温阳补肾药对抗骨髓间充质干细胞凋亡的实验研究

目的:探讨温阳补肾药对骨髓间充质干细胞凋亡的影响及作用机制。方法:建立白细胞介素1β诱导体外培养的SD大鼠骨髓间充质干细胞凋亡体系,分别向其中加入巴戟天含药血清(A组)、鹿角胶含药血清(B组)、淫羊藿含药血清(C组)、骨碎补含药血清(D组)和空白血清(F组),E组不加入血清。各组细胞培养48 h后,采用RT-PCR法检测bcl-2和Bax的mRNA表达量,采用电泳法检测骨髓间充质干细胞凋亡体系的建立,采用Western Blot法检测bcl-2和Bax的蛋白表达量。结果:①骨髓间充质干细胞表面标记结果。流式细胞仪检测结果显示CD34、CD45表达阴性,CD90表达阳性。②bcl-2和Bax的mRNA表达量。各组bcl-2mRNA表达量比较,差异有统计学意义(22.25±1.15,15.18±1.51,15.36±0.72,16.12±0.95,16.79±1.39,16.02±1.14;F=182.000,P=0.000)。A组bcl-2mRNA表达量高于B组、C组、D组、E组和F组(P=0.000,P=0.000,P=0.000,P=0.000,P=0.000);E组高于B组(P=0.030)。各组BaxmRNA表达量比较,差异有统计学意义(19.17±0.67,15.37±1.02,18.18±0.23,17.37±0.72,28.36±0.93,23.52±1.26;F=28.422,P=0.000)。A组BaxmRNA表达量高于B组和D组(P=0.001,P=0.018),低于E组(P=0.001);B组低于C组、E组和F组(P=0.013,P=0.000,P=0.000),B组与D组比较,差异无统计学意义(P=0.052);D组低于F组(P=0.000);E组高于C组和F组(P=0.000,P=0.000)。③bcl-2DNA和BaxDNA电泳结果。电泳图谱显示,E组条带与A组、B组、C组、D组有明显差异。④bcl-2和Bax的蛋白表达量。各组bcl-2蛋白表达量比较,差异有统计学意义(11 526.18±697.38,20 096.88±953.73,16 784.88±504.36,14 856.65±546.90,8 549.29±313.63,9 004.79±399.12;F=341.740,P=0.000)。A组bcl-2蛋白表达量低于B组、C组和D组(P=0.000,P=0.000,P=0.000),高于E组和F组(P=0.000,P=0.000);B组高于C组、D组、E组和F组(P=0.000,P=0.000,P=0.000,P=0.000);C组高于D组、E组和F组(P=0.000,P=0.000,P=0.000);D组高于E组和F组(P=0.000,P=0.000)。各组Bax蛋白表达量比较,差异有统计学意义(12 435.09±1002.35,4 590.96±71.45,11 721.90±855.08,10 393.54±662.79,13 874.83±541.16,12 774.15±674.40;F=136.305,P=0.000)。A组Bax蛋白表达量高于B组和D组(P=0.000,P=0.039);B组低于C组、D组、E组和F组(P=0.000,P=0.000,P=0.000,P=0.000);C组低于E组(P=0.010);D组低于E组和F组(P=0.000,P=0.002)。结论:温阳补肾药含药血清有对抗白细胞介素1β诱导的骨髓间充质干细胞凋亡的作用,其机制主要是上调抑制凋亡基因Bcl-2的表达,下调促进凋亡基因Bax的表达,抑制其蛋白酶活性从而降低细胞凋亡率。     

淫羊藿防治激素性股骨头坏死的作用机制研究

目的：探讨淫羊藿防治激素性股骨头坏死的作用机制.方法：将50只家兔随机分为5组,每组10只.B、C、D、E组家兔采用臀肌注射醋酸泼尼松龙的方法进行激素性股骨头坏死造模,A组家兔臀肌注射生理盐水.造模结束后,C、D、E组根据体质量分别按1.2 g·kg-1、0.6 g·kg-1和0.3 g·kg-1以淫羊藿提取液灌胃,每天1次,连续灌胃10周;A组和B组以10 mL生理盐水灌胃.分别于药物干预开始前（0周）及药物干预4周、6周、8周、10周后测定各组家兔血液中胆固醇和甘油三酯含量,同时在药物干预开始前（0周）及药物干预6周、10周后测定家兔股骨近端骨密度,并于药物干预10周后处死家兔,取双侧股骨头切片进行HE染色,观察骨小梁和骨陷窝的变化.结果：①血脂.药物干预开始后不同时间,家兔血胆固醇含量的差异总体上无统计学意义,即不存在时间效应（F=1.136,P=0.314）;各组家兔血胆固醇含量的组间差异总体上有统计学意义,即存在分组效应（F=12.874,P=0.000）,除0周和4周外,其余各时点B组均高于A、C、D、E组;时间因素和分组因素之间存在交互效应（F=4.910,P=0.001）.药物干预开始后不同时间,家兔血甘油三酯含量的差异有统计学意义,即存在时间效应（F=144.191,P=0.000）;各组家兔血甘油三酯含量的组间差异总体上有统计学意义,即存在分组效应（F=12.358,P=0.000）,B组和E组各时点血甘油三酯含量比较,差异均无统计学意义;除0周外,其余各时点B组血甘油三酯含量均高于A、C、D组;时间因素和分组因素之间存在交互效应（F=8.798,P=0.000）.②骨密度.药物干预开始后不同时间,家兔股骨近端骨密度的差异有统计学意义,即存在时间效应（F=289.909,P=0.000）;除A组外,其余4组骨密度均呈下降趋势,B组下降趋势最明显;各组家兔骨密度的组间差异总体上有统计学意义,即存在分组效应（F=72.539,P=0.000）,除0周外,其余各时点B组骨密度均低于A、C、D、E组;时间因素和分组因素之间存在交互效应（F=40.182,P=0.000）.③病理学检查结果.药物干预10周后,与其余4组相比,B组骨小梁广泛变细、断裂;5组家兔骨小梁面积分数和空骨陷窝率比较,组间差异均有统计学意义（F=62.032,P=0.000;F=20.515,P=0.000）;B组骨小梁面积分数小于A、C、D、E组（P=0.000,P=0.000,P=0.000,P=0.000）,空骨陷窝率大于A、C、D、E组（P=0.000,P=0.000,P=0.000,P=0.000）.结论：淫羊藿能够降低股骨头坏死家兔血液中胆固醇和甘油三酯的含量、延缓骨密度降低、降低空骨陷窝率、提高骨小梁面积分数,从而具有防治激素性股骨头坏死的作用.     

黄芪丹参超微颗粒凝胶对大鼠创面愈合影响的实验研究

目的:观察黄芪丹参超微颗粒凝胶对大鼠创面愈合的影响,并探讨其可能的作用机制。方法:将90只SD大鼠随机分成模型组、敷贴组和凝胶组,每组30只。在所有大鼠背部制成直径约1.8 cm的圆形全层皮肤切除开放创面。纱布止血,碘伏消毒后,模型组创面以无菌纱布包扎、敷贴组创面以爱力敷湿性敷贴包扎、凝胶组创面涂抹0.5 g黄芪丹参超微颗粒凝胶后用无菌纱布包扎,隔天换药1次。分别于造模后第1天、第3天、第7天、第11天,从各组随机选取6只大鼠,计算创面愈合率,并切取创面全层皮肤组织制成切片,计算创面修复组织中新生毛细血管数量和血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)含量。造模后第15天,计算剩余6只大鼠创面愈合率,待创面完全愈合后处死。结果:①创面愈合率。造模后第1天,各组大鼠创面均无明显变化,未计算创面愈合率。造模后第3天、第7天、第11天、第15天,3组大鼠的创面愈合率总体比较,差异均有统计学意义[造模后第3天:(11.53±0.36)%,(12.41±0.27)%,(13.37±0.60)%,F=27.127,P=0.000;造模后第7天:(38.21±0.46)%,(38.72±0.72)%,(38.81±0.24)%,F=22.971,P=0.000;造模后第11天:(87.23±0.12)%,(87.40±0.31)%,(88.55±0.50)%,F=25.437,P=0.000;造模后第15天:(93.38±0.26)%,(93.45±0.41)%,(94.27±0.43)%,F=10.526,P=0.001]。造模后第3天、第7天、第11天、第15天,凝胶组的创面愈合率均高于模型组(P=0.000,P=0.000,P=0.000,P=0.000)和敷贴组(P=0.000,P=0.000,P=0.000,P=0.000)。造模后第3天,敷贴组的创面愈合率高于模型组(P=0.003);造模后第7天、第11天、第15天,模型组和敷贴组的创面愈合率比较,差异均无统计学意义(P=0.059,P=0.246,P=0.690)。实验结束时,3组大鼠创面均愈合,均未出现创面感染及死亡。②创面修复组织中新生毛细血管数量。造模后第1天、第3天、第7天、第11天,3组大鼠创面修复组织中新生毛细血管数量总体比较,差异均有统计学意义[造模后第1天:(15.50±0.55)个·mm~(-2),(16.17±0.75)个·mm~(-2),(17.67±0.82)个·mm~(-2),F=14.457,P=0.000;造模后第3天:(23.33±1.03)个·mm~(-2),(23.83±0.98)个·mm~(-2),(24.56±1.69)个·mm~(-2),F=19.085,P=0.000;造模后第7天:(23.17±1.17)个·mm~(-2),(24.17±0.75)个·mm~(-2),(26.50±1.38)个·mm~(-2),F=13.739,P=0.000;造模后第11天:(16.33±0.82)个·mm~(-2),(16.33±1.03)个·mm~(-2),(18.50±0.55)个·mm~(-2),F=13.852,P=0.000]。造模后第1天、第3天、第7天、第11天,凝胶组创面修复组织中新生毛细血管数量均高于模型组(P=0.000,P=0.000,P=0.000,P=0.000)和敷贴组(P=0.000,P=0.000,P=0.000,P=0.000);模型组和敷贴组创面修复组织中新生毛细血管数量比较,差异均无统计学意义(P=0.175,P=0.363,P=0.229,P=1.000)。③创面修复组织中VEGF含量。造模后第1天、第3天、第7天、第11天,3组大鼠创面修复组织中VEGF含量总体比较,差异均有统计学意义(造模后第1天:0.332±0.192,0.340±0.236,0.409±0.267,F=19.414,P=0.000;造模后第3天:0.456±0.250,0.479±0.459,0.560±0.232,F=16.559,P=0.000;造模后第7天:0.359±0.244,0.387±0.279,0.459±0.476,F=13.280,P=0.000;造模后第11天:0.229±0.182,0.256±0.334,0.326±0.213,F=23.516,P=0.000)。造模后第1天、第3天、第7天、第11天,凝胶组创面修复组织中VEGF含量均高于模型组(P=0.000,P=0.000,P=0.000,P=0.000)和敷贴组(P=0.000,P=0.000,P=0.000,P=0.000);造模后第1天、第3天,模型组和敷贴组创面修复组织中VEGF含量比较,差异均无统计学意义(P=0.378,P=0.338);造模后第7天、第11天,敷贴组创面修复组织中VEGF含量均高于模型组(P=0.045,P=0.016)。结论:黄芪丹参超微颗粒凝胶能促进大鼠创面愈合,其作用可能与其上调创面修复组织中VEGF表达,从而促进毛细血管增殖有关。     

人工关节假体磨损颗粒对巨噬细胞游走抑制因子表达的影响

目的:观察人工关节假体磨损颗粒对巨噬细胞游走抑制因子表达的影响.方法:配制钛颗粒悬液,并培养小鼠巨噬细胞.将培养的第3代小鼠巨噬细胞分别进行以下实验:①将细胞分为4组,A组不作任何处理,B组加入浓度为0.01％的钛颗粒;C组加入浓度为0.05％的钛颗粒,D组加入浓度为0.1％的钛颗粒培养24 h后分别用酶联免疫吸附剂测定法和聚合酶链式反应法检测各组的巨噬细胞游走抑制因子蛋白和巨噬细胞游走抑制因子mRNA的含量.②将细胞分2组,对照组不作任何处理,观察组加入浓度为0.1％的钛颗粒.分别在实验开始后0h、6h、12h、24 h和36 h对2组的不同培养孔的细胞用酶联免疫吸附剂测定法和聚合酶链式反应法检测各组的巨噬细胞游走抑制因子蛋白和巨噬细胞游走抑制因子mRNA的含量.③将细胞分为4组,Ⅰ组不作任何处理,Ⅱ组加入浓度为0.1％的钛颗粒,Ⅲ组加入浓度为1 00 μmol· mL-1的吡咯烷二硫代氨基甲酸盐,Ⅳ组先加入浓度为100 μmol·mL-1的吡咯烷二硫代氨基甲酸盐,1h后再加入浓度为0.1％的钛颗粒.培养24 h后用酶联免疫吸附剂测定法检测各组的巨噬细胞游走抑制因子蛋白含量.④将细胞分为2组,a组不作任何处理,b组加入浓度为0.1％的钛颗粒.分别在实验开始后0h、0.5h、1h、3h和6h对2组的不同培养孔的细胞用酶联免疫吸附剂测定法测定磷酸化p65的含量.结果:①钛颗粒浓度对巨噬细胞游走抑制因子表达的影响:各组小鼠巨噬细胞巨噬细胞游走抑制因子蛋白和巨噬细胞游走抑制因子mRNA含量的组间比较,差异均有统计学意义(F=207.158,P=0.000;F=64.955,P=0.000).A组巨噬细胞游走抑制因子蛋白和巨噬细胞游走抑制因子mRNA的含量[(3.93±0.11)ng· mL-1,(0.03±0.01)]与B组[(4.21±0.27)ng· mL-1,(0.10±0.01)]比较,差异无统计学意义(P=0.167;P =0.223);A组小于C组[(6.56 ±0.27)ng·mL-1,(0.25±0.09)],差异有统计学意义(P=0.000;P=0.004);A组小于D组[(7.82 ±0.21)ng·mL-1,(0.70 ±0.09)],差异有统计学意义(P =0.000;P=0.000);B组小于C组(P =0.000;P=0.025)和D组(P=0.000;P=0.000);C组小于D组(P=0.000;P =0.000).②钛颗粒刺激时间对巨噬细胞游走抑制因子的影响:对照组巨噬细胞游走抑制因子蛋白和巨噬细胞游走抑制因子mRNA含量各时点间比较,差异无统计学意义(F=0.310,P=0.865;F=0.065,P=0.991).观察组巨噬细胞游走抑制因子蛋白和巨噬细胞游走抑制因子mRNA含量各时点间比较,差异有统计学意义(F=32.857,P=0.000;F=15.621,P=0.000),各时点间两两比较:6h时的巨噬细胞游走抑制因子蛋白和巨噬细胞游走抑制因子mRNA表达量[(4.14±0.24)ng· mL-1,(0.08±0.04)]与0 h[(3.60±0.40)ng,mL-1,(0.03±0.01)]比较,差异无统计学意义(P =0.133;P =0.621);12 h的表达量[(5.61±0.47)ng· mL-1,(0.36±0.21)]大于0h,差异有统计学意义(P =0.000;P=0.004);24 h的表达量[(7.15 ±0.10)ng· mL-1,(0.71±0.12)]大于12 h,差异有统计学意义(P=0.000;P =0.003);36 h的表达量[(5.22±0.85)ng·mL-1,(0.31 ±0.18)]小于24 h,差异有统计学意义(P =0.000;P =0.004),但高于0h的表达量(P =0.000;P=0.003).③钛颗粒和吡咯烷二硫代氨基甲酸盐对巨噬细胞表达巨噬细胞游走抑制因子蛋白的影响:实验结束后4组小鼠巨噬细胞的巨噬细胞游走抑制因子蛋白量分别为,Ⅰ组(3.77 ±0.42)ng·mL-1,Ⅱ组(7.59±0.28)ng· mL-1,Ⅲ组(4.23 ±0.42)ng·mL-1,Ⅳ组(6.48±0.5)ng· mL-1 析因方差分析结果提示,单独使用0.1％钛颗粒能促进巨噬细胞表达巨噬细胞游走抑制因子蛋白(F=153.363,P=0.000);单独使用100 μmol·mL-1的吡咯烷二硫代氨基甲酸盐对巨噬细胞表达巨噬细胞游走抑制因子蛋白无影响(F=1.762,P=0.221);100 μmol·mL-1的吡咯烷二硫代氨基甲酸盐对0.1％钛颗粒促进巨噬细胞表达巨噬细胞游走抑制因子蛋白具有抑制效应(F=10.325,P=0.012).④钛颗粒浓度对巨噬细胞NF-κB信号通路的影响:a组各时点磷酸化p65含量比较,差异无统计学意义(F=0.248,P=0.904).b组各时点磷酸化p65含量比较,差异有统计学意义(F=30.217,P=0.000),各时点间两两比较:0.5 h磷酸化p65含量[(17.68±0.55)pg·mg-1]高于0 h[(10.38±3.18)pg·mg-1],差异有统计学意义(P =0.005);1 h磷酸化p65含量[(23.31 ±2.05)pg· mg-1]高于0.5h,差异有统计学意义(P =0.020);3 h磷酸化p65含量[(31.80±1.84)pg·mg-1]高于1 h,差异有统计学意义(P =0.002);6 h磷酸化p65含量[(18.42±3.61)pg·mg-1]低于3 h(P =0.000),但高于0 h(P=0.003) 结论:人工关节假体磨损颗粒可通过NF-κB信号通路上调巨噬细胞游走抑制因子的表达,促进假体周围炎症反应,导致假体周围骨吸收、溶解,导致假体无菌性松动.     

二氯乙酸钠对人骨肉瘤MG63细胞增殖、凋亡和迁移的影响

目的:观察二氯乙酸钠(sodium dichloroacetate,DCA-Na)对人骨肉瘤MG63细胞增殖、凋亡和迁移的影响。方法:将对数生长期的MG63细胞随机分为对照组和低、中、高浓度DCA-Na组,对照组不加DCA-Na,低、中、高DCA-Na组加入DCA-Na(终浓度分别为50μg·m L-1、100μg·m L-1、200μg·m L-1),并设1个只加等量培养基不加细胞和DCA-Na的空白组。分别在干预24 h、48 h、72 h后,采用Cell Counting Kit-8细胞活性检测试剂盒分光光度法检测MG63细胞增殖情况,测定光密度(optical density,OD),计算低、中、高DCA-Na组细胞增殖抑制率,细胞增殖抑制率=[1-(DCA-Na组OD值-空白组OD值)/(对照组OD值-空白组OD值)]×100%;分别采用Caspase-3活性检测试剂盒分光光度法和Annexin V-FITC细胞凋亡检测试剂盒流式细胞法检测MG63细胞Caspase-3酶活性情况和细胞凋亡情况;并在干预48 h后采用Transwell实验检测MG63细胞迁移情况。结果:1细胞增殖检测结果。干预后,低、中、高DCA-Na组MG63细胞增殖抑制明显,且随干预时间的延长,3组细胞增殖抑制率均呈上升趋势。各时间点间MG63细胞增殖抑制率差异有统计学意义(F=847.080,P=0.000),存在时间效应;干预24 h、48 h、72 h后,低、中、高DCA-Na组MG63细胞增殖抑制率的组间差异均有统计学意义,且低DCA-Na组中DCA-Na组高DCA-Na组[(10.802±3.000)%,(18.792±2.261)%,(27.080±3.133)%,F=2.795,P=0.000;(13.098±1.299)%,(25.215±2.676)%,(44.382±2.397)%,F=4.362,P=0.000;(14.728±1.177)%,(35.297±4.757)%,(64.227±4.549)%,F=5.896,P=0.000];3组间MG63细胞增殖抑制率总体比较,差异有统计学意义,存在分组效应(F=296.412,P=0.000);时间因素与分组因素之间存在交互效应(F=75.678,P=0.000)。2Caspase-3酶活性检测结果。对照组MG63细胞Caspase-3酶活性无明显变化,干预后低、中、高DCA-Na组MG63细胞Caspase-3酶活性均呈上升趋势。各时间点间MG63细胞Caspase-3酶活性的差异有统计学意义(F=1 480.792,P=0.000),存在时间效应;干预24 h、48 h、72 h后,4组间MG63细胞Caspase-3酶活性的差异均有统计学意义,且对照组低DCA-Na组中DCA-Na组高DCA-Na组(0.027±0.003,0.143±0.005,0.153±0.008,0.161±0.003,F=2.320,P=0.000;0.035±0.003,0.174±0.004,0.184±0.007,0.253±0.001,F=1.014,P=0.000;0.031±0.004,0.246±0.006,0.275±0.003,0.371±0.004,F=1.000,P=0.000);4组间MG63细胞Caspase-3酶活性总体比较,差异有统计学意义,存在分组效应(F=624.975,P=0.000);时间因素与分组因素之间存在交互效应(F=94.579,P=0.000)。3流式细胞法细胞凋亡检测结果。对照组MG63细胞凋亡率无明显变化,干预后低、中、高浓度DCA-Na组MG63细胞凋亡率均呈上升趋势。各时间点间MG63细胞凋亡率的差异有统计学意义(F=359.645,P=0.000),存在时间效应;干预24 h、48 h、72 h后,各组间MG63细胞凋亡率的差异均有统计学意义,且对照组低DCA-Na组中DCA-Na组高DCA-Na组[(2.554±0.427)%,(10.708±2.012)%,(20.857±2.531)%,(27.312±2.140)%,F=6.733,P=0.000;(1.748±0.202)%,(18.604±2.721)%,(29.471±1.605)%,(36.873±2.734)%,F=9.292,P=0.000;(1.944±0.112)%,(24.071±3.921)%,(30.050±3.921)%,(38.211±1.721)%,F=8.237,P=0.000];4组间MG63细胞凋亡率总体比较,差异有统计学意义,存在分组效应(F=46.627,P=0.000);时间因素与分组因素之间存在交互效应(F=7.012,P=0.000)。4细胞迁移检测结果。干预48 h后,4组迁移细胞数[显微镜每个视野下(×200)]的组间差异有统计学意义[(84.45±10.45)个,(74.56±9.45)个,(65.41±5.21)个,(40.21±4.52)个,F=148.243,P=0.000)];低、中、高DCA-Na组迁移细胞数均少于对照组(P=0.017,P=0.001,P=0.000),且低DCA-Na组中DCA-Na组高DCA-Na组(P=0.012,P=0.001,P=0.000)。结论:DCA-Na可抑制人骨肉瘤MG63细胞的增殖,增强MG63细胞Caspase-3酶活性,诱导和促进MG63细胞凋亡,抑制MG63细胞的迁移;且浓度越高、干预时间越长,其影响越明显。     

六味地黄丸对兔椎间盘退变模型椎间盘组织中Ⅰ、Ⅱ型胶原表达的影响

目的:观察六味地黄丸对兔椎间盘退变模型椎间盘组织中Ⅰ、Ⅱ型胶原表达的影响。方法:将80只新西兰兔随机分为空白组、假手术组、模型组和六味地黄组,每组20只。模型组、六味地黄组手术暴露L4~5和L5~6椎间隙,随机选择1个椎间盘注射肿瘤坏死因子α进行椎间盘退变造模,并以咬骨钳咬除该椎间盘上位椎体横突进行标记;假手术组经相同手术入路暴露L4~5和L5~6椎间隙,不做任何处理后缝合;空白组不进行任何手术干预。造模术后3 d开始,六味地黄组按26 mg·kg-1以六味地黄胶囊混悬液灌胃,其余3组以等量生理盐水灌胃,每天1次,共8周。分别于药物干预开始后2、4、6、8周,从各组随机选取5只兔子处死,模型组和六味地黄组手术取出造模椎间盘,空白组和假手术组随机选择L4~5或L5~6椎间盘取出。分别采用聚合酶链式反应法和Western Blot法测定椎间盘组织中Ⅰ、Ⅱ型胶原的mRNA和蛋白表达水平。结果:药物干预2、4、6、8周后,4组兔子椎间盘组织Ⅰ型胶原mRNA表达水平比较,组间差异均有统计学意义[(0.064 8±0.009 8),(0.068 6±0.012 7),(0.192 0±0.040 6),(0.124 6±0.012 0),F=49.752,P=0.000;(0.066 0±0.010 0),(0.077 1±0.011 8),(0.252 4±0.039 9),(0.164 1±0.018 1),F=79.537,P=0.000;(0.071 2±0.011 2),(0.089 1±0.008 1),(0.326 3±0.028 5),(0.176 3±0.015 0),F=236.726,P=0.000;(0.094 1±0.012 0),(0.155 0±0.003 8),(0.451 4±0.039 6),(0.205 8±0.018 1),F=201.055,P=0.000];模型组Ⅰ型胶原mRNA表达水平高于空白组、假手术组和六味地黄组(P=0.000,P=0.015,P=0.002,P=0.000;P=0.013,P=0.002,P=0.000,P=0.015;P=0.002,P=0.012,P=0.000,P=0.000)。空白组和假手术组的Ⅰ型胶原mRNA表达水平各时间点间比较,差异均无统计学意义(F=50.563,P=0.132;F=80.352,P=0.634);模型组和六味地黄组的Ⅰ型胶原mRNA表达水平各时间点间比较,差异均有统计学意义(F=193.635,P=0.000;F=284.736,P=0.000),Ⅰ型胶原mRNA表达水平均逐渐增高(P=0.004,P=0.002,P=0.000;P=0.000,P=0.003,P=0.001)。药物干预2、4、6、8周后,4组兔子椎间盘组织Ⅱ型胶原mRNA表达水平比较,组间差异均有统计学意义[(0.042 7±0.008 0),(0.041 2±0.005 8),(0.011 6±0.002 1),(0.031 7±0.005 6),F=42.696,P=0.000;(0.038 8±0.004 3),(0.037 3±0.004 3),(0.011 5±0.001 8),(0.031 1±0.003 5),F=108.110,P=0.000;(0.030 3±0.005 7),(0.025 9±0.008 3),(0.007 9±0.002 7),(0.017 2±0.002 1),F=52.436,P=0.000;(0.029 3±0.006 9),(0.023 7±0.004 6),(0.005 3±0.001 0),(0.014 8±0.001 8),F=51.375,P=0.000];模型组Ⅱ型胶原mRNA表达水平低于空白组、假手术组和六味地黄组(P=0.002,P=0.001,P=0.000,P=0.001;P=0.001,P=0.000,P=0.000,P=0.001;P=0.001,P=0.002,P=0.013,P=0.000)。空白组和假手术组的Ⅱ型胶原mRNA表达水平各时间点间比较,差异均无统计学意义(F=70.463,P=0.122;F=90.362,P=0.089);模型组和六味地黄组的Ⅱ型胶原mRNA表达水平各时间点间比较,差异均有统计学意义(F=110.364,P=0.001;F=86.362,P=0.004),模型组和六味地黄组的Ⅱ型胶原mRNA表达水平均逐渐降低(P=0.002,P=0.005,P=0.003;P=0.000,P=0.001,P=0.000)。药物干预2、4、6、8周后,4组兔子椎间盘组织Ⅰ型胶原蛋白表达水平比较,组间差异均有统计学意义[(0.575 9±0.135 6),(0.599 5±0.037 4),(0.620 0±0.072 0),(0.609 6±0.032 1),F=9.288,P=0.001;(0.593 9±0.108 0),(0.647 1±0.044 8),(0.807 0±0.061 6),(0.659 9±0.105 5),F=28.883,P=0.000;(0.614 0±0.224 6),(0.685 6±0.066 5),(1.129 1±0.097 4),(0.700 1±0.086 5),F=34.957,P=0.000;(0.614 8±0.139 3),(0.742 3±0.165 3),(1.322 4±0.351 7),(0.806 0±0.094 3),F=3.296,P=0.048];模型组Ⅰ型胶原蛋白表达水平高于空白组、假手术组和六味地黄组(P=0.000,P=0.015,P=0.002,P=0.000;P=0.013,P=0.002,P=0.000,P=0.015;P=0.002,P=0.012,P=0.000,P=0.000)。空白组和假手术组的Ⅰ型胶原蛋白表达水平各时间点间比较,差异均无统计学意义(F=37.485,P=0.365;F=10.376,P=0.583);模型组和六味地黄组的Ⅰ型胶原蛋白表达水平各时间点间比较,差异均有统计学意义(F=70.362,P=0.000;F=6.375,P=0.001),模型组和六味地黄组的Ⅰ型胶原蛋白表达水平均逐渐增高(P=0.005,P=0.002,P=0.000;P=0.004,P=0.001,P=0.000)。药物干预2、4、6、8周后,4组兔子椎间盘组织Ⅱ型胶原蛋白表达水平比较,组间差异均有统计学意义[(0.605 8±0.066 5),(0.550 0±0.117 9),(0.278 0±0.053 2),(0.498 6±0.149 1),F=10.224,P=0.001;(0.553 7±0.126 5),(0.523 4±0.078 4),(0.258 2±0.037 8),(0.479 7±0.090 8),F=11.627,P=0.000;(0.546 8±0.120 8),(0.494 8±0.139 8),(0.219 0±0.099 2),(0.440 5±0.052 7),F=13.543,P=0.003;(0.494 8±0.042 5),(0.433 7±0.061 9),(0.131 9±0.012 8),(0.392 9±0.107 0),F=13.979,P=0.000];模型组Ⅱ型胶原蛋白表达水平低于空白组、假手术组和六味地黄组(P=0.002,P=0.001,P=0.000,P=0.001;P=0.001,P=0.000,P=0.000,P=0.001;P=0.001,P=0.002,P=0.013,P=0.000)。空白组和假手术组的Ⅱ型胶原蛋白表达水平各时间点间比较,差异均无统计学意义(F=17.364,P=0.092;F=15.573,P=0.175);模型组和六味地黄组的Ⅱ型胶原蛋白表达水平各时间点间比较,差异均有统计学意义(F=17.753,P=0.001;F=13.674,P=0.000),模型组和六味地黄组的Ⅱ型胶原蛋白表达水平均逐渐降低(P=0.002,P=0.004,P=0.001;P=0.000,P=0.001,P=0.000)。结论:六味地黄丸能适度下调兔椎间盘退变模型椎间盘组织中Ⅰ型胶原的表达、上调Ⅱ型胶原的表达,可在一定程度上延缓椎间盘退变进程。     

骨碎补总黄酮对纳米羟基磷灰石-胶原复合材料与成骨细胞-血管内皮细胞共培养体系中血管内皮细胞增殖的影响

目的:探讨骨碎补总黄酮(osteopractic total flavone,OTF)对纳米羟基磷灰石-胶原(nano-hydroxyapatite collagen,nHAC)复合材料与成骨细胞-血管内皮细胞共培养体系中血管内皮细胞增殖的影响。方法:分别以浓度为500μg·mL~(-1)、250μg·mL~(-1)、100μg·mL~(-1)、50μg·mL~(-1)及0μg·mL~(-1)的OTF溶液干预生长在nHAC复合材料上的hFOB1.19人成骨细胞,干预24 h后收集5种上清液。再分别以5种上清液和人脐静脉血管内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells,HUVEC)培养基混合培养HUVEC,培养24 h和48 h后进行划痕实验,计算细胞迁移率,确定OTF溶液最佳干预浓度和时间。在4个培养皿中铺满nHAC复合材料,加入DMEM/F12。A培养皿中不添加其他材料;B、D培养皿中接种hFOB1.19人成骨细胞,预培养24 h使细胞贴壁;C、D培养皿中加入OTF溶液,根据上一步划痕实验确定的最佳干预浓度和时间进行干预。干预结束后收集各培养皿中的上清液进行后续实验。接种HUVEC于HUVEC培养基上,分为空白组和A、B、C、D共5组;空白组不添加其他材料,A、B、C、D组分别加入A、B、C、D培养皿上清液;以CCK-8法测定细胞增殖率,HE染色后观察HUVEC形态,以ELISA法检测血管内皮细胞生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)和成纤维细胞生长因子-2(fibroblast growth factor-2,FGF-2)含量。结果:①OTF溶液最佳干预浓度与时间检测结果。5种浓度OTF溶液干预后,0～24 h细胞迁移率的差异有统计学意义[(16.46±4.01)%,(21.71±1.30)%,(24.94±3.47)%,(22.08±2.46)%,(21.34±2.28)%,F=4.564,P=0.013],其中100μg·mL~(-1)OTF溶液干预后的细胞迁移率高于其余4组(P=0.001,P=0.020,P=0.014,P=0.029);24～48 h细胞迁移率的差异无统计学意义[(6.06±1.22)%,(5.37±1.85)%,(5.58±1.88)%,(6.14±1.52)%,(4.99±1.25)%,F=0.374,P=0.823]。提示OTF溶液最佳干预浓度为100μg·mL~(-1),最佳干预时间为24 h。②HUVEC细胞活性检测结果。时间因素与分组因素存在交互效应(F=14.039,P=0.000);5组HUVEC细胞增殖率总体比较,差异有统计学意义,即存在分组效应(F=83.285,P=0.000);干预开始后不同时点之间HUVEC细胞增殖率的差异有统计学意义,即存在时间效应(F=1 968.467,P=0.000);5组HUVEC细胞增殖率随时间变化均呈升高趋势,各组的变化趋势不完全相同(1.05±0.06,1.81±0.09,2.53±0.05,6.10±0.17,11.29±1.21,F=527.347,P=0.000;0.99±0.11,2.37±0.40,2.92±0.19,7.35±0.19,14.41±1.35,F=913.030,P=0.000;0.98±0.20,3.50±0.18,4.35±0.16,8.53±0.99,15.42±0.73,F=1 637.304,P=0.000;1.02±0.10,2.10±0.13,2.59±0.15,4.70±0.25,11.41±1.21,F=494.876,P=0.000;1.01±0.06,2.81±0.37,3.31±0.08,5.95±0.24,12.74±2.03,F=878.982,P=0.000);干预开始后0 d时,各组细胞增殖率比较,差异无统计学意义;干预开始后1 d、2 d时,B组HUVEC细胞增殖率最高、D组次之,其余3组增殖率较为接近;干预开始后3 d、4 d时,B组HUVEC细胞增殖率最高、A组次之,其余3组增殖率较为接近。③HUVEC形态观察结果。细胞形态观察结果显示,干预开始后0 d、1 d、2 d、3 d、4 d时各组HUVEC的形态均无明显差异。④VEGF和FGF-2含量检测。A、B、C、D 4组VEGF含量比较,差异无统计学意义(0.059±0.012,0.057±0.016,0.059±0.018,0.057±0.014,F=0.060,P=0.980)。4组FGF-2含量比较,差异有统计学意义[(215.83±19.56)pg·mL~(-1),(565.83±47.14)pg·mL~(-1),(228.33±17.67)pg·mL~(-1),(445.00±17.69)pg·mL~(-1),F=317.377,P=0.000];B组的FGF-2含量高于其余3组(P=0.009,P=0.010,P=0.025),D组的FGF-2含量高于A组和C组(P=0.013,P=0.017),A组和C组FGF-2含量的差异无统计学意义(P=0.050)。结论:人成骨细胞和HUVEC在nHAC复合材料上共培养,均可以良好贴附、生长和增殖;OTF不能促进nHAC复合材料与人成骨细胞-HUVEC共培养体系中HUVEC增殖;HUVEC的增殖可能与成骨细胞分泌FGF-2有关。     

蠲痹胶囊对膝骨关节炎豚鼠关节软骨组织形态及滑膜中Toll样受体4、NF-κB p65及肿瘤坏死因子-α表达的影响

目的:观察蠲痹胶囊对膝骨关节炎(knee osteoarthritis,KOA)豚鼠关节软骨组织形态及滑膜中Toll样受体4(Toll-like receptor 4,TLR4)、NF-κB p65及肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)表达的影响,探讨其治疗KOA的可能作用机制。方法:将40只1月龄豚鼠随机分为正常组、3月龄组、5月龄组、氨基葡萄糖组和蠲痹胶囊组,每组8只。分组后正常组豚鼠直接进行标本采集,其余4组饲养至3月龄建立自发性KOA模型。造模结束后,3月龄组豚鼠进行标本采集;5月龄组、氨基葡萄糖组和蠲痹胶囊组分别以纯水、盐酸氨基葡萄糖胶囊和蠲痹胶囊灌胃,每天1次,连续干预2个月后进行标本采集。采集标本为豚鼠左后下肢膝关节髌下韧带表面的滑膜和胫骨内侧平台软骨,制成石蜡切片。软骨组织切片以番红固绿染色后光镜下观察软骨组织形态,采用Mankin’s病理评分标准进行评分;滑膜组织切片进行免疫组织化学染色(SP法),用Image-pro Plus 6.0图像分析软件对阳性染色的平均光密度值进行半定量分析,测定指标包括TLR4、NF-κB p65及TNF-α的表达水平。结果:5组豚鼠关节软骨Mankin’s评分比较,差异有统计学意义[(0.132±0.125)分,(5.011±0.180)分,(7.324±0.293)分,(4.250±0.250)分,(2.500±0.327)分,F=108.400,P=0.000];3月龄组评分高于正常组(P=0.000),5月龄组评分高于3月龄组(P=0.000),氨基葡萄糖组评分低于5月龄组(P=0.000),蠲痹胶囊组评分低于氨基葡萄糖组(P=0.000)。5组豚鼠关节滑膜中TLR4、NF-κB p65及TNF-α表达量比较,组间差异均有统计学意义(0.000±0.000,0.268±0.021,0.454±0.043,1.879±0.013,0.116±0.015,F=97.000,P=0.000;0.023±0.019,0.251±0.142,0.525±0.103,0.217±0.087,0.211±0.019,F=40.293,P=0.000;0.047±0.023,0.386±0.142,0.812±0.174,0.289±0.151,0.204±0.108,F=78.242,P=0.000);3月龄组TLR4、NF-κB p65及TNF-α表达量均高于正常组(P=0.000,P=0.000,P=0.000),5月龄组TLR4、NF-κB p65及TNF-α表达量均高于3月龄组(P=0.000,P=0.000,P=0.000),氨基葡萄糖组TLR4、NF-κB p65及TNF-α表达量均低于5月龄组(P=0.000,P=0.000,P=0.000),蠲痹胶囊组TLR4、NF-κB p65及TNF-α表达量均低于氨基葡萄糖组(P=0.011,P=0.019,P=0.008)。结论:蠲痹胶囊和盐酸氨基葡萄糖均可延缓KOA豚鼠关节软骨退变,蠲痹胶囊的作用更加明显;其作用机制可能是通过激活TLR4/NF-κB信号转导通路来抑制炎性因子TNF-α表达,从而减轻组织炎症反应。     

活血通络汤中药对激素性股骨头坏死造模家兔中BMP2和Jagged1表达的影响

目的:探讨中药预防性治疗激素性股骨头坏死(SANFH)的疗效及作用机制。方法:将192只日本大耳兔随机分为模型组A(48)、模型组B(48)、模型对照组C(48)、空白对照组D(48),A组第2周开始喂服中药饲料,B组第3周开始喂服中药饲料,C、D组均喂服等量普通饲料,A、B、C组第3周开始造模,每组分别于第2周末、第5周末、第8周末随机抽取8只取双侧股骨头标本,做病理镜检及计算空骨陷窝率,并采用酶联免疫吸附法(ELISA)对兔血清BMP2的含量进行测定,实时荧光定量PCR(RT-PCR)对兔血清Jagged1蛋白基因表达进行测定。结果:病理镜检及空骨陷窝率显示造模成功,BMP2阳性表达的强度及面积均明显高于造模组,结果有统计学意义(P0.05),模型组A、模型组B、模型对照组C的Jagged1均呈上调趋势。结论:1表明活血通络汤中药对股骨头坏死的预防治疗作用确切;2活血通络汤中药可能是通过促进Jagged1的上调并维持股骨头BMP2浓度,共同促进骨修复和血管生成起治疗作用。     

髓芯减压联合丹参酮ⅡA混合植骨治疗FicatⅡ期股骨头坏死

目的：观察丹参酮ⅡA结合髓芯减压打压植骨治疗FicatⅡ期股骨头坏死的临床疗效和安全性。方法：将60例符合要求的Ficat分期Ⅱ期股骨头坏死患者随机分为2组,每组30例。治疗组采用丹参酮ⅡA结合髓芯减压打压植骨治疗,对照组采用单纯髓芯减压打压植骨治疗。分别于术前和术后12个月采用Harris髋关节功能评分法评定患者的髋关节功能,并进行X线检查观察股骨头塌陷程度,同时观察比较2组患者术后及随访期间并发症的发生情况。结果：①髋关节功能。术前2组患者髋关节功能Harris评分比较,差异无统计学意义[（75．73±7．43）分,（73．60±10．12）分,t＝1．105,P＝0．273];术后12个月治疗组Harris评分高于对照组,差异有统计学意义[（95．81±2．88）分,（94．76±4．02）分,t＝12．590,P＝0．000]。②股骨头塌陷程度。治疗组优25髋、良7髋、中5髋、差3髋;对照组优23髋、良6髋、中5髋、差4髋。2组患者股骨头塌陷程度比较,差异无统计学意义（Z＝-0．287,P＝0．774）。③并发症发生情况。2组患者均获随访,随访时时间13～18个月,中位数15．5个月。术后2组患者切口均甲级愈合,术后及随访期间未出现手术相关并发症。结论：丹参酮ⅡA结合髓芯减压打压植骨可有效减缓FicatⅡ期股骨头坏死患者股骨头塌陷的病理进程,改善髋关节功能,而且具有较高的安全性。     

柚皮苷对体外培养骨髓间充质干细胞Runx-2和Osterix表达及骨质疏松模型大鼠骨强度的影响

目的：探讨柚皮苷对体外培养骨髓间充质干细胞Runx-2和Osterix表达及骨质疏松模型大鼠骨强度的作用.方法：采用髓腔冲洗离心法从雌性Lewis大鼠股骨获取骨髓间充质干细胞,将传代培养后的细胞分为5组.A组不进行干预,B组加入二甲基亚砜,C、D、E组分别加入浓度为1 μg·mL-1、10 μg·mL-1、100 μg·mL-1的柚皮苷.培养6 h后收集细胞采用RT-PCR法测定各组细胞Runx-2和Osterix的mRNA表达水平.将24只雌性SD大鼠的卵巢切除,3个月后将其随机分为4组,每组6只.Ⅰ组、Ⅱ组、Ⅲ组分别以60 mg·kg-1、300 mg·kg-1和1 500 mg·kg-1柚皮苷灌胃,Ⅳ组给予等体积的PBS灌胃,每天灌胃1次,持续2个月.药物干预结束后,测定大鼠股骨强度和胫骨骨小梁面积.结果：①Runx-2 mRNA和Osterix mRNA表达水平.B、C、D、E组大鼠骨髓间充质干细胞Runx-2 mRNA表达水平比较,差异有统计学意义[（1.10±0.02）,（2.05±0.31）,（2.76±0.14）,（1.82±0.10）,F=44.021,P=0.000].进一步两两比较,C、D、E组Runx - 2 mRNA表达水平高于B组（P=0.000,P=0.000,P=0.000）;D组高于C组和E组（P=0.001,P=0.000）;C组和E组比较,差异无统计学意义（P=0.153）.B、C、D、E组Osterix mRNA表达水平比较,差异有统计学意义[（1.02±0.10）,（1.11±1.35）,（3.24±0.30）,（2.55±0.35）,F=7.037,P=0.012].进一步两两比较,D组和E组Osterix mRNA表达水平高于B组（P=0.031,P=0.005）;C组和B组比较,差异无统计学意义（P=0.886）;C组低于D组和E组（P=0.006,P=0.039）;D组和E组比较,差异无统计学意义（P=0.267）.②股骨生物力学强度.4组骨质疏松模型大鼠股骨强度比较,差异有统计学意义[（773.36±9.21）N·mm-1,（805.66±16.00）N·mm-1,（766.70±38.96）N·mm-1,（707.46±15.88）N·mm-1,F=37.776,P=0.000].进一步两两比较,Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ组股骨强度均高于Ⅳ组（P=0.000,P=0.000,P=0.000）;Ⅰ组和Ⅲ组比较,差异无统计学意义（P=0.509）;Ⅱ组高于Ⅰ组和Ⅲ组（P=0.004,P=0.001）.③胫骨骨小梁面积.4组骨质疏松模型大鼠胫骨骨小梁面积比较,差异有统计学意义[（22.26±2.32）,（25.10±2.18）,（23.66±3.26）,（15.63±2.00）,F=14.168,P=0.000].进一步两两比较,Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ组胫骨骨小梁面积均大于Ⅳ组（P=0.001,P=0.000,P=0.000）;Ⅰ组与Ⅱ组和Ⅲ组比较,差异均无统计学意义（P=0.090,P=0.387）;Ⅱ组和Ⅲ组比较,差异无统计学意义（P=0.374）.结论：柚皮苷可促进体外培养的骨髓间充质干细胞中Runx - 2和Osterix的表达,增强骨质疏松模型大鼠的骨强度,增大骨小梁面积.     

经皮椎体成形术后骨折椎体生物力学性能和组织形态研究

目的：观察经皮椎体成形术后骨折椎体的生物力学性能和组织形态.方法：将105只新西兰雌兔随机分为3组,每组35只.B组和C组采用卵巢切除加地塞米松肌肉注射法进行骨质疏松造模.造模成功后,在所有实验动物L4和L5椎体上通过手术造成骨缺损,C组实验动物在形成骨缺损的椎体中模拟经皮椎体成形术注射调制好的聚甲基丙烯酸甲酯骨水泥Ⅲ.分别于模拟经皮椎体成形术完成后2周、4周、8周、12周、16周、24周、48周从各组中随机选取5只实验动物处死,取出进行过手术的2个椎体,进行生物力学强度测定.同时,C组作盐酸四环素荧光标记,经甲苯胺蓝染色后进行椎体组织形态观察.结果：①椎体轴向压缩实验结果.除48周外[（0.54±0.14）mm,（0.83±0.26）mm,（0.54±0.16）mm,F=3.744,P=0.054],3组椎体标本术后2周、4周、8周、12周、16周、24周时的轴向压缩位移比较,组间差异均有统计学意义[（0.62±0.10）mm,（0.92±0.22）mm,（0.43±0.09）mm,F=13.489,P=0.001;（0.65±0.17）mm,（1.01±0.16）mm,（0.44±0.08）mm,F=24.843,P=0.000;（0.61±0.12）mm,（1.27±0.23）mm,（0.50±0.11）mm,F=32.262,P=0.000;（0.61±0.15）mm,（1.10±0.10）mm,（0.49±0.13）mm,F=25.488,P=0.000;（0.58±0.19）mm,（1.17±0.16）mm,（0.54±0.10）mm,F=24.730,P=0.000;（0.55±0.17）mm,（1.10±0.28）mm,（0.53±0.15）mm,F=11.998,P=0.001].进一步两两比较,A组和C组各时点轴向压缩位移均小于B组（P=0.009,P=0.001,P=0.000,P=0.000,P=0.000,P=0.001;P=0.000,P=0.000,P=0.000,P=0.000,P=0.000,P=0.001）;除4周时外（P=0.038）,A组各时点轴向压缩位移与C组比较,差异均无统计学意义（P=0.062,P=0.328,P=0.208,P=0.648,P=0.894）.②椎体三点弯曲实验结果.3组实验动物椎体标本术后2周、4周、8周、12周、16周、24周和48周时的最大载荷比较,组间差异均有统计学意义[（178.0±7.7）N,（130.3±6.2）N,（232.0±1.7）N,F=385.253,P=0.000;（178.3±4.4）N,（127.7±7.1）N,（226.0±5.4）N,F=371.286,P=0.000;（182.4±4.4）N,（131.8±5.2）N,（221.0±3.1）N,F=536.544,P=0.000;（184.0±0.8）N,（137.0±6.6）N,（215.0±3.2）N,F=422.579,P=0.000;（182.9±0.9）N,（140.2±1.5）N,（217.0±4.3）N,F=1 006.122,P=0.000;（189.0±3.2）N,（140.6±1.7）N,（194.0±4.9）N,F=351.372,P=0.000;（191.9±3.9）N,（142.4±2.1）N,（191.0±8.1）N,F=139.682,P=0.000].进一步两两比较,A组和C组各时点的最大载荷均大于B组（P=0.000,P=0.000,P=0.000,P=0.000,P=0.000,P=0.000,P=0.000;P=0.000,P=0.000,P=0.000,P=0.000,P=0.000,P=0.000,P=0.000）;除24周和48周外（P=0.054,P=0.724）,C组各时点的最大载荷均大于A组（P=0.000,P=0.000,P=0.000,P=0.000,P=0.000）.③椎体抗扭转实验结果.3组实验动物椎体标本术后2周、4周、8周、12周、16周、24周和48周时的扭转角度比较,组间差异均有统计学意义[（3.8°±0.6°）,（5.4°±0.5°）,（2.4°±0.6°）,F=37.977,P=0.000;（4.0°±1.3°）,（5.8°±1.6°）,（2.4°±0.7°）,F=9.408,P=0.003;（3.7°±0.8°）,（5.7°±0.4°）,（2.3°±0.7°）,F=32.229,P=0.000;（3.5°±0.8°）,（5.8°±0.4°）,（2.4°±0.5°）,F=38.685,P=0.000;（3.5°±0.8°）,（5.7°±0.4°）,（2.4°±0.4°）,F=41.931,P=0.000;（3.4°±0.8°）,（5.2°±1.2°）,（2.5°±0.8°）,F=10.072,P=0.003;（3.0°±0.3°）,（5.1°±0.4°）,（2.7°±0.4°）,F=53.166,P=0.000].进一步两两比较,A组和C组各时点的扭转角度均小于B组（P=0.001,P=0.045,P=0.000,P=0.000,P=0.000,P=0.012,P=0.000;P=0.000,P=0.001,P=0.000,P=0.000,P=0.000,P=0.001,P=0.000）;除4周、24周和48周外（P=0.057,P=0.171,P=0.347）,C组各时点的扭转角度均小于A组（P=0.001,P=0.008,P=0.014,P=0.017）.④椎体组织学观察结果.经皮椎体成形术后2周和4周时,聚甲基丙烯酸甲酯骨水泥Ⅲ与宿主骨交界处有大量软骨细胞和成骨细胞,交界处未见纤维组织;8周时骨水泥与宿主骨结合紧密,软骨组织被新生的类骨质替代,新生骨组织明显增加,交界处未见纤维组织;12周和16周时可见纤维组织,骨水泥与宿主骨结合更加紧密,界面处类骨质减少,矿化骨痂增多,编织骨被板层骨取代;24周和48周时可见少量破骨细胞和骨单位,大部分界面结合处新生骨组织与骨水泥结合紧密.结论：经皮椎体成形术后,凝固的聚甲基丙烯酸甲酯骨水泥能与骨组织形成骨性结合,为骨折椎体提供较好的近期和远期生物力学性能.     

绝经后2型糖尿病患者骨质疏松与血微量元素的关系研究

目的：探讨绝经后2型糖尿病患者骨质疏松与血微量元素间的关系.方法：纳入绝经后女性168例,年龄48～82岁,中位数63.5岁;其中2型糖尿病患者122例,健康女性46例.所有受检者均测定血清钙、镁、锌、铜、铁含量和糖化血红蛋白含量,并测定身高和体质量.绝经后2型糖尿病患者同时测定腰椎和左侧股骨骨密度.将绝经后2型糖尿病患者纳入Ⅰ组,绝经后健康女性纳入Ⅱ组,比较2组受检者微量元素的血清含量.根据骨密度检测结果,将122例绝经后2型糖尿病患者中骨密度正常者纳入A组、骨量减少者纳入B组、骨质疏松者纳入C组,比较3组患者微量元素的血清含量;然后根据是否骨质疏松将122例绝经后2型糖尿病患者分为2组,采用Logistic回归分析法分析绝经后2型糖尿病患者骨质疏松与血微量元素的关系.结果：①绝经后2型糖尿病与血微量元素的关系.Ⅰ组受检者血液中锌、镁含量低于Ⅱ组[（91.42±10.88）μmol·L-1,（98.47±11.06）μmol·L-1,t=15.890,P=0.000;（1.46±0.14）mmol·L-1,（1.69±0.14）mmol·L-1,t=88.490,P=0.000];铜、钙、铁含量与Ⅱ组比较,差异无统计学意义[（12.95±2.43）μmol·L-1,（12.54±2.11）μmol·L-1,t=1.053,P=0.306;（1.52±0.13）mmol·L-1,（1.54±0.15）mmol·L-1,t=0.890,P=0.347;（8.07±1.16）mmol·L-1,（8.17±1.40）mmol·L-1,t=0.968,P=0.323].②绝经后2型糖尿病患者骨质疏松与血微量元素的关系.A组42例,B组40例,C组40例.3组绝经后2型糖尿病患者血液中钙、镁、铁含量比较,组间差异无统计学意义[（1.53±0.10）mmol·L-1,（1.51±0.17）mmol·L-1,（1.50±0.12）mmol·L-1,F=0.362,P=0.697;（1.47±0.13）mmol·L-1,（1.45±0.15）mmol·L-1,（1.44±0.14）mmol·L-1,F=0.325,P=0.723;（8.39±1.11）mmol·L-1,（7.94±1.28）mmol·L-1,（7.90±1.04）mmol·L-1,F=2.324,P=0.102].铜、锌含量比较,组间差异有统计学意义[（13.99±2.33）μmol·L-1,（12.83±1.89）μmol·L-1,（12.09±2.64）μmol·L-1,F=7.027,P=0.001;（96.80±11.09）μmol·L-1,（91.51±9.64）μmol·L-1,（86.21±9.39）μmol·L-1,F=11.388,P=0.000].A组患者血液中铜含量高于B组和C组（P=0.027,P=0.000）,B、C组比较,差异无统计学意义（P=0.149）;A组患者血液中锌含量高于B组和C组（P=0.020,P=0.000）,B组高于C组（P=0.018）.对血液中锌、铜、钙、镁、铁含量行二元Logistic回归分析显示,血液中铜、锌含量为绝经后2型糖尿病患者骨质疏松的保护因素（OR=0.731,P=0.006;OR=0.843,P=0.046）.结论：绝经后2型糖尿病患者骨质疏松与血液中锌、铜缺乏有关.     

温阳补肾方对激素性股骨头坏死模型兔股骨头形态学的影响

目的:观察温阳补肾方对激素性股骨头坏死模型兔股骨头形态学的影响。方法:136只新西兰大白兔随机分为正常组、模型组、中药低、中、高剂量组。造模成功后,分别于给药后第4、8、12周取双侧股骨头行常规苏木精-伊红染色,计算空骨陷窝率。结果:第4、8、12周时,正常组、中药中、高剂量组空骨陷窝率均明显低于模型组(P0.01)。结论:大剂量激素使用可增加股骨头空骨陷窝率,使骨过度吸收从而破坏骨质导致股骨头坏死。温阳补肾方可以降低空骨陷窝率,抑制破骨细胞的活化,促进新骨的形成。     

活血、温经、补益肝肾类中药对膝骨关节炎兔关节软骨形态的影响

目的：观察活血、温经及补益肝肾3类中药对膝骨关节炎兔关节软骨形态的影响.方法：将62只新西兰白兔随机分为6组,A组12只,B、C、D、E和F组各10只.采用关节制动法对B、C、D、E和F组动物左后腿进行膝骨关节炎造模.造模成功后进行药物干预,A、B组以10 mL蒸馏水灌胃,C组以10 mL丹参和当归药液灌胃,D组以10 mL桂枝和防风药液灌胃,E组以10 mL杜仲和怀牛膝药液灌胃,F组以10 mL金乌骨通胶囊水溶液灌胃.各组动物均在每天上午10时给药1次.分别于药物干预21 d和42d后分2批处死动物,取左后腿股骨外髁关节软骨及软骨下骨,制成组织切片后分别进行HE染色和阿利辛蓝-过碘酸雪夫氏染色,采用Mankin软骨组织学评分法进行评分.结果：①动物一般情况.造模结束时,B、C、D、E和F组动物膝关节肿胀,屈伸活动不利,行走呈跨越步态.造模期间共有9只动物因拒绝进食死亡.②Mankin评分.药物干预后21 d,各组动物膝关节软骨Mankin评分比较,差异有统计学意义[（0.67±0.82）分,（13.00±1.63）分,（4.75±2.22）分,（6.75±0.96）分,（8.25±1.26）分,（9.75±2.36）分,F=34.904,P=0.000].组间两两比较,A组评分小于B、C、D、E和F组（P=0.000,P=0.000,P=0.000,P=0.000,P=0.009）;B组大于C、D、E和F组（P =0.001,P=0.000,P=0.000,P=0.000）;C组小于E组和F组（P =0.005,P=0.000）;D组小于F组（P=0.015）;其余各组间两两比较,差异均无统计学意义.药物干预后42 d,各组动物膝关节软骨Mankin评分比较,差异有统计学意义[（0.67±1.03）分,（13.25±1.50）分,（3.00±0.81）分,（4.50±1.73）分,（4.00±1.10）分,（4.75±1.71）分,F=44.868,P=0.000].组间两两比较,A组评分小于B、C、D、E和F组（P=0.000,P=0.014,P=0.000,P=0.001,P=0.000）;B组大于C、D、E和F组（P=0.000,P=0.000,P=0.000,P=0.000）;其余各组间两两比较,差异均无统计学意义.E组和F组干预后42 d的膝关节软骨Mankin评分小于干预后21 d的膝?     

原发性高血压患者动脉硬化与早期肾损害的关系调查

目的探讨原发性高血压患者动脉硬化对早期肾损害的预测价值。方法选择符合条件的原发性高血压早期肾损害患者90例,统计其动态动脉硬化指数（AASI）、血清肌酐（Scr）、尿蛋白肌酐比值（ACR）,并计算估算肾小球滤过率（eGFR）。按照AASI水平将所有患者分为两组,A组AASI≥0．55,B组AASI〈0．55,比较两组间各数据差异,并进行相关性分析,建立多元线性回归方程。结果①A、B两组的年龄、24h平均舒张压（DBP）、ACR、ACR阳性率及eGFR的差异均有统计学意义。（2）AASI与其他因素的相关性分析：AASI与年龄（r=0．483,P=0．000）、24h平均收缩压SBP（r=0．350,p=0．001）及ACR（r=0．474,P=0．000）呈正相关,与eGFR（r=-0．383,P=0．000）呈负相关,而与其他因素不相关。从AASI与肾功能损伤指标之间的多元线性回归分析结果看,eGFR每增加1ml／min,AASI相应下降0．001;ACR每增加1mg／mmol,AASI相应增加0．025。结论①动脉硬化程度与患者年龄及昼夜血压变异率相关;②动脉硬化与原发性高血压早期肾损害密切相关,并对高血压早期肾损害有预测价值。     

3种颈椎后路单开门椎管扩大成形术的临床效果评价

目的：观察3种颈椎后路单开门椎管扩大成形术的临床疗效和安全性。方法：回顾性分析105例多节段颈段脊髓受压患者的病例资料,采用单开门丝线悬吊椎管扩大成形术治疗者35例（丝线固定组）,采用单开门带线锚钉固定椎管扩大成形术治疗者37例（锚钉固定组）,采用单开门微型钛板固定椎管扩大成形术治疗者33例（钛板固定组）。比较3组患者的手术时间、出血量、住院时间、JOA评分、最窄椎管面积、颈椎活动度、颈椎曲率指数及并发症发生情况。结果：1一般情况。3组患者手术时间、出血量及住院时间比较,组间差异均有统计学意义[（68.4±18.6）min,（79.8±21.3）min,（86.1±25.9）min,F=13.560,P=0.000;（346.3±85.7）m L,（364.1±83.2）m L,（436.2±89.4）m L,F=14.317,P=0.000;（53.3±4.8）d,（52.4±3.7）d,（32.4±4.5）d,F=19.492,P=0.000]。钛板固定组手术时间、出血量大于其余2组（P=0.000,P=0.000;P=0.000,P=0.000）,住院时间比其余2组短（P=0.000,P=0.000）;丝线固定组和锚钉固定组的手术时间、出血量及住院时间比较,组间差异均无统计学意义（P=0.326,P=0.824,P=0.536）。2JOA评分。手术前后不同时间JOA评分的差异有统计学意义,即存在时间效应[（7.5±3.6）分,（12.7±3.3）分,（13.2±3.7）分;（8.3±3.7）分,（12.8±3.8）分,（12.4±3.3）分;（7.6±2.5）分,（13.2±2.7）分,（14.5±2.6）分;F=56.672,P=0.000]。3组患者JOA评分的组间差异总体上有统计学意义,即存在分组效应（F=45.718,P=0.000）;术前和术后1周时3组患者JOA评分比较,组间差异均无统计学意义（F=1.315,P=0.692;F=1.047,P=0.739）;术后2年时,钛板固定组评分高于其余2组（P=0.002,P=0.000）,其余2组间比较,差异无统计学意义（P=0.336）。时间因素和分组因素之间不存在交互效应（F=0.372,P=1.041）。3最窄椎管面积。手术前后不同时间最窄椎管面积的差异有统计学意义,即存在?     

木豆叶煎液外洗治疗四肢创伤创面的临床观察

目的：观察木豆叶煎液外洗治疗四肢软组织缺损的临床疗效.方法：将226例软组织缺损患者随机分为2组,每组113例.清创结束后,治疗组用木豆叶煎液外洗处理创面,对照组用5%呋喃西林溶液处理创面.每日2次.观察2组患者的创面愈合率、创面愈合时间、创面分泌物细菌培养结果及临床疗效.结果：①创面愈合率.治疗后不同时间患者的创面愈合率的差异总体上有统计学意义,即存在时间效应（F=111.562,P=0.000）;2组患者治疗后不同时间创面愈合率的组间差异总体上有统计学意义,即存在分组效应（F=1757.082,P=0.000）,治疗组各时间点创面愈合率均高于对照组[（54.43±24.77）,（42.96±19.99）,t=5.171,P=0.006;（83.74±13.79）,（55.81±21.59）,t=15.746,P=0.000;（94.07±9.28）,（65.37±21.80）,t=17.163,P=0.000;（97.49±6.16）,（77.75±20.76）,t=13.875,P=0.000];时间因素和分组因素存在交互效应（F=188.500,P=0.003）.②创面愈合时间.治疗组创面愈合时间比对照组短,差异有统计学意义[（33.47±7.22）,（43.37±11.39）,t=-11.692,P=0.008].③创面分泌物细菌培养结果.治疗前2组患者创面分泌物细菌培养阳性率比较,差异无统计学意义（χ2=0.398,P=0.528）,治疗开始后1周、2周、3周、4周治疗组创面分泌物细菌培养阳性率均低于对照组,差异有统计学意义（χ2=33.275,P=0.000;χ2=20.884,P=0.000;χ2=11.760,P=0.001;χ2=7.706,P=0.006）.④临床疗效.治疗组治愈88例、显效23例、有效2例,对照组治愈12例、显效45例、有效39例、无效17例.治疗组疗效优于对照组（u=1 474.500,P=0.000）.结论：木豆叶煎液能提高创面愈合率,缩短创面愈合时间,抑制创面细菌繁殖,可有效促进四肢软组织创伤创面的愈合.