肝癌组织survivin的表达与凋亡,增殖和p53的关系

目的：研究肝癌survivin的表达与细胞增殖、凋亡以及053表达的关系．方法：应用免疫组化法检测原发性肝癌组织42例、癌旁肝硬化组织34例、正常肝组织10例中survivin,p53,增殖细胞核抗原（PCNA）的表达．应用TUNEL法检测细胞凋亡．结果：在42例肝癌组织中survivin阳性30例（71．4％）,显著高于癌旁肝硬化组织（11．8％）和正常肝组织（0％,P〈0．001）．肝癌中survivin蛋白的高表达与病理分级（P=0．003）,p53蛋白水平（P=0．008）、细胞增殖凋亡比（P=0．001）及患者生存时间（P=0．002）存在显著相关性,而与年龄、性别、肿瘤大小、临床分期、门脉癌栓（局部转移）无显著相关（P〉0．05）．结论：肝癌组织survivin高表达在打破肝癌细胞的增生和凋亡之间的平衡中起着重要作用．Survivin可能抑制p53阴性肝癌细胞的凋亡,在肿瘤细胞的进一步恶性转化中发挥作用．     

薏苡仁提取物对人肝癌细胞增殖、凋亡及p53表达的影响

目的：探讨薏苡仁提取物（康莱特注射液,KLT）抗肝癌的作用机制。方法：利用MTT法、免疫组化法及电镜观察34例肝癌患者的癌细胞在体外培养和经KLT处理后的变化,并与对照组比较,结果：（1）KLT对肝癌细胞增殖有抑制作用,可达30％以上。（2）经KTL处理后的肝癌细胞有明显的凋亡现象和p53增高,与对照组比较有显著性差异（P＜0．05）。（3）电镜下观察,肝癌细胞形态改变,出现细胞膜小泡和凋亡小体形成等调亡细胞的特征性变化。结果：KLT抗肝癌的作用是通过诱发细胞凋亡或上调p53基因表达,引起细胞坏死而达到治疗目的的。     

突变型p53与胃癌细胞多药耐药性关系的研究

目的：研究胃癌细胞中突变型p53和MDR-1基因的表达及其与不同化疗药物敏感性的关系。方法：将突变型p53、sv40Tag（封闭p53）导入胃癌细胞株SGC-7901中，研究胃癌细胞中MDR-1基因表达的变化；用MTT法比较各组细胞对化疗药的敏感性。结果：导入突变型p53细胞株的MDR-1基因mRNA表达比导入突变型p53＋sv40Tag细胞株、对照组MDR-1基因mRNA表达强；导入突变型P53细胞株对5-氟脲嘧啶（5-Fu）耐药性与导入突变型P53＋sv40Tag细胞株和对照组比较均有显著性差异（P〈0．05），而后两者之间耐药性差异无显著性（P〉0．05）；导入突变型p53细胞株和导入突变型p53＋sv40Tag细胞株对阿霉素（ADM）耐药性与对照组比较均有显著性差异（P〈0．05），而前两者之间对ADM的耐药性差异无显著性（P〉0．05）。导入突变型p53细胞株、导入突变型p53＋sv40Tag细胞株及对照组细胞株对顺铂（CDDP）耐药性均无显著性差异（P〉0．05）。结论：突变型p53能促进MDR-1 mRNA表达，与肿瘤细胞发生多药耐药密切相关。     

奥曲肽联合长春新碱对胃癌细胞的抑制作用

目的：探讨生长抑素类似物-奥曲肽（OCT）联合细胞毒化疗药物长春新碱（VCR）对胃癌细胞系SGC一7901的抑制作用和机制。方法：用M1Tr比色法和免疫组化法分析OCT、VCR和OCT联合VCR对胃癌细胞生长、细胞凋亡调节基因p53表达的影响。结果：当OCT为1×10^-5g／L时,对胃癌细胞的抑制作用最明显;OCT联合VCR对胃癌细胞的抑制高于VCR组（P〈0．05）;OCT上调p53的表达,也可以协同VCR上调p53的表达vs对照组,P〈0．05）。结论：OCT可以通过上调p53的表达诱导胃癌细胞凋亡,联合应用可以增强VCR对胃癌细胞的抑制作用。     

RNA干扰沉默bcl-2基因对人黑素瘤细胞生长抑制研究

目的：探讨应用RNAi技术下调bel-2基因表达后对人黑素瘤M14细胞株生长的影响。方法：采用人黑素瘤川4细胞株,利用人工合成的bcl-2靶向小分子干扰RNA（small interference RNA,siRNA）转染细胞,MTT法测细胞增殖情况。结果：免疫组化可见25例实验组细胞爬片均表达bcl-2,表达强度弱阳性,25例空白对照组和阴性对照均表达bel-2,表达强度强阳性,实验组细胞与空白对照组和阴性对照组相比bcl-2表达明显减低,差异有统计学意义（P〈0．05）,空白对照组和阴性对照组bcl-2表达差异无统计学意义（P〉0．05）,MTT法测定显示：转染48h后,实验组7组细胞平均吸光度OD值0．384±0．026,空白对照组7组细胞平均吸光度OD值0．590±0．032,阴性对照组7组细胞平均吸光度OD值0．541±0．034,实验组细胞吸光度降低,与空白对照组及阴性对照组相比差异有统计学意义（P〈0．05）,而空白对照组和阴性对照组两组间差异无统计学意义（P〉0．05）,实验组细胞增殖抑制率34．9l％,阴性对照组细胞增殖抑制率8．30％,差异有统计学意义（P〈0．05）,显示实验细胞增殖减慢。结论：Bcl-2RNAi能显著降低人黑素瘤M14细胞株的bcl-2蛋白表达,有效押制癌细胞的生长,为黑素瘤的治疗提供了一种新的治疗策略。     

CB125等四种合成物对人肝癌细胞体外增殖的抑制作用

目的观察CB125等四种合成物对人肝癌SMMC7721细胞体外增殖的抑制作用。方法采用MTT比色法，观察CB125等四种合成物对人肝癌SMMC7721细胞增殖的影响。结果1．CB125对人肝癌SMMC7721细胞的生长抑制浓度为10^-8～10^-4 mol.L^-1，（与对照组比较，P〈0．01。），抑制率为55％～73％，呈现明显的剂量依赖性；2．CB97对人肝癌SMMC7721细胞的生长抑制浓度为10^-17～10^-4mo1．L^-1（与对照组比较，P〈0．05或P〈0．01。），抑制率为60％～63％；3．JS86对人肝癌SMMC7721细胞的生长抑制浓度为10^-7～10^-4mol．L^-1（与对照组比较，P〈0．01。），抑制率为59％～72％，呈现明显的剂量依赖性；4．JS146对人肝癌SMMC7721细胞的生长抑制浓度为10^-6～10^-14mol．L^-1（与对照组比较，P〈0．05或P〈0．01。），抑制率为60％～65％。结论CB125等四种合成物对人肝癌SMMC7721细胞的生长均有抑制作用。其中CB125抑制作用较明显。     

莪术油抗小鼠结肠癌效应的实验研究

目的 探讨莪术油对小鼠结肠癌抑制作用及机制。方法 采用MTT法检测莪术油对癌细胞的生长抑制作用；建立荷瘤鼠模型，观察荷瘤鼠的肿瘤大小及生存时间；TUNEL法检测原位细胞凋亡。结果 莪术油体外可明显抑制小鼠CT26结肠癌细胞生长，其浓度与细胞生长抑制率成正比；莪术油明显抑制肿瘤生长（P〈0．05）；莪术油组对荷瘤鼠明显延长平均生存时间（P〈0．05）；莪术油明显促进荷瘤鼠结肠癌细胞的原位凋亡（P〈0．05）。结论 莪术油能够诱导机体抗肿瘤反应，促进细胞凋亡可能是其主要作用机制。     

miRNA-34c对肺腺癌A549细胞的辐射增敏效应

目的研究肺腺癌A549细胞中miRNA-34e的辐射增敏效应。方法单独转染miRNA．34e序列或单独照射或转染和照射联合处理细胞后,采用MTT比色法检测细胞生长抑制率,流式细胞术检测细胞周期,藻红B染色法观察细胞凋亡率,Westernblot检测p53蛋白的表达。结果转染联合照射处理组的抑制率及凋亡率都较单独转染或单独照射组明显增高（均P〈0．05）,且随miR-34e转染浓度的增加而增高（均P〈0．05）。细胞周期检测结果显示,细胞明显阻滞于G1／G0期（P〈0．05）。联合处理的细胞p53蛋白表达量较单独照射组增加,且呈miRNA．34c浓度依赖性增加（P〈0．05）。结论miRNA-34c对肺腺癌细胞A549有辐射增敏效应,可强化p53蛋白的表达,诱导细胞G1／G0期阻滞和凋亡。     

Apoptin基因诱导膀胱癌耐药细胞凋亡的研究

目的观察Apoptin基因对膀胱癌耐药细胞株EJ／MDR细胞的杀伤效果，探讨其可能的机制。方法用脂质体将Apoptin基因导人EJ／MDR细胞，通过RT-PCR法检测ApoptinmRNA的表达，同时用SABC免疫组化法分析Apoptin和p53的表达。采用细胞计数法检测细胞生长抑制率，TUNEL法标记凋亡细胞，流式细胞仪检测细胞周期的变化。结果转入Apoptin基因后，EJ／MDR细胞的生长明显受抑制（P％0．05）。细胞周期分析可见凋亡峰，凋亡率35％。细胞中可见Apoptin阳性表达（P〈0．05），p53表达无显著性差异（P〉0．05）。凋亡细胞在荧光显微镜下形成凋亡小体。结论转入Apoptin基因可显著促进EJ／MDR细胞的凋亡，Apoptin诱导的凋亡不依赖功能性p53的生成。     

蛋白酶体抑制剂对大肠癌细胞增殖和凋亡的影响

目的研究蛋白酶体抑制剂MG132对大肠癌细胞系HCT-8增殖和凋亡的影响及其机制。方法将不同浓度MG132分别作用于HCT-8细胞,MTT法测其对HCT-8细胞增殖的抑制作用,流式细胞术检测细胞凋亡率,免疫细胞化学检测NF—κB、caspase3蛋白表达。结果随着MG132剂量、作用时间的增加,细胞增值抑制率增加（P〈0．01）;MG132作用细胞48h后,随着药物浓度的增加,细胞凋亡率增加（P〈0．01）;细胞内NF—kBp65的表达减少而caspase3的表达增加（P〈0．01）。结论MG132能显著抑制大肠癌细胞增殖并诱导其凋亡,可能与下调NF—κB表达、促进caspase3表达有关。     

木犀草素对人肝癌细胞HepG2的促凋亡作用

目的：研究木犀草素（Luteolin）对人肝癌细胞HepG2的生长抑制与促凋亡作用机制。 方法：用梯度浓度木犀草素作用于多种肿瘤细胞,以MTT法检测药物对细胞的生长抑制作用,以流式细胞术检测HepG2细胞内活性氧水平,以Annexin V-FITC/PI双染法利用流式细胞术检测HepG2细胞凋亡情况,以Western-blot检测HepG2细胞凋亡相关通路蛋白表达水平。 结果：木犀草素对多种肿瘤细胞的生长具有浓度和时间依赖的抑制作用（72 h最高抑制率超过60%）,并能有效降低HepG2细胞内活性氧水平（约降低41.11%）。木犀草素作用下HepG2细胞凋亡率可达14.43%左右。木犀草素能够降低HepG2细胞内iASPP蛋白表达水平并上调p53与ASPP2蛋白表达。 结论：木犀草素能够抑制肿瘤细胞生长,降低HepG2细胞内活性氧水平,并调节细胞内相关凋亡通路蛋白水平,从而诱导HepG2细胞凋亡。     

叶下珠复方Ⅱ号对人肝癌HepG2细胞增殖和凋亡作用

目的探讨叶下珠复方Ⅱ号（CPUⅡ）对体外培养的人肝癌细胞Hep劬增殖和凋亡的作用。方法采用四甲基偶氮唑盐比色法（MTT法）,比较不同浓度的叶下珠复方在不同作用时间对体外培养的HepG2细胞增殖的影响;应用流式细胞术（FCM）结合AnnexinV—FITC,PI荧光双染法观察CPUⅡ诱导24h后人肝癌Hep晚细胞的凋亡率。结果MTT结果显示,人肝癌HepG2细胞经叶下珠复方Ⅱ号处理一定时间后,增殖比率明显下降,2．60mg／ml以上的叶下珠Ⅱ号对人肝癌HepG2细胞株的增殖有抑制作用（P〈0．01;48hP〈0．05）,且呈一定的量效关系;FCM结果显示,随着叶下珠复方Ⅱ号浓度的增加（2．6、26．0、130．0mg／ml）,细胞的凋亡率也逐渐增加,差异有统计学意义（P〈0．01）。结论叶下珠复方Ⅱ号能够抑制人肝癌HepG2细胞生长和增殖,诱导人肝癌Hep岛细胞凋亡,呈明显的量效关系。     

p53基因在茉莉酸甲酯诱导HepG2细胞凋亡过程中表达变化的实验研究

目的探讨p53基因在茉莉酸甲酯诱导HepG2细胞凋亡过程中的表达变化.方法 RT-PCR检测HepG2细胞中p53mRNA表达,免疫细胞化学检测HepG2细胞p53蛋白表达.结果 MeJA作用HepG2细胞48h后：p53 mRNA表达水平明显下降（P〈0.01）;p53蛋白表达水平明显降低（P〈0.01）.结论 MeJA通过下调mtp53及其蛋白的表达,相对增加了wtp53的比例,使细胞周期相关蛋白的表达发生改变,引起细胞周期阻滞和细胞凋亡,从而发挥抗肝癌作用.     

健脾化瘀方对肝癌HepG2细胞生物行为学的影响

目的：本研究旨在探讨：①健脾化瘀方体外对人肝癌细胞株HepG2增殖、黏附和侵袭的生物行为学影响;②健脾化瘀方体外对人肝癌细胞株HepG2凋亡的影响。方法：①采用MTT法、黏附实验、Transwell小室侵袭迁移实验,观察不同浓度的健脾化瘀方对人肝癌细胞株HepG2增殖、黏附和侵袭的影响;②利用流式细胞仪,AnnexinV/PI双染色法,研究不同浓度健脾化瘀方对人肝癌细胞株HepG2早期凋亡的诱导作用。结果：①健脾化瘀方有抑制人肝癌细胞株HepG2增殖的作用,并呈一定的浓度依赖性：同一时间不同浓度各组细胞的生长抑制率有明显差异（P〈0.01）。②健脾化瘀方高、中浓度（2、1mg/mL）作用HepG 2细胞40、60和120min时,细胞的黏附能力明显降低（P〈0.01）。健脾化瘀方作用HepG 2细胞24h后,侵袭的细胞数减少（P〈0.05）。③健脾化瘀方对人肝癌细胞HepG2作用48h后,有诱导人肝癌细胞株HepG2凋亡的作用（P〈0.05）。结论：①健脾化瘀方对人肝癌细胞株HepG2的增殖具有抑制作用;②健脾化瘀方能抑制人肝癌细胞株HepG2的黏附能力和侵袭能力;③健脾化瘀方有诱导人肝癌细胞株HepG2凋亡的作用。     

17-AAG对人肝癌HepG2细胞株增殖和凋亡作用的影响

目的观察17-AAG对人肝癌HepG2细胞增殖和凋亡的影响并探讨其机制。方法四甲基偶氮唑蓝（MTT）比色法检测不同浓度的17-AAG对肝癌HepG2细胞增殖的影响;荧光显微镜观察碘化丙啶（PI）染色的细胞凋亡形态;流式细胞仪检测分析细胞周期分布和凋亡率的变化;免疫组化法检测肝癌HepG2细胞中重组人血管内皮生长因子相关蛋白（VEGF-C蛋白）表达水平变化。结果不同浓度的17-AAG呈时间、剂量依赖性抑制肝癌HepG2细胞的生长增殖（P〈0.05）;流式细胞仪分析显示,17-AAG作用HepG2细胞48 h后G2/M期细胞比例上升,G1/G0期细胞比例下降;0.63、1.25、2.5、5.0μmol/L 17-AAG作用HepG2细胞48 h后的凋亡率分别为（3.23±1.43）%、（9.71±2.20）%、（14.15±2.34）%、（23.65±2.58）%;随着药物浓度的加大,VEGF-C蛋白表达逐渐减少。结论 17-AAG对肝癌HepG2细胞有抑制增殖、诱导凋亡的作用,并能抑制VEGF-C蛋白的表达。     

联合应用干扰素α-2b及选择性环氧化酶2抑制剂对肝癌细胞抑制作用的研究

目的观察干扰素α-2b(IFN-α-2b),选择性环氧化酶2(COX-2)抑制剂非甾体类消炎药塞来昔布单用以及两者联合应用时,对人肝癌细胞株HepG2的生长抑制作用及同时检测药物作用后COX-2和血管内皮生长因子(VEGF)及Bcl-2表达的情况,探讨药物作用的机制。方法 HepG2细胞根据所加药物不同分为不同浓度的IFN-α-2b组(1250、2500、5000、10 000、20 000、40 000 U/mL)、塞来昔布组(25、50、100、200μmol/L)、联合用药组(IFN-α-2b 5000 U/mL+塞来昔布50μmol/L、IFN-α-2b 5000 U/mL+选择性COX-2 100μmol/L)。MTT法检测不同时间(24、48 h)各组细胞增殖抑制率,流式细胞术检测细胞凋亡率,Western blot检测用药前后COX-2、VEGF、Bcl-2蛋白在HepG2细胞中的表达变化。结果不同浓度的塞来昔布和干扰素对HepG2细胞均有抑制作用,且联合效果明显优于单用,各组与对照组差异有统计学意义(P<0.05);流式细胞术分析:塞来昔布50μmol/L组、塞来昔布100μmol/L组、IFN-α-2b 5000 U/mL组、IFN-α-2b 5000 U/mL+塞来昔布50μmol/L组、IFN-α-2b 5000 U/mL+塞来昔布100μmol/L组细胞凋亡率分别为(14.93±0.79)%、(25.43±0.89)%、(20.52±1.46)%、(27.12±3.34)%、(48.17±2.04)%,与阴性对照组(8.73±0.83)%比较差异均有统计学意义(P<0.05);塞来昔布单用及联合IFN-α-2b作用48 h后,各组COX-2、VEGF、Bcl-2蛋白的表达下调,呈剂量依赖性,联合用药组较单药组作用明显。结论干扰素α-2b和塞来昔布均有抑制肝癌细胞HepG2增殖的作用,同时对细胞具有凋亡诱导作用,亦能抑制细胞中COX-2、VEGF、Bcl-2的表达。上述抑制作用随药物浓度的增加、作用时间的延长而增强,联合作用更强。     

重楼水提物对肝癌细胞HepG2增殖及凋亡的影响

目的 探讨重楼水提物对人肝癌HepG2细胞株增殖和凋亡的影响.方法 以体外培养的肝癌HepG2细胞为研究对象,MTT法检测重楼对肝癌HepG2细胞增殖的抑制作用,流式细胞仪Annexin V/PI 双染法检测重楼对其凋亡的影响,ELISA法检测Bcl-2、Bax 蛋白表达的情况.结果 不同浓度重楼水提物能有效抑制HepG2细胞的增殖,且呈时间及浓度依赖性,作用效果在12 μg/ml时抑制效果最好（P〈0.01）.12 μg/ml重楼水提物作用HepG2细胞24 h、48 h后,结果表明HepG2随着重楼水提物作用时间的延长,细胞凋亡率增加,与阴性对照组相比,差异有统计学意义（P〈0.01）.12 μg/ml重楼水提物作用HepG2 细胞24 h后,Bcl-2蛋白表达降低,Bax蛋白表达增加,与阴性对照组相比,差异有统计学意义（P〈0.05）.结论 重楼水提物能抑制HepG2细胞的体外增殖,抑制作用表现出时效关系,其机制可能与促进细胞凋亡、降低Bcl-2蛋白表达、增加Bax蛋白表达有关.     

重组人p53腺病毒联合奥沙利铂对结肠癌细胞的生长抑制作用

目的观察外源p53基因在结肠癌细胞内的表达、对肿瘤细胞生长的影响,及对结肠癌细胞化疗敏感性的作用和机制。方法用重组人p53腺病毒注射液（rAd-p53）及奥沙利铂（OXA）单独及联合作用于结肠癌细胞株SW1116不同时间后,CCK-8法检测其对体外培养细胞的抑制率,免疫组织化学S-P法检测p53蛋白的表达情况,流式细胞仪（FCM）分析其细胞凋亡蛋白caspase3的表达情况。结果rAd-p53及OXA单独作用时,随药物浓度及作用时间的增加,细胞的生长抑制率逐渐增高;二者联合作用24 h,在较低浓度时细胞生长抑制率即明显增高（P值均〈0.05）;OXA（6.25μg/ml）与rAd-p53（5×105、5×106、5×107、5×108、5×109vp/ml）联合作用24 h后,与对照组比较,结肠癌细胞caspase-3蛋白的含量升高,但p53蛋白无明显升高。结论OXA和rAd-p53单药可抑制结肠癌细胞SW1116的生长,二者联合对结肠癌细胞的抑制作用增强;rAd-p53有增强OXA化疗敏感性的作用,其机制与通过线粒体途径激活下游的caspase-3诱导细胞凋亡有关。     

重组人p53腺病毒联合奥沙利铂对结肠癌细胞的生长抑制作用

目的观察外源p53基因在结肠癌细胞内的表达、对肿瘤细胞生长的影响,及对结肠癌细胞化疗敏感性的作用和机制。方法用重组人p53腺病毒注射液（rAd-p53）及奥沙利铂（OXA）单独及联合作用于结肠癌细胞株SW1116不同时间后,CCK-8法检测其对体外培养细胞的抑制率,免疫组织化学S-P法检测p53蛋白的表达情况,流式细胞仪（FCM）分析其细胞凋亡蛋白caspase3的表达情况。结果rAd-p53及OXA单独作用时,随药物浓度及作用时间的增加,细胞的生长抑制率逐渐增高;二者联合作用24 h,在较低浓度时细胞生长抑制率即明显增高（P值均〈0.05）;OXA（6.25μg/ml）与rAd-p53（5×105、5×106、5×107、5×108、5×109vp/ml）联合作用24 h后,与对照组比较,结肠癌细胞caspase-3蛋白的含量升高,但p53蛋白无明显升高。结论OXA和rAd-p53单药可抑制结肠癌细胞SW1116的生长,二者联合对结肠癌细胞的抑制作用增强;rAd-p53有增强OXA化疗敏感性的作用,其机制与通过线粒体途径激活下游的caspase-3诱导细胞凋亡有关。     

TRAIL重组蛋白诱导肝癌细胞HepG2凋亡的研究

目的研究重组人肿瘤坏死因子相关的凋亡诱导配体（TRAIL）蛋白诱导肝癌细胞HepG2的凋亡作用和意义。方法HepG2细胞经重组人可溶性TRAIL蛋白处理后,以MTT法测定细胞存活率、流式细胞术检测细胞凋亡指数。结果TRAIL蛋白对HepG2的作用存在较好的量效和时效关系,其最佳作用剂量和最佳作用时间分别为1 000 ng/ml和24h;1 000 ng/ml的TRAIL蛋白作用24 h后,HepG2肝癌细胞的存活率降至45%,凋亡指数达51%。结论TRAIL重组蛋白能通过诱导细胞凋亡的方式杀伤一定量的HepG2肝癌细胞,有可能成为潜在的抗肝癌新药。