HPLC法测定大鼠肝微粒体中洛伐他汀含量的方法学研究

目的:考察测定大鼠肝微粒体中洛伐他汀含量的方法学。方法:采用高效液相色谱法,内标为地西泮,色谱柱为Ulti-mateXB-C18,流动相为乙腈-水(70∶30),流速为1.0mL·min-1,检测波长为238nm,柱温为30℃,进样量为20μL。结果:大鼠肝微粒体中洛伐他汀检测浓度的线性范围为2.5～40μmol·L-1(r=0.9983),低、中、高浓度洛伐他汀溶液的日内RSD分别为5.44%、2.89%、2.83%,日间RSD分别为5.48%、1.84%、1.91%,方法回收率分别为(109.24±3.28)%、(104.82±5.92)%、(102.17±1.92)%,绝对回收率分别为(104.65±2.93)%、(113.72±6.25)%、(101.92±1.89)%。结论:方法学考察结果表明,本方法简单易行、灵敏度高,可用于肝微粒体中洛伐他汀的含量测定。     

HPLC法测定大鼠肝微粒体中睾酮的含量

目的:建立以高效液相色谱法测定大鼠肝微粒体中细胞色素P4503A4(CYP3A4)探针底物睾酮含量的方法。方法:色谱柱为Ultimate-XB C18,流动相为水-乙腈(50∶50),内标为地西泮,流速为1.0mL·min-1,检测波长为245nm,柱温为30℃,进样量为20μL。结果:睾酮生物样品检测浓度的线性范围为10.0～200.0μmo·lL-1(r=0.9995);低、中、高浓度的平均方法回收率分别为86.15%、103.10%、97.48%,平均相对回收率为111.15%、107.24%、100.78%,日内RSD分别为3.92%、2.46%、2.82%,日间RSD分别为2.98%、1.34%、2.41%。结论:本方法简便快速、灵敏度高、重复性好,可用于大鼠肝微粒体中CYP3A4活性的测定及相关研究应用。     

HPLC法测定大鼠肝微粒体中6-羟基氯唑沙宗的含量

目的：建立高效液相色谱法测定大鼠肝微粒体中6-羟基氯唑沙宗的含量.方法：采用Diamonsil C18柱（200 mm×215;4.6 mm,5 μm）,以甲醇-水-磷酸（45：55：0.1）为流动相,流速1.0 ml·min^-1,检测波长为296 nm.结果：6-羟基氯唑沙宗浓度在0.5 - 25 μmol·L^-1 范围内呈现良好的线性关系（r=0.999 1）,方法回收率为92.57% - 98.72%,提取回收率为76.38%-82.25%,日内、日间精密度RSD〈9%.结论：该方法可靠、准确、重复性好,可用于大鼠肝微粒体中6-羟基氯唑沙宗的含量测定及体外代谢研究.     

氯胺酮及其代谢物去甲氯胺酮在大鼠体液及组织中的检测及分布

目的:建立生物检材中氯胺酮及其代谢物去甲氯胺酮的检测方法,考察氯胺酮和去甲氯胺酮在大鼠体内的分布。方法:用高效液相色谱法(HPLC)检测生物检材中的氯胺酮及去甲氯胺酮;以10 mg·kg-1剂量给大鼠灌胃(ig),分别于给药后10 min,45 min,2 h和8 h处死,测定体液和组织中氯胺酮及去甲氯胺酮的含量。结果:建立起生物检材中氯胺酮及其代谢物去甲氯胺酮的HPLC法。所建方法在0.05-25.0μg.g-1浓度范围内线性关系良好,r2=0.999,萃取回收率大于75%;肝和肾中氯胺酮和去甲氯胺酮含量最高,其次为:脾、尿液、肺、脑、血液、心和肌肉。结论:所建方法准确、灵敏,适用于组织中氯胺酮及其代谢物去甲氯胺酮的分析鉴定;肝和肾可作为毒物分析的组织检材。     

HPLC法测定去甲斑蝥素的含量

目的：建立采用高效液相色谱法测定去甲斑蝥素原料药的含量。方法：色谱柱为C18（250mm×4．6mm,5μm）,流动相为甲醇-0．016mol·L^-1磷酸二氢钾溶液（17：83）（用磷酸调pH至3．1）,检测波长为210nm。结果：去甲斑蝥素能与杂质有较好的分离,在4～60μg·ml^-1范围内线性关系良好（r=0．9999）;平均加样回收率为99．62％（RSD=1．85％）。结论：方法简单,结果准确,重复性好,适用该产品的含量测定。     

HPLC法测定盐酸氯胺酮控释片中盐酸氯胺酮的含量

目的：建立盐酸氯胺酮控释片中盐酸氯胺酮的含量测定方法。方法：采用高效液相色谱法，以C19为固定相，乙腈－水（30：70）为流动相，检测波长为269nm。结果：盐酸氨胺酮在31－310μg.ml^-1范围内，其峰面积值与浓度具有良好的线性关系（r＝0．9991），该方法平均回收率为97．4％。RSD为0．66％（n＝5）。结论：该方法简便易行，精密度高、可做为该制剂的质量控制方法。     

HPLC法测定去甲乌药碱的含量

目的:改进去甲乌药碱原料药的HPLC测定方法.方法:采用Alltech公司Apollo Phenyl色谱柱(150mm×4.6mm,5μm),以0.05mo1·mL-1磷酸盐缓冲液(pH 3.0)-乙腈(90:10)为流动相,流速1.0mL·min-1,紫外检测波长284nm.结果:去甲乌药碱在0.01～0.50mg·mL-1范围内线性关系良好(r=0.999 9),最低检测限为0.5ng,日内RSD为0.99%,日间RSD为0.36%,相关杂质与去甲乌药碱分离良好.结论:该方法专属性强,简便快速,结果准确,可用作去甲乌药碱原料药的含量测定.     

人肝微粒体中尼莫地平及其脱氢代谢物的HPLC测定法及代谢动力学

目的：建立人肝微粒体中尼莫地平及其代谢物的HPLC测定法,并用本法研究尼莫地平在肝微粒体中代谢的动力学。方法：采用HPLC法,色谱柱为Hypersil C₁₈柱,流动相为乙腈—水(62∶38)检测波长UV 238 nm,样品用乙醚—正己烷(1∶1)提取。结果：本法的回收率为94.3%～98.5%,日内和日间RSD为1.45%～9.68%,尼莫地平和其脱氢代谢物的浓度分别在1.31～20.92 μg.mL^-1和122.7～4908.0 ng.mL^-1范围内与峰面积呈良好线性关系。在本实验条件下尼莫地平呈线性消除,而其脱氢代谢物呈线性增加。结论：尼莫地平在人肝微粒体内被迅速代谢,肝微粒体P450酶参与了尼莫地平的脱氢氧化。     

大鼠肝微粒体中有机锡抗癌化合物DBDCT的测定与酶促动力学研究

目的 建立测定大鼠肝微粒体中有机锡抗癌化合物DBDCT的方法并研究其相应的酶促动力学。方法 采用HPLC测定DBDCT在体外代谢系统中的酶促动力学,用Eadie-Hofstee法分析数据,求算酶促动力学参数Km和Vmax以及肝代谢速率Clin。结果 在体外代谢系统中,DBDCT代谢酶促动力学参数Km=159.07 μmol·L^-1,Vmax=2.813 μmol·(min·mg)^-1以及肝清除率Clin=V_max/Km=0.017 L·(min·mg)^-1。结论 此分析方法符合方法学验证要求且简单准确,可满足DBDCT体外代谢的研究。     

大鼠肝微粒体中有机锡抗癌化合物DBDCT的测定与酶促动力学研究

目的 建立测定大鼠肝微粒体中有机锡抗癌化合物DBDCT的方法并研究其相应的酶促动力学。方法 采用HPLC测定DBDCT在体外代谢系统中的酶促动力学,用Eadie-Hofstee法分析数据,求算酶促动力学参数Km和Vmax以及肝代谢速率Clin。结果 在体外代谢系统中,DBDCT代谢酶促动力学参数Km=159.07 μmol·L^-1,Vmax=2.813 μmol·(min·mg)^-1以及肝清除率Clin=V_max/Km=0.017 L·(min·mg)^-1。结论 此分析方法符合方法学验证要求且简单准确,可满足DBDCT体外代谢的研究。     

苯环喹溴铵在大鼠肝微粒体中的代谢转化研究

目的:建立检测大鼠肝微粒体中苯环喹溴铵代谢产物的方法,验证其在大鼠体内的代谢途径。方法:采用大鼠肝微粒体体外温孵法,建立液相色谱-质谱法测定并分析肝微粒体中苯环喹溴铵及其代谢物。色谱及质谱条件如下:色谱柱为TSK-gelODS-80Ts,流动相为甲醇-40mmol·L-1的乙酸铵水溶液(含0.1%甲酸)梯度洗脱;正离子模式,扫描型离子检测。结果:在体外代谢系统中,根据质谱碎片信息检测出6个代谢产物,分别是苯环喹溴铵的二羟基、单羟基和氧化产物。结论:建立的液相色谱-质谱法能够准确灵敏地测定大鼠肝微粒体中苯环喹溴铵的代谢产物,验证了在大鼠体内苯环喹溴铵的代谢部位在环戊烷基上。     

阿帕替尼对大鼠肝微粒体细胞色素P_(450)3A1酶活性的影响研究

目的:研究阿帕替尼对大鼠肝微粒体细胞色素P450(CYP)3A1酶活性的影响。方法:取SD大鼠随机分为空白对照组、地塞米松组(100mg·kg-1)和阿帕替尼高、中、低剂量组(100、50、25mg·kg-1),每组5只,灌胃给予相应药物,每日1次,除地塞米松组连续给药3d外,其余各组连续给药14d,采用高效液相色谱-紫外检测法,以睾酮为探针,测定睾酮经大鼠肝微粒体温孵后转化的代谢产物6β-羟基睾酮(6β-OHT)的生成速率,以评价各组CYP3A1酶活性。结果:空白对照组、地塞米松组和阿帕替尼高、中、低剂量组6β-OHT的生成速率分别为(3.41±0.39)、(23.36±1.76)、(4.25±0.48)、(3.82±0.40)、(3.48±0.74)nmo·lmg-1·min-1,与地塞米松组比较,阿帕替尼各剂量组6β-OHT的生成速率均明显降低(P<0.01)。结论:阿帕替尼对大鼠肝细胞CYP3A1酶活性无诱导作用。     

阿替洛尔的手性衍生化RP—HPLC法拆分及在鼠肝微粒体中的测定

目的：建立阿替洛尔两对映体在鼠肝微粒体中的ＲＰ－ＨＰＬＣ测定方法。方法：从鼠肝微粒体中提取阿替洛尔消旋体,采用手性衍生化试剂２,３,４,６－四－Ｏ－乙酰基－β－Ｄ－吡喃葡萄糖异硫氰酸酯（ＧＩＴＣ）对阿替洛尔消旋体进行柱前手性衍生化再以ＲＰ－ＨＰＬＣ拆分,测定鼠肝微粒体中阿替洛尔对映体含量。结果：建立了在碱性条件下从水相中用乙酸乙酯提取阿替洛尔,用ＧＩＴＣ进行柱前手性衍生化,以及用流动相ＮａＨ２ＰＯ     

高效液相色谱法测定血浆中氯胺酮对映体的浓度

目的:建立以高效液相色谱手性固定相法测定血浆中氯胺酮对映体浓度的方法。方法:色谱柱为Chirobiotic V手性柱,流动相为甲醇-冰醋酸-三乙胺(100∶0.02∶0.02),检测波长为269nm,流速为1mL·min-1,内标为非那西丁。结果:S-氯胺酮、R-氯胺酮分别在19.5～2600(r=0.9992)、26～2600ng·mL-1(r=0.9989)范围内线性关系良好,最低检测浓度分别为13.0、19.5ng·mL-1;相对回收率分别为99.48%～103.40%、98.53%～103.20%,绝对回收率分别为63.2%～73.1%、64.5%～72.3%;日内RSD分别为3.3%～6.4%、3.5%～5.7%,日间RSD分别为7.1%～9.7%、6.3%～9.9%。结论:本方法简便、准确、灵敏、快速、专属,可用于血浆中R-氯胺酮和S-氯胺酮的测定及药动学研究。     

尿液中氯胺酮及其代谢物的气相-质谱分析

目的:建立尿液样品中氯胺酮及其代谢物去甲氯胺酮、去氢去甲氯胺酮、脱氢去甲去氨氯胺酮的快速提取及气相-质谱(GC-MS)分析方法。方法:尿液用10%碳酸钠调节pH=9～10,乙醚液液萃取,GC-MS分析。结果:该方法可快速检测氯胺酮滥用者尿液中的氯胺酮原体及三个代谢物,同时检测包括苯丙胺类药物在内的其它药物。结论:该方法可快速进行氯胺酮滥用者尿液的分析。     

氯苄律定在离体大鼠简易肝微粒体的代谢动力学

目的　测试氯苄律定 (CPU 86 0 17)在离体大鼠肝简易微粒体中的代谢。方法　首先制备肝简易微粒体 (含肝细胞胞浆及部分线粒体 ) ,分别加入不同浓度的CPU 86 0 17,测定药物代谢速率、Vmax、Km。结果　测出肝代谢t1/ 2 为 1h ,Km为 0 0 31mmol/L ,Vmax为 891pmol/mg蛋白 /h。结论　肝内代谢速率较慢 ,可排除肝首过效应 ,亦未见肝酶饱和现象。     

HPLC法测定大鼠血浆中奥拉西坦的浓度

目的:建立大鼠血浆中奥拉西坦浓度的检测方法。方法:取大鼠8只,一次性灌胃给予奥拉西坦200 mg.kg-1,给药2 h后取血,采用高效液相色谱法检测其血药浓度。色谱柱:Symmetry shiedTMRP18;流动相:乙腈-水(3.2∶96.8,V/V),流速:0.8 mL.min-1;检测波长:210 nm;柱温:40℃;进样量:20μL。结果:奥拉西坦的保留时间为3.65 min;其检测浓度的线性范围为2～100 mg.L-1(r=0.999 8);低、中、高浓度血浆样品的绝对回收率分别为(91.1±5.17)%、(97.9±3.22)%、(98.4±1.99)%,方法回收率分别为(96.35±3.01)%、(101.40±3.41)%、(102.23±1.37)%;日内RSD分别为2.86%、4.38%、3.54%,日间RSD分别为3.25%、3.17%、3.14%;奥拉西坦血浆样品-40℃保存30 d及反复冻融3次后性质稳定,血浆样品处理后放置4 h对测定无影响。8只大鼠血浆样品中奥拉西坦的平均浓度为(35.58±10.83)mg.L-1。结论:本方法简便、准确、灵敏度高、重现性好,可用于大鼠血浆中奥拉西坦浓度的测定。     

大鼠肝微粒体中间尼索地平的HPLC法测定与酶促反应动力学

建立了HPLC法测定大鼠肝微粒体中的间尼索地平及相应的酶促反应动力学。采用C18色谱柱,乙腈-水（62∶38）为流动相,检测波长237nm,样品经氢氧化钠溶液碱化后用乙醚-正己烷（1∶1）萃取。间尼索地平在1.56～100μmol/L浓度范围内线性关系良好。本法的相对回收率为93.0%,RSD为3.75%;日内、日间RSD分别为6.04%和1.53%。     

氯苄律定在离体大鼠简易肝微粒体的代谢动力学

目的 测试氯苄律定（CPU-86017）在离体大鼠肝简易微粒体中的代谢。方法 首先制备肝简易微粒体（含肝细胞胞浆及部分线粒体），分别加入不同尝试的CPU-86017，测定药物代谢速率，Vmax、Vm。结果 测出肝代谢t1/2为1h,Km为0.031mmol/L,Vmax为891pmol/Lmg蛋白/h。结论 肝内代谢速率较慢，可排除肝首过效应，亦未见肝本科饱和现象。     

黄磷对大鼠肝微粒体Ca^2＋泵的影响

用离体实验和整体动物实验方法,发现不同浓度的黄磷对大鼠肝微粒体Ca~(2+)-ATP酶和~(45)Ca摄取有不同程度的抑制作用,并有随剂量增大而抑制作用加重的趋势,提示微粒体Ca~(2+)泵的损害在黄磷中毒性肝损害中具有重要作用。