗前、后免疫功能。结果为：①HPD＋放疗组放疗前后免疫功能无明显变化；②单纯放疗组放疗后较放疗前免疫功能明显下降，包括OKT3、OKT4、OKT4／OKT8和淋巴细胞转化率均具有统计学意义（P＜0．01和P＜0．05）。上述结果提示HPD配合放射治疗鼻咽癌对免疫功能具有一定的保护作用。     

新型重组人肿瘤坏死因子抗荷鼻咽癌裸鼠的实验研究

目的寻找理想的鼻咽癌生物治疗及联合治疗的新方法。方法利用国内建株的鼻咽癌细胞株（ＣＮＥ－２）制造了裸鼠鼻咽癌模型，用新型重组人肿瘤坏死因子（ＮｒｈＴＮＦ－α），通过不同的用药途径（局部、全身）和模式（单独、联合）观察治疗荷鼻咽癌裸鼠的疗效。并在光镜和透射电镜下观察ＮｒｈＴＮＦ－α作用后肿瘤组织细胞组织病理学及超微结构，探讨其作用机理。结果和结论①荷鼻咽癌裸鼠经ＮｒｈＴＮＦ－α治疗后可出现肿瘤出血、坏死，肿瘤缩小、消失、生存期延长。②ＮｒｈＴＮＦ－α局部使用的抗瘤效果优于全身用药。③ＮｒｈＴＮＦ－α与Ｃａｂ联合使用具有协同作用，增强抗瘤效果。④组织病理学及超微结构观察发现ＮｒｈＴＮＦ－α首先引起细胞质内线粒体、内质网肿胀、整个细胞空泡样变性，逐步导致核浓缩，崩解，最终导致细胞死亡。该研究为临床上鼻咽癌生物治疗及联合治疗提供实验基础。     

新福菌素对人鼻咽癌细胞株CNE-2凋亡杀伤作用的研究

目的探讨新福菌素对人鼻咽癌细胞株CNE-2的体外杀伤效应及作用机制。方法体外培养CNE-2细胞,应用MTT比色法观察新福菌素对CNE-2细胞增殖的抑制作用。倒置显微镜下观察实验组细胞的生长及结构变化,同时采用逆转录．聚合酶链反应技术（RT—PCR）检测BaxmRNA基因的表达。结果新福菌素在体外对CNE-2细胞有较强的增殖抑制作用,能诱导CNE-2细胞凋亡;同时进行BaxmRNA基因表达检测发现对照组CNE-2细胞BaxmRNA表达呈弱阳性;实验组CNE．2细胞BaxmRNA表达均呈阳性,且随着新福菌素浓度的增加而逐渐增强。结论新福菌素对CNE-2细胞有明显的杀伤效应,杀伤机制可能是诱导鼻咽癌细胞凋亡,并与凋亡相关基因BaxmRNA表达上调有关。     

鼻咽癌细胞多药耐药性的研究进展

鼻咽癌是耳鼻咽喉科发病率最高的恶性肿瘤。局部放射照射是鼻咽癌最主要的治疗手段,化学药物治疗是鼻咽癌综合治疗的重要组成部分,尤其对复发或已转移的晚期患者具有重要意义。临床发现鼻咽癌患者的化疗效果并不理想,究其原因,肿瘤细胞的多药耐药性(multidrug resistance,MDR)可能是影响疗效的重要原因。肿瘤细胞MDR是指肿瘤细胞在接触某种化学治疗药物后,产生不仅对该种化疗药物的耐药性,同时对其他结构、功能和作用方式不同的化学药物也产生不同程度的交叉耐药现象,其可分为内源性和外源性。多药耐药的形成机制非常复杂,且不同肿瘤的形…     

Maspin蛋白在鼻咽癌放射敏感CNE2细胞株中的表达分析

目的探讨放射敏感鼻咽癌CNE2细胞株在放射条件下丝氨酸蛋白酶抑制剂Maspin蛋白的反应性变化,分析鼻咽癌放射作用的分子机制。方法采用MTT比色法检测放射线对鼻咽癌CNE2细胞株生长的影响,胎盼蓝染色法检测CNE2细胞增殖,流式细胞术检测CNE2细胞放射后的凋亡及周期改变,Western blotting分析Maspin蛋白的表达。结果鼻咽癌CNE2细胞株放射后,细胞周期重新分布,出现较多的G2/M期细胞以及较少的G0/G1期细胞;增殖受到抑制、细胞凋亡明显、Maspin蛋白表达上调,且其上调与细胞凋亡率增高呈现一致性改变,也与细胞周期分布改变相关。结论鼻咽癌CNE2细胞对放射线敏感、容易被诱发凋亡;细胞周期参与了放射诱导的CNE2放射反应调节;放射提高了CNE2细胞的Maspin蛋白表达,提示该蛋白参与了CNE2细胞的放射反应;Maspin蛋白表达提高涉及CNE2细胞周期和凋亡改变,是一个值得深入研究的鼻咽癌放射敏感相关分子。     

放疗诱导鼻咽癌细胞株CNE1热休克蛋白高表达

目的鼻咽癌是一种以放射治疗为主的头颈肿瘤,但部分鼻咽癌对放疗耐受。为了解鼻咽癌放疗耐受机制,本实验拟初步探讨人高分化鼻咽癌细胞株CNE1放疗后的蛋白质改变。方法利用固相pH梯度二维凝胶电泳,建立CNE1放疗前后总蛋白质2DE图谱,利用MALDI TOF MS及数据库搜索初步分析和鉴定部分放疗前后差异蛋白质点。结果高分子量酸性蛋白质在CNE1放疗后20min高表达,其中大多为热休克蛋白质HSPs(heatshockproteins,HSPs)。结论放射能诱导CNE1的热休克蛋白高表达,它们可能与鼻咽癌放疗耐受有关。     

人鼻咽癌CNE细胞摄取99mTcN(NOEt)2与99mTc-MIBI动力学对比研究

目的：研究^99mTc-氮二{（N-乙基-N-乙氧基二硫代氨基甲酸盐[N（NOEt）2]）和^99mTc甲氧基异丁基异腈（MIBI）在人鼻咽癌CNE细胞中的摄取动力学。方法：用放射性核素示踪技术研究人鼻咽癌CNE细胞在37℃和22℃时对^99mTcN（NOEt）2和^99mTc-MIBI的摄取动力学规律。结果：37℃和22℃时CNE细胞对^99mTcN（NOEt）2的摄取差异无统计学意义,^99mTcMIBI摄取则呈温度依赖性。37℃时CNE细胞对^99mTcN（NOEt）z摄取峰值为43．15％,^99mTc-MIBI为11．08％（P〈0．01）;5min时CNE细胞摄取^99mTcN（NOEt）2为峰值的63％．^99mTc-MIBI为48％（P〈0．05）;60min时^99mTcN（NOEt）2在CNE细胞中的滞留率为63．92％,^99mTc-MIBI为53．97％（P〈0．05）。结论：^99mTcN（NOEt）2可能较^99mTc-MIBI更适用于鼻咽癌显像,具有潜在的临床应用价值。     

冬凌草甲素对人鼻咽癌细胞株CNE-2细胞增殖的抑制作用

鼻咽癌是我国头颈部最常见的恶性肿瘤之一，病理类型以低分化鳞状细胞癌多见，临床上以放疗为主，晚期患者辅以化疗。与传统的化疗药物相比，天然抗肿瘤药物日益受到人们的关注。冬凌草甲素是从冬凌草中提取出来的有效抗癌成分，其主要化学结构是一种四环二萜类化合物，有研究表明对食管癌、肝癌、结肠癌以及白血病等有一定的疗效。本研究通过体外实验探讨冬凌草甲素对人鼻咽癌细胞株CNE-2细胞生长是否具有抑制作用，以期为临床应用提供理论依据。[第一段]     

Genistein对人鼻咽癌细胞系CNE抑制增殖和促进凋亡的作用及机制探讨

目的:研究genistein对人鼻咽癌细胞系CNE抑制增殖和促进凋亡的作用,探讨其抗癌作用的机制。方法:应用MTT检测不同浓度genistein在不同时间对鼻咽癌细胞系CNE的生长抑制作用;透视电镜下观察鼻咽癌细胞演变过程、凋亡细胞及凋亡小体,应用流式细胞仪分析细胞周期及凋亡率。结果:Genistein可明显抑制CNE细胞的增殖,并且这种抑制作用呈时间及浓度依赖性,随浓度的增加时间的延长抑制作用逐渐增强,尤以200μmol/L组最明显;Genistein诱导鼻咽癌细胞的早期凋亡率随浓度的增加而增强,200μmol/L时为49.9%;FCM分析发现genistein阻断CNE细胞生长于细胞周期的G2/M期;电镜观察到用药后凋亡细胞典型的形态学特征。结论:Genistein对鼻咽癌细胞系CNE的生长有明显的呈时间及浓度依赖性的抑制作用,其阻断细胞的生长主要在细胞周期的G2/M期,并且具有明显诱导CNE细胞凋亡的作用。     

重组人内皮抑素对鼻咽癌细胞CNE2增殖及凋亡的影响

目的探讨重组人内皮抑素(rh-endostatin,rh-ES)对鼻咽癌CNE2细胞增殖、凋亡的影响。方法分别以25、50、100、200、400μg/ml的rh-ES体外处理人鼻咽癌细胞株CNE2,同时设空白对照组和细胞对照组。利用四甲基偶氮唑蓝法(MTT)检测不同浓度和时间rh-ES作用下的细胞增殖状态;流式细胞仪检测细胞周期及凋亡;透射电镜观察CNE2细胞超微结构的变化。结果①MTT检测显示rh-ES(25～400μg/ml)能抑制CNE2细胞的增殖,不同浓度的rh-ES对人鼻咽癌细胞株CNE2具有不同程度的生长抑制作用,且存在时间剂量效应,以400μg/ml rh-ES作用72 h后抑制效果最为显著,各浓度组相比差异具有统计学意义。②流式细胞仪检测结果发现与CNE2细胞对照组相比,rh-ES实验组处于细胞周期G0/G1期的细胞明显增多,细胞凋亡率增加(P<0.05)。③电镜观察,rh-ES实验组CNE2细胞出现凋亡特征,细胞和细胞器皱缩,核染色质边集碎裂,核膜消失。结论 rh-ES能显著抑制鼻咽癌细胞CNE2细胞的增殖,并具有时间-剂量依赖性,其主要机制可能为诱导细胞凋亡,调整细胞周期分布。     

田基黄对人鼻咽癌细胞CNE-2生长和凋亡的影响

目的探讨田基黄对人鼻咽癌细胞CNE-2的抑制和凋亡作用,为其临床应用提供实验依据。方法SRB法检测田基黄对CNE-2细胞生长的抑制作用,PI分析细胞周期的变化、Annexin V检测细胞凋亡的发生。结果田基黄抑制CNE-2细胞的生长,引起细胞死亡;田基黄诱导CNE-2细胞发生凋亡和坏死;田基黄作用人鼻咽癌细胞后S期细胞的比例增加,G2/M期细胞的比例减少。结论一定浓度的田基黄可明显抑制人鼻咽癌细胞CNE-2生长,并诱导其凋亡,机制可能与阻滞细胞停留在S期有关。     

yCDglyTK融合自杀基因前药系统对鼻咽癌CNE-2细胞株放射增敏作用的研究

目的研究yCDglyTK融合自杀基因前药系统对人鼻咽癌细胞株CNE2细胞的放射增敏作用。方法pcDNA3.1(-)CMVe·Egr-1yCDglyTK质粒经电穿孔法转染CNE2细胞,给予不同剂量γ射线照射及不同剂量前药,通过免疫组化、高效液相色谱、细胞存活率测定(MTT法)及克隆增殖实验,观察不同剂量辐射对自杀基因阳性CNE-2细胞中自杀基因表达及功能的影响,并观察前药干预及γ射线对CNE-2细胞生长的影响。结果电离辐射可诱导增强自杀基因阳性细胞株中yCDglyTK基因的表达;电离辐射与前药的联合大大增强了对自杀基因阳性CNE-2细胞的杀伤作用,其杀伤作用大于单独自杀基因前药系统和单独放射。结论yCDglyTK融合自杀基因前药系统对CNE-2细胞有放射增敏作用,其与放射联合使用对CNE-2细胞有明显协同杀伤效应。     

莪术醇对人鼻咽癌细胞CNE2增殖、凋亡及周期的影响

目的 探讨莪术醇( curcumoI)在体外对人鼻咽癌CNE2细胞增殖、凋亡及周期的影响,为其临床治疗鼻咽癌提供理论依据.方法 不同浓度莪术醇作用于人鼻咽癌CNE2细胞后,用MTT法和流式细胞仪检测不同时间点鼻咽癌细胞CNE2的增殖、凋亡及周期分布.结果 莪术醇在体外明显抑制鼻咽癌CNE2细胞的增殖,且呈浓度和时间依赖...     

抗癌活性肽对鼻咽癌细胞周期的影响

目的探讨抗癌活性肽(anti-cancer bioactive peptide,ACBP)肝肽和科脾肽对人鼻咽癌细胞株CNE体外增殖抑制作用及细胞周期的影响。方法将人鼻咽癌CNE细胞与不同浓度的ACBP进行体外培养,采用四甲基偶氮唑蓝法测定不同浓度的ACBP对CNE细胞的生长抑制率;光镜下观察形态学变化;流式细胞仪分析细胞周期与凋亡率。结果质量浓度5．0-20．0μg／ml的ACBP均能抑制CNE细胞的生长,且随浓度及作用时间延长抑制率上升,20．0μg／ml ACBP作用72 h后,肝肽组的抑制率为63．0％,科脾肽组抑制率为46．7％。光镜下可观察到ACBP作用后的细胞凋亡现象。流式细胞仪结果显示:5．0μg/ml肝肽和科脾肽作用CNE细胞24 h的早期凋亡率较高,分别为(11．8±0．3)％和(8．1±0．2)％,分别与对照组比较,差异均有统计学意义(t值分别为42．535和47．300, P值均为0．000);20．0μg／ml的肝肽和科脾肽作用CNE细胞,随作用时间延长S期细胞构成比有明显上升。结论肝肽和科脾肽对CNE细胞均有抑制增殖的作用,其抗鼻咽癌细胞增殖作用机制可能为诱导肿瘤细胞凋亡,调控肿瘤细胞周期。