聚合酶链反应-微孔板杂交技术用于结核分枝杆菌的检测

目的建立结核分枝杆菌的ＰＣＲ酶联免疫吸附测定（ＥＬＩＳＡ）方法，使ＰＣＲ结果判定更加客观。方法我们使用玻璃粉吸附提纯模板ＤＮＡ，将ＰＣＲ引物５′端标记生物素，用ＰＣＲ产物与微孔板中预先包被的克隆靶基因杂交，然后用酶标链霉亲和素与杂交体中的生物素结合，最后用酶底物与所标记酶进行显色反应，通过测定其吸光度来判断结果。结果所建立的ＰＣＲＥＬＩＳＡ检测法可提高检测的灵敏度和特异性。对５０份来自结核病人高度怀疑有结核分枝杆菌的标本检测表明，ＰＣＲＥＬＩＳＡ检出２２份阳性，比抗酸染色法（７／５０）、培养法（１３／５０）和ＰＣＲ电泳法（１８／５０）检出率高，而２０份证实无结核分枝杆菌的标本，几种方法检查均为阴性。结论该法可敏感、特异和客观地检测临床标本中的结核分枝杆菌。     

改进聚合酶链反应检测方法提高结核分枝杆菌检出率

改进聚合酶链反应检测方法提高结核分枝杆菌检出率张捷，李小英，寇丽筠各种聚合酶链反应（ＰＣＲ）检测临床标本的结核分枝杆菌（ＭＴＢ）已被国内外公认是一个快速可靠的检测方法。我们应用ＰＣＲ方法和杂交技术期间发现尚有许多问题有待探讨。如应用该法对临床１８２份...     

结核分枝杆菌的检测及分子生物学技术应用评价

文中分析了几种传统的结核杆菌检测方法及分子生物学技术在结核分枝杆菌检测中的应用。ＰＣＲ技术具有快速、敏感和特异性高的优点，但结果的精确性在各实验室之间仍存在着差异，尽管如何，ＰＣＲ技术对结构分枝杆菌早期感染和ＭＤＲ结核病的直接检测，仍具有其独特的优势。同时，指出了影响ＰＣＲ结果精确性的因素，以及对新暴露的人群，在ＰＣＲ检测阳性、结核菌素试验和结核杆菌培养结果阴性的情况下，阴性预测值（ＮＰＶ）的研究     

PCR扩增IS6110用于检测痰液中结核分枝杆菌的评价

为评价ＰＣＲ扩增ＩＳ６１１０检测结核分枝杆菌的特异性，用Ｂａｃｔｅｃ培养法对４５例可疑肺结核病人痰样品进行分枝杆菌检测；用４对分别针对ＩＳ６１１０不同区域引物和一对分枝杆菌属特异的１６ＳｒＲＮＡ基因引物对这４５例痰样品及其培养物和２７株已知分枝杆菌属菌株进行ＰＣＲ扩增检测。结果所有分枝杆菌ＤＮＡ均扩增出了１６ＳｒＲＮＡ基因片段，结核分枝杆菌ＤＮＡ均扩增出了ＩＳ６１１０的４个不同区域片段，非典型分枝杆菌ＤＮＡ均未扩增出ＩＳ６１１０片段，但存在假阳性和假阴性     

应用聚合酶链反应检测胸水中结核分枝杆菌DNA

应用聚合酶链反应（ＰＣＲ）技术检测１２８例胸水中结核分枝杆菌ＤＮＡ，并将涂片镜检和分离培养作为参比方法。试验结果显示：ＰＣＲ直接检测胸水中结核分枝杆菌的灵敏为３１个菌体单位，敏感性为４２．３％，特异性为９６．８％，高于涂片镜检和分离培养的检出率（３８．２％和３５．１％）。该法具有敏感性高，特异性强和简便快速等优点，特别适合含微量结构分枝菌临床标本的检测，可用于结核性胸膜炎早期和鉴别诊断。     

微孔板杂交法检测结核分枝杆菌的初步临床应用

目的：对ＰＣＲ－微孔板杂交法的临床应用进行评价。方法：取临床标本２６８例分别进行抗酸染色、培养、ＰＣＲ扩增产物电泳、ＰＣＲ微孔板杂交四种方法的比较。结果：在２１６份临床高度怀疑有结核分枝杆菌感染的患者标本中,ＰＣＲ－微孔板杂交法检测阳阳性为９８例,其检出率高于ＰＣＲ－电泳法（９１／２１８）、培养法（８１／２１８）和抗酸染色法（５６／２１８）,５０份临床证实无结核分枝杆菌感染的病人标本,四种方法均未     

耐利福平结核分枝杆菌rpoB基因突变

利福平（ＲＦＰ）耐药性的产生系由于结核分枝杆菌（结核菌）编码ＲＮＡ聚合酶β亚基（ｒｐｏＢ）的基因突变所致［１］。目前检测ｒｐｏＢ基因突变的聚合酶链反应（ＰＣＲ）方法，所用引物大多对结核菌特异性较差，其他分枝杆菌也能获得扩增。我们结合国外研究资料，采用...     

结核分枝杆菌四种检测方法的比较研究

结核分枝杆菌四种检测方法的比较研究陈东科张秀珍我们采用聚合酶链反应（ＰＣＲ）法、４６０ＴＢ自动检测系统快速培养法（ＢＡＣＴＥＣ法）、改良罗氏培养法（Ｌ－Ｊ法）、金胺－酚染色法４种检测方法同时检测１１５份临床患者标本中的结核分枝杆菌，并对结果进行了分析...     

聚合酶链反应检测肺炎衣原体方法的建立与初步应用

目的 探讨聚合酶链反应（ＰＣＲ）技术在肺炎衣原体检测中的应用。方法 参照Ｃａｍｐｂｅｌｌ报道的肺炎衣原体全基因序列、Ｇ＋Ｃ比例和次级结构设计一对引物，采用ＰＣＲ法检测肺炎衣原体ＤＮＡ有临床标本中的肺炎衣原体感染。结果 经对肺炎衣原体、沙眼衣原体、大肠埃希菌、溶血性链球菌、白色念珠菌和结核分枝杆菌培养物进行ＰＣＲ扩增，结果只有肺炎衣原体出现单一４３７ｂｐ的扩增区带；敏感性试验可检测出１０ｆｇ的肺炎衣     

PCR直接测序法分析结核分枝杆菌katG基因突变

为了了解我国结核分枝杆菌耐异烟肼（ＩＮＨ）分离株ｋａｔＧ基因突变情况，研究其临床意义。本研究通过聚合酶链反应（ＰＣＲ）、ＰＣＲ－单链构象多态性（ＳＳＣＰ）和ＰＣＲ直测序法分析９２株结核分枝杆菌临床分离株的ｋａｔＧ基因。以Ｈ３７Ｒｖ标准株为对照，２３株药物敏感体中，２１株ｋａｔＧ基因ＳＳＣＰ分析正常，２株异常。３６株耐非ＩＮＨ药物的分离株中，２０株ｋａｔＧ基因ＳＳＣ正常，１６株异常。３３株耐ＩＮＨ分     

定量PCR技术的研究进展

定量ＰＣＲ技术的研究进展陈建魁综述牟兆钦审校（军事医学科学院附属医院，北京１０００３９）关键词定量ＰＣＲ核酸检测技术聚合酶链反应（ＰＣＲ）技术建立以来，定性技术不断改进和完善，可以达到检测单个靶序列的水平。但实际工作中常需要定量检测标本中核酸，而不是...     

结核分枝杆菌培养及PCR法研究进展

自８０年代后期以来,全球结核病患者人数呈上升趋势,因此结核分枝杆菌的检出对结核病的诊断和治疗就显得尤为重要。本文综述了有关结核分枝杆菌培养及ＰＣＲ法的研究进展。     

新型结核分枝杆菌核酸检测试剂盒的临床应用初步评价

目的通过对比实验,对结核分枝杆菌（TB）核酸检测试剂的临床使用效果进行评价。方法用分离培养法与圣湘生物结核分枝杆菌（TB）核酸检测试剂分别对202例临床收集的样本进行结核分枝杆菌的检测并对比其结果,同时,将两种检测方法的检测结果分别与测序法结果进行对比。结果结核分枝杆菌核酸检测试剂与培养法的阳性一致性百分比为100%,阴性一致性百分比为98.61%,总一致性百分比为99.01%;对2例不符样本进行测序复核,并对复核后的结果进行Kappa检验一致性分析,结果 Kappa值为1.000,表明结核分枝杆菌核酸检测试剂结果与金标准分离培养法的结果具有很好的一致性,表现出较好的准确性。结论结核分枝杆菌核酸检测试剂与分离培养法的结果具有很好的一致性,且阳性率较分离培养法更高,所需检测时间大为缩短,具有内标控制假阴性,结果准确,符合临床检测要求,具有较高的临床应用价值。     

聚合酶链反应-反向斑点杂交鉴定分枝杆菌菌种

目的 建立一种简便、快速、敏感和特异的分枝杆菌菌种鉴定方法。方法以１６ＳｒＤＮＡ为靶序列,采用聚合酶链反应（ＰＣＲ）－反向斑点杂交检测２５种分枝杆菌１１种分枝杆菌标准株、１２０株分枝杆菌临床分离株和２６份痰标本。结果 分枝杆菌、非分枝杆菌标准株经ＤＮＡ扩增,分枝杆菌均出现５７８ｂｐＤＮＡ片段,非分枝杆菌除假白喉棒状杆菌可见同样片段外,其余菌种均未见扩增。敏感性试验可检测出１００ｆｇ结核分枝杆菌ＤＮ     

应用聚合酶链反应-微孔板反相杂交技术检测结核分枝杆菌

近年来，应用聚合酶链反应（ＰＣＲ）技术检测结核分枝杆菌（结核菌）的方法已被广泛应用于临床，其灵敏、快速、简便等优点得到公认［１］。但是由于受诸多因素的影响，检测结果容易出现假阳性及假阴性，给临床诊断带来困难。我们采用特异性结核菌探针，通过微孔板反相杂...     

分枝杆菌的分子诊断

结核病仍然是世界范围的主要传染病，由于致病菌结核分支杆菌生长速度缓慢，结核杆菌和其他的临床上重要的分枝杆菌的分离，鉴定和药物敏感试验需要几个星期或更长的时间，近年来，多种分子诊断方法已用于分枝杆菌的直接检测，菌种鉴定和药物敏感实验，极大缩短了诊断时间，两种核酸扩增方法改良型结核分支杆菌直接试验和Amplicor结核分枝杆菌试验已经获得FDA批准用于临床标本结核分枝杆菌的检测，PCR测序和DNA探针作为多数分枝杆菌的菌种鉴定的常规手段。高通量的寡核苷酸阵列已用于分枝杆菌利福平耐药基因突变的检测和菌种的鉴定。     

支气管肺泡灌洗液结核抗体检测在肺结核诊断中的应用

近几年运用ＰＣＲ检测结核分支杆菌已得到广泛应用，ＰＣＲ属病原学检测，若严格防止污染，特异性可达１００％，不受菌种及数量的影响。对细菌量少、痰菌培养为阴性的肺结核的早期诊断及鉴别诊断和肺外结核的诊断具有重要意义。据报道对痰标本涂片阳性的病人应用ＰＣＲ技...     

结核特异性细胞免疫反应试验在结核病中的诊断价值

目的通过对结核特异性细胞免疫反应(TB-IGRA)试验结果进行分析,探讨TB-IGRA在结核病诊断及鉴别诊断中的意义。方法收集甘肃省人民医院2014年1~12月住院的肺结核、疑似肺结核及肺外结核患者共1 366例,采用TB-IGRA检测结核分枝杆菌相关γ-干扰素,进行敏感度和特异性指标分析,与涂片镜检、结核抗体检测及结核分枝杆菌核酸检测方法进行比较。结果 TB-IGRA在肺结核及肺外结核病中的阳性检出率高达85.40%及86.20%,同时与涂片镜检、结核抗体检测及结核分枝杆菌核酸检测比较,其阳性率分别为82.90%、36.60%、11.00%和31.70%。TB-IGRA检测阳性率显著高于另3种方法。结论 TB-IGRA是检测结核分枝杆菌的快速敏感指标,且优于传统方法,在临床结核病诊断中有重要价值。     

多聚酶链式反应快速检测肺活检组织中的结核杆菌DNA

利用多聚酶链式反应（ＰＣＲ）对３１例病理可疑诊断为结核的肺活检切片进行结核菌ＮＤＡ的检测，并与抗酸染色进行了比较。用蛋白酶Ｋ和冻融裂解法快提切片中ＤＮＡ。３１例中有２４例ＰＣＲ阳性，１４例抗酸染色阳性；其中１７例抗酸染色阴性经ＰＣＲ检出１２例阳性，１４例抗酸染色阳性ＰＣＲ检出１２例阳性。ＰＣＲ检测阳性率明显高于抗酸染色（Ｐ＜０．０１）。说明ＰＣＲ用于肺活检组织诊断结核是一快速、敏感性较高、特异性较强的技术。此外，对影响ＰＣＲ结果的因素进行了分析。     

不同分子检测方法在肺结核诊断中的应用评估

摘要：目的 探讨不同分子检测方法在肺结核诊断中的应用价值。 方法 回顾性选取 ２０１９ 年 １ 月至 ２０２０ 年 １２ 月南京市第 二医院收治的住院患者 ２９３ 例，依据最终临床诊断分为肺结核组 １７１ 例，非结核肺病组 １２２ 例。 所有患者均采集痰液标本，进 行痰抗酸染色涂片、ＢＡＣＴＥＣ ＭＧＩＴ ９６０ 分枝杆菌快速培养、荧光定量 ＰＣＲ（ＦＱ?ＰＣＲ）检测结核分枝杆菌 ＤＮＡ、结核分枝杆菌 ＲＮＡ 恒温扩增检测技术（ＳＡＴ?ＴＢ）和结核分枝杆菌／ 利福平耐药实时荧光定量核酸扩增检测技术（Ｘｐｅｒｔ ＭＴＢ／ ＲＩＦ）检测。 结 果 ２９３ 例患者中，最终临床诊断肺结核 １７１ 例，非结核肺病 １２２ 例；痰涂片总阳性 ７０ 例（２３．８９％），其中有 １３ 例经菌种鉴定 为非结核分枝杆菌；快速培养总阳性 ７０ 例（２３．８９％），ＳＡＴ?ＴＢ 总阳性 ５６ 例（１９．１１％），ＦＱ?ＰＣＲ 总阳性 ７５ 例（２５．６０％），Ｘｐｅｒｔ ＭＴＢ／ ＲＩＦ 总阳性 ８５ 例（２９．０１％）；５ 种方法的敏感性分别为 ３３．３３％、４０．９４％、４３．８６％、３２．７５％、４９．７１％，痰涂片的特异性和阳性 预测值为 ８９．３４％、８１．４３％，其余方法均达 １００％，其中 Ｘｐｅｒｔ ＭＴＢ／ ＲＩＦ 和临床诊断一致性最高（Ｋａｐｐａ ＝ ０．４５１）；１７１ 例肺结核患 者中，痰涂片阴性 １１４ 例（ ６６． ６７％），培养阴性 １０１ 例（ ５９． ０６％）；涂阳培阴肺结核 ８ 例（ ４． ６８％）、涂阳培阳肺结核 ４９ 例 （２８．６５％）、涂阴培阳肺结核 １９ 例（１１．１１％）、涂阴培阴肺结核 ９５ 例（５５．５６％），Ｘｐｅｒｔ ＭＴＢ／ ＲＩＦ 在涂阳培阴肺结核、涂阳培阳肺 结核、涂阴培阳肺结核、涂阴培阴肺结核 ４ 组患者中的阳性检出率均最高（３７．５％、９７．９６％、７８．９５％、１７．８９％）。 结论 Ｘｐｅｒｔ ＭＴＢ／ ＲＩＦ 具有较高的阳性检出率、敏感性和特异性，与临床诊断的一致性较好，在肺结核诊断中具有较高的应用价值，适合推 广使用。