ELISA法测定人血清中apo AV浓度

目的建立测定人血清中apoAV浓度的ELISA双抗体夹心法,并对该法的敏感性、重复性、干扰因素等作评价。方法测定了该法的aimAV标准曲线,最低检测限,批间、批内变异系数（CV）,非特异性脂蛋白的干扰;测定了505例血脂正常人群aimAV的浓度,建立本实验室的参考值。结果本法的线性范围为（5．86～187．5）ng／ml;最低检测限为2．34ng／ml;脂蛋白（a）、apoAI和apoB用本法检测吸光度值均〈0．3;批内、批间CV均〈10％。结论该方法灵敏度和特异性均好,为apoAV的临床检测提供了一种可行的方法。     

化学发光免疫分析法检测黄体生成素、维生素B12和癌胚抗原的性能评价

目的 评价化学发光免疫分析法检测黄体生成素、维生素B12和癌胚抗原.方法 通过对不同浓度样品黄体生成素(LH)、维生素B12(VB12)、癌胚抗原(CEA)含量的测定,进行精密度、灵敏度、干扰、回收试验.结果 批内变异系数(CV)均小于10.0%,批间CV均小于14.0%;LH、VB12、CEA回收率分别为97.9%～102.2%、97.4%～102.5%、98.9%～102.4%,灵敏度分别达到2.4IU/L、57pg/ml、2.6ng/ml;无吸样间的交叉污染.结论 该方法各项指标结果准确,精密度好、灵敏度高、干扰小,具有广泛的应用前景.     

血清脂联素水平与冠心病关系的研究

目的 检测血清脂联素(APN)水平,探讨其在CHD发病中的作用。 方法 收集150例冠状动脉造影阳性的CHD患者和104例体检健康者血清,用ELISA法检测APN和apo A5水平,7600-020E全自动生化分析仪检测TC、TG、LDL-C、HDL-C、Lp(a)等。 结果 与健康对照组比较,CHD组患者的HDL-C水平显著降低,LDL-C、TG、TC、Lp(a)均增高。稳定型心绞痛(SAP)患者和急性冠脉综合征(ACS)患者血清APN浓度均明显低于健康对照组(P＜0.05),ACS患者血清APN浓度较SAP患者进一步降低(P＜0.05);SAP患者血清apo A5浓度为(209.8±52.6) ng/ml,显著低于健康对照组(231.5±57.0) ng/ml,P＜0.05。ACS组血清apo A5浓度［(248.6±54.4) ng/ml］显著高于SAP组［(209.8±52.6) ng/ml］,P＜0.01。Pearson相关分析显示经年龄、性别校正后APN水平与LDL-C、TG呈负相关,与HDL-C呈正相关;SAP组APN与apo A5呈正相关(P＜0.05)。 结论 低水平血清APN和异常升高apo A5不仅与CHD类型密切相关,还可作为CHD患者预后评价的一个新指标。     

2-氯-4-硝基苯-α-L-岩藻糖苷测定α-L-岩藻糖苷酶及性能评价

目的 应用2-氯-4-硝基苯-α-L-岩藻糖苷(CNP-AFU)建立检测α-L-岩藻糖苷酶(AFU)活力的动力学法,用于血清中AFU活性测定.方法 基于动力学反应特点,对缓冲液离子强度、pH值、底物浓度等最佳反应条件及各种实验参数进行研究.用该法在AU400全自动生化分析仪上进行相应的性能分析研究.结果 该法最低检出限为2.5 U/L,线性范围可达250 U/L(r=0.999 4),批内CV＜3%,批间CV＜5%,回收率为101.3%.结论 本法灵敏度高,线性、精密度好,结果准确,且操作简便快速,适用于全自动生化分析仪操作.     

血清载脂蛋白A5 ELISA的建立及其初步应用

目的建立人血清中载脂蛋白A5(ApoA5)双抗体夹心酶联免疫吸附试验(ELISA),并初步观察其在2型糖尿病(T2DM)中的应用价值。方法用棋盘滴定法确定捕获抗体、检测抗体的最佳工作浓度;绘制标准曲线,确定线性范围、检测限;检测该方法的精密度和特异性,并分别检测T2DM患者及健康人血清中ApoA5水平以及其它生化指标。结果本研究建立的方法测定范围为5-640ng/ml,最低检出量2ng/ml,批内和批间变异系数(CV)分别为5.6%和6.7%。T2DM患者血清中ApoA5水平为(494.2±233.1)ng/ml,显著低于健康对照组(668.2±357.0ng/ml,P=0.001);血清ApoA5浓度与HDL-c呈正相关(r=0.16,P=0.031),与TG呈负相关,但是没有达到统计学差异(r=-0.028,P=0.717)。结论本研究建立的人血清ApoA5双抗体夹心ELISA灵敏度高,特异性好,可应用于临床ApoA5的检测;ApoA5可能是T2DM的独立危险因素,监测ApoA5浓度对于T2DM的预防和干预具有一定临床意义。     

Access免疫分析仪检测HBsAg的评价

目的评价Access免疫分析仪对血清HBsAg的测定.方法利用Access免疫分析仪及配套试剂检测血清HBsAg.结果 Access免疫分析仪测定HBsAg的灵敏度为0.1ng/ml,HBsAg在0.3～100ng/ml范围内线性良好;批内CV 3.97%～10.77%,批间CV 4.34%～14.48%;溶血显著影响HBsAg测定结果.抗-HBs、HBeAg、抗-HBe与HBsAg无交叉反应.结论 Access免疫分析仪测定HBsAg快速、灵敏、重复性好、线性范围宽、特异性强,可用于乙型肝炎病毒感染的确认.     

液相芯片技术联合等位基因特异性引物延伸反应检测结核分枝杆菌耐多药突变

目的建立一种耐多药结核分枝杆菌检测方法。方法设计并构建含有kat G315、rpo B526、rpo B531耐药基因突变位点的质粒;通过PCR扩增及纯化、等位基因特异性引物延伸反应(ASPE)、荧光微球杂交反应及液相芯片系统Luminex 200检测;并对该方法反应条件进行探索及方法学评价。结果 ASPE反应中Tsp DNA聚合酶最适浓度为0.025 U/μL,杂交荧光微球浓度为每μL 100个,链霉亲和素藻红蛋白浓度及杂交时间分别为2μg/m L和20 min;所建立方法的检测灵敏度最低可达1ng/m L;当质粒浓度为1.5×105ng/m L时,批间和批内变异系数(CV)分别为6.48%~12.15%和0.35%~6.92%;当质粒浓度为2 ng/m L时,批间和批内变异系数(CV)分别为5.73%~10.77%和0.97%~8.91%;特异性引物探针与其他突变位点均无交叉反应。结论液相芯片技术联合等位基因特异性引物延伸反应检测耐多药结核分枝杆菌灵敏且具有成本低、高通量等特点,极具临床应用潜力。     

白念珠菌烯醇化酶双抗体夹心ELISA检测方法的建立

摘要：目的：建立检测白念珠菌烯醇化酶（enolase, Eno）的双抗体夹心ELISA法,并试用于几种真菌培养上清液的检测。 方法：将抗白念珠菌Eno单抗作为包被抗体,辣根过氧化物酶标记的羊抗Eno抗体作为检测抗体,用方阵滴定法确定包被抗体和酶标抗体浓度,建立检测Eno的ELISA法,对方法的精密度、特异性、最低检测限等指标进行评价。用该法检测白念珠菌、热带念珠菌、光滑念珠菌、近平滑念珠菌、季也蒙念珠菌、新生隐球菌和酿酒酵母等不同真菌培养上清中Eno水平。 结果：Eno浓度为20 ng/mL和5 ng/mL时,批内和批间变异系数(CV)分别为6.61%、9.19%和6.98%、13.81%;最低检测限为1.25 ng/mL。本法可从白念珠菌37 ℃培养24 h后的上清中检出Eno,Eno含量与白念珠菌菌丝含量呈正相关。本法对近平滑念珠菌有微弱交叉反应,与热带念珠菌、光滑念珠菌、季也蒙念珠菌、新生隐球菌和酿酒酵母均无交叉反应。 结论：建立的检测白念珠菌Eno的双抗体夹心ELISA方法有较好的特异性,可用于评价Eno检测在侵袭性白念珠菌感染中的诊断价值。     

均相法检测脂蛋白残粒胆固醇的建立及初步临床应用

目的建立均相法检测脂蛋白残粒胆固醇(RLP-C)的方法,并进行初步评估。方法以聚氧乙烯-聚氧丁烯嵌段共聚物(POE-POB)为屏蔽剂,特异性屏蔽非脂蛋白残粒,以此为基础,优化实验条件,建立检测RLP-C的均相法。将自建方法与参比方法[日本协和公司RLP-C试剂(均相法)]进行比对,采用自建方法测定116例混合性高脂血症患者和130名正常对照者的血清RLP-C浓度,同时测定血清三酰甘油(TG)、总胆固醇(TC)、载脂蛋白C2(apo C2)浓度。采用Pearson相关分析评估各项目之间的相关性。结果自建方法的最佳缓冲体系为3-(N-玛代琳)丙磺酸(MOPS)缓冲体系,最适pH值为6.8,POE-POB最适浓度为8g/L,检测延迟时间为5min,测定时间为5min。自建方法的批内平均变异系数(CV)为3.37%,批间平均CV为4.91%,试剂在4℃条件下可稳定1个月。参比方法与自建方法的检测结果稍有差异,但2种方法的相关性良好(r=0.980),Bland-Altman散点图显示,98例样本中仅有4例(4.08%)不在±1.96s范围内。混合性高脂血症组血清RLP-C、TG、apo C2、TC浓度均高于正常对照组(P0.001)。RLP-C与TG呈正相关(r=0.496,P0.001),与apo C2、TC均无相关性(r值分别为0.157、-0.090,P0.05)。结论自建方法简便、快捷,可用于全自动生化分析仪,适用于临床常规检测。     

差异磁分离酶联免疫法检测血清甲胎蛋白的研究

目的 改进磁分离酶联免疫法(MEIA).方法 采取预加微量标本、将磁铁置于微孔侧壁和扣除上清液A值法,改进MEIA建立了差异磁分离酶联免疫法(DMEIA).求DMEIA回归方程、线性范围、变异系数(CV),比较DMEIA和全自动电化学发光法(ECLIA)配对检测100份血清AFP结果差异.结果 DMEIA检测AFP的回归方程Y=3.94X+16.45,r=0.992,线性范围5～500 ng/ml,批内CV=7.7%,批间CV=8.5%;DMEIA和ECLIA测定血清AFP值差异无统计学意义(t检验,P>0.05);检测原倍高浓度AFP时(21 460～501 690 ng/ml)两法均未出现hook效应.结论 DMEIA可基本克服hook效应,可用普通微孔板和酶标仪比色,可省去洗涤,检测AFP结果接近ECLIA,但线性范围小于ECLIA.     

时间分辨免疫荧光法用于梅毒抗体测定的探讨

目的 通过对时间分辨免疫荧光法（TRFIA）,酶联免疫吸附试验（ELISA）,明胶颗粒凝集试验（TPPA）三种方法测定梅毒特异性抗体（TP）的比较,并对TRFIA法的特异性、灵敏度、线性进行方法学评价,探讨临床常规使用TRFIA方法检测梅毒特异性抗体的可行性.方法 对2012年1月至2012年7月我院256名门诊患者标本分别用TRFIA、ELISA、TPPA三种方法测定TP,并对TRFIA检测系统的灵敏度、批内,批间精密度、线性范围进行测定.结果 TRFIA与TPPA法检测相比其灵敏度为100％,特异性为98.2％.TP阴阳性结果,经配对卡方检验P＞0.05,三种方法无统计学差别.最低检测浓度0.15NCU,相关系数分别为0.95、0.999,高、中、低三种浓度血清的批内、批间精密度CV＜10％.结论 TRFIA法测定TP灵敏度、特异性、方法性能、相关性均好,可作为临床TP常规筛查方法.     

肌氨酸氧化酶法测定血清肌酐在CX9分析仪上的应用

目的建立肌氨酸氧化酶-PAP法测定血清肌酐的自动分析方法.方法根据测定条件的优化实验采用肌氨酸氧化酶法直接测定.结果本法300s达反应终点,线性达8840μmol/L(Y=0.9835X+0.124,r=0.9997),批内CV＜1.87%,日间CV＜3.56%,总CV＜4.19%,回收率平均100.3%,加入,BIL＜456μmol/k;Hb＜200g/L;抗坏血酸2.48mmol/L时无显著干扰.结论本法适合全自动分析.     

酶循环法检测血清总胆汁酸的方法学评价

目的通过对方法学评价试验,选择一种检测血清总胆汁酸的方法.方法ThioNADH黄色发光系统酶循环法检测血清总胆汁酸.结果本法线性达150μmol/L,精密度高,批内CV分别为0.98%和0.85%,批间CV为4.58%和4.13%.本法与普通酶显色法比较,r=0.903x-1.45,r=0.995 5,n=50,配对t检验P＞0.05,胆红素＜830μmol/L,血红蛋白＜5g/L,肝素钠＜120mmol/L,枸椽酸钠＜120mmol/L,乳酸＜30mmol/L,抗坏血酸＜28mmol/L,对测定结果无显著性干扰.结论本法线性好,精密度高,结果无明显干扰,对仪器管道比色杯基本无色素沉着污染,是测定血清总胆汁酸的一种理想方法,值得扩广应用.     

血清溶菌酶TTC比色测定法

本文利用活的溶壁微球菌(Micrococcus Lysodeikticus)在代谢时,将无色的TTC还原成红色的甲(月替),建立了溶菌酶的TTC比色测定法。该法最小检出量1μg/ml,测定线性范围1～20μg/ml,批内CV 4.89%,批间CV 7.652%;与平板法测定结果比较无差异(r=0.9788,t=0.905,P>0.05)。用本法测定了42名健康献血员,血清溶菌酶含量为6.63±3.56μg/ml。本法操作简便快速,干扰小,灵敏度高,呈色稳定,不需特殊仪器,易于推广。     

EIA定量检测甲状腺球蛋白抗体和甲状腺微粒体抗体在临床中的应用

目的 探讨酶免疫法定量检测血清抗甲状腺球蛋白抗体(TG-Ab)和抗甲状腺微粒体抗体(TM-Ab)在临床应用价值.方法 采用酶免疫法(EIA)定量检测血清TG-Ab和TM-Ab,并对检测条件、干扰因素、精密度和准确度进行试验探讨.结果 EIA定量测定血清TG-Ab和TM-Ab分别在880IU/ml和665IU/ml以下线性良好,TG-Ab批内和批间CV分别为3.2%和7.1%;TM-Ab批内和批间CV分别为 3.9%和7.6%.测得平均回收率为TG-Ab:92.4%、TM-Ab:101.2%.血清标本4℃存放一周内,对测定结果 无影响.胆红素、血红蛋白在0.5g/L对测定无干扰,Hb浓度＞0.5g/L对TM-Ab产生正干扰.结论 EIA定量检测能较准确检测血清甲状腺自身抗体水平,操作简便,结果准确,符合临床常规使用要求,对自身免疫性甲状腺疾病的诊断、疗效观察及预后具有临床应用价值.     

血清脂肪酶测定色团底物法的方法学和临床评价

目的 评价脂肪酶测定——色团底物法的各项技术指标和临床诊断的准确性。方法 用NCCLS的评价方案对本法的线性、精密度、方法比较和干扰作评价,并用ROC曲线对本法的临床诊断准确性作评价。结果 本法线性范围为3—330U／L;精密度：批内CV＜1．5％,总CV＜5．0％;本法(Y)和比浊法(X)比较有良好的相关,Y＝0．289X 6．75,r＝0．937,n=46。Hb＜1g/L,Bil＜100μmol/L和TG＜10mmol/l均无干扰。临床评价证实,本测定对急性胰腺炎的敏感性为90％,特异性为93％,ROC的曲线下面积为0．956,有较高的临床诊断准确性。结论 本法的各项技术指标均优于其他脂肪酶测定方法。临床评价说明脂肪酶测定对急性胰腺炎的诊断准确性优于淀粉酶。     

直接法测定高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)试剂性能评价

目的 评价高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)直接法检测试剂盒.方法 利用日立7060全自动生化分析仪对HDL-C试剂进行一系列方法学评价比较试验.结果 批内CV＜2.0%,批间CV＜4.0%;线性范围可达0.01～2.58 mmol/L;抗干扰能力:当样品中血红蛋白在5000 mg/L,胆红素1000 μmol/L,甘油三酯5 mmol/L以下,以及正常用量的抗凝剂,均不干扰测定结果;与某进口公司试剂比较,回归方程为:y=1.0087x-0.0152,γ=0.9990.结论 该试剂使用方便、快速、准确,适用于自动化分析.     

脂蛋白残粒检测方法的评价及在冠心病中的初步应用

目的对免疫分离法测定血清脂蛋白残粒（RLP）进行方法学评价,分析该方法在冠心病患者血清RLP临床检测中的应用。方法评价免疫分离法测定血浆RLP的精密度、稳定性试验、回收试验、干扰试验、线性范围。用该法测定100名体检健康者、59名冠心病患者空腹血清RLP水平,同时测定三酰甘油（TG）、总胆固醇（TC）、高密度脂蛋白胆固醇（HDL-C）、低密度脂蛋白胆固醇（LDL-C）、载脂蛋白A1（apo A1）和载脂蛋白B（apo B）,比较7个项目的临床符合率。结果免疫分离法测定高（0.48 mmol/L）、低浓度（0.12 mmol/L）血清RLP的批内变异系数（CV）分别为4.6%、4.2%,平均为4.4%;批间CV分别为5.8%、6.0%,平均为5.9%。平均回收率为98.7%。血清样本4℃可保存4 d以上,-20℃可稳定保存1个月以上。血红蛋白（Hb）〈5 g/L、胆红素〈300μmol/L、TG〈14.1 mmol/L时对RLP测定无明显干扰;RLP在2.0 mmol/L范围内线性良好。体检健康人群RLP参考范围为（0.18±0.04）mmol/L。冠心病患者空腹血清RLP浓度为（0.31±0.072）mmol/L,明显高于正常对照组（P〈0.01）;其临床符合率为79.7%,高于TG（44.0%）、TC（30.5%）、LDL-C（28.8%）、apo B（27.1%）、apo A1（25.4%）和HDL-C（18.6%）。结论免疫分离法测定RLP操作简单,结果准确、可靠,符合临床质控要求,适用于基础研究和临床检验。RLP可作为冠心病的致病因子应用于临床。     

乙丙肝酶免试剂盒临床应用准确性评价

[目的]采用酶联免疫方法对准备新引进的和实验室现使用的两种乙丙肝酶免试剂盒进行临床应用准确性和精密度评价。[方法]采用卫生部临检中心己明确预期阴、阳结果的乙肝两对半和丙肝抗体质控血清，进行乙丙肝酶免试剂盒临床应用准确性评价；用HBsAg不同含量定值血清进行HBsAg最低检测限分析；用定值血清进行批内和批间精密度评价。[结果]待评价的乙丙肝酶免试剂盒除HBeAg和HBeAb的符合率为92％，抗-HCV的特异性为90．91％外，其余各项的灵敏度、特异性、总符合率均低于90％；HBaAg在2ng／ml含量时的阳性检出率为76．52％，但在1ng／ml和0．5ng／ml时阳性检出率均为0％；批内精密度CV在10％以上，批间精密度CV均在20％以上，HBeAb和HBcAb达到42．86％和60％。而实验室现使用的乙丙肝酶免试剂盒各项评价指标均优于待评价的试剂盒。[结论]所评价的乙丙肝酶免试剂盒其灵敏度、特异性、总符合率均较低，而HBaAg最低检测限也达不到卫生部所要求的0．5ng／ml检测水平，加上重复测定精密度较差，待评价的乙丙肝酶免试剂盒无法满足临床检测要求。     

MPT-NAG测定N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶的应用价值

目的 应用新型底物6-甲基-2-硫代吡啶-N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷(MPT-NAG)建立检测N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶活力的紫外动力学新方法,用于尿液中NAG活性测定.方法 基于NAG催化水解对硝基苯-N-乙酶-β-D-氨基葡萄糖苷生成有色的对硝基酚这一反应,对缓冲液离子强度、pH值、底物浓度等最佳反应条件及各种实验参数进行研究.用该法测定了多种病尿样中NAG活活性.结果 该法最低检出限为1.5 U/L,线性范围可达250 U/L(r=0.998 9),批内CV为＜3%,批间CV＜5%,回收率为101.3%.结论 本法灵敏度高,线性、精密度好,结果准确,且操作简便快速,适用于全自动生物化学分析仪操作.