乳腺癌髓系来源抑制细胞中IDO表达与调节性T细胞相关性及其临床意义的研究

  目的  研究不同期别乳腺癌组织中CD33+髓系来源抑制细胞(MDSCs)和Foxp3+调节性T细胞(Tregs)的分布情况, 探讨MDSCs中吲哚胺2, 3-双加氧酶(IDO)表达与Tregs分布关系及其临床意义。   方法  收集天津医科大学附属肿瘤医院2005年1月至2007年1月手术患者的乳腺癌石蜡切片50例, 采用免疫组织化学单染方法对肿瘤局部CD33+MDSCs和Foxp3+Tregs分布和比例进行检测; 采用免疫组织化学双染方法检测肿瘤原位浸润MDSCs中IDO的表达情况; 分析MDSCs中IDO表达与Tregs分布、比例及其他临床病理资料之间的相关性。   结果  Foxp3+Tregs和CD33+MDSCs细胞在乳腺癌组织中呈散在性分布。MDSCs中IDO表达水平与腋窝淋巴结转移密切相关(P < 0.05)。Foxp3+Tregs高表达组中MDSCs中IDO表达水平显著高于Foxp3+Tregs低表达或不表达组(P < 0.05)。   结论  MDSCs中IDO过表达可能有利于Tregs的募集和乳腺癌的转移。      

淋巴瘤细胞EL-4培养上清液对CD4＋CD25＋调节性T细胞比例的调节作用

目的探讨肿瘤细胞是否能上调CD4＋CD25＋调节性T细胞（Treg细胞）的比例。方法将小鼠淋巴瘤细胞株EL4培养上清液与正常小鼠脾脏淋巴细胞混合培养72h,流式细胞仪检测其中CD4＋CD25＋Treg细胞含量,RT—PCR检测Foxp3mRNA的表达,实验重复3次。结果和EL-4培养上清液混合培养的正常小鼠脾脏淋巴细胞中CD4＋CD25＋Treg细胞的比例高于对照组（P〈0．05）,在CD3单抗刺激的同时加入EL-4培养上清液后,小鼠脾脏中CD4＋CD25＋Treg细胞仍呈同步增加（P〈0．05）;且Foxp3mRNA的表达增加。结论淋巴瘤细胞分泌的免疫调节因子能诱导CD4＋CD25＋Treg细胞的增生,提示肿瘤可以上调CD4＋CD25＋Treg细胞比例。     

CD4+CD25+CCR6+调节性T细胞在小鼠乳腺癌模型中对CD8+T细胞的抑制作用

目的：观察CD4+CD25+CCR6+调节性T细胞（简称CCR6+Tregs）体内对CD8+T细胞功能的抑制作用,并探讨其与肿瘤免疫逃逸的关系。方法：建立4T1乳腺癌细胞荷瘤裸鼠模型,FACS分选CCR6+Tregs,检测其Foxp3的表达;FACS分选4T1特异性CD8+T细胞,CFSE标记后分别与CCR6+Tregs或CCR6Tregs共同过继转输入4T1荷瘤裸鼠体内,观察荷瘤裸鼠肿瘤生长情况和小鼠存活时间;FACS检测肿瘤组织中CD8+T细胞的增殖、细胞因子IFNγ的产生和颗粒酶B的表达情况。结果：CCR6+Tregs和CCR6Tregs均高表达Foxp3;CCR6+Tregs和CD8+T细胞共转输组4T1荷瘤裸鼠肿瘤的生长明显快于CCR6Tregs共转输组和CD8+T细胞单转输组,同时该组荷瘤裸鼠生存时间也明显缩短（P<0.05）;CCR6+Tregs和CD8+T细胞共转输组CD8+T细胞的增殖、IFNγ的产生和颗粒酶B的表达均明显低于CCR6Tregs共转输组和CD8+T细胞单转输组（P<0.05）。结论：CCR6+Tregs在体内可以有效抑制CD8+T细胞的功能,其在肿瘤免疫逃逸和肿瘤发生、发展中发挥重要作用。     

调节性T细胞及Th1/Th2细胞因子在急性白血病中的表达及意义

目的:探讨调节性T细胞（Tregs）及Th1/Th2型细胞因子在急性白血病发病中的作用。方法:采用流式细胞术检测37例急性白血病患者［包括急性髓细胞性白血病（acute myeloid leukemia,AML）24例,急性淋巴细胞白血病（acute lymphocytic leukemia,ALL）13例］及28例健康对照者外周血CD4+CD25+Foxp3+Tregs的比例,酶联免疫吸附法（ELISA）法检测血浆IL-2、IFN-γ、IL-10、IL-4和TGF-β水平。结果:AML和ALL患者外周血CD4+CD25+Foxp3+Tregs比例均高于健康对照组 (P＜0.05);AML及ALL患者血浆IL-4、IL-10和TGF-β水平均较健康对照组升高 (P＜0.05);IFN-γ水平较健康对照组降低 (P＜0.05);IL-2水平与健康对照组比较无明显差异 (P＞0.05)。结论:Tregs与Th1/Th2细胞因子同时参与了急性白血病的发生;急性白血病患者机体Th1/Th2细胞因子失衡,Th2占优势状态,这可能是导致急性白血病细胞免疫逃逸的原因之一;Tregs可能通过影响Th1/Th2细胞因子平衡参与急性白血病的发病。     

Klotho 蛋白通过TGF-β1/Foxp3/RORγt 通路抑制Treg 和Th7 细胞介导的宫颈癌细胞的免疫逃逸

目的: 研究抗衰老蛋白Klotho 对荷宫颈癌小鼠体内调节性T细胞（Treg 细胞）和辅助性T细胞17（Th7）细胞介导宫颈癌细胞免疫逃逸的影响及其作用机制。方法: 建立宫颈癌U14 细胞移植瘤小鼠模型,并设Control 组（正常小鼠组）、Model 组（荷宫颈癌小鼠模型组）、Klotho 处理组（荷宫颈癌小鼠经Klotho 蛋白处理组,200 ng/d)。分别在处理7、14 d 时称取各组小鼠体内宫颈癌移植瘤质量,以流式细胞术检测各组小鼠脾淋巴细胞功能、Treg和Th7细胞比例变化,qPCR检测各组小鼠Treg和Th7细胞关键转录因子Foxp3、RORγt的表达情况,ELISA方法检测各组小鼠脾淋巴细胞培养液中IL-17、IL-6、IL-10、TGF-β、IL-23 等因子的含量变化,WB检测各组小鼠脾淋巴细胞中Klotho、TGF-β1、Foxp3、RORγt 蛋白表达的变化。结果: 14 d 时,Klotho 组宫颈癌荷瘤小鼠肿瘤抑瘤率显著高于Model 组[(52.16±8.25)% vs (23.33±6.29)%,P<0.05]。Model 组与Control 组相比,荷瘤小鼠脾淋巴细胞中Treg、Th7 细胞比例均显著升高（均P<0.05）,总T淋巴细胞（CD3+）、辅助/诱导T淋巴细胞（CD3+CD4+）比例及免疫指数（CD3+CD4+/CD3+CD8+）显著下降（均P<0.05）,Foxp3、RORγt 基因mRNA表达显著增加（均P<0.05）,IL-17、IL-6、IL-10、TGF-β、IL-23 等因子分泌显著增加（均P<0.05）,Klotho 蛋白水平明显下降（P<0.05）,TGF-β1、Foxp3、RORγt 蛋白表达均明显升高（均P<0.05）;而Klotho 处理组与Model 组相比,上述指标均出现了相反的变化（均P<0.05）,但与Control 组无显著差异（均P>0.05）。结论: Klotho 蛋白可能通过调控TGF-β1/Foxp3/RORγt信号通路抑制宫颈癌荷瘤小鼠体内Treg和Th7 细胞介导的免疫逃逸,从而发挥抗肿瘤作用。     

肿瘤疫苗联合节拍化疗对小鼠乳腺癌作用的研究

  目的   研究新型肿瘤疫苗联合节拍化疗对晚期乳腺癌小鼠模型的治疗效果,并探讨其作用机制。   方法   以小鼠乳腺癌细胞系4T1接种Balb/c小鼠建立模型。利用含高迁移率核小体蛋白1（high-mobility group nucleosome binding protein 1,HMGN1）基因的重组质粒转染4T1细胞,制备瘤苗。小鼠皮下接种4T1细胞,随机分成生理盐水对照组（NS组）、吉西他滨节拍化疗组（MET组）、瘤苗组、节拍化疗联合瘤苗组（联合组）4组。观察各组小鼠肿瘤生长及不良反应,并检测肿瘤局部调节性T细胞（regulatory T cells,Tregs）的Foxp3表达及肿瘤微血管密度（microvessel density,MVD）的变化。   结果   联合组肿瘤体积明显小于MET组及瘤苗组（P < 0.05）,与NS组比较有显著性差异（P < 0.001）。Western blot和免疫组织化学检测发现,联合组与MET组小鼠肿瘤局部浸润Tregs的Foxp3表达及肿瘤MVD明显减少（P < 0.05）。各治疗组未出现明显的不良反应。   结论   HMGN1基因修饰的新型瘤苗联合吉西他滨节拍化疗在乳腺癌小鼠模型治疗中疗效显著且耐受性良好。      

微波消融治疗对肝癌小鼠调节性 T 细胞的影响

目的：研究微波消融治疗荷肿瘤后小鼠的Treg和淋巴细胞亚群的变化,探讨微波消融治疗荷瘤小鼠后的机体免疫功能的变化.方法：建立H22荷瘤小鼠模型,分为荷瘤对照组和微波消融组.微波消融荷瘤小鼠肿瘤.流式细胞术检测脾脏中的CD4＋CD25＋T细胞、CD25＋FOXP3＋T细胞、CD4＋T细胞、CD8＋T细胞.结果：与荷瘤对照组相比,微波消融治疗后21天、28天组小鼠CD25＋FOXP3＋T细胞明显下降,差异有统计学意义（P＜0.05）,以术后28天下降更为明显（P＜0.01）.微波消融术后各组小鼠CD4＋/CD8＋比值明显增高（P＜0.05）.结论：微波消融治疗减低Tregs比例可能是热消融治疗提高机体抗肿瘤免疫作用的主要机制.微波消融治疗肿瘤后,Treg数量下降及功能降低,且CD4＋/CD8＋比值升高,提示了微波消融治疗肝癌可以改善机体的免疫状态.     

环磷酰胺联合卡介苗对Lewis肺癌小鼠CD4~+CD25~+Treg细胞及效应细胞功能的影响

目的探讨环磷酰胺(CTX)联合卡介苗(BCG)治疗对Lewis肺癌小鼠CD4+CD25+Treg细胞和效应细胞功能的影响及CD4+CD25+Treg细胞与肿瘤的相关性。方法将传代培养的Lewis肺癌细胞接种于C57BL/6小鼠右腋皮下,建立Lewis肺癌模型。采用CTX联合BCG治疗,观察各组动物的肿瘤体积、脾脏CD4+CD25+Treg细胞数量和Foxp3 mRNA表达水平、脾脏T淋巴细胞增殖和杀伤功能。结果CTX联合BCG治疗组肿瘤生长较肿瘤组缓慢;联合治疗组小鼠脾脏CD4+CD25+Treg细胞数量明显低于肿瘤组(P<0.05);联合治疗组小鼠脾脏Foxp3 mRNA表达水平明显低于肿瘤组(P<0.05);联合治疗组小鼠脾脏T淋巴细胞增殖功能明显高于肿瘤组(P<0.05);联合治疗组小鼠脾脏CTLs细胞的杀伤活性略高于肿瘤组(P>0.05)。结论CTX联合BCG治疗可明显降低CD4+CD25+Treg细胞数量和Foxp3 mRNA表达水平,并增强机体抗肿瘤免疫应答,使肿瘤生长延缓。     

结肠癌组织中Foxp3和TGF-β1的相互关系

目的：对结肠癌组织中Foxp3、TGF-β1蛋白进行检测,结合临床病理资料,分析其表达与患者临床病理资料及预后的关系。方法：收集56例结肠癌、癌旁组织标本和15例健康对照组的标本。应用免疫组化法检测56例结肠癌原发灶及癌旁组织和15例健康对照组织中Foxp3、TGF-β1蛋白的表达。结果：结肠癌患者组织Foxp3、TGF-β1阳性表达率均显著高于健康对照组和癌旁对照组（ P〈0.01）。癌旁对照组Foxp3、TGF-β1阳性表达率高于健康对照组,有统计学意义（ P〈0.05）。阳性表达率与淋巴结转移、临床Duke分期有关（P〈0.05）,与组织学分级、肿瘤大小无关（P〉0.05）。Spearman等级相关分析表明,结肠癌组织Foxp3与TGF-β1蛋白表达呈正相关。结论：Foxp3、TGF-β1在结肠癌组织中表达增高,提示在结肠癌患者中,全身免疫状态与肿瘤的生长和侵袭密切相关,Foxp3、TGF-β1可作为判断患者预后的指标,并为结肠癌的靶向治疗提供新的途径。     

hMIP-1β基因修饰瘤苗体内诱导抗肿瘤免疫效应的研究

目的：探讨人巨噬细胞炎性蛋白-1β（hMIP-1β）基因修饰瘤苗体内诱导的抗肿瘤免疫效应。方法：通过重组腺病毒载体介导将hMIP-1β基因导入CT26细胞中,X-gal染色法检测基因转染效率;ELISA法检测hMIP-1β基因修饰CT26细胞培养上清中hMIP-1β的含量;Boyden趋化小室法检测培养上清对CD4^＋T细胞、CD8^＋T细胞、NK细胞及未成熟树突状细胞（imDCs）的趋化作用;制备hMIP-1β基因修饰的CT26细胞瘤苗并免疫BALB／c小鼠,观察其诱导免疫细胞的杀伤活性和保护性免疫反应。结果：腺病毒载体可介导hMIP-1β基因转染CT26细胞和表达（X—gal染色的阳性率〉95％）,培养上清中hMIP-1β水平为980pg／mL,并对CD4^＋T细胞、CD8^＋T细胞、NK细胞及imDCs有显著的趋化作用,与转染对照基因LacZ的CT26细胞及野生型CT26细胞比较差异均有统计学意义,P〈0．01。hMIP-1β基因修饰的CT26细胞瘤苗免疫小鼠能有效诱导肿瘤特异性CTL活性和非特异性NK活性,产生明显的免疫保护作用,可抵抗肿瘤细胞的再攻击,成瘤率降低,肿瘤生长速度减慢,小鼠生存期延长。结论：hMIP-1β基因修饰瘤苗可诱导产生有效的抗肿瘤免疫保护作用,有希望成为预防肿瘤转移与复发的有效手段。     

肠瑞灌肠剂对放射性直肠炎大鼠IL-1β及NF-κB表达的影响

目的 观察肠瑞灌肠剂对直线加速器诱导的放射性直肠炎大鼠直肠黏膜IL-1β和NF-κB表达的影响,探讨其黏膜修复作用及抗炎机制.方法 利用直线加速器单次大剂量盆腔局部照射,建立放射性直肠炎大鼠模型.70只大鼠随机分为7组,三个治疗组分别给予高、中、低不同剂量肠瑞灌肠剂,西药对照组给予地塞米松+庆大霉素,中药对照组给予八味锡类散,模型组与空白组给予生理盐水,给药途径均保留灌肠.观察治疗1周后处死全部动物.分别用RT-PCR方法、免疫组织化学方法检测直肠黏膜IL-1β mRNA、NF-κB表达,进行统计学处理.结果 照射后直肠黏膜出现IL-1β mRNA及NF-κB表达,治疗组IL-1β mRNA表达及NF-κB表达显著减少,与模型组、中西药对照组比较差异有统计学意义(P<0.05).治疗高剂量组优于低剂量组.结论 肠瑞灌肠剂能下调放射性直肠炎大鼠直肠黏膜IL-1β mRNA及NF-κB表达,以炎症因子为药物靶点,减轻放射性直肠炎炎症反应,促进肠黏膜修复.     

金属硫蛋白2与基质金属蛋白酶9在炎症相关性结肠癌中的表达及意义

目的:研究金属硫蛋白2(MT2)与基质金属蛋白酶9(MMP9)在小鼠的结肠炎及炎症相关性结肠癌(CAC)中的表达情况及相关性.方法:采用氧化偶氮甲烷试剂(AOM)腹腔注射及葡聚糖硫酸钠试剂(DSS)喂药方法,成功建立小鼠的结肠炎-癌模型.使用免疫组化方法观察MT2与MMP9在小鼠结肠炎-癌模型中的表达情况.应用统计学分析MT2与MMP9在小鼠结肠炎-癌模型中的表达相关性.结果:MT2在小鼠的结肠炎及炎癌组织中的表达明显上调,具有统计学意义(P<0.05);在炎症组与炎癌组,MT2与MMP9的表达均存在显著正相关性,具有统计学意义(r=0.949,P<0.001;r=0.859,P=0.001).结论:MT2与MMP9在小鼠的结肠炎和炎症相关性结肠癌中表达的显著正相关性提示它们可能在结肠炎症促进癌变这一过程起到一定作用,有望成为治疗炎症相关性结肠癌的新靶点.     

人工蛹虫草子实体对Leiws肺癌荷瘤小鼠CD4^＋CD25^＋调节性T细胞的影响

目的：观察人工蛹虫草子实体（CCM）对Lewis肺癌移植瘤生长与转移的作用,同时检测CCM对荷瘤鼠CD4^＋ CD25^＋调节性T细胞的影响,探讨其治疗肿瘤的免疫调节机制。方法：建立Lewis肺癌移植肿瘤模型。给予CCM处理后,观测肿瘤体积动态变化,计数转移灶数目,计算抑瘤率;采用流式细胞术分别于肿瘤生长第6、11、16和21d检测荷瘤鼠脾细胞CD4^＋ CD25^＋的比例;荧光定量RT—PCR检测肺转移灶组织Foxp3和TGF-β mRNA的表达水平。结果：CCM可抑制Lewis肺癌移植肿瘤的生长与转移。肿瘤生长的早期这种抑制作用比较明显,在肿瘤生长21d抑制率虽为28．6％,但治疗组肺转移灶数目明显降低,P〈0．01。与模型组相比,CCM治疗组CD4^＋CD25^＋ T细胞增高缓慢,在肿瘤生长21d时,模型组脾脏CD4^＋ CD25^＋T细胞比例为17．0％,而CCM组为13．5％,两者差异有统计学意义,P〈0．01。CCM纽肺转移灶组织Foxp3和TGF-β mRNA的表达也明显低于模型组。结论：CCM抑制肿瘤生长和转移作用可能与CCM下调荷瘤体内CD4^＋ CD25^＋ T细胞,抑制TGF-β分泌,从而激发机体的抗肿瘤免疫相关。     

大鼠骨髓间充质干细胞分泌多种造血相关因子的研究

目的：初步探讨大鼠骨髓间充质干细胞（MSC）分离培养的方法及检测其所表达的多种细胞因子。方法：采用全骨髓贴壁法和单克隆培养法分离培养大鼠骨髓MSC,间接免疫荧光法鉴定其生物学特性,RT-PCR方法检测多种细胞因子的表达。结果：成功分离出大鼠骨髓MSC,CD44表达率为92.3%,CD45表达率为6.9%;RT-PCR分析示有干细胞因子（SCF）、血小板生成素（TPO）、粒细胞巨噬细胞集落刺激因子（GM-CSF）、转化生长因子（TGF-β1）的表达,不表达白介素-3（IL-3）。结论：成功从大鼠骨髓中分离培养出MSC,并分泌多种造血相关因子,这可能揭示了其促造血功能的部分分子基础。     

维甲酸增加诱导型FOXP3^＋细胞数量：直接作用还是间接作用？

诱导型调节性T细胞是利用体外培养的方法、通过人为加入TGF—β等细胞因子诱导生成的一群具有调节性T细胞（Treg）表型（FOXP3^＋）与功能的细胞。虽然该群细胞的稳定性不及天然的Treg，但仍不失为一个良好的研究Treg的体外模型。哈佛医学院Mathis等于2008年11月在Immunity杂志上发表一篇名为《维甲酸可通过抑制CD4^＋ CD44^hi细胞间接增加FOXP3表达》的文章，该文认为，哺乳动物肠道内一群CD103^＋ DC生成的维生素A代谢产物维甲酸（retinoic acid，RA）在诱导型调节性T细胞牛成的模型中可以促进FOXP3^＋生成。     

不同辐射剂量损伤后T淋巴细胞亚群及Th1和Th2的变化

目的： 观察不同辐射剂量损伤对小鼠T淋巴细胞功能亚群的影响,探讨辐射所致的免疫系统损伤在细胞学和分子水平上的机制。方法：C57BL/6j小鼠采用60 Coγ射线照射诱导辐射损伤模型。总照射剂量分别为0、0.7、1.4、2.8和5.6 Gy。应用细胞表面标志和细胞内因子标记,流式细胞仪检测分析不同剂量组小鼠脾T淋巴细胞功能亚群CD3＋、CD4＋、CD8＋ T细胞改变及Th1和Th2的变化。结果：与空白对照组比较,小鼠脾T淋巴细胞功能亚群CD3＋、CD4＋、CD8＋ T细胞在照射后均明显降低(P＜0.01),降低幅度与受照剂量明显相关。CD4＋/CD8＋比值显示照射后均明显升高(P＜0.01)。照射后Th1水平均降低(P＜0.01),而在照射剂量≥1.4 Gy时Th2均明显降低(P＜0.01),其中Th1降低明显高于Th2。受照剂量大于2.8 Gy组Th2/Th1比值较空白对照组明显升高(P＜0.01)。结论：不同照射剂量对T淋巴细胞功能亚群CD3+、CD4+、CD8+ T细胞和CD4＋/CD8＋比值有明显影响,Th1,Th2和Th2/Th1功能亚群的失衡在辐射所致的免疫损伤中具有重要作用。     

肿瘤患者外周血调节性T细胞的检测及临床意义

目的：研究肿瘤患者外周血调节性T细胞水平的变化并探讨其临床意义,旨在了解肿瘤患者的免疫功能改变,为肿瘤患者临床治疗及判断预后提供依据。方法：采用流式细胞仪对40例肿瘤患者及40例正常人外周血CD4＋CD25＋T细胞、CD4＋CD25highT细胞及CD4＋CD25＋Foxp3＋Treg细胞水平进行检测。结果：肿瘤患者外周血中CD4＋CD25＋T细胞和CD4＋CD25highT细胞高于正常对照组（P〈0.05）;CD4＋CD25＋Foxp3＋调节性T细胞亦明显高于对照组（P〈0.01）。结论：肿瘤患者细胞免疫功能明显异常,CD4＋CD25＋Foxp3＋调节性T细胞增多可能是肿瘤患者免疫功能受抑的重要原因之一;调节性T细胞水平检测在评价肿瘤患者疗效及判断预后方面具有一定的临床价值。     

大鼠骨髓间充质干细胞分泌多种造血相关因子的研究

目的:初步探讨大鼠骨髓间充质干细胞(MSC)分离培养的方法及检测其所表达的多种细胞因子。方法:采用全骨髓贴壁法和单克隆培养法分离培养大鼠骨髓MSC,间接免疫荧光法鉴定其生物学特性,RT-PCR方法检测多种细胞因子的表达。结果:成功分离出大鼠骨髓MSC,CD44表达率为92.3%,CD45表达率为6.9%;RT-PCR分析示有干细胞因子(SCF)、血小板生成素(TPO)、粒细胞巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)、转化生长因子(TGF-β1)的表达,不表达白介素-3(IL-3)。结论:成功从大鼠骨髓中分离培养出MSC,并分泌多种造血相关因子,这可能揭示了其促造血功能的部分分子基础。     

肝癌荷瘤小鼠调节性T细胞数量的改变及其与肿瘤生长的关系

目的研究肝癌荷瘤小鼠调节性T细胞数量的改变及其与肿瘤生长的关系。方法采用小鼠肝癌细胞系H22接种BALB／c小鼠,建立肝癌模型;采用流式细胞术方法检测CD4^＋ CD25^＋T／CD4^＋T细胞的比例;以RT-PCR和流式细胞术检测Foxp3基因的表达。以免疫磁珠分选法纯化CD4^＋CD25^＋T和CD4^＋CD25^-T细胞;在体外,用3H-TdR掺入法检测T细胞的增殖情况;在体内,观察荷瘤小鼠来源的CD4^＋CD25^＋T细胞对肿瘤生长的作用。结果（1）荷瘤小鼠在引流淋巴结中,CD4^＋CD25^＋T细胞占CD4＋T细胞（18．80％±0．06％）比例增高,与对照组（9．50％±0．03％）相比,差异有统计学意义（P〈0．01）;在非引流淋巴结（LN）和脾脏（SP）中,荷瘤小鼠CD4^＋CD25^＋T／CD4^＋T比例分别为16．28％±0．02％和17．28％±0．06％,与对照组9．50％±0．03％和11．08％±0．04％相比,差异有统计学意义（P〈0．01,P〈0．05）;同时,调节性T细胞特异性标志Foxp3 mRNA的表达也升高。在同一只荷瘤小鼠中,引流淋巴结中CD4^＋CD25^＋T细胞数量（18．8％±0．06％）较对侧非引流淋巴结（16．28％±0．02％）略有升高,但差异无统计学意义（P〉0．05）。（2）从荷瘤小鼠中纯化的CD4^＋CD25^＋T细胞,在体外对抗CD3单抗的刺激无反应,但能抑制CD4^＋CD25^-T细胞的增殖。（3）CD4^＋CD25^＋T／CD4＋T比例与肿瘤大小呈正相关,并且可以抑制CD4^＋CD25^-T细胞的抗肿瘤效应。结论肝癌细胞在小鼠体内的生长可以提高调节性T细胞的数量,其数量的高低与肿瘤的大小呈正相关,提示清除调节性T细胞将是肿瘤免疫治疗的策略之一。