高尔基体蛋白73单克隆抗体的制备和鉴定

目的探讨高尔基体蛋白73(GP73)鼠源单克隆抗体的制备方法并进行鉴定。方法用GP73重组抗原蛋白免疫5只小鼠获得血清抗体,免疫小鼠脾细胞与sp2/0骨髓瘤细胞融合,经过筛选后选择GP73抗体阳性杂交瘤细胞进行克隆化培养,通过腹水制备获得高特异性和高效价的GP73单克隆抗体(单抗)。结果成功筛选出11株能稳定分泌特异性GP73单抗的杂交瘤细胞株,经多次复苏传代仍能稳定分泌特异性强、效价高的抗体。11株单抗均能结合天然状态下的GP73蛋白,与无关蛋白均无交叉反应,提示有较强的特异性。应用筛选出的配对GP73单抗可检测出浓度为1ng/ml的GP73基因工程表达抗原。结论制备的GP73杂交瘤细胞株分泌的抗体对GP73蛋白具有特异亲和性,并且有较高效价,为GP73蛋白诊断试剂的研制提供了关键技术基础。     

人脑肌酸激酶单克隆抗体的制备及鉴定

用事故死亡者脑组织中提纯的人脑肌酸激酶（ＣＫ－ＢＢ）对ＢＡＬＢ／Ｃ小鼠进行免疫，应用杂交瘤技术将免疫小鼠脾细胞分别与２种骨髓瘤细胞（ＮＳ－１，６５３）融合，筛选得到８株能稳定分泌ＩｇＭ抗体的杂交瘤细胞。对分泌抗体经酶联免疫电泳转移试验（Ｗｅｓｔ－Ｂｌｏｔ）进行了鉴定，其中４种抗体能特异地与ＣＫ－ＢＢ的ＳＤＳ－ＰＡＧＥ电泳带结合。提示这些单克隆抗体有可能应用于肌酸激酶的结构功能研究和临床检验中。     

单克隆抗体检测广州管圆线虫循环抗原的研究

目的制备抗广州管圆线虫成虫可溶性抗原单克隆抗体,用于广州管圆线虫循环抗原（CAg）的检测。方法广州管圆线虫成虫可溶性抗原免疫BALB／c小鼠,取小鼠脾细胞与骨髓瘤细胞（SP2／0）融合,用酶联免疫吸附试验（ELISA）和免疫印迹试验对所获得的细胞克隆进行筛选和鉴定,双抗体（单抗3F1和4H2）夹心ELISA法检测实验感染广州管圆线虫大鼠、小鼠和广州管圆线虫病人血清中的CAg。结果获得了3株稳定分泌抗广州管圆线虫成虫可溶性抗原单抗的杂交瘤细胞株,经鉴定2株为IgG1（3F1、4H2）,1株为IgM（2A2）,杂交瘤细胞培养上清效价分别为1：25600、1：25600和1：12800,诱生腹水ELISA效价分别为1：80000、1：80000和1：40000。3株单抗均识别广州管圆线虫成虫相对分子量约为15000的蛋白。实验感染广州管圆线虫大鼠、小鼠血清CAg检出率分别为84．2％（48／57）和87．2％（41／47）,广州管圆线虫病人血清CAg检出率为86,4％（19／22）,与日本血吸虫、囊虫、肺吸虫、旋毛虫病人血清无交叉反应。实验感染小鼠血清CAg第2周即呈阳性反应,第4周A。。值达到高峰。结论建立了敏感性高、特异性强的3P1、4H2双抗体夹心ELISA检测广州管圆线虫循环抗原法,可用于广州管圆线虫病的临床诊断、疗效考核和流行病学调查。     

抗人脑源性神经营养因子单克隆抗体的制备及初步鉴定

OBJECTIVE: To prepare monoclonal antibodies (mAbs) against human brain-derived neurotrophic factor (BDNF). METHODS: BALB/C mice were immunized with purified BDNF protein in conjunction with acid-treated Salmonella (antigen:thallus=1:5), and mAbs were subsequently derived by hybridoma technique. RESULTS: Three hybridoma cell lines secreting anti-BDNF mAbs were obtained, designated as B1, B2 and 4D1 respectively and all categorized into IgG1 subtype. The titers of the mAbs in the ascitic fluid of the rats ranged from 1x10(6) to 1x10(5), and their relative affinities were B2>B1>4D1. CONCLUSION: mAbs against BDNF are successfully prepared, which can be instrumental for further study of the expression and distribution of BDNF in vivo, and the detection of BDNF produced by genetic engineering.     

快速ELISA法检测单克隆抗体

本文采用HRP-SPA快速ELISA法检测筛选葡萄球菌A蛋白单克隆抗体,使整个检测流程由常规法的5～6小时以上缩短为1小时。常规法与快速法OD值比较,用配对t检验结果:1O~(-1)组t=1.625 P>0.10;10~(-2)组t=1.345 P>0.20,均无显著性差异。证明快速法可替代常规法,具有快速、简便、特异、敏感等特点,是检测单克隆抗体较好的方法。     

单克隆抗体分析单纯疱疹病毒的抗原性

用15种抗HSV型共同性McAb相2种分别抗HSV-1和HSV-2的型特异性McAb,分析了43株HSV临床株的抗原性。间接免疫荧光试验和改良ELISA的分机结果表明,从宫颈炎患者分离出的15株HSV中,1株为HSV-1,14株为HSV-2;从口唇和眼部感染病变中分离出的28株HSV均为HSV-1.用15种型共同性McAb对HSV的抗原性分析表明43株HSV分离株中,22株(51.2％)可与所有型共同性McAb反应,21株(48.8％)仅与部分McAb反应。结果表明,HSV临床分离株间及不同的HSV参考株间在抗原性上有明显差异,其原因有待进一步研究。     

一组抗人T淋巴细胞表面抗原单克隆抗体的制备及鉴定

用鼠细胞融合杂交瘤技术,获得3株分泌抗人T淋巴细胞表面抗原的单克隆抗体杂交瘤细胞株,分别为SMU_1、SMU_2、SMU_3,为IgG_1类,不与补体结合。间接免疫荧光法表明,SMU_1、SMU_3分别与50.3±6.42%和51.5±6.37%的周血单个核细胞反应,SMU_2与68.89±9.92%的周血半个核细胞及74.68±8.08%的成熟粒细胞反应,3株单抗的分子量为54～62kD(未还原)。调变试验及竞争抑制试验表明SMU_1、SMU_3与WuT_3识别相同的抗原分子,但为不同的表位。SMU_2为一非系限性单抗。本组单抗对研究T淋巴细胞分化及临床白血病免疫分型是有意义的。     

在使用杂交瘤技术制备纯化单克隆抗体中应用BALB/c小鼠的几点体会

自 1975年英国剑桥大学分子生物学研究室的Kohler和Milstein创立杂交瘤单克隆抗体技术以来 ,该技术的应用和推广为所有制备和使用特异性抗体的研究提供了全新的手段和制剂[1] 。采用何品系的动物进行免疫 ,是获得高质量单克隆抗体的一个关键。我们在使用杂交瘤技术制备纯化的单克隆抗体过程中 ,多次应用了BALB c品系的小鼠 ,并对不同周龄和性别的小鼠产生单克隆抗体的能力进行了对比观察 ,现将体会介绍如下。1　材料与方法1.1　实验动物　北京种 7～ 13周龄BALB c小鼠 ,按 7～ 8周龄、9～ 10周龄、11～ 13周龄分组。1.2　试剂　降植烷pr…     

人源性单克隆抗体识别的血清卵巢癌相关抗原

应用体外致敏和ＤＮＡ转染技术构建的永生化Ｂ淋巴细胞系所产生的抗卵巢癌人源性单克隆抗体ＡＴ４为探针，所建立的夹心ＥＬＩＳＡ法测定了人血清卵巢癌相关抗原ＣＡＴ４。以２０例正常妇女血清的Ａ４９０均值加３个标准差（Ｘ±３Ｓ）之和（０．１９Ａ４９０Ｕ）为阳性阈值，对２０例卵巢癌和１２例卵巢囊肿病人的血清进行了检测，结果发现，卵巢癌为１５／２０阳性，卵巢囊肿２／１２阳性；此外，２例卵巢癌腹水及卵巢癌细胞ａｏ１０／１７培养上清液均为阳性。经统计学分析，ＡＴ４识别的卵巢癌相关抗原ＣＡＴ４存在于卵巢癌病人血清中，其敏感性为７５％，特异性为８３．３３％。因此，ＡＴ４－ＥＬＩＳＡ对于人血清卵巢癌相关抗原的测定，具有较好临床应用前景。     

单克隆抗体酶联免疫吸附测定甲胎蛋白方法的建立

应用二种抗甲胎蛋白(AFP)不同抗原决定簇的单克隆抗体分别与纤维素及酶结合,建立酶联免疫吸附测定(ELISA)法。应用这种方法测定18例人血清标本,结果与放射酶免疫测定比较,二者趋于一致。此外,本文对单克隆抗体的ELISA与抗血清的RIA进行了比较与讨论。     

人白细胞介素4单克隆抗体的研制及其鉴定

应用脾内免疫法免疫BALB/c小鼠,进行细胞融合,获得两株分泌IgG型抗人白细胞介素4单克隆抗体的杂交瘤细胞。用间接ELISA法可测出的抗原量100pg/ml;抗体的效价细胞培养基上清达1:16,腹水达1:1×10~(-5)。对E.coli表达的重组IL_4、商品化的IL_4及天然IL_4呈阳性反应,与E.coli蛋白及重组IL_1、IL_2、IL_3、IFNa及TNFa无交叉反应。     

抗胃癌细胞单克隆抗体的制备

作者用新鲜胃癌组织匀浆免疫ＢＡＬＢ／ｃ小鼠，制备抗胃癌细胞单克隆抗体（ＭｃＡｂ）。一次融合率为９２．８％，获得分泌特异性ＭｃＡｂ杂交瘤细胞１５株，阳性率１３．２％，三次克隆纯化后阳性率１００％，在体外培养１５０余天，分泌能力稳定。选择ＱＹ－１，ＱＹ－２，ＱＹ－３，ＱＹ－４４株ＭｃＡｂ进行鉴定。４株ＭｃＡｂ对正常纤维组织、红细胞等呈阴性反应，而对胚胎的消化道上皮均呈强阳性反应，ＱＹ－１～４ＭｃＡｂ的胃癌反应阳性率为９４．６～１００％，肝癌３３．３～６０．０％，大肠癌为５．０～３５．０％，萎缩性胃炎不伴肠化型为０％，伴肠化型为０～１５．０％。本文结果表明ＱＹ－１～４ＭｃＡｂ相应抗原为非ＣＥＡ、ＡＦＰ成份的消化道肿瘤抗原，ＱＹ－１～４ＭｃＡｂ具有较高的肿瘤特异性。     

肺癌与人类巨细胞病毒感染关系的初步研究

目的：探讨肺癌与人类巨细胞病毒（HCMV）感染的关系。方法：对88例肺癌及117例肺非癌患者，用酶联免疫吸附试验（ELISA）法检测血清HCMV－IgG，IgM抗体，用聚合酶链反应（PCR）法检测尿HCMV－DNA。同时检测其中64例肺癌及67例肺非癌患者的病灶局部冲洗或支气管肺泡灌洗回收液HCMV－DNA。对肺癌组中抗癌化疗的患者于每一化疗周期复查血清HCMV－IgM，尿HCMV－DNA。结果：肺癌组血清HCMV－IgM阳性率26．1％，病灶局部冲洗或支气管肺泡灌洗回收液HCMV－DNA阳性率26．6％，均显著高于肺非癌组（P＜0．01）；血清HCMV－IgG及尿HCMV－DNA阳性率两组未见明显差别。42例肺癌到化疗第二周期时，血清HCMV－IgM16例由阴性转阳性，尿HCMV－DNA6例转阳性。结论：肺病与HCMV感染有统计学上的相关性；抗癌化疗使肺癌患者HCMV活动性感染明显增多，值得重视。     

风疹病毒单克隆抗体的研究

用风疹病毒(RV)Gos-10株免疫BALB/c小鼠,取其脾细胞与Sp2/0细胞融合,用ELISA法筛选分泌RV McAb的杂交瘤细胞6株,经克隆培养后发现其中的1A_9株能稳定分泌高效价特异性McAb,经鉴定为IgG2a,经ELISA检测、抗原吸收试验、中和试验及HI试验征明该McAb是种特异性的,能与各株RV发生交叉反应,而与其它种病毒不发生反应,证明此McAb对RV抗原有高度特异性与敏感性,可用以制备诊断试剂,实现风疹的早期、快速诊断和基础理论研究。     

组合单克隆抗体提高人胃癌细胞系及组织反应性的研究

采用７种识别不同抗原决定簇的胃癌单克隆抗体３Ｈ１１、３Ｇ９、ＰＤ４、ＰＣ１、ＰＣ６、ＢＢ４．３、３Ｆ４在单一和配对组合应用情况下，观察其与人胃癌细胞系及胃癌组织的反应性。单抗３Ｇ６９、ＢＢ４．３及其组合作用于胃癌细胞系上，经流式细胞仪分析３Ｇ９、ＢＢ４．３与胃细胞结合的膜荧光阳性率分别为７４．２％和５４．９％。平均膜荧光强度分别为５３．６和６５．８．两者合后，在相同抗体浓度下，膜荧光阳性率为９７．４％（Ｐ＜０．０１）；平均膜荧光强度为１２５．５（Ｐ＜００１）．２６例胃癌组织冰冻切片红ＡＢＣ免疫过氧化物酶染色法显示，３Ｇ９、ＢＢ４．３经合后，在相同抗体浓度下与单一单克隆抗体相比，胃癌细胞着染范围增大，染色强度增高。阳性率由单一单克隆抗体的５０．０％，６５．４％，提高到组合后的９６．０％（Ｐ＜０．０１）．单克隆抗３Ｇ９与ＢＢ４．３组合后作用于正常胃癌组织均呈阴性反应，表明单克隆抗体经组合后并未降低单危险抗体的选择性。因此，合理采用组合的单克隆抗体可提高单克隆抗体与人胃癌细胞系及组织的反应性，降低抗原表达的异质性，从而提高单克隆抗体的载体效应。     

原发性肝癌与乙型肝炎病毒感染的关系

采用RPHA 法和ELISA 法对79例原发性肝癌患者和26例胃癌患者做了HBsAg、HBcAg 和抗-HBc 三项指标的检测,并且以胃癌患者为对照组,就原发性肝癌患者的各项感染指标做了比较,发现原发性肝癌与HBV 的感染有密切关系。文章就这一关系做了初步探讨。