人白细胞介素2单克隆抗体的制备

作者采用自行制备ＩＬ－２纯品及免疫ＢＡＬＢ／Ｌ小鼠，将脾细胞与ＮＳ－１细胞融合，获得具有分泌稳定性抗体的高效价杂交瘤细胞株，细胞连续舆传４２代仍稳定分泌单克隆抗体，该抗体与ＩＬ－２有特殊吸附，杂交瘤核型呈双亲染色体特点。连续传代未见变异。     

重组人白细胞介素10单克隆抗体的制备

目的 制备重组人白细胞介素１０（ｒｈＩＬ－１０）单克隆抗体。方法 应用鼠－鼠 瘤技术建立分泌单克隆抗体的杂交瘤细胞系,ＥＬＩＳＡ检测朵交瘤细胞培养上清、腹水效价,双向免疫扩散试验进行亚类鉴定,Ｇｉｅｍｓａ染色镜下计数杂交瘤染色体数目。结果获得了２株能分泌抗ｒｈＩＬ－１０单克隆抗体的杂交瘤细胞系（１Ｄ３、２Ａ３）,无血清培养液效价为１：５１２、１：２５６,腹水效价１：１０＾４、１：１０＾４。ＵＪＦ     

抗重组人白细胞介素12单克隆抗体的制备及其生物学特性

以纯化的重组人白细胞介素12（rhIL-12）蛋白为抗原,制备具有生物活性的rhIL-12单克隆抗体（McAb）,并对其特性进行研究鉴定,为肿瘤及免疫相关性疾病的诊断与治疗提供具有实用价值的研究工具。方法： 以纯化的rhIL-12p70免疫BALB/C小鼠,采用杂交瘤技术,用间接ELISA法筛选抗体阳性的杂交瘤细胞及多次克隆化,培养制备杂交瘤细胞系,用clutathione sepharose 4B进行纯化。采用间接ELISA及Western blotting等方法对McAb的Ig亚类（型）腹水效价及特异性进行鉴定。结果：建立了3株持续分泌rhIL-12p70　McAb的杂交瘤细胞株,3株细胞染色体数目均为100条左右,证实为杂交瘤细胞,所分泌的抗体为2株IgG1亚类及1株IgG2a亚类,轻链属k型,小鼠腹水效价测定分别为1∶5.9×106、1∶2.9×10⁷、1∶3.6×10⁷,亲和力依次为EM5>EM6>EV9。结论：成功地制备了3株能稳定分泌抗rhIL-12p70的杂交瘤细胞株,产生的McAb特异性好,亲和力高。     

可溶性白细胞介素—2受体的研究进展

白细胞介素－２在机体免疫应答虽起重要作用，其可溶性受体通过与细胞受体竞争性结合对ＩＬ－２起调节作用，血清中ｓＩＬ－２Ｒ的浓度能灵敏地反映出机体的免疫状态，尤其是细胞免疫功能。因此，临床检测血清ｓＩＬ－２Ｒ可作为血液系统恶性疾病，淋巴瘤，实体瘤自身免疫病，感染及器官移植等的辅助诊断，判断疗效和预后的敏感指标。     

应用白细胞介素8单克隆抗体治疗寻常型银屑病的疗效观察

白细胞介素 8(ＩＬ 8)在银屑病的发病机制中有很强的白细胞趋化作用和角质形成细胞的丝裂原作用 ,在介导淋巴细胞和中性粒细胞皮肤的浸润中起关键作用。为此 ,我们观察了ＩＬ 8单抗乳膏外用治疗银屑病的疗效和安全性。一、对象与方法1.对象 :本院皮肤科患者 6 7例 ,其中男 41例 ,女 2 6例 ,年龄 18～ 6 5岁 ,平均 38.31岁 ,总病程 0 .5～ 480个月。皮损分型 :点滴状 8例 ,钱币状 5 7例 ,混合型 2例。进行期 2 8例 ,静止期 39例。 5 3例患者有上肢皮损 ,42例有胸背皮损 ,5 0例有下肢皮损 ,2 4例有头部皮损。入选标准 :符合寻常型银屑病诊断 ,…     

人降钙素原的原核表达及其单克隆抗体的制备

目的: 原核表达人降钙素原（procalcitonin,PCT）重组蛋白,制备高纯度的PCT单克隆抗体。方法: 将构建的PCT-pET22b表达载体转入大肠埃希菌BL21中诱导表达PCT蛋白,经Ni-NTA亲和层析法纯化,用蛋白质印迹法和胶体金法对其进行鉴定。获得的PCT重组蛋白采用长程免疫法皮下多点注射Balb/c小鼠,取小鼠脾细胞和骨髓瘤细胞（SP2/0）融合,筛选阳性杂交瘤细胞株并进行亚克隆4次。将细胞株注入小鼠腹腔收集腹腔积液获得单克隆抗体,经辛酸硫酸铵法和Protein G亲和层析法进行纯化。结果： SDS-PAGE电泳结果显示在相对分子质量约14 kDa处有一明显条带,与目的蛋白大小相符。蛋白质印迹法和胶体金法证明该可溶性蛋白为PCT。采用细胞融合技术成功筛选出7株阳性杂交瘤细胞,将其命名为B3,C4,C7,E9,F8,F10,G2。选B3和C4细胞株通过体内诱生法制备单克隆抗体,经纯化后纯度可达95%以上。间接ELISA法检测B3、C4抗体效价均可达10⁷,亲和常数分别为5.06×10⁸,7.3×10⁸。结论： 获得高纯度的PCT重组蛋白及其单克隆抗体,为PCT检测试剂盒的进一步研究提供了支持。     

抗人hER单克隆抗体的制备及其应用

目的:制备抗人hER单克隆抗体。方法:用原核表达的人雌激素受体(hER)重组蛋白为抗原,免疫BalB/c小鼠,取免疫小鼠脾细胞与小鼠骨髓瘤SP2/0细胞,进行细胞融合。结果:通过ELISA和免疫组织化学法筛选,有限稀释克隆化,得到一株分泌抗hER单克隆抗体的杂交瘤细胞株(2B8/1C5/2C3),经鉴定2B8/1C5/2C3分泌的单克隆抗体为IgG2a,利用Western Blot分析,显示在23kU处针对hER重组蛋白位置有一特异性条带;利用乳腺癌组织进行的免疫组织化学染色结果显示该株细胞产生的单克隆抗体与细胞核呈强阳性反应。结论:该单克隆抗体适于乳腺癌组织hER的免疫组化检测。     

绒毛膜促性腺激素受体单克隆抗体的制备及其特性的初步研究

We reported the production of monoclonal antibodies (McAbs) against chorionic gonadotropin hormone (CG) receptor by fusing spleen cells of BALB/c mice which had been immunized by purified bacteria (Pseudomonas maltophilia) CG receptor with mouse myeloma line SP2/0. Four hybridoma cell lines secreting CG receptor McAbs were obtained (ED490 DG390, AB890 and GE590). The titers of specific antibodies of both mice ascites and culture supernatant were 10(-2)-10(-6) and 1-10(-2) respectively, by solid phase ELISA. Double-Immunodiffusion test showed that the McAb GE590 was IgG1, and the McAbs ED490, DG390 and AB890 were IgG2b Immunoprecipitation indicated that 125I-HCG could bind the HCG receptor which had reacted with McAbs ED490, AB890 and DG390, suggesting that they may recognize the receptor with different antigenic determinant. Interaction of McAb GE590 with the receptor showed that the increased concentration of GE590 was in inverse proportion to the amount of 125I-HCG binding receptor, indicating that both the McAb and 125I-HCG could recognize a common site of receptor and that increased concentration of McAb GE590 may induce some change in conformation and structure of the receptor. Our study suggested that these McAbs may be used for studying structure of CG receptor.     

慢性肾衰患者血T细胞产生白细胞介素2及白细胞介素2受体的研究

本实验利用分离培养外周血单核细胞的上清液来刺激靶细胞的方法，研究了尿毒症未透析（non-HD)，血透（HD）及连续非卧床性腹膜透析（CAPD）患T细胞产生白细胞介素－2（IL－2）及白细胞介素－2受体（IL－2R）的表达，结果发现经们都显低于正常对照，其中血透的IL－2活性及IL－2R表达阳性细胞数显低于腹透，而与尿毒症未透析无差别。实验提示，尿毒症的细胞免疫功能低下，透析不能恢复这种异常的免疫状况，腹透的细胞免疫功能要优于血透。     

He─Ne激光照射对肿瘤患者IL─2基因表达作用的研究

本研究采用核酸杂交技术、ＥＬＩＳＡ、~３Ｈ─ＴｄＲ掺入法及免疫荧光技术检测肿瘤患者及５００只带瘤ＢＡＬＢ／Ｃ小鼠Ｈｅ─Ｎｅ激光照射前后ＩＬ─２ｍＲＮＡ、ｓＩＬ─２Ｒ、ｍＩＬ─２Ｒ及ＩＬ─２活性的变化。研究结果表明，Ｈｅ─Ｎｅ激光照射具有促进ＩＬ─２基因表达的作用。激光照射组ＩＬ─２ｍＲＮＡ、ｍＩＬ─２Ｒ、ＩＬ─２活性均明显增加，而血清ｓＩＬ─２Ｒ减少，瘤块明显缩小，与非激光组比较（Ｐ＜０．０１），差异有高度显著性。此研究从基因水平上阐明Ｈｅ─Ｎｅ激光具有促进肿瘤患者内源性ＩＬ─２产生的作用，为肿瘤的治疗提供了一条新途径。     

人胰磷脂酶A2纯化及单克隆抗体的制备

为建立磷脂酶Ａ２免疫检测法，纯化ＰＩ２Ａ２，将胰组织匀浆加热、离心去除沉积，上清过ＣＭ－ｓｅｐｈａｄｅｘＣ－２５ｓｙｇｇ，ｎｈ ｗｙｓ ｅ ＰＬＡ２的部分，纯化ＰＬＡ２样品经ＳＤＳ－ＦＡＤＥ电 一条区带。纯分的ＰＬＡ２作为抗原免疫ＢＡＬＢ／Ｃ小鼠，抗体产生后与骨髓瘤细胞融合，在ＰＧＥ－４０００促融下，融合为杂交瘤细胞株经ＥＬＩＳＡ法鉴定筛选出分泌抗ＰＬＡ２的细胞株，扩大培养后将杂交瘤细胞注射小鼠腹     

白细胞介素2（IL—2）脂质体的制备及其包封率测定

本文利用逆相蒸发法、薄膜法和超声法分别采用二种膜材包裹ＩＬ—２，制备出ＩＬ—２的大单层脂质体（ＬＵＶｓ）、多层脂质体（ＭＬＶｓ）和小单层脂质体（ＳＵＶｓ），并对其进行了包封率测定。结果表明，逆相蒸发法制备的ＩＬ—２大单层脂质体包封率最高（３４．５２±１．１２％）。