荧光定量PCR技术及其在临床上的应用

荧光定量PCR（Fluorescence Quantitive Polymerase Chain Reaction FQ-PCR)技术是在90年代末期发展起来的一项全新技术。经过几年的实践及临床应用，已获得了较为稳定的检测效果。作为一种体外基因扩增技术，它能敏感地检测初始模板浓度及基因变异等情况。它的出现，克服了传统PCR技术普遍存在的假阳性及不能定量等问题，使得PCR技术更广泛地应用于临床，在监测患者病情、预后、指导用药等方面有着广阔的应用前景。本文概述了FQ－PCR技术及其在临床上的应用，即常见病原体的检测及其在分子遗传学和法医学中的应用。     

荧光定量PCR技术在临床微生物检测中的应用价值

目的探究荧光定量PCR,技术在临床微生物检测中的应用效果。方法回顾性分析2017年1月-2019年1月间我院门诊收治的90例患者的临床标本,对其荧光定量PCR技术微生物检测结果进行分析。结果各取2株沙门氏菌、肠出血性大肠杆菌0157:H7、副溶血性弧菌及黄色葡萄球菌进行试剂盒特异性检测,结果未出现假阳性或假阴性情况,特异性100%;同时对所取菌株进行10倍系列系数PCR技术灵敏度检测,结果表明102拷贝/mL核酸样本能够进行最低核酸检测限度。结论在微生物的临床检测中,荧光定量PCR技术灵敏度强,特异性好,检测效率高,还具有精准的特点,值得推广应用。     

荧光定量PCR技术在结核杆菌检测中的应用

目的：建立结核病荧光定量PCR快速检测方法。方法：建立检测结核杆菌的荧光定量PCR方法并进行特异性、敏感性、重复性实验，对临床样品进行检测分析。结果：该方法的敏感性达到了1Pg，且特异性高．重复性好。应用荧光定量PCR法及抗酸染色、结核杆菌培养法，对332例活动性肺结核患者晨痰、215例活动性肺结核患者外周血、187例结核性胸膜炎患者胸水进行检测．荧光定量PCR技术阳性率分别为53．0％（176／332）、34．4％（74／215）、36．9％（69／187），经统计学比较分析，3种方法检测率差异有统计学意义（P〈0．01）。结论：荧光定量PCR技术具有简便、快速、防污染、敏感性与特异性高等优点，是结核病诊断的有效方法之一。[著者文摘]     

荧光定量PCR在乙型肝炎患者检测中的临床应用

目的　探讨荧光定量 PCR( fluorescence quantitative polymerase chain reaction,FQ-PCR)定量检测血清HBV-DNA的临床应用价值。方法　采用 FQ-PCR和 ELISA法检测 1 76例乙型肝炎患者血清 HBV DNA含量和 HBV血清学标志物 ,并进行比较分析。结果　 HBs Ag、HBe Ag和抗 -HBc三项阳性 ,HBs Ag、抗 -HBe、抗 -HBc三项阳性 ,HBs Ag、HBe Ag两项阳性 ,HBs Ag、抗 -HBc阳性的样品中 ,HBV DNA阳性率分别为 95 .1 %、83 .3 %、1 0 0 .0 %、81 .8% ,DNA拷贝数/ml分别为 2 .2 9× 1 0 7、1 .2 3× 1 0 6 、8.5 1× 1 0 6 、6.61× 1 0 5,其中以抗 -HBc-Ig M阳性组 DNA拷贝数为最高。结论　 FQ-PCR法检测 HBV DNA具有灵敏度高、结果可靠的优点 ,可检测 HBV感染和复制状态 ,对于乙肝的早期诊断、传染性判断和疗效考核具有重要的指导意义。     

荧光定量PCR技术在细菌L型检测中的应用

目的建立检测细菌L型的荧光定量PCR方法。方法应用药敏纸片法诱导金黄色葡萄球菌为L型,并用T ag-m an荧光定量PCR方法检测L型菌的存在。结果应用该方法可以检测到L型菌的存在,琼脂糖凝胶电泳分析也观察到阳性扩增条带。结论应用荧光定量PCR分析检测L型菌的存在操作简便、省时,为提高血液制品的安全性提供保证。     

应用荧光定量PCR技术检测HBVDNA的临床意义

ＰＣＲ定量技术作为基因诊断的主要方法 ,对疾病诊断、预后及药物疗效的评估起着十分重要的作用。我们应用荧光定量ＰＣＲ技术对 144 0例各型乙肝患者进行了ＨＢＶＤＮＡ的定量检测 ,现将结果报告如下。1　材料和方法1.1　一般资料病例选自 1999年 11月至 2 0 0 1年 11月我院门     

实时荧光定量PCR检测曲霉DNA技术的建立与临床应用

目的 利用LightCycler建立一种简便、特异的实时荧光定量PCR检测方法,用于系统性曲霉感染的快速检测.方法 用自行设计的高效率引物对标准菌株和临床疑为系统性曲霉感染患者血标本进行实时荧光定量PCR检测,对方法的敏感度和特异度进行评价,并与半乳甘露聚糖抗原检测比较.结果 琼脂糖凝胶电泳显示PCR产物分子量与预期分子量一致,熔解曲线峰值单一,对应温度值与预期值相同.检测97例可疑曲霉感染血标本,27例阳性,其中一次阳性7例,间断阳性14例,连续阳性6例,与临床诊断符合率为90%.结论 荧光定量PCR可敏感、特异地检测曲霉感染,有一定的临床应用前景.     

运用荧光定量PCR反应检测性病病原体

淋球菌 (ＮＧ)、沙眼衣原体 (ＣＴ)、解脲支原体 (ＵＵ)所致的泌尿生殖系感染 ,已成为我国各地区常见的性传播疾病。而快速、准确的性病病原体定量检测 ,是临床诊断治疗的迫切需求。为了解本地区这三种性病病原体感染现状 ,我们运用荧光定量ＰＣＲ技术 (ＦＱ -ＰＣＲ)对我院 3 14份标本进行ＮＧ、ＣＴ、ＵＵ联检 ,现报告如下。1　材料1 1　标本来源 :3 14例标本选自我院 2 0 0 1年 1月～ 2 0 0 2年2月间皮肤性病科、泌尿外科、妇产科门诊患者。男性取尿道口2～ 4ｃｍ分泌物 ,女性取宫颈内 2ｃｍ分泌物。放入含有 1ｍｌ无菌生理盐水的试管内…     

实时荧光定量PCR的研究进展及其应用

多聚酶链反应飞速的发展使其成为了分子生物学实验室重要的工具，实时荧光定量PCR(real-time quantitative PCR）以其敏感性高、重复性好、速度快和污染少使PCR技术又向前迈进了一步。本文对real-time Q-PCR技术的原理、五种主要的荧光化学及定量方法作一介绍，同时也讨论了此技术存在的不足，并对其目前在研究领域中主要的应用进行了概述。     

荧光定量PCR分析法在结核病诊断中的应用

为了探讨荧光定量PCR(FQ PCR)技术检测结核分枝杆菌的临床应用 ,本文采用FQ PCR技术检测 14 5例标本 ,并与培养法、抗酸染色法和PCR 电泳法进行比较。结果 :在 115例来自结核病人的高度怀疑有结核分枝杆菌的标本中 ,FQ PCR法检出阳性为 5 3例 ,其检出率高于PCR 电泳法检出率(4 8/ 115 )、培养法检出率 (4 3/ 115 )和抗酸染色法检出率 (31/115 ) ,30例非结核病的病人标本 ,四种方法均未检出结核分枝杆菌。FQ PCR法的阳性检出最低值为 10 3 拷贝 /ml,PCR 电泳法为 10 4拷贝 /ml。结果表明 ,FQ PCR技术是高度灵敏、高度特异的快…     

荧光定量PCR检测乙型肝炎病毒的临床意义

目的 评价荧光定量聚合酶链反应(PCR)检测乙型肝炎病毒(HBV)-DNA对辨别病毒复制的临床意义.方法 采用荧光定量PCR和酶联免疫吸附试验(ELISA)方法,检测258例乙型肝炎患者及100例健康对照血清的HBV-DNA和免疫学指标.结果 123份HBsAg、HBeAg、HBcAb三项均阳性的标本中FQ-PCR检测HBV-DNA阳性120份,阳性率为97.6%.在108份三项HBsAg、HBeAg、HBcAb均阳性的标本中FQ-PCR阳性43份,阳性率为39.8%.在100例乙肝血清免疫指标全阴的对照血清中,FQ-PCR全部阴性.结论 FQ-PCR在乙肝治疗方案选择和疗效观察方面具有广泛的应用前景.     

实时荧光定量PCR技术的理论研究及其医学应用

背景:实时荧光定量PCR是指在PCR反应体系中加入荧光基团,利用荧光信号累积实时监测整个PCR进程,最后通过标准曲线对未知模板进行定量分析的方法.目的:对实时荧光定量PCR的理论进行研究并探讨其在医学方面的应用和进展.方法:以real.time fluorescence quota PCR,theorem,application为检索词,检索PubMed数据库(2000-01/2008-12).以实时荧光定量PCR,原理,应用为检索词,检索万方数据库(2000-0112008-12),清华同方中文系列数据库(2000-01/2008-12).文献检索语种限制为英文和中文.以细胞因子和肿瘤耐药基因的表达为评价指标.纳入实时荧光定量PCR技术的方法学研究和实时荧光定量PCR技术的医学应用研究.排除重复性研究和Meta分析.结果与结论:实时荧光定量PCR技术不仅实现了PCR从定性到定量的飞跃,而且与常规PCR相比,它具有特异性更强、灵敏度高、重复性好、定量准确、自动化程度高、全封闭反应等优点,成为分子生物学研究中的重要工具.实时荧光定量PCR的应用范围非常广泛,包括mRNA表达的研究、DNA拷贝数的检测、单核苷酸多态性的测定等,已广泛应用于医学临床,它能对结核分枝杆菌、乙型、丙型肝炎、爱滋病病毒、淋球菌、沙眼衣原体等病原体进行准确的定量检测.其定量范围极宽,无需做梯度稀释,特异性更强,克服了假阳性.由于传统的PCR技术不能准确定量,使其在实际应用方面受到很大限制.因此,对PCR产物进行准确定量,尤其是病毒性病原的动态监控,成为迫切需要.     

荧光定量PCR检测技术在结核分枝杆菌耐药性检测中的应用价值

目的 分析荧光定量PCR检测技术在结核分枝杆菌耐药性检测中的应用价值.方法 选取2018年1月至2020年1月在漯河市第七人民医院肺科门诊或住院部结核患者1100例,所有患者均进行荧光定量PCR检测,与传统的罗氏药敏比例法对比,评价两种检测方法检测结核分枝杆菌耐药性的结果.结果 荧光定量PCR检测链霉素耐药的敏感度、特...     

实时荧光定量PCR的研究进展及其应用

多聚酶链反应飞速的发展使其成为了分子生物学实验室重要的工具 ,实时荧光定量PCR(real timequantitativePCR)技术以其敏感性高、重复性好、速度快和污染少使PCR技术又向前迈进了一步。本文对real timeQ PCR技术的原理、五种主要的荧光化学及定量方法作一介绍 ,同时也讨论了此技术存在的不足 ,并对其目前在研究领域中主要的应用进行了概述。     

应用TaqMan荧光定量PCR技术建立HIV前病毒检测方法

目的建立HIV前病毒荧光定量PCR检测方法。方法常规培养8E5／LAV细胞,收集后计数,提取HIV前病毒核酸,运用实时荧光定量PCR法扩增晚期逆转录基因片段（HIVFL）。结果建立的实时荧光定量PCR技术检测灵敏度可达1拷贝,扩增结果稳定可靠。结论成功建立了HIV前病毒检测方法,为今后筛选和鉴定潜伏感染细胞以及评价抗-HIV药物的治疗效果奠定基础。     

乙型肝炎病毒核酸的实时荧光定量PCR检测及其临床意义

目的建立实时荧光定量PCR(rea l-tim e fluorescence quan titative PCR,RFQ-PCR)检测HBV-DNA含量的方法,探讨其在乙型肝炎预防、诊断、治疗及判断病情等方面的临床应用价值。方法在HBV S基因高保守区设计了特异性的引物和探针,利用T aqM an探针的基本原理,PCR扩增目的片段并实时检测产物的荧光强度,根据标准品建立的标准曲线,由软件自动计算出待测样本中HBV-DNA的准确含量。结果220例临床样本的检测结果显示,乙肝大三阳患者HBV-DNA阳性率(98.8%)显著高于其它各组(P<0.01),病毒平均含量为7.52±0.43 cop ies/m l;小三阳患者HBV-DNA阳性率低于大三阳组(P<0.01),但平均病毒含量与大三阳组无差异(P>0.05),高达7.41±0.26 cop ies/m l;单独HB sA g阳性和单独HB sA b阳性组HBV-DNA阳性率分别为56.4%,19.2%,平均病毒含量分别为5.35±0.32 cop ies/m l,4.02±0.31 cop ies/m l;80例献血员血清仍有3例HBV-DNA阳性,其病毒含量低于其它各组。结论RFQ-PCR检测HBV-DNA含量比EL ISA法具有更好的灵敏度和特异性,能准确反映HBV在体内的复制情况,对临床上抗病毒药物的选择和判断疾病的预后意义重大。     

实时荧光定量PCR检测血浆结核分枝杆菌DNA的初步临床应用

目的 评价实时荧光定量PCR技术检测血浆（或血清）结核分枝杆菌（Mycobacterium tuberculosis,MTB）DNA的技术。方法 建立实时荧光定期量PCR方法测定血浆MTB DNA,分别检测临床确诊的55例结核病患者血清43份,血浆25份以及非结核肺部疾病患者血清18份,健康体检血清18份和健康体检者血浆11份的MTB DNA含量。结果 18例非结板肺疾病患者血清、18例健康体检者血清以及11例健康体检者血浆MTB DNA全部阴性。55例初诊结核患者中10例（18．2％）治疗前血浆（或血清）MTB DNA阳性。在痰涂片阴性的18例结核患者中,血浆（或血清）MTB DNA阳性检出率为27．8％（5／18）,其特异性达100％。结论 本研究证实了结核患者血浆（或血清）循环MTB DNA的存在,其定量检测对痰涂片阴性及无痰患者的结核病诊断有重要参考价值。     

定量PCR的研究进展

定量PCR技术是在PCR定性技术基础上发展起来的基因定量技术 ,克服了原有的PCR技术存在的不足 ,能准确敏感地测定模板浓度及检测基因变异等。本文就定量PCR技术中的竟争性PCR和荧光定量PCR技术作一综述 ,以便更好地理解及应用这项技术     

实时荧光定量PCR在人血液循环DNA检测中的应用

循环DNA主要存在于人血浆和血清等体液中，在多种人类疾病中含量升高，具有临床诊断意义和预后判断价值。本研究以人工重组质粒DNA为内参照物，建立双重实时荧光定量PCR检测方法，对健康人血浆和血清DNA含量进行定量测定。[第一段]