增生性瘢痕成纤维细胞与正常皮肤成纤维细胞生长差异比较

【目的】探讨增生性瘢痕成纤维细胞与正常皮肤成纤维细胞基因表现型的差异以及EGF、PDGF和bFGF对其的影响。【方法】测定细胞生长曲线;应用液闪计数测定成纤维细胞胶原蛋白的合成。【结果】增生性瘢痕成纤维细胞增殖速度比正常皮肤成纤维细胞慢;胶原蛋白的合成高于正常皮肤成纤维细胞。EGF、PDGF和bFGF均对两种成纤维细胞的增殖具有强烈的刺激作用。EGF和bFGF可减少增生性瘢痕成纤维细胞的胶原蛋白合成,PDGF可以使两种成纤维细胞的胶原蛋白合成增加。【结论】增生性瘢痕成纤维细胞是一种特殊基因表现型的成纤维细胞,它具有自己特殊的生物学特性。EGF、PDGF和bFGF在增生性瘢痕的形成过程中可能具有重要作用。     

皮肤成纤维细胞培养的体会

国内已有一些科研单位开展了皮肤成纤维细胞的培养技术〔１〕，因其在核型分析中稳定性好，并能够表达其来源个体的基因组中与代谢有关的绝大多数基因，利用理化方法予以检测。此外皮肤组织取材方便、安全，易为患者接受，可以动态观察，细胞株可储存备用，故有着重要的实...     

猪皮肤成纤维细胞的培养与鉴定

目的　研究猪内源性逆转录病毒在体内和体外的感染性 ,建立理想的细胞模型 ,为猪一人间跨种移植的生物安全性评价奠定良好的基础。方法　运用组织块培养法、冷胰蛋白酶方法及热胰蛋白酶方法培养猪皮肤成纤维细胞 ,比较 3种方法的优点和缺点。结果　建立了猪皮肤成纤维细胞系组织块培养法优于胰酶法。结论　应用组织块培养法培养猪皮肤成纤维细胞优于胰酶法 ,经济实惠、操作简便、易于掌握 ;并为研究PERV在体内和体外的感染性提供了理想的细胞模型 ,为评估猪一人间跨种移植的生物安全性提供一种新的方法 ;对建立动物克隆生产的皮肤体外培养模式具有重要的参考价值。     

雌激素对人正常皮肤成纤维细胞的影响

目的:探讨雌激素对人正常皮肤成纤维细胞的影响,为进一步探讨雌激素抗皮肤衰老的机制和开发抗衰老护肤品提供新思路。方法:采集正常成人皮肤标本,分离培养真皮成纤维细胞;以流式细胞术检测17β-E2作用前后成纤维细胞内活性氧(ROS)水平的改变,以及检测丙二醛(MDA)含量和三种抗氧化酶(SOD,GSH-px,Cat)的活性。结果:①雌激素浓度为1×10-6-1×10-10mol/L(生理浓度至药理浓度范围之内)时,可促进人皮肤成纤维细胞的增殖;②雌激素浓度为1×10-7-1×10-10mol/L时,可以减少人正常皮肤成纤维细胞内MDA的生成,加速三种抗氧化酶的产生;③1×10-6-1×10-10mol/L雌激素作用于人皮肤成纤维细胞后,可以降低细胞内活性氧(ROS)的产生。结论:雌激素在一定浓度时具有改善人正常皮肤成纤维细胞生物学特性的作用,且药物浓度与对人皮肤成纤维细胞的作用密切相关。     

绵羊胎儿成纤维细胞体外培养及转基因研究

目的用增强型绿色荧光蛋白(EGFP)基因转染体外培养绵羊胎儿成纤维细胞,探讨绿色荧光蛋白对绵羊胎儿成纤维细胞生物学特性的影响.方法体外分离培养绵羊胎儿成纤维细胞,经脂质体介导EGFP基因转染第一代成纤维细胞,G418筛选10～12*!d,挑选转基因单克隆细胞,传代培养,进行细胞形态观察、生长曲线以及染色体核型分析,并进行了培养细胞性别鉴定.结果整合有EGFP基因的绵羊胎儿成纤维细胞生物学行为与未转染外源基因的细胞无明显差别,根据荧光强度可直接反应外源基因的表达量.结论 EGFP基因作为体内报告基因可用于转基因细胞的研究,并将整合有EGFP基因的转基因细胞为克隆动物提供核供体奠定了基础.     

人皮肤成纤维细胞原代培养及生物学特性

目的 探索和建立人皮肤成纤维细胞原代培养的方法,为皮肤成纤维细胞在临床医学中的应用提供可靠的科学依据.方法 胰蛋白酶消化法分离培养人皮肤成纤维细胞;细胞生长曲线及MTT法测定细胞增殖能力;流式细胞仪测定细胞生长周期及细胞增殖指数;倒置显微镜下观察成纤维细胞生长状态;HE染色观察细胞爬片下的形态及着色;免疫组织化学染色观察成纤维细胞中间丝波形蛋白;电子显微镜下观察成纤维细胞超微结构,结果体外用胰蛋白酶消化法建立了人皮肤成纤维细胞;传5代内细胞及传5代内冻存复苏后人皮肤成纤维细胞增殖能力均很强;倒置镜下观察、HE染色、波形蛋白免疫组化染色及电镜下观察鉴定培养细胞的形态及生物学特性符合成纤维细胞.结论 本研究确立了体外人皮肤成纤维细胞原代培养.     

国人不同年龄正常男性包皮成纤维细胞雄激素受体的测定

为确定国人不同年龄男性靶细胞雄激素受体（ＡＲ）的含量及其正常值，我们以氚标记的人工合成的雄激素－［＾３Ｈ］－Ｒ１８８１为配体，采用完整细胞的Ｓｃａｔｃｈａｒｄ分析及单点分析法测定了４０例不同年龄正常男性（从１．５～６０岁）包皮成纤维细胞的ＡＲ含量。实验表明，青春前期、青春期、青壮年期及中年期组的ＡＲ含量（位点／细胞）分别为５９４３±９０２（ｎ＝８）、６２０７±１０９７（ｎ＝１２）、６００４±１２２     

人皮肤成纤维细胞的高效分离培养及鉴定

[摘要] 目的 建立高效的人皮肤成纤维细胞的原代培养和体外连续培养体系,为组织工程皮肤真皮的构建提供充足的种子细胞。方法 取临床无菌切除的幼儿包皮,利用II型胶原酶分离表皮和真皮, 再用胰蛋白酶消化,剪碎真皮,接种于培养瓶,加少许含10%胎牛血清的高糖-DMEM培养液进行培养,次日补加培养液。原代长满后,进行传代,并对所培养的细胞进行形态学观察及免疫荧光鉴定。结果 接种次日倒置镜下可见有长梭形细胞迁出、生长,3～4d进行传代,传代后3d长满,可长期传代。细胞免疫荧光检测,Vimentin表达阳性。结论 该方法可快速高效获得构建组织观察皮肤真皮所需的成纤维细胞。     

犬皮肤成纤维细胞的分离、培养及鉴定

目的 探索和建立适用于犬皮肤成纤维细胞的体外分离、培养及鉴定的技术方法.方法 采用组织贴块培养法和胰蛋白酶、胶原酶I联合消化法对犬皮肤成纤维细胞进行体外培养、传代.并对所培养的细胞进行倒置显微镜观察和苏木素-伊红染色,观察成纤维细胞形态,并对培养细胞行波形蛋白免疫荧光染色.结果 倒置相差显微镜下可见长梭形细胞生长,苏木素-伊红染色可见细胞呈漩涡状、平行排列,第5代细胞免疫荧光检测波形蛋白(vimentin)表达阳性.结论 建立了高效快速分离和稳定培养成纤维细胞的方法,为诱导犬心房纤维化提供了充足的种子细胞.     

人皮肤成纤维细胞原代培养及增殖能力研究

目的探索和建立永生化的人皮肤成纤维细胞,为皮肤成纤维细胞在临床医学上的应用提供可靠的科学依据。方法胰蛋白酶消化法分离培养人皮肤成纤维细胞;细胞生长曲线及MTT法测定细胞增殖能力;流式细胞仪测定成纤维细胞生长周期及细胞增殖指数。结果不同代次原代及冻存复苏后的人皮肤成纤维细胞增殖能力均很强。结论人皮肤成纤维细胞在增殖能力上完全可以作为体细胞基因治疗的靶细胞,而且是未来最有希望的永生化基因治疗细胞之一。     

新生小鼠皮肤成纤维细胞的分离培养与鉴定

目的：建立一种简单易行的自新生小鼠皮肤分离培养成纤维细胞的方法,并对分离细胞进行鉴定。方法：无菌取新生Balb/c小鼠背部皮肤,剪碎呈1 mm2大小,组织块均匀放置于培养皿并以DMEM（含10%胎牛血清）培养基对组织块进行培养;以胰蛋白酶消化分离细胞-重新贴壁法对分离培养细胞进行纯化;以NIH3T3细胞为对照,免疫荧光、流式细胞术、Western blot检测波形蛋白表达情况以对培养的成纤维细胞进行鉴定。结果：新生小鼠背部皮肤组织培养3 d时可见细胞呈细长梭形或呈多角形,组织培养5 d后可见大量细胞自组织块游离生长,组织培养7 d后可见细胞呈单层漩涡状排列或纵横交错,贴壁细胞团呈放射状生长。免疫荧光、流式细胞术、Western blot检测发现分离细胞和NIH3T3细胞均表达波形蛋白;流式细胞术证实分离的成纤维细胞波形蛋白表达阳性率和平均荧光密度分别为13.33%和9.89,而NIH3T3细胞波形蛋白阳性率和平均荧光密度分别为28.11%和14.16。结论：分离培养的细胞具有成纤维细胞的形态学特征,并表达成纤维细胞的特征分子波形蛋白。以组织块直接培养法成功自新生小鼠皮肤分离培养成纤维细胞,为建立肿瘤体外模拟微环境提供实验材料和研究基础。     

包皮成纤维细胞的生物学特性研究

目的:探讨人包皮成纤维细胞的生物学特性,为人胚胎生殖细胞(Human embryonic germ cells,hEG cell)长期体外培养打下基础.方法:探索分离包皮成纤维细胞的方法;采用免疫细胞化学法、MTY法、流式细胞术等对人包皮成纤维细胞进行生长形态观察.纯度鉴定,生长曲线及细胞周期检测,并就不同浓度丝裂霉素作用不同时间对人包皮成纤维细胞生长的影响进行研究.结果:0.25%胰酶,4℃消化过夜(12-16h)较37℃,5%CO2孵育2h更容易分离表皮和真皮;包皮成纤维细胞波形蛋白染色呈强阳性,纯度达95%以上;细胞生长曲线没有明显的滞留期,在1～6 d处于快速增殖期,第7d开始处于平台期;细胞周期大多数处于G0/G1期,细胞周期与细胞生长曲线保持一致.丝裂霉素抑制包皮成纤维细胞增殖的适宜浓度及时间为12.5μg/ml作用2.5h.结论:包皮成纤维细胞的生物学特性表明其可以作为人EG细胞长期体外培养的饲养层.     

两种人包皮成纤维细胞分离培养方法的比较

目的:作为理想的种子细胞,成纤维细胞的高效获取及纯化尤为重要.本研究通过比较改良组织块培养法(improved tissue culture method,ITCM)及酶消化培养法(enzyme digestion method,EDM)分离培养人包皮成纤维细胞(human foreskin fibroblasts,H...     

东方田鼠皮肤成纤维细胞的分离培养及生物学特性

目的 探索和建立东方田鼠皮肤成纤维细胞体外分离、培养的技术方法并观察其生物学特性。方法采用含10%小牛血清的Dulbecco 改良Eagle培养液(DMEM)和1640两种培养体系,运用组织块贴壁法和胰酶消化法,分别对出生后1 、3 d和5 d的东方田鼠乳鼠皮肤成纤维细胞进行原代分离、培养。苏木素-伊红染色及倒置相差显微镜下观察成纤维细胞形态和生长特性。结果0.25%胰酶消化分离出生后1 d和3 d东方田鼠乳鼠皮肤较出生后5 d组织可获得较多数量细胞,成纤维细胞在体外快速贴壁生长,一般6 ～7 d长满培养瓶,细胞纯度高,HE染色细胞呈长梭形,胞核明显;DMEM和1640两种培养液均可用于东方田鼠皮肤成纤维细胞的培养,但细胞传代后生长趋缓,只可传代2～3次。本实验运用组织块贴壁法未能培养出皮肤成纤维细胞。结论确定了有效分离东方田鼠皮肤成纤维细胞的日龄和方法,为进一步深入研究提供了技术方法和操作依据。     

人皮肤成纤维细胞的体外分离、培养及鉴定

目的：探索和建立一种新的、适宜于人皮肤成纤维细胞（Fbs）的体外分离、培养及鉴定方法。方法：采用冷胰蛋白酶和胶原酶联合消化法对人皮肤Fbs的进行体外培养，通过生物化学、免疫细胞化学及ELISA实验技术，对人皮肤Fbs的活力检测、生长曲线、羟脯氨酸（HYP）含量及Ⅰ型胶原含量指标进行研究。结果：人皮肤Fbs原代培养时间较大鼠长。人皮肤Fbs冻存复苏后所得生长曲线与冻存前所得曲线基本相似；人皮肤Fbs培养液中，3～5 d的HYP含量与1 d相比有显著增加（P<0.01）；2～6 d Ⅰ型胶原含量与1 d相比有显著增加（P<0.01）。结论：培养的人皮肤Fbs增殖能力强、适应性强、易培养且性状稳定，可为人类凹陷性瘢痕修复和美容除皱提供可靠的细胞来源。     

优化贴壁法人皮肤成纤维细胞的原代培养

目的:优化贴壁法原代培养人皮肤成纤维细胞的条件,建立稳定?经济?高效可行的人皮肤成纤维细胞培养方法?方法:采用包皮环切术后皮肤组织,剪成均匀组织块后贴壁,皮肤边缘长出薄层致密细胞团后胰酶消化?传代,并对所培养的细胞进行形态学观察及细胞免疫荧光鉴定?此方法与酶消化法相对照?结果:优化贴壁法成功率100%,取得组织后2 d沿皮肤边缘均开始生长高密度类圆形细胞层,在1周内可获得高质量?高数量的细胞,传代贴壁后经镜下形态观察及细胞免疫荧光染色确定为皮肤成纤维细胞?结论:较之酶消化法,优化贴壁法细胞存活率高,活性及纯度好?该方法可稳定?经济地获得足够数量的细胞?     

人皮肤成纤维细胞的分离和体外培养

基因治疗方式可分为间接体内法 (ｅｘｖｉｖｏ)和直接体内法(ｉｎｖｉｖｏ)。离体基因治疗方法亦称间接法是将患者的某种组织或细胞取出体外 ,在短期培养的条件下转入目的基因 ,进行筛选和富集整合有外源基因的阳性细胞 ,然后再回输到患者体内。该方法具有靶细胞明确 ,转染效率高的优点 ,因此在基因治疗中被较多采用。目前 ,国际上已有 10余种疾病的基因治疗研究采用皮肤成纤维细胞为靶细胞 ,并且越来越多的研究已进入临床Ⅰ期试验。本实验探讨了人皮肤成纤维细胞的分离及体外培养方法 ,观察总结了体外培养的生长特征 ,以获得在体外稳定生长的正常皮肤成纤维细胞 ,从而为自体皮肤成纤维细胞基因治疗的研究提供充足、可     

人皮肤成纤维细胞原代培养方法的改良

目的：改良人皮肤成纤维细胞培养方法。方法：采用培齐后组织块消化法(简称改良法)培养成纤维细胞，以组织块贴瓶法(简称贴瓶法)作为对照。结果：改良法成功率为100％，43d左右成纤维细胞增殖形成单层并进行第1次传代；贴瓶法成功率为66．7％，47d左右成纤维细胞增殖形成单层并进行第1次传代结论：改良法是一种可行的成纤维细胞培养方法。