旋毛虫肌幼虫培养细胞的扫描电镜观察

目的:观察旋毛虫(Trichinella spiralis,T1)肌幼虫培养细胞的超微结构.方法:分离旋毛虫肌幼虫细胞,进行体外传代培养.利用简单重复序列区间扩增(ISSR-PCR)标准引物对第3代培养细胞及肌幼虫基因组进行扩增,利用扫描电镜观察贴壁细胞的形态特征.结果和结论:旋毛虫肌幼虫第3代培养细胞和旋毛虫肌幼虫DNA的ISSR-PCR扩增产物均在1 000 bp和750 bp处出现相同条带.扫描电镜下旋毛虫培养细胞的彤态有多种类型,可分为圆颗粒形、多角形、三角扇形、蜂窝型、似分裂型及褶皱型等.其中以圆颗粒形细胞占多数.     

旋毛虫幼虫在实验动物体内的分布

旋毛虫病是人畜共有的寄生虫病,人体感染的主要来源是生食含有旋毛虫幼虫的猪肉,感染后常引起较为严重的临床症状,甚至引起死亡。1963年我室得知郑州肉类联合加工厂从南阳地区调来的生猪经宰后检查不断发现旋毛虫幼虫,遂取回阳性猪肉一块,于1963年8月至1966年3月感染实验动物小白鼠和豚鼠共25只,观察旋毛虫幼虫在其体内的分布情况,目的是在此工作的基础上,拟     

小鼠感染不同数量旋毛虫后幼虫在鼠体内的发育及分布

目的 :观察小鼠感染不同数量旋毛虫幼虫后 ,幼虫在体内的发育、分布以及密度上的差异。方法 :小鼠随机分组感染不同数量旋毛虫幼虫 ,2 8天、35天后解剖观察鼠体不同组织内幼虫的发育 ,分布以及密度。结果 :旋毛虫在 3组小鼠体内发育情况大体相同 ,幼虫在鼠体膈肌和咬肌中的密度最高。不同动物组感染不同数量旋毛虫后 ,鼠体幼虫密度和分布有明显差异。结论 :研究结果表明 ,较小数量旋毛虫幼虫感染适宜于旋毛虫保种 ,较大数量旋毛虫幼虫感染适合于旋毛虫幼虫的收集及进行旋毛虫病的试验研究。     

单核细胞体外杀伤旋毛虫肌幼虫的实验观察

【目的】探讨单核细胞对旋毛虫肌幼虫的杀伤作用。【方法】用体外培养法观察了大鼠单核细胞、免；赃清及补体对旋毛虫肌幼虫的杀伤作用。【结果】单纯单核细胞或免疫血清对旋毛虫肌幼虫均无明显杀伤作用；在抗体及补体参与下，单核细胞对旋毛虫肌幼虫的杀伤作用显增强。【结论】单核细胞在IgG类抗体及补体的协同下，具有杀伤旋毛虫肌幼虫的作用。     

三种旋毛虫肌肉期幼虫染色方法的比较研究

目的 为寻找简便有效的旋毛虫病病原学诊断方法,本文比较研究了吉姆萨、天狼猩红和苏木素一伊红(HE)染色对肌肉中旋毛虫幼虫染色后的观察效果.方法 BALB/c小鼠口饲感染旋毛虫肌期幼虫300条,分别于感染后90 d和120 d处死小鼠,取其膈肌,福尔马林固定后,一分为四,分别行吉姆萨染色、天狼猩红染色和HE染色,同时设不染色的对照,光镜下观察肌肉中虫体的显示效果.结果 吉姆萨染色对旋毛虫肌期幼虫的显示效果较好,天狼猩红染色对幼虫周围纤维囊壁的显示效果较好.结论 吉姆萨和天狼猩红染色均有助于对小鼠膈肌中的旋毛虫幼虫进行观察,且二者各具特点.     

从大白鼠体内分离旋毛虫幼虫并建立纯培养

旋毛虫病是一种动物源性寄生虫病 ,在哺乳动物之间广泛传播 ,自然界有l5 0余种动物感染旋毛虫病 ,野生食肉动物感染率较高 ,该病广泛流行于世界各地。根据它的生活史特点 ,能比较容易获取它的幼虫和成虫[1～ 4] ,而从幼虫发育为成虫的过程则很难观察到。为今后更进一步地研究旋毛虫幼虫成熟及产幼的机理 ,我们对旋毛虫幼虫的培养方法进行了探讨。1　材料与方法1 .1　感染用旋毛虫幼虫的制备将保种的感染旋毛虫大白鼠击头处死 ,取其肌肉搅碎后用蛋白酶消化液 (1 %HCl,1 %胃蛋白酶 )消化 ,肌肉与消化液的比例为每一克肌肉 6～ 1 0ml消化液 ,…     

甘肃省旋毛虫的检见及实验研究

1.在甘肃省检查104只狐类,其中49只有旋毛虫感染(47.10%),22只狗有6只(27.2%)有感染,此外在1,376只家野鼠类,151只猪及4只鸟鸦均未查获。2.实验动物感染旋毛虫,虫体于6日后开始成熟,15日后在肌肉血管中出现幼虫,19日后出现于肌纤维中,45日后始成囊。3.幼虫开始在肌肉中出现时,先是腊肠状不具活动性的幼虫, 经24—36小时后成为卷曲状的活动性幼虫。前者经动物试验不能感染动物,后者具感染性。4.含旋毛虫幼虫的肉品经冷冻72小时以内不能致死。5.蝇类幼虫可以短时间携带旋毛虫幼虫,蛹及成蝇则不能携带。6.初步探讨甘肃省旋毛虫病自然疫源地问题。     

半乳糖凝集素-受体相互作用对旋毛虫感染小鼠肠道黏膜免疫的调节

目的 探讨半乳糖凝集素对旋毛虫感染小鼠小肠组织的免疫调节作用.方法 本实验共使用26只雌性昆明小鼠,其中正常对照组6只;α-乳糖对照组6只,每天给每只鼠经腹腔注射200 μL 1.5 mmol/L α-乳糖溶液;旋毛虫感染组7只,每只鼠口饲感染旋毛虫幼虫300条;旋毛虫感染+α-乳糖组7只,每只鼠口饲感染旋毛虫幼虫30...     

间接荧光抗体试验诊断实验性旋毛虫病的研究

本文应用间接荧光抗体试验比较了４种方法制备的旋毛虫幼虫抗原诊断实验性旋毛虫病的效果。结果表明，旋毛虫纯净幼虫冰冻切片抗原优于完整幼虫抗原、超声粉碎幼虫抗原及膈肌幼虫冰冻切片抗原。用此抗原检测感染旋毛虫的大鼠血清时，抗体阳性率为１００％（１３／１３），而１０份正常大鼠血清均为阴性反应。小鼠感染旋毛虫后２周即可检测到抗旋毛虫抗体，阳性率为１１．１１％（１／９），感染后５周抗体阳性率已升到１００％（８／８），升高的抗体滴度可一直持续至感染后第１５周。此抗原在－２０℃至少可保存２．５年而不丧失其活性和特异性。应用滤纸血也可取得满意的检测结果。     

中性粒细胞体外杀伤旋毛虫肌幼虫的实验观察

目的探讨感染旋毛虫大鼠中性粒细胞(Neu)在免疫血清协助下对旋毛虫肌幼虫的杀伤作用。方法采用体外CO2培养法,按分组设计在96孔细胞培养板的板孔中加入Wistar雄性大鼠血液中的Neu、旋毛虫肌幼虫、血清(对照血清或经不同条件处理的血清)及含有10%灭活小牛血清的R/MINI-1640培养液,连续培养2d。显微镜下,在12、24、36、48h等时相观察大鼠Neu、免疫血清及补体对旋毛虫肌幼虫的影响。结果无论是感染鼠或正常鼠的单纯Neu或正常血清对旋毛虫肌幼虫均无杀伤作用。在免疫血清及补体参与下,Neu对幼虫的杀伤作用明显增强,同时灭活补体和IgE与仅灭活补体的免疫血清效果相似。结论在体外培养的条件下,感染鼠或正常鼠的单纯Neu或正常血清均无杀伤旋毛虫肌幼虫的作用,感染旋毛虫大鼠的Neu在免疫血清及补体的协助下对旋毛虫肌幼虫具有较强的杀伤作用。免疫血清在灭活IgE前后对Neu杀伤靶虫作用不明显,说明Neu介导的ADCC效应主要依赖的是IgG,并非IgE。     

旋毛虫在小鼠体内的发育及炎性细胞反应的动态观察

目的观察旋毛虫感染小鼠后,幼虫在鼠体内的发育、分布及密度上的差异,以及外周血细胞动态变化。方法在小鼠感染旋毛虫后第21d、28d、35d、42d解剖,观察鼠体各组织内幼虫的发育,分布以及密度。采集血液进行细胞计数。结果旋毛虫幼虫在鼠体的分布和密度有一定差异,但以膈肌和咬肌中的密度为高。小鼠外周血中性粒细胞及淋巴细胞于第14d后逐渐上升趋势,21d、28d达高峰,后逐渐下降。中性粒细胞比例高于对照组,而淋巴细胞低于对照组。结论研究结果显示,一定数量旋毛虫幼虫感染适宜于旋毛虫保种,感染旋毛虫小鼠外周血细胞的变化与宿主免疫现象有一定的关系。     

中美猪型旋毛虫株不同发育阶段同工酶的电泳分析

应用聚丙烯酰胺凝胶电泳 (PAGE)和UVP凝胶分析仪系统 ,分析比较了中、美猪型旋毛虫成虫和幼虫的酯酶 (EST)同工酶及乳酸脱氢酶 (LDH)同工酶的带谱。结果表明 :猪型黑龙江株旋毛虫成虫和幼虫的EST同工酶酶带均为 2条 ,猪型美国株旋毛虫成虫和幼虫EST同工酶酶带分别为 3条和 2条 ;中、美猪型旋毛虫成虫的LDH同工酶无酶带 ,而幼虫则各具 1条酶带 ,且其迁移率也不同。结果提示 :来自不同地域的旋毛虫在遗传学上存在差异 ,同时 ,不同发育阶段同工酶酶谱也有明显不同。     

2型糖尿病小鼠对旋毛虫易感性的研究

目的研究2型糖尿病小鼠对旋毛虫的易感性。方法高糖高脂饮食喂养1mon,加上小剂量链脲佐菌素(STZ)注射建立小鼠2型糖尿病模型;以常规饲料喂养小鼠作为对照。用旋毛虫感染建模成功的小鼠,然后随机分为PBS组,胰岛素组。2周后处死小鼠,取膈肌进行幼虫检测。结果用旋毛虫幼虫攻击感染2型糖尿病建模成功小鼠,其肌肉幼虫检出率较正常对照组小鼠显著增多(P<0.01),胰岛素治疗后肌肉幼虫检出率下降。结论2型糖尿病小鼠对旋毛虫易感性增加,胰岛素治疗后其对旋毛虫易感性下降。     

旋毛虫感染长爪沙鼠的实验研究

目的 探讨用蒙古长爪沙鼠建立旋毛虫动物模型及最佳感染幼虫数。方法 取含旋毛虫幼虫的沙鼠肌肉压片计数，按50、80、100、150、200、300条幼虫／只喂饲长爪沙鼠，观察其发病及死亡情况，并以同样数量喂饲小白鼠作对照组。结果 ①用长爪沙鼠建立动物模型感染所需的最适旋毛虫幼虫数为80条／只。②沙鼠感染超过150条／只，则在感染后45d内全部死亡，而小白鼠喂饲300条／只旋毛虫幼虫几乎无任何症状。结论 长爪沙鼠不仅可以作为旋毛虫病的动物模型，且症状典型，故用长爪沙鼠建立旋毛虫的动物模型进行教学及科研较为合适，小白鼠则更适合保种。     

鼠旋毛虫肌幼虫的分离与体外培养

目的探讨旋毛虫幼虫在宿主体外培养的情况。方法将从小鼠肌肉分离、纯化的旋毛虫幼虫,接种于含20%小牛血清的RPMI1640和M199作为培养液,在37℃、5%CO2的CO2培养箱中培养。结果旋毛虫幼虫能在体外合适培养液中存活较长时间。但虫体无明显增大。结论旋毛虫的幼虫能在体外较长时间生存,但生长和发育还需要其他刺激因子。     

我国3个旋毛虫地理株肌幼虫形态观察及生殖力测定

目的:观察我国3个旋毛虫地理株肌幼虫的形态,并测定其生殖力,为旋毛虫属的分类提供依据.方法:对我国河南(Hn)、黑龙江(Hlj)及云南(Yn)的3个猪源旋毛虫地理株肌幼虫进行长度测量,并观察25℃与4℃下的形态.40只昆明小鼠随机分为8组,每组5只,分别感染8个不同种和地理株旋毛虫,每只小鼠经口感染100条肌幼虫,感染后40 d剖杀,人工消化法消化全身肌肉后按贝氏分离法收集肌幼虫,进行不同种株的生殖力指数(RCI)测定,并与旋毛虫(T1)、乡土旋毛虫(T2)、布氏旋毛虫(T3)、伪旋毛虫(T4)及纳氏旋毛虫(T7)国际参考株进行比较.结果:3个地理株肌幼虫长度分别为(1.183±0.063)mm、(1.054±0.068)mm及(1.159±0.086)mm,与T1参考株长度((1.107±0.049)mm)相比,差异均有统计学意义(P均＜0.05).T4肌幼虫最小((0.841±0.038)mm),与其他种(T1、T2、T3、T7)及3个地理株相比差异均有统计学意义(P均＜0.05).T2肌幼虫在25℃下螺旋状卷曲数所占比例(24.34%)与其他种与地理株肌幼虫相比差异均有统计学意义(P均＜0.05),但其他种与地理株肌幼虫在25℃和4℃下形态变化无明显的规律性.不同种与地理株的RCI以河南株最高(297.500±12.179),其次分别为T1(279.670±6.408)、T4(186.670±5.391)、T7(158.080±11.630)、云南株(154.250±16.535)、T3(86.330±2.944)及黑龙江株(68.670±3.266),T2的RCI最低(55.290±4.196);各组的RCI相比差异有统计学意义(P＜0.05).结论:旋毛虫肌幼虫形态和RCI不能用于区分种和地理株的生物学特征,但可作为旋毛虫属分类的参考指标.     

紫外线减毒弓形虫免疫对小鼠旋毛虫感染肌肉组织病理的影响

目的 探讨紫外线减毒弓形虫免疫对小鼠旋毛虫感染肌肉期组织病理的影响.方法 ICR小鼠分为两组,实验组为紫外线减毒弓形虫免疫3周后再感染旋毛虫,对照组为旋毛虫单独感染.结果 与旋毛虫单感染相比,小鼠预先经紫外线减毒弓形虫免疫再感染旋毛虫后23 d,其肌肉期幼虫周围的炎症细胞浸润明显减轻,肌肉组织的病理损伤也明显减轻.结论 紫外线减毒弓形虫免疫对小鼠旋毛虫感染肌肉期的组织病理有一定的免疫调节作用.     

旋毛虫感染小鼠IL-4、IL-5的表达及嗜酸性粒细胞体外杀伤旋毛虫肌幼虫的实验观察

【目的】探讨感染旋毛虫小鼠嗜酸性粒细胞（Eosinophil,Eos）在体外对旋毛虫肌幼虫的杀伤作用及脾细胞中IL-4和IL-5的表达。【方法】制作旋毛虫感染小鼠模型,采用体外培养法,按分组设计在96孔细胞培养板的板孔中加入感染旋毛虫小鼠外周血提取的Eos、旋毛虫肌幼虫、血清（对照血清或经不同条件处理的血清）及含有10%灭活小牛血清的PRMI1640培养液,连续培养2d。显微镜下,在12、24、48h等时相观察小鼠Eos对旋毛虫肌幼虫的影响;用RT-PCR方法检测感染旋毛虫小鼠脾脏中IL-4、IL-5的mRNA含量,观察这两种细胞因子的表达情况。【结果】在体外培养的条件下,单纯Eos对旋毛虫肌幼虫无杀伤作用,在免疫血清参与下,Eos对幼虫的杀伤作用明显增强,在灭活IgE前后,Eos的杀伤作用明显改变,在灭活补体和IgE后Eos的杀伤作用明显减弱,与单纯Eos的情况无差别。感染组小鼠脾脏中IL-4和IL-5mRNA的含量均明显高于对照组。【结论】Eos对旋毛虫肌幼虫杀伤的过程需要免疫血清的参与,且IgE是Eos发挥ADCC效应所依赖的重要免疫球蛋白,IgG可能在Eos发挥ADCC效应的过程中并没有明显作用。感染旋毛虫小鼠脾脏细胞IL-4和IL-5表达量明显升高。     

旋毛虫感染与细胞凋亡关系的研究进展

细胞凋亡,指机体细胞在发育过程中或在某些因素作用下,通过细胞内基因及其产物的调控而发生的一种程序性死亡,其在细胞和组织内稳态及生长发育中起着重要的作用.研究发现旋毛虫感染与细胞凋亡有着密切的联系,旋毛虫可以通过细胞凋亡途径诱导肿瘤细胞的凋亡.除此以外,旋毛虫还有一种独特的能力,使寄生的肌细胞结构发生变化,形成独立于其他肌肉组织的营养细胞(保姆细胞),其功能是给幼虫提供所需的营养物质并保护幼虫免遭宿主的破坏.旋毛虫在发育过程中存在细胞凋亡,寄生于宿主体内可引起宿主细胞凋亡,甚至可诱导肿瘤细胞的凋亡,两者关系密不可分.     

IgE在小鼠旋毛虫感染急性期免疫反应中的作用

目的观察感染旋毛虫小鼠IgE水平的动态变化及其抗体依赖细胞介导的细胞毒效应(antibody-dependent cell cytotoxicity,ADCC),并通过IL-4、IL-5的表达测定,探讨IgE在旋毛虫感染小鼠急性期免疫反应中的作用。方法采用双抗体夹心ELISA法,分别检测感染旋毛虫后7、14、21、28、35、60d小鼠外周血中总IgE水平,同时用间接ELISA法测定特异性IgE水平,采用体外培养法做IgE介导嗜酸性粒细胞对旋毛虫肌幼虫的体外杀伤实验,按分组设计在96孔细胞培养板的板孔中加入感染旋毛虫小鼠外周血提取的嗜酸性粒细胞(Eos)、感染鼠血清及感染鼠的旋毛虫肌幼虫与含有10%灭活小牛血清的RPMI-1640培养液,共培养2d。显微镜下,分别在12、24、48h观察小鼠Eos对旋毛虫肌幼虫的影响,另外,用RT-PCR方法观察感染旋毛虫小鼠脾脏中IL-4、IL-5的mRNA含量,观察这两种细胞因子的表达情况。结果实验组较对照组总IgE水平增高,在14、21d达到高峰(P0.01),第3周后逐渐下降,特异性IgE在14和21d组与对照组比较差异有统计学意义(P0.01),阳性率达88.9%。在体外培养的条件下,单纯Eos对旋毛虫肌幼虫无杀伤作用,在免疫血清参与下,Eos对幼虫的杀伤作用明显增强,灭活IgE后,Eos的杀伤作用明显减弱,与单纯Eos的情况无差别。感染组小鼠脾脏中IL-4和IL-5mRNA的含量均明显高于对照组。结论血清中IgE抗体参与了旋毛虫急性期的免疫,主要作用为快速排出肠道内的旋毛虫脱囊幼虫,Eos对旋毛虫肌幼虫杀伤的过程需要IgE的参与,且IgE是Eos发挥ADCC效应所依赖的重要免疫球蛋白,感染旋毛虫小鼠的IL-4和IL-5表达量明显升高,故说明IgE是小鼠旋毛虫感染急性期重要的抗体。