重组日本血吸虫26 kDa GST抗原免疫水牛后抗体动态及免疫保护性效果

目的　观察重组日本血吸虫 2 6kDaGST抗原 (reSjc2 6GST)免疫役用放养水牛 (简称水牛 )后抗体动态及免疫保护性的效果。　方法　试验组 96头水牛 ,用reSjc2 6GST免疫 3次 ,每次间隔 2wk ,3次剂量分别为 0 2、 0 2和 0 1mg。对照组 90头水牛不作免疫 ;观察 2组水牛免疫前及免疫后 2、 5、 9、 12、 15和 2 0个月的抗体水平及血吸虫感染率的变化。　结果　试验组机体产生特异性抗reSjc2 6GST抗体 ,其抗体水平呈明显的梯形升高趋势。试验组免疫后 2 0个月血吸虫感染率比免疫前下降了 62 2 % ,比同期对照组低 67 7%。　结论　用reSjc2 6GST免疫水牛能产生特异性抗体 ,在免疫后 2 0个月内维持较高水平 ,有一定的抗血吸虫自然感染的保护力。     

重组日本血吸虫26kDa GST抗原诱导水牛产生抗体及减少排卵的初步观察

目的　观察rSjc2 6GST抗原诱导水牛产生特异性抗体水平以及排卵数量的减少。　 方法　 2 0头水牛随机分为两组 ,每组 1 0头。试验组免疫rSjc2 6GST抗原 ,对照组注射佐剂 ,攻击感染日本血吸虫尾蚴后 ,定期检测抗rSjc2 6GST抗体、粪检虫卵和毛蚴。　 结果　水牛免疫rSjc2 6GST抗原后 1个月 ,产生抗rSjc2 6GST抗体 ,至 1 2个月一直维持较高水平。试验组水牛感染后 50～ 90d,粪便EPG和MPG几何均值明显低于对照组 ,但在 1 0 0d以后两组的EPG和MPG均逐渐降低 ,至 330d均为 0。结论　水牛免疫rSjc2 6GST抗原后能产生特异性抗体 ,维持较高水平至 1 2个月 ,在感染后 3个月内有显著的减卵效果 ,此后排卵量逐渐下降至阴性     

日本血吸虫（中国大陆株）22.6kDa重组抗原对小鼠免疫保护性的？…

为研究日本血吸虫２２．６ｋＤａ抗原的免疫保护性。方法：将其编码ｃＤＮＡ经ＰＣＲ扩增后亚克隆入载体重粒ｐＧＥＸ－１λｔ进行表达，并重组抗原免疫了一批昆明鼠。结论：证明重组的日本血吸虫２２．６ｋＤａ抗原可诱导宿主抗血吸虫感染的部分保护力。     

重组GST抗原对水牛的保护性及其防制血吸虫病效果的研究

目的　研究重组GST抗原对水牛的保护性及其防制血吸虫病的效果。方法　在洲垸亚型血吸虫病流行区 ,选择两个村居民役用水牛 ,试验组 96头水牛免疫重组GST抗原 ,对照组 90头水牛不免疫作对照 ;观察两组水牛血吸虫感染率、湖洲感染性钉螺密度等的变化。结果　试验组免疫 2 0个月后检测水牛 5 6头 ,感染率为 5 36 % ,比免疫前 (13 5 4 % )下降了6 0 4 1% ,比对照组同期 (16 6 7% )低 6 7 85 % ,试验组外洲易感地带感染性钉螺密度较免疫前降低了 71.4 3%。居民血吸虫感染率基本无变化。结论　水牛免疫重组GST抗原能产生一定的保护力 ,对降低水牛血吸虫病情有明显作用。     

重组日本血吸虫26kDaGST抗原免疫家兔后抗体动态观察

目的： 探讨重组日本血吸虫２６ ｋ Ｄａ Ｇ Ｓ Ｔ 抗原免疫家兔后抗体水平动态变化。方法： 家兔随机分为免疫组与佐剂对照组,免疫组用纯化重组日本血吸虫 ２６ ｋ Ｄａ Ｇ Ｓ Ｔ 抗原加福氏佐剂免疫;佐剂对照组用０．８５％ 盐水加福氏佐剂免疫。免疫后,每兔逐周取耳静脉血,采用酶联免疫吸附试验（ Ｅ Ｌ Ｉ Ｓ Ａ） 检测血清中特异性抗体水平。结果： 免疫组家兔从免疫后第４ ｗ ｋ 起血清中特异性抗 Ｇ Ｓ Ｔ 抗体升高,且维持在较高的水平达６５ ｗ ｋ。结论： 重组日本血吸虫 ２６ ｋ Ｄａ Ｇ Ｓ Ｔ 抗原免疫家兔后,特异性抗 Ｇ Ｓ Ｔ 抗体水平较对照组明显升高,且至少能维持 １ 年。     

日本血吸虫大陆株GST抗原

谷胱苷肽转移酶(GST)是以谷胱苷肽为共同底物的一组具有解毒功能的同工酶。国外研究证明血吸虫的GSTs含量丰富,是研究日本血吸虫疫苗的主要侯选抗原之一。有关日本血吸虫大陆株GST抗原的研究,作者曾在日本血吸虫24—26kDa和90kDa蛋白质“靶抗原”的抗原性研究,应用24—26kDa和90kDa蛋白质“靶抗原”免疫小鼠研制抗血吸虫“靶抗原”单克隆抗体,24—26kDa和90kDa蛋白质抗原用于血吸虫病诊断的可能性探讨,日本血吸虫24—26kDa抗原和重组Sj26抗原的抗原性和免疫原性比较研究等论文以及有关血吸虫疫苗研制的综     

日本血吸虫(中国大陆株)22.6kDa重组抗原对小鼠免疫保护性的初步研究

目的：为研究日本血吸虫（中国大陆株）22．6kDa抗原的免疫保护性。方法：将其编码cDNA经PCR扩增后亚克隆入载体质粒PGEX—1λt进行表达，并用重组抗原免疫了一批昆明鼠。结果：与对照组相比，重组抗原免疫小鼠获得了38．93％的减虫率。结论：证明重组的日本血吸虫22．6kDa抗原可诱导宿主抗血吸虫感染的部分保护力。     

日本血吸虫重组BCG-Sj26GST疫苗免疫小鼠保护力的观察

目的探讨日本血吸虫重组BCG-Sj26GST疫苗免疫鼠后对尾蚴攻击感染的保护作用。方法采用10^6和10^8CFU疫苗皮下接种免疫BALB／C鼠，免疫后8周用日本血吸虫尾蚴进行攻击感染，感染后6周剖杀小鼠，计算减虫率和减卵率，观察肝脏病理变化，测量虫卵肉芽肿周长和面积，测定血清中CAg、IgG及其亚类水平，同时设有PBS和BCG对照。结果疫苗接种组的减虫率为16．64％-46．20％，减卵率为55．75％-60．50％，肝组织病变明显减轻，虫卵肉芽肿的平均周长和平均面积显著减少，血清IgG和IgG2a水平明显升高，10^8CFU组CAg升高。结论日本血吸虫重组BCG-Sj26GST疫苗是一种新型比较理想的疫苗，值得进一步深入研究。     

日本血吸虫24—26kDa抗原和重组Sj26抗原的...

This paper reports on the comparison of the recombinant Sj26 (rSj26) antigen originated from the Philippine strain and 24-26 kDa antigen isolated and purified from Chinese mainland strain of S. japonicum for their antigenicity and immunogenicity. The results showed that there were obvious cross reactions between rSj26 and 24-26 kDa antigen when rSj26 antigen was tested against specific antibodies in sera from mice infected with the mainland strain of S. japonicum or 24-26 kDa antigen was tested against specific anti-rSj26 antibodies by ELISA, IFA and Western blotting etc. Both of 24-26 kDa and rSj26 antigen had weak cross reaction with SEA antigen. The worm reduction rate after challenging with mainland strain cercariae in mice immunized with rSj26 was 26-32%, similar to that in mice immunized with 24-26 kDa antigen. It is suggested that rSj26 antigen can induce certain level of specific protective immunity to protect the host against infection by Chinese strain of S. japonicum cercaciae.     

血吸虫多基因非融合性膜锚定表达疫苗的研究

目的 构建日本血吸虫多基因非融合性膜锚定表达疫苗pIRES-Sj97-Sj14-Sj26,并研究其免疫原性及免疫保护作用。 方法 构建日本血吸虫脂肪酸结合蛋白（Sj14）、谷胱甘肽-S-转移酶（Sj26）和副肌球蛋白（Sj97）的跨膜共表达质粒pIRES?鄄Sj97-Sj14-Sj26,转染HeLa细胞。通过RT?鄄PCR法检测Sj14、Sj26和Sj97 mRNA的表达,免疫荧光（IFA）检测Sj14、Sj26和Sj97蛋白的表达。用纯化的该质粒免疫BALB／c小鼠（100 μg/只）,设生理盐水和空载体对照组,20只/组,每隔2周加强免疫1次,共免疫3次。末次免疫2周后,每组取10只小鼠,眼球取血并断颈处死,取脾淋巴细胞及腹腔巨噬细胞。分别检测免疫小鼠血清中总IgG抗体及脾淋巴细胞培养上清干扰素-γ（IFN-γ）水平,淋巴细胞刺激指数（SI）及 NO释放量,并分析脾淋巴细胞亚群。各组中余下小鼠每只经腹部感染40±1条尾蚴,45 d后剖杀,计数成虫数及肝卵数,计算减虫率和减卵率。结果 构建的质粒可在体外表达。疫苗组、生理盐水组和空白质粒组血清总IgG抗体含量分别为（5.62±0.64）、 （1.22±0.20）及（1.48±0.36） mg/ml,疫苗组与各对照组差异均具有统计学意义（P<0.01, P<0.05）。疫苗组、生理盐水组和空白质粒组小鼠腹腔巨噬细胞NO含量分别为（321.19±18.03）、 （184.12±11.05）及（213.51±15.93） nmol/ml,疫苗组与生理盐水组间差异有统计学意义（P<0.05）。疫苗组、生理盐水组、空白质粒组小鼠脾淋巴细胞刺激指数分别为（2.25±0.29）、（1.18±0.07）及（1.22±0.09）,疫苗组显著升高（P<0.01）。疫苗组INF-γ水平与各对照组相比,差异具有统计学意义（P<0.01）;CD4+和CD8+T细胞百分比明显升高。疫苗组减虫率和肝减卵率分别为39.9％和43.94％。 结论 pIRES-Sj97-Sj14-Sj26疫苗具有较强的免疫原性,可对日本血吸虫感染的小鼠产生一定保护作用。     

日本血吸虫体表蛋白rSj29的保护性效果

目的 克隆表达日本血吸虫体表蛋白Sj29基因,分析其表达特性和免疫保护效果。 方法 根据日本血吸虫体表蛋白Sj29基因序列（GenBank登录号为AY814537）设计引物,PCR扩增目的基因,生物信息技术分析序列特性。将目的基因部分片段亚克隆到原核表达载体pET28c中,构建重组质粒pET28c-Sj29,将其转至大肠埃希菌后用异丙基-β-D-硫代半乳糖苷（IPTG）诱导表达,组氨酸（His）柱亲和层析法纯化重组蛋白;蛋白质印迹(Western blotting)分析其免疫原性。30只雌性BALB/c小鼠均分3组,实验组每鼠皮下多点注射重组蛋白rSj29共100 μl（0.1 mg/ml,用206佐剂配制）、佐剂对照组和空白（PBS）对照组,分别免疫3次,每次间隔2周。末次免疫后2周用血吸虫尾蚴攻击感染小鼠,每鼠40±2条,感染后第53天剖杀,收集虫体计算减虫率;取肝脏和粪便计算减卵率。ELISA法检测实验鼠血清特异性IgG抗体水平,免疫组织化学法检测rSj29蛋白在各期虫体的定位,荧光定量PCR法分析各期虫体及攻击感染后42 d虫体Sj29基因表达水平。 结果 获得576 bp的Sj29基因。重组蛋白的相对分子质量（Mr）为22 900,以包涵体形式存在。Western blotting表明,重组蛋白可被免疫小鼠血清和感染日本血吸虫的小鼠血清识别。攻击感染后42 d,小鼠体内Sj29基因转录水平分别为佐剂对照组和空白对照组虫体的9.1倍和51.8倍。实验组小鼠成虫数（15.4±5.9）、肝组织虫卵数（40 143.3±2 995.9）和粪便虫卵数（3 803.9±110.9）与空白对照组相比,差异均有统计学意义（P<0.05）。ELISA结果显示,免疫小鼠可产生高滴度（1 ∶ 32 000）特异性IgG抗体。免疫组织化学结果表明,重组蛋白rSj29可在7、14 d童虫,28、32 d成虫和42 d雄、雌虫的体表表达。荧光定量PCR结果表明,虫龄为32 d的日本血吸虫成虫Sj29基因转录水平最高。 结论 重组蛋白rSj29有一定的免疫保护效果。     

日本血吸虫SjPP基因重组杆状病毒的构建和在昆虫细胞中的表达

目的 在昆虫细胞中表达获得可溶性的日本血吸虫SjPP重组蛋白。 方法 提取日本血吸虫成虫总RNA,通过RT-PCR扩增出SjPP基因的编码区序列,将其定向克隆到供体质粒pFastBac HT-B中,构建重组杆状病毒供体质粒pFastBac-SjPP,转化入大肠埃希菌DH10Bac进行转座,提取重组杆粒Bacmid-SjPP,用阳离子脂质体法转染粉纹夜蛾（TN5B1-4）细胞。利用十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）和蛋白质印迹（Western blotting）分析重组蛋白表达情况。 结果 构建了含日本血吸虫SjPP基因的重组杆粒Bacmid-SjPP,转染TN5B1-4细胞后,获得有感染力的重组杆状病毒,并在TN5B1-4细胞中成功表达SjPP蛋白。该重组蛋白可被抗SjPP蛋白的兔血清识别。 结论 成功构建SjPP基因重组杆状病毒,并在TN5B1-4细胞中表达,该蛋白具有良好的抗原性。     

重组日本血吸虫Sj16蛋白调节宿主炎症反应的实验研究

目的 评价日本血吸虫重组蛋白（reSj16）调节宿主炎症反应的效果。方法 在大肠埃希菌中对重组pGEX-4T-1-Sj16基因进行原核表达并纯化重组蛋白。56只昆明小鼠随机分为7组（每组8只）,其中5个实验组,所用reSj16蛋白剂量分别为0.1、0.5、1.0、5.0和10.0 μg/kg;并设地塞米松（5.0 μg/kg）和生理盐水（0.1 ml/只）对照组。进行小鼠耳廓肿胀和毛细血管通透性实验,观察reSj16蛋白对二甲苯致小鼠耳廓肿胀作用和毛细血管通透性改变的影响。56只SD大鼠进行角叉菜胶所致大鼠足跖肿胀实验,56只昆明小鼠进行实验性腹膜炎小鼠腹腔毛细血管通透性改变实验,观察reSj16调节宿主炎症反应效果。 结果 0.1、0.5、1.0、5.0和10.0 μg/kg的reSj16蛋白均可明显减轻二甲苯所致小鼠耳廓肿胀和毛细血管通透性增加,抑制角叉菜胶所致大鼠足跖肿胀,明显抑制实验性腹膜炎小鼠腹腔毛细血管通透性增高,且具有一定的剂量依赖关系。1.0、5.0和10.0 μg/kg的reSj16蛋白组与对照组相比,差异具有统计学意义。 结论 Sj16具有明显的调节宿主炎症反应的作用。     

日本血吸虫不同阶段抗原免疫抑制过敏性哮喘小鼠气道炎症的实验观察

目的 观察日本血吸虫不同生活史阶段抗原对过敏性哮喘小鼠气道炎症的影响。方法 雌性BALB/c小鼠48只,随机均分8组,A组为健康对照组;B组为哮喘模型组,以鸡卵白蛋白（OVA）抗原腹腔注射致敏,OVA滴鼻诱发哮喘;C、D和E组小鼠分别用可溶性虫卵抗原（SEA）、可溶性成虫抗原（SWA）和童虫抗原（SSA）经腹部皮下免疫,共4次,每次间隔1周,末次免疫后1周再按B组方法诱发哮喘;F、G和H组分别用SEA、SWA和SSA免疫接种小鼠（免疫方法及剂量分别同C、D、E组）,末次免疫后1周用等量生理盐水代替OVA处理小鼠,不诱发哮喘。诱发哮喘后48 h剖杀各组小鼠,观察各组小鼠肺组织的病理变化和支气管肺泡灌洗液（BALF）中的相关细胞成分及细胞因子的变化。 结果 A组小鼠气道肺组织无明显炎症变化;B组小鼠气道肺组织可见明显的炎性细胞,尤其是嗜酸粒细胞的浸润;C、D和E组小鼠气道肺组织炎症明显轻于B组小鼠。B组小鼠BALF中白细胞总数［（98.4±16.1）×10⁴/ml］、嗜酸粒细胞百分数[（17.6±4.3）×10⁴/ml]和白细胞介素-5(IL-5)水平［（197.9±36.5）pg/ml］均明显高于A组［分别为（8.2±1.1）×10⁴/ml、（0.02±0.01）×10⁴/ml和（12.3±7.4）pg/ml］,而IL-10和γ干扰素(IFN-γ)水平明显低于A组。C、D和E组小鼠BALF中白细胞总数、嗜酸粒细胞百分数和IL-5水平均明显低于B组,而IL-10,IFN-γ水平则明显高于B组,差异有统计学意义（P<0.05）。 结论 日本血吸虫不同抗原免疫后能有效调节过敏性哮喘小鼠的细胞因子平衡,同时对哮喘小鼠嗜酸粒细胞在肺组织中的浸润及肺组织炎症都有一定的抑制作用。     

日本血吸虫中国大陆株基因重组抗原 Sj22.6kDa 的免疫学活性鉴定

目的：对重组Ｓｊ２２．６ｋＤａ抗原（ｒＳｊ２２．６）进行免疫学活性鉴定,了解其作为疫苗候选抗原的潜力。方法：Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ反应确定ｒＳｊ２２．６的抗原性;将ｒＳｊ２２．６注射家兔,制备特异抗血清;以血吸虫尾蚴对Ｃ５７小鼠进行攻击感染,初步鉴定其免疫保护力。结果：ｒＳｊ２２．６可与特异性抗体发生反应,并刺激家兔产生特异性抗体应答,抗体滴度为１１２８０。攻击感染中,免疫组小鼠的减虫率达７７．２％。结论：ｒＳｊ２２．６具有良好的免疫学活性,在诱导抗日本血吸虫感染方面具有一定的潜力。     

日本血吸虫线粒体nad4基因部分序列的多态性研究

采用PCR技术及DNA序列分析技术对采自湖南省4个不同地区的日本血吸虫的线粒体NADH脱氢酶基因亚基Ⅳ（nad4）部分片段（pnad4）进行克隆及序列分析,获得480 bp的pnad4序列。与GenBank上的日本血吸虫相应基因序列进行比对,发现pnad4序列有一定的种内差异（0.4％～1.3％）。     

日本血吸虫染色体核型分析及C带和G带的制备

收集日本血吸虫成虫,常规气干法制备血吸虫染色体,改进的BSG法制备C带,胰酶消化法制备G带,分析其染色体核型和C带、G带带型特征。研究表明其核型公式为2n= 4m+6Sm+4St+2性染色体,C带带型公式为2n= 5CI++4CI++3CI+2CT+2CT+,各对染色体显示出特征性的G带。