神经干细胞移植对192-IgG-saporin老年性痴呆模型鼠的学习记忆及海马胆碱能纤维的影响

目的探讨神经干细胞(NSCs)移植对192-IgG-saporin致老年性痴呆模型鼠学习记忆和海马胆碱能纤维再生的影响。方法采用192-IgG-saporin(2.5μg/5μL)侧脑室注射SD大鼠建立痴呆模型后,行基底前脑神经干细胞移植,4周后行Y迷宫检测,并观察大鼠海马胆碱能纤维数的变化。结果Y迷宫检测显示大鼠的学习、记忆能力,模型组(107.38±9.34、3.75±0.71)与正常组比较明显下降(P<0.01),而移植组(75.26±5.33、5.45±0.51)有所改善(P<0.05);免疫组化显示模型组大鼠海马CA1区辐射层和齿状回分子层胆碱能阳性纤维,模型组与正常组比较,CA1辐射层和齿状回分子层纤维密度分别减少到11.07%和12.96%(P<0.01),与正常组比较均而干细胞移植组则分别恢复到正常组的81.39%和75.30%(P>0.05)。结论神经干细胞能促进192-IgG-saporinAD动物模型鼠学习记忆能力的恢复及海马胆碱能纤维的再生。     

侧脑室注射192-IgG-saporin致痴呆动物模型的实验研究

建立老年性痴呆模型大鼠,并观察其学习记忆能力及基底前脑胆碱能神经元数目的变化。在成年SD大鼠左侧侧脑室注射免疫毒素192-IgG-saporin(2.5μg/5μl),3周后行Y迷宫检测其学习和记忆能力;4周后处死大鼠,采用免疫组化结合图像分析技术观察各组大鼠基底前脑ChAT阳性神经元数目的变化。结果显示:模型组大鼠的学习记忆能力与正常组相比明显下降(P<0.01);模型组基底前脑的内侧隔核(MS)和斜角带垂直部(VDB)胆碱能神经元数目分别减少至正常组的9.70%和14.09%,与正常组相比均明显下降(P<0.01);学习、记忆能力与基底前脑胆碱能神经元数目密切相关。上述结果表明应用192-IgG-saporin免疫毒素能成功建立AD大鼠动物模型,该模型可用于抗痴呆药物的筛选及药效的评价。     

免疫毒素192-IgG-saporin侧脑室注射建立阿尔茨海默病动物模型的实验研究

目的建立大鼠阿尔茨海默病(Alzheimer′sdisease,AD)动物模型,并观察其学习记忆能力及基底前脑胆碱能神经元改变。方法采用SD大鼠侧脑室注射192-IgG-saporin(2.5μg/5μl),21d后行Y迷宫检测,28d后处死大鼠,免疫组化观察基底前脑神经生长因子受体(NGFR)阳性神经元细胞数的变化。结果Y迷宫检测显示模型组大鼠的学习次数、记忆能力(107.38±9.34、3.75±0.71)较正常组明显下降(P<0.01)。免疫组化显示模型组损伤侧在内侧隔核(MS)和斜角带垂直支(VDB)的NGFR阳性神经元细胞数(7.50±1.77、15.00±2.27)与正常组对应侧比较分别减少81.96%和84.23%(P<0.01),MS和VDB的NGFR阳性神经元面积和周长降低(P<0.05),灰度值升高(P<0.05)。结论免疫毒素192-IgG-saporin侧脑室注射可以模拟AD行为学改变和部分病理学特征。     

NSCs移植对AD鼠基底前脑胆碱能神经元和学习记忆能力的影响

目的:探讨神经干细胞(NSCs)移植对侧脑室注射192-IgG-saporin致老年性痴呆(AD)动物模型的治疗作用。方法:24只SD大鼠随机分为正常组,模型组和移植组,每组8只。左侧侧脑室注射192-IgG-saporin5μ(l0.5μg/μl),建立AD动物模型,基底前脑行NSCs移植,Y-迷宫行为检测,NADPH-d组织化学法染色,结合图像分析技术观察各组大鼠基底前脑NOS阳性神经元数目和形态学参数的变化。结果:侧脑室注射192-IgG-saporin1个月,损伤侧基底前脑内侧隔核(MS)和斜角带垂直支(VDB)一氧化氮合酶(NOS)阳性神经元数明显减少,分别减少到正常组的22.43%和28.36%(与正常组相比P<0.01)。移植组NOS阳性神经元数恢复到正常组的70.22%和74.88%(与模型组相比P<0.01)。细胞形态学参数提示,移植组NOS阳性神经元中含有大小不等的未成熟细胞。大鼠的学习记忆能力与基底前脑NOS阳性细胞数呈正相关。结论:NSCs移植对注射192-IgG-saporin致AD鼠基底前脑胆碱能神经元有明显补充和保护作用,可改善大鼠的学习记忆能力。     

多奈哌齐联合维拉帕米对阿尔茨海默病模型大鼠学习记忆功能的保护作用

目的:探讨多奈哌齐与维拉帕米联合用药对阿尔茨海默病模型大鼠学习记忆功能的保护作用。方法:SD大鼠40只,随机分为假手术组、模型组、多奈哌齐组和联合用药组。采用5μl Aβ1-40(2μg.μl-1)右侧海马区立体定向微量注射法制备大鼠AD模型,通过水迷宫实验评价对多奈哌齐与维拉帕米联合用药对阿尔茨海默病模型大鼠学习记忆功能的保护作用,并通过大鼠海马系数、乙酰胆碱酯酶(AChE)活性和尼氏染色的检测,评价其保护作用机制。结果:Morris水迷宫实验结果表明,同模型组比较,多奈哌齐组和联合用药组逃避潜伏游程均缩短;并且显著增加海马系数;AChE活性实验结果显示,同模型组比较,假手术组、多奈哌齐组和联合用药组海马组织AChE活性减弱;尼氏染色中,多奈哌齐组与联合用药组海马CA3区基本病变减轻,同模型组比较,锥体细胞排列较整齐,较紧密,胞浆内尼氏体较丰富,较清晰。结论:多奈哌齐和维拉帕米可降低海马组织中AChE活性,改善AD大鼠的学习记忆能力,且联合用药更佳。     

褪黑素对阿尔茨海默病模型大鼠学习记忆能力及海马CA3区神经元的保护作用

目的 观察褪黑素(MT)对阿尔茨海默病(AD)模型大鼠学习记忆及海马CA3区神经元的保护作用.方法 随机将60只雄性Wistar大鼠分为正常对照组、AD模型组与MT治疗组.采用右侧海马CA1区注射β-淀粉样蛋白1～40(Aβ1～40)构建AD动物模型,MT治疗组以MT(10mg/kg·d)腹腔注射,正常对照组与AD模型...     

单侧磨牙缺失对老年记忆减退大鼠海马结构的影响

为了探讨单侧缺牙对不同学习记忆能力老年大鼠海马结构的影响 ,本研究用 Morris水迷宫筛选出老年记忆减退鼠和老年记忆正常鼠 ,拔除单侧磨牙后 2个月 ,观察其海马结构神经元和胆碱能纤维密度的影响变化。结果显示 :(1)海马 CA1 区锥体细胞密度 :老年记忆减退鼠拔牙组较对照组 (未拔牙 )明显下降 (P<0 .0 1) ;(2 )海马 CA1 区 ACh E阳性纤维密度 :老年记忆减退鼠拔牙组和老年记忆正常鼠拔牙组均较对照组 (未拔牙 )明显下降 (P<0 .0 1)。结果提示 :单侧磨牙缺失可加速老年性学习记忆减退鼠海马结构的损害。     

神经细胞黏附分子在学习记忆减退大鼠海马中的表达

目的探讨神经黏附分子(NCAM)细胞在学习记忆减退对大鼠脑海马组织中的表达。方法20只雄性SD大鼠随机分成模型组和对照组。建立学习记忆减退模型鼠,4周后行Y迷宫检测和基底前脑胆碱能神经元免疫组织化学染色验证模型成立;并对海马CA1和CA3区进行免疫组织化学染色,观察NCAM含量的变化。结果Y迷宫检测显示模型组大鼠学习记忆能力较正常组明显下降,免疫组织化学染色表明模型组胆碱能神经元数和NCAM阳性数明显低于正常组(P<0.05)。结论学习记忆减退可降低大鼠脑海马组织NCAM表达。     

阿尔茨海默病大鼠海马 N-甲基天冬氨酸受体和丝裂酶原激活蛋白激酶的表达

目的探讨N甲基天冬氨酸受体(NMDAR)及丝裂酶原激活蛋白激酶(MAPK)在阿尔茨海默病(AD)发病中的变化及其可能机制。方法将β淀粉样肽(Aβ1～40)1μl(10g L)在立体定位仪下注入大鼠海马建立大鼠AD模型。2周后测水迷宫潜伏期、长时程增强(LTP)、原位杂交方法检测大鼠海马NMDAR mRNA的表达及免疫组织化学SABC法检测MAPK的蛋白表达,并应用显微图像分析系统对两者的表达进行分析。结果AD模型组Aβ注射2周后,水迷宫潜伏期与模型组术前及对照组相比显著延长(P<0.05);模型组刺激前后fEPSP斜率变化及高频刺激增加的幅值与对照组相比显著下降(P<0.01);模型组海马CA1区、CA3区NMDAR mRNA及MAPK蛋白的表达显著降低(P<0.05或P<0.01)。相关性分析表明,AD模型2周后LTP检测的结果与NMDAR mRNA的表达及MAPK的蛋白表达呈正相关。结论Aβ通过抑制MAPK信号通路和降低NMDA受体磷酸化状态,导致大鼠海马LTP降低和学习记忆功能减低,参与AD学习记忆障碍和痴呆形成。     

阿尔茨海默病大鼠氢质子磁共振波谱研究

目的:探讨海马注射β-淀粉样肽(Aβ1-42)诱发阿尔茨海默病(AD)大鼠模型的病理学变化及氢质子磁共振波谱(~1H MRS)特性。方法:健康SD大鼠40只,实验随机分为假伤组(Sham组)、阿尔茨海默病模型(AD组)。采用大鼠海马注射Aβ_(1-42)复制AD模型。苏木精-伊红染色法染色观察海马CA1区神经元形态,免疫化学染色观察Aβ的沉积,采用Morris水迷宫法进行大鼠记忆功能的测定。~1H MRS检测AD鼠脑中的N-乙酰天门冬氨酸(NAA)、胆碱(Cho)、肌酸(Cr)和乳酸(Lac)水平。结果:与Sham组比较,AD组游全程时间延长,错误次数增加,差异显著(均P0.01)。与Sham组比较,AD组双侧海马CA1区神经元数目减少,核固缩增加;且与注射对侧比较,Aβ_(1-42)注射侧大鼠海马CA1区神经元数目显著减少,核固缩显著增加。免疫化学染色Sham组呈阴性;AD组双侧抗Aβ1-42呈阳性,且与注射对侧比较,注射侧阳性显著增加。~1H MRS结果Sham组双侧半球无显著性差异。与Sham组比较,AD组双侧~1H MRS海马NAA/Cr明显降低、Cho/Cr增加、Lac/Cr增加;在AD组,与注射对侧半球比较,注射侧半球海马NAA/Cr明显降低(P0.05)、Cho/Cr显著增加(P0.01)、Lac/Cr显著增加(P0.01)。结论:Aβ1-42能引起大鼠海马CA1区神经元损伤,记忆功能下降,注射Aβ后4周NAA/Cr已有明显改变,与免疫组化发现Aβ1-42表达增强结果一致,提示利用~1H MRS检测NAA/Cr改变,可能有助于AD早期临床诊断。     

AD样大鼠模型海马内PSD-95表达与学习记忆变化的研究

目的:研究阿尔茨海默病(AD)样大鼠模型海马内突触后致密物-95(PSD-95)表达与学习记忆损伤的元素。方法:健康成年雄性SD大鼠随机分为正常对照组、模型对照组和AD模型组。AD样大鼠模型的建立采用Aβ1-40/Al Cl3双干预法。采用Morris水迷宫和跳台实验检测大鼠的学习记忆能力,采用刚果红染色和尼氏染色观察大鼠海马病理变化,采用免疫印迹的方法检测大鼠海马PSD-95的表达情况。结果:与正常对照组和模型对照组相比,AD模型组大鼠Morris水迷宫逃避潜伏期明显延长(P0.05),跳台实验的反应时间、基础错误次数和错误次数均增加,潜伏期缩短(P0.05)。AD模型组大鼠海马可观察到明显的病理改变,正常对照组和模型对照组中则观察不到。与正常对照组和模型对照组相比,AD模型组大鼠海马PSD-95的表达明显降低(P0.05)。结论:PSD-95在AD样大鼠海马表现为病理性低表达,并且这种病理性低表达很可能与AD样学习记忆损伤存在联系。     

促红细胞生成素对β淀粉样蛋白诱导大鼠海马损伤的保护作用以及对大鼠学习记忆的影响

目的:探讨促红细胞生成素(erythropoietin,EPO)对阿尔茨海默病(Alzheimer disease,AD)大鼠脑损伤的保护机制。方法:采用大鼠海马内注射β淀粉样蛋白制作AD模型。将SD大鼠随机分为正常对照组、生理盐水对照组及EPO处理组。Aβ1-40大鼠海马内注射造模,在生理盐水对照组大鼠行脑室立体定向注射生理盐水,EPO处理组则行脑室立体定向注射重组人促红细胞生成素(rHu-EPO)。观察手术后7 d海马CA1区细胞凋亡变化,及缺血造模后4周大鼠学习和记忆力的变化。结果:EPO处理组大鼠海马CA1区凋亡细胞较生理盐水对照组减少(P<0.01),EPO处理组大鼠学习记忆能力明显高于生理盐水对照组(P<0.05)。结论:EPO可以抑制Aβ1-40诱导海马CA1区细胞凋亡,保护AD大鼠学习记忆功能。     

免疫毒素192-IgG-saporin致痴呆动物基底前脑一氧化氮合酶阳性神经元的变化

目的:建立侧脑室注射免疫毒素192-IgG-saporin致痴呆动物模型,观察其学习记忆能力和基底前脑一氧化氮合酶(NOS)阳性神经元的变化。方法:侧脑室注射免疫毒素192-IgG-saporin,行Y迷宫检测,采用NADPH-d组织化学法染色,结合图像分析技术观察大鼠基底前脑NOS阳性神经元数目和形态学参数的变化。结果:模型组大鼠的学习、记忆能力较正常组明显下降。模型组基底前脑内侧隔核(MS)和斜角带垂直支(VDB)NOS阳性神经元数分别减少到正常组的21.62%和17.70%;细胞周长和面积降低,灰度值升高,均有显著性差异。结论:应用192-IgG-saporin免疫毒素可使基底前脑NOS阳性神经元明显减少。     

雌激素对阿尔茨海默病大鼠模型MAPK蛋白表达的影响

目的探讨雌激素对阿尔茨海默病(AD)大鼠模型学习记忆能力及丝裂霉原活化的蛋白激酶(MAPK)蛋白表达的影响。方法30只大鼠行卵巢切除术(OVX)后,均分成OVX组和雌激素替代治疗组(ERT),然后采用1μlofAβ1～40(10μg/μl)立体定位单侧海马内注射建立AD动物模型,通过水迷宫实验检测动物模型的学习、记忆能力;免疫组化检测MAPK蛋白表达情况。结果ERT组AD动物模型的水迷宫逃避潜伏期较OVX组明显缩短(P<0.05),同时ERT组AD动物模型的海马CA1、CA3区的MAPK表达上调(P<0.05)。结论雌激素可以改善AD动物模型的认知功能,其神经保护作用可能与上调海马MAPK表达有关。     

山茶籽醇提取液对去卵巢阿尔茨海默病大鼠学习记忆、脑组织β淀粉样蛋白的影响

目的:观察山茶籽醇提取液对去卵巢阿尔茨海默病(AD)大鼠学习记忆、脑组织β淀粉样蛋白(Aβ)的影响,为临床应用山茶籽醇提取液防治雌激素缺乏AD提供实验依据。方法:5月龄健康雌性大鼠分成对照组、AD模型组、山茶籽治疗组和雌二醇治疗组。各实验组第4、8、12周分别取大鼠,称重后进行水迷宫实验,再麻醉大鼠取左心血5 ml,处死取大脑。免疫组织化学显色的大脑组织片用显微镜观察;右侧大脑用低温匀浆提取液进行Aβ分析。结果:AD模型组经水迷宫实验证明其学习记忆能力明显下降,脑组织海马CA1免疫组织化学显色Aβ沉积明显增加,Aβ阳性细胞计数明显增加,脑组织Aβ_(1-40)电泳带光密度值明显增加,山茶籽治疗组和雌二醇(E2)治疗组的学习记忆能力明显提高,海马CA1免疫组织化学显色Aβ沉积和Aβ阳性细胞计数明显减少,脑组织Aβ_(1-40)电泳带光密度值明显变小。结论:山茶籽醇提取液有雌激素样作用,可以减少AD模型大鼠脑组织β淀粉样蛋白沉积,提高其学习记忆能力,对去卵巢AD模型大鼠有防治作用。     

单侧磨牙缺失对老年学习记忆减退大鼠基底前脑胆碱能系统的影响

目的:探讨单侧缺牙对不同学习记忆能力老年大鼠基底前脑胆碱能系统的影响。方法:用Morris水迷宫筛选出老年记忆减退鼠和老年记忆正常鼠,拔除单侧磨牙后2个月,用免疫组化和组织化学染色观察对其斜角带核垂直支胆碱能神经元和海马CA1区、前额皮质胆碱能纤维密度的影响。结果:斜角带核垂直支ChAT阳性细胞数和海马CA1区、前额皮质AChE阳性纤维密度在老年记忆减退鼠中,拔牙组较对照组(未拔牙)明显下降;海马CA1区AChE阳性纤维密度在老年记忆正常鼠中,拔牙组较对照组明显下降。结论:单侧磨牙缺失可加速老年学习记忆减退鼠基底前脑胆碱能系统的损害。     

慢性应激通过增加齿状回的促肾上腺皮质激素释放因子减轻阿尔茨海默病样大鼠空间学习记忆损伤

目的:观察慢性应激(CS)对阿尔茨海默病(AD)样学习记忆损伤模型大鼠海马齿状回(DG)的促肾上腺皮质激素释放因子(CRF)及其1型受体(CRFR1)的影响,并探讨CRFR1在CS引起的AD样模型大鼠空间学习和记忆能力改变中的作用。方法:雄性Wistar大鼠随机分为对照(CON)组、AD模型(AD)组和AD给予CS(AD+CS)组,每组7只。用侧脑室单次注射链脲佐菌素联合长期腹腔注射D-半乳糖(每天1次,共6周)的方法制备AD样学习记忆损伤模型大鼠;AD+CS组大鼠在D-半乳糖注射的后4周,每天随机给予一种应激原刺激。Morris水迷宫评估大鼠的空间学习和记忆能力;免疫组织化学染色观察海马Aβ_1-42的表达;ELISA检测DG区CRF的水平;Western blot法观察DG区CRFR1表达。之后,AD大鼠DG区注射CRFR1阻断剂R121919,观察其对CS条件下的AD样模型大鼠空间学习和记忆能力的影响。结果:与CON组比较,AD样模型大鼠的空间学习和记忆能力显著下降,且海马区Aβ_1-42沉积增多;而给予CS可缓解AD样模型大鼠的空间学习记...     

细叶远志皂苷对阿尔茨海默病大鼠海马低密度脂蛋白受体相关蛋白1水平的影响

目的探讨细叶远志皂苷(TEN)对阿尔茨海默病(AD)大鼠海马低密度脂蛋白受体相关蛋白1(LRP1)水平的影响。方法 60只SD大鼠随机分组,采用脑立体定位技术将β-淀粉样蛋白(Aβ)1~40注入大鼠右侧海马CA1区制备AD模型并给予细叶远志皂苷治疗4周。术后分别采用Morris水迷宫、Real-time PCR和Western blotting检测大鼠学习记忆能力及海马内LRP1 mRNA及蛋白的表达变化,并行免疫荧光检测海马区LRP1阳性神经元的变化。结果 1.Morris水迷宫:模型组大鼠学习记忆能力较正常组相比明显降低(P0.01),经TEN灌胃治疗后,TEN各剂量组逃逸潜伏期均不同程度缩短、游泳路程缩小、穿越虚拟平台次数增加,中、高剂量组差异具有统计学意义(P0.05,P0.01);2.Real-time PCR和Western blotting:模型组LRP1mRNA和蛋白的相对表达量均明显低于正常对照组(P0.01),给予TEN治疗后,治疗组LRP1mRNA和蛋白相对表达量随着TEN给药剂量的增加逐步升高,低剂量组差异不明显(P0.05),中、高剂量组与模型组之间的差异有统计学意义(P0.01);3.免疫荧光检测结果显示,海马区模型组LRP1阳性细胞明显减少,与正常组差异有统计学意义(P0.01);高剂量组LRP1阳性细胞数量增加明显,与正常组差异没有统计学意义(P0.05)。结论细叶远志皂苷可能通过提高脑内LRP1的含量,从而改善Aβ1~40诱导的AD大鼠的学习记忆能力。     

石菖蒲不同提取部位对β淀粉样蛋白致学习记忆障碍模型小鼠的影响

目的:探讨石菖蒲不同提取部位灌服对β淀粉样蛋白致学习记忆障碍模型小鼠的学习记忆能力和Aβ沉积的影响。方法:雄性NIH小鼠分为AD模型组、生理盐水模型组和正常对照组。AD模型组又分为生理盐水灌胃组、水提液灌胃组、去油水煎液灌胃组和挥发油灌胃组。共6组,每组6只。AD模型组小鼠双侧海马CA1区内注射Aβ1-42(2μg/μl,2μl/侧)。模型制备后,进行第1次水迷宫测试,检测并比较各组小鼠的学习记忆能力。然后,每天1次的石菖蒲不同提取部位分别进行灌胃(0.2 g石菖蒲/10 g体重),连续3周,以生理盐水灌胃组为对照。灌胃结束后,进行第2次水迷宫测试,免疫组织化学检测Aβ在小鼠海马的沉积情况。结果:第1次水迷宫检测显示,与生理盐水模型组和正常对照组模型小鼠比较,AD模型组逃避潜伏期明显延长,差异具有显著性(P<0.05)。第2次水迷宫检测表明,与生理盐水灌胃组相比,石菖蒲灌胃三组模型小鼠其逃避潜伏期均明显缩短(P<0.05)。其中挥发油灌胃组逃避潜伏期最短,但与其它两组相比差异无显著性(P>0.05)。免疫组化染色结果显示,AD模型小鼠灌服后Aβ沉积明显减少(P<0.01)。但石菖蒲不同部位灌服组与生理盐水灌服组Aβ沉积相比,差异无显著性(P>0.05);石菖蒲三组之间比较,差异也无显著性(P>0.05)。结论:石菖蒲水溶性部位与挥发油部位一样含有改善学习记忆功能的药效成分,应引起研究者的重视;但这种改善功效是否与减少Aβ沉积有关,尚待进一步研究。     

Aβ_(1-42)寡聚体对大鼠认知功能的影响和神经毒性分析

目的:探讨β淀粉样蛋白_(1-42)(Aβ_(1-42))寡聚体对阿尔茨海默病(AD)大鼠认知功能的影响以及其神经毒性的分析。方法:采用Morris水迷宫法筛选出逃避潜伏期少于60 s的60只雄性大鼠随机均分为正常组、PBS对照组、Aβ_(1-42)纤维体组、Aβ_(1-42)寡聚体组。用脑立体定位仪将Aβ_(1-42)寡聚体或纤维体分别注入AD模型鼠的双侧海马,PBS对照组注射等量的PBS,正常组不作任何处理。AD模型建立后第8周,采用Morris水迷宫测试大鼠学习记忆能力的变化,然后在麻醉条件下断头取大脑皮质和海马,冷冻切片,常规H-E染色观察脑组织的病理变化。结果;造模后,与正常组和PBS对照组相比,Aβ_(1-42)寡聚体组和Aβ_(1-42)纤维体组逃避潜伏期较造模前均延长,Aβ_(1-42)寡聚体组大鼠逃避潜伏期长于Aβ_(1-42)纤维体组;Aβ_(1-42)寡聚体可导致大鼠海马和大脑皮质神经元细胞凋亡,镜下可见细胞核固缩,核呈黑紫色,染色质边集,Aβ_(1-42)纤维体对神经元损伤较寡聚体轻。结论:Aβ_(1-42)寡聚体海马内注射可导致大鼠认知功能障碍和神经毒性,且Aβ_(1-42)寡聚体较Aβ_(1-42)纤维体神经毒性要强。Aβ_(1-42)寡聚体导致的认知功能障碍与神经细胞损害有关。