头孢西丁纸片法检测mecA基因介导的MRS

目的评价应用头孢西丁纸片扩散法检测mecA基因介导的耐甲氧西林葡萄球菌(MRS)。方法分别用头孢西丁纸片法扩散法、苯唑西林纸片扩散法、苯唑西林琼脂稀释法、VITEK微生物自动分析系统及聚合酶链反应(PCR)mecA基因检测4种方法对MRS进行检测比较,最低抑菌浓度(MIC)测定应用VITEK微生物自动分析系统GPS卡。结果96株葡萄球菌属(金黄色葡萄球菌16株、凝固酶阴性葡萄球菌80株)中苯唑西林纸片法扩散法、苯唑西林琼脂稀释法、VITEK微生物自动分析系统3种方法检出MRS菌株54株(金黄色葡萄球菌2株、凝固酶阴性葡萄球菌52株),而PCR法检出mecA基因48株(金黄色葡萄球菌2株、凝固酶阴性葡萄球菌46株),头孢西丁纸片法扩散法与PCR法一致。结论头孢西丁纸片扩散法与mecA基因检测法高度一致,是筛选和确认mecA基因介导的MRS一种可靠的方法。     

荧光实时PCR法检测耐甲氧西林金黄色葡萄球菌的研究

目的建立检测耐甲氧西林金黄色葡萄球菌（MRSA）mecA基因的荧光实时PCR法。方法对荧光实时PCR法的实验条件进行优化,并用该法检测临床分离的109株金黄色葡萄球菌,其结果与苯唑西林纸片扩散法的结果进行比较。结果109株金黄色葡萄球菌中,荧光实时PCR法检测出mecA基因阳性37株、阴性72株;苯唑西林纸片扩散法检测出MRSA27株、MSSA82株,经配对χ^2检验,荧光实时PCR法检出率显著高于苯唑西林纸片扩散法（P〈0.01）。结论荧光实时PCR法能敏感、特异检测MRSA并可实时监测反应进程,比普通PCR法更加简便、快速,可以弥补苯唑西林纸片扩散法漏检隐匿型、临界型耐药株的不足。     

葡萄球菌属的耐药性及耐药机制探讨

目的探讨诱导型克林霉素耐药测定的临床价值和评价头孢西丁纸片扩散法检测耐甲氧西林葡萄球菌mecA基因。方法用NCCLS规定的D试验法检测红霉素和克林霉素的耐药表型,以及根据2004年版的NCCLS推荐使用头孢西丁(30μg)纸片扩散法检测葡萄球菌mecA基因。结果所有390株葡萄球菌属细菌中,218株(55.9%)对红霉素和克林霉素均耐药(cMLS),70株(17.9%)对红霉素耐药,克林霉素敏感,但D试验阳性(iMLS),79株(20.3%)对红霉素耐药,克林霉素敏感,但D试验阴性(MS);头孢西丁纸片扩散法筛选的390株葡萄球菌属细菌,有272株为MRS。结论开展D试验检测葡萄球菌属中红霉素对克林霉素的诱导耐药性可帮助临床医师正确选用大环内酯类、克林霉素类抗菌药物,同时用头孢西丁纸片扩散法可以成为临床实验室常规开展筛选MRS的方法。     

应用双重PCR快速检测耐甲氧西林金黄色葡萄球菌

目的应用双重聚合酶链反应（PCR）技术,建立金黄色葡萄球菌及耐甲氧西林金黄色葡萄球菌（MRSA）的快速检测方法,指导临床及时、合理使用抗菌药物,防止MRSA的扩散。方法 根据金黄色葡萄球菌血浆凝固酶基因Coag和耐药基因mecA设计引物,调整PCR扩增反应各参数,建立快速、准确扩增Coag和mecA基因的双重PCR体系;应用双重PCR对临床分离鉴定的85株金黄色葡萄球菌同时扩增Coag和mecA基因片段,并将PCR扩增结果与苯唑西林-高盐琼脂筛选试验（OSAS）的结果进行比对。结果生化常规试验分离鉴定85株金黄色葡萄球菌,通过OSAS试验,共检出MRSA 53株,MRSA检出率为62.35%。双重PCR快速检测MRSA,85株金黄色葡萄球菌均扩增出Coag基因片段,其中53株扩增出mecA基因片段。双重PCR检测MRSA的结果与生化常规试验分离鉴定MRSA结果一致。结论双重PCR法能快速、同时检测金黄色葡萄球菌血浆凝固酶Coag基因和耐药基因mecA,有助于及早检出MRSA,指导临床合理用药,控制MRSA传播。     

头孢西丁纸片扩散法检测耐甲氧西林金黄色葡萄球菌的研究

目的评价头孢西丁纸片扩散法检测耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)的准确性. 方法头孢西丁、苯唑西林药敏纸片分别采用K-B法检测 156株金黄色葡萄球菌临床分离株,同时采用PCR扩增mecA基因方法为检测MRSA的标准方法,比较两种方法的准确性. 结果 95株mecA基因阳性,61株mecA基因阴性;头孢西丁、苯唑西林药敏纸片K-B法的敏感性分别为98.9%和96.7%,特异性分别为98.4%和93.4%;头孢西丁纸片扩散法检测MRSA的敏感性和特异性高于苯唑西林纸片扩散法. 结论头孢西丁纸片扩散法是检测MRSA的可靠方法.     

耐甲氧西林金黄色葡萄球菌中mecA、femA检测及其抗生素敏感性研究

目的探讨mecA、femA基因PCR聚合扩散快速检测耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)的敏感性及特异性。方法选择耐甲氧西林金黄色葡萄球菌株84株用PCR聚合扩散法检测mecA、femA基因,并用纸片扩散法检测MRSA菌株的药物敏感性。结果 84株耐甲氧西林金黄色葡萄球菌中,mecA基因阳性率为100%femA基因阳性率为97.6%。未发现万古霉素耐药的菌株。结论 PCRmecA、femA基因聚合扩散法即可用于MRSA快速诊断,又有特异性强的有点。     

头孢西丁纸片扩散法检测耐甲氧西林葡萄球菌的评价

目前在临床实验室常规开展的检测MRS的方法如苯唑西林K-B法、E-test微量稀释法、琼脂筛查法等表型试验,因不同的MRS具有不同的耐药水平(MIC不同),而无法检测处于临界范围的MRS,特别是低表达的MRS.在2002年,美国国家临床实验室标准化委员会(NCCLS)指出,一旦葡萄球菌检出mecA基因或PBP2a蛋白即可定为MRS,因此PCR扩增法检测MRS的mecA基因是判断MRS的金标准,但是该方法对于实验室设备要求、操作人员的要求十分高,而且费用昂贵,不易在临床实验室中常规开展.而头孢西丁纸片扩散法操作简单、准确率高、同PCR扩增法的结果具有很好的相关性,可以在临床实验室常规开展,是目前临床实验室筛选MRS最好的表型试验之一.     

mecA基因扩增法与细菌鉴定仪法鉴定耐甲氧西林金黄色葡萄球菌比较及耐药性研究

目的比较mecA基因PCR扩增法与细菌鉴定仪法对耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)的鉴定差异,分析MRSA耐药性,为有效控制MRSA医院感染提供参考依据。方法收集2012年10月-2013年11月从临床分离出142株金黄色葡萄球菌,采用VITEK-2Compact全自动细菌鉴定仪和mecA基因PCR扩增方法检测MRSA,并对其进行耐药性分析,使用WHONET5.6软件统计病原菌的耐药率,采用SPSS 17.0软件对数据进行统计分析。结果 142株金黄色葡萄球菌中两种方法检测到MRSA分别为30、35株,检出率分别为21.1%、24.6%,两种检测方法对MRSA检出率差异无统计学意义,MSSA对除利奈唑胺、万古霉素、喹奴普汀/达福普汀及替加环素外,对抗菌药物的敏感度均高于MRSA,差异有统计学意义(P0.05)。结论全自动细菌鉴定仪、mecA基因扩增法两种方法检测MRSA结果差异无统计学意义;但是全自动细菌鉴定仪可能会产生漏检,MRSA耐药现状严峻,应规范合理用药,控制感染与扩散。     

纸片扩散法检测耐甲氧西林葡萄球菌的临床应用评价

目的 评价苯唑西林、头孢西丁两种药敏纸片检测耐甲氧西林葡萄球菌（MRS）的准确性.方法 以PCR方法检测mecA基因作参考,用纸片扩散法（K-B法）检测163株葡萄球菌对苯唑西林、头孢西丁两种药物的敏感性,比较两种纸片检测MRS的敏感性、特异性和预期率.结果 73株金黄色葡萄球菌和30株凝固酶阴性的葡萄球菌mecA基因检测阳性,头孢西丁检测金黄色葡萄球菌和凝固酶阴性的葡萄球菌的敏感性、特异性、阳性预期率和阴性预期率分别为97.4%、94.1%、97.4%94.1%;95.1%、100%、100%、88.9%.苯唑西林检测金黄色葡萄球菌和凝固酶阴性的葡萄球菌的敏感性、特异性、阳性预期率和阴性预期率分别为100%、58.8%、84.8%、100%;93.4%、89.1%、91.9%、91.1%.结论 头孢西丁比苯唑西林特异性更强但敏感性不够,二者联合使用更有助准确预测葡萄球菌对甲氧西林耐药性.     

mecA基因在金黄色葡萄球菌中的分布及对耐药性的影响

目的 探讨mecA基因在金黄色葡萄球菌中的分布以及对其耐药性的影响.方法 收集金黄色葡萄球菌临床分离菌株47株,用琼脂扩散法进行敏感性检测,提取分离株DNA,通过聚合酶链反应(PCR)对mecA基因进行扩增,分析mecA基因和金黄色葡萄球菌耐药性的关系.结果 47株金黄色葡萄球菌中,有33株为耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA),占70.2%;甲氧西林敏感金黄色葡萄球菌(MSSA)有14株,占29.8%;在33株MRSA中,只有3株对除替考拉宁、万古霉素等糖肽类以外的抗菌药物敏感,占9.1%;14株MSSA中只有2株对全部12种抗菌药物敏感,仅占14.3%;PCR结果 显示,在33株MRSA中,32株携带mecA基因,占97.0%;而在14株MSSA中有3株携带mecA基因,3株携带mecA基因的MSSA耐药性较不携带mecA基因MSSA的耐药性严重.结论 金黄色葡萄球菌中MRSA具有较高的分离率,MRSA的耐药性非常严重,万古霉素等糖肽类抗菌药物是惟一有效的抗菌药物,绝大多数的MRSA携带有mecA基因,mecA基因在金黄色葡萄球菌的耐药机制中发挥重要作用,携带mecA基因的MSSA耐药情况比不携带mecA基因的MSSA严重.     

Detection of MRSA in a group of 752 strains of S. aureus using a cefoxitin disk

A set of 752 S. aureus strains including 665 fresh clinical isolates, 82 collection strains from the NRL for staphylococci and three control strains for external quality assessment were tested for susceptibility to oxacillin by three routine phenotypic methods with oxacillin (agar screening method, dilution micromethod and disk diffusion method) and a new method with a 30 micrograms cefoxitin disk. Gene mecA coding for oxacillin resistance was detected by PCR, PBP2a gene product was detected by latex agglutination. All of 218 oxacillin resistant strains--MRSA (methicillin resistant S. aureus)--gave inhibition zones of 6-19 mm around the cefoxitin disk, i.e. zones within the range set up for oxacillin resistant strains, eight out of these strains showing false oxacillin susceptibility in one or more phenotypic tests. It can be stated that the presence of an inhibition zone of < 20 mm around the 30 micrograms cefoxitin disk allows for reliable differentiation between MRSA and oxacillin susceptible S. aureus.     

耐甲氧西林金黄色葡萄球菌SCCmec基因分型及PVL基因研究

目的了解耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)SCCmec基因型的分布特征并检测杀白细胞毒素(PVL)基因。方法收集2007年10月-2008年5月临床标本中,分离的非重复金黄色葡萄球菌110株,用头孢西丁纸片扩散法对MRSA进行初筛;用多重聚合酶链反应(PCR)对MRSA进行SCCmec基因分型及PVL基因检测;用琼脂稀释法对MRSA菌株进行抗菌药物最低抑菌浓度(MIC)检测。结果 64株MRSA中,63株医院获得性(HA)-MRSA,1株社区获得性(CA)-MRSA,其中SCCmecⅢ型57株(89.0%),Ⅱ型1株(1.6%),SCCmecⅣ型1株(1.6%),未分型5株(7.8%);未发现SCCmecⅠ、Ⅴ型菌株;SCCm ecⅡ型、SCCm ecⅢ型的菌株均为多药耐药株,SCCmecⅣ型的菌株除对β-内酰胺类抗菌药物耐药外,对其他类抗菌药物较敏感。结论 HA-MRSA主要以SCCmecⅢ型为主,CA-MRSA菌株为SCCmecⅣ型,携带PVL毒力基因,HA-MRSA对抗菌药物呈多药耐药性,CA-MRSA菌株耐药谱比HA-MRSA菌株耐药谱窄,加强对MRSA的监测,对指导临床合理使用抗菌药物具有重要意义。     

耐甲氧西林金黄色葡萄球菌基因诊断及多重PCR SCCmec基因分型方法的建立

目的建立对临床分离的耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)基因诊断和金黄色葡萄球菌染色体mec基因盒(SCCmec)基因分型的方法。方法对临床分离的11株金黄色葡萄球菌采用双重PCR(femA和mecA)鉴定,再将鉴定为MRSA的临床菌株和3株标准株用多重PCR方法在一个反应体系(针对MRSA的8个基因)中进行SCCmec基因分型。结果临床分离株中有6株鉴定为MRSA,对其和MRSA标准株的多重PCR基因分型结果显示,两株临床株为SCCmecⅡ型,4株为Ⅲ型,标准株SA-w2为Ⅰ型,MRSA252为Ⅱ型。结论该研究可以很好地对临床MRSA进行基因诊断和分型,对MRSA的诊断和分型、耐药研究以及分子流行病学有重要意义。     

烧伤科耐甲氧西林金黄色葡萄球菌杀白细胞素基因检测及SCCmec分子流行病学调查

目的 研究临床分离的耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)分子流行病学特点,为临床预防MRSA流行、制定防治方案等提供科学依据.方法 采用聚合酶链反应(PCR技术)对烧伤科2010年4月14日-6月1日临床标本中分离的24株MRSA进行SCCmec分型及pvl基因检测;纸片扩散法检测MRSA对21种抗菌药物的耐药性.结果 24株MRSA中,SCCmecⅢ型20株占83.3％,4株未分型占16.7％,pvl基因均为阴性;SCCmecⅢ 型的菌株除对万古霉素、替考拉宁、利奈唑胺、喹奴普汀/达福普汀敏感以外,对其他抗菌药物均耐药.结论 医院烧伤科临床分离MRSA的SCCmec型别主要以SCCmecⅢ型为主,携带SCCmecⅢ型的MRSA对抗菌药物呈现多药耐药现象.     

社区糖尿病人群携带金黄色葡萄球菌的 分型与耐药谱关系研究

摘要:目的　了解社区糖尿病人群携带金黄色葡萄球菌的分型情况并分析其耐药谱。方法　随机抽取佛山市里水镇11个社区糖尿病人438名并收集其鼻拭子样本,根据传统实验室方法分离鉴定金黄色葡萄球菌,采用头孢西丁纸片扩散法和mecA基因扩增法进行耐甲氧西林金黄色葡萄球菌（Methicillin-Resistant Staphylococcus Aureus,MRSA）的鉴定,利用多重聚合酶链式反应（Polymerase Chain Reaction,PCR）的方法对MRSA菌株进行葡萄球菌染色体盒（Staphyloccoccal Cassette Chromosome mec,SCCmec）的分子分型,应用K-B纸片扩散法分析金黄色葡萄球菌的耐药谱。结果　438份样本中分离出43株金黄色葡萄球菌,检出率为9.82%,其中22株（5.02%）为MRSA。22株MRSA中,医院获得性耐甲氧西林金黄色葡萄球菌（Hospital-Acquired MRSA,HA-MRSA）7株,社区获得性耐甲氧西林金黄色葡萄球菌（Community-Acquired MRSA,CA-MRSA）10株,SCCmec未分型5株。金黄色葡萄球菌除对替考拉宁无耐药外,对其他抗生素均有不同程度的耐药,MRSA的耐药率普遍高于甲氧西林敏感金黄色葡萄球菌（Methicillin Sensitive Staphylococcus Aureus,MSSA）的耐药率,两者对红霉素和克林霉素耐药率差异有统计学意义,36.36%（8/22）的MRSA具有多重耐药性,MSSA中未发现多重耐药菌株。结论　该地区糖尿病人群携带的金黄色葡萄球菌中MRSA比例高,所携带的MRSA中以CA-MRSA为主,MRSA对抗生素的多重耐药问题值得重视。     

Prevalence and antibiotic resistance of foodborne Staphylococcus aureus isolates in Turkey

Abstract In this study, 154 Staphylococcus aureus isolates were detected from 1070 food samples (14.4%) collected from seven cities in Turkey. Antimicrobial susceptibility testing against 21 antibiotics was performed by agar disk diffusion method, and those isolates resistant to any antibiotic were further analyzed to determine minimum inhibitory concentration by E-test and polymerase chain reaction analysis of vanA and mecA genes. According to disk diffusion test results, a total of 139 strains were resistant to at least one tested antibiotic, with 39 (25.3%) strains being multidrug resistant (MDR) and the other 15 strains being susceptible to all antibiotics. Penicillin G, linezolid, erythromycin, and tetracycline took up 71.4%, 23.4%, 18.2%, and 15.6% of the tested strains, respectively. In addition, all of the strains were susceptible to vancomycin, oxacillin, cefoxitin, and imipenem. Only one strain (S158B) was resistant to both teicoplanin and cefazolin. On the other hand, the presence of vanA and mecA genes was not detected in the strains. Pulsed-field gel electrophoresis analysis was used to identify genetic-relatedness of the MDR strains. It is noteworthy that some strains from different sources showed 100% homology; however, some of MDR strains were found unrelated with 60% or less homology. The high diversity observed in pulsed-field gel electrophoresis results indicated the possible contamination of S. aureus from different sources and routes.     

徐州地区116株MRSA耐药性分析与分子流行病学调查

目的了解耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)感染现状和耐药机制,为临床合理用药提供依据。方法收集徐州地区2012—2015年各类标本中分离的金黄色葡萄球菌(SA),用头孢西丁纸片扩散法初筛MRSA菌株,扩增mecA基因进行确认,K-B法检测MRSA对药物的敏感性,E-test法测定万古霉素的最低抑菌浓度(MIC),采用多重PCR进行葡萄球菌染色体mec(SCCmec)基因分型。结果 2012—2015年210株SA共检出MRSA116株,其中mecA基因阳性114株,MRSA总检出率为55.24%。MRSA对万古霉素、奎奴普丁/达福普汀、替考拉宁和利奈唑胺的敏感率均为100%,对氯霉素和呋喃妥因的耐药率最低,分别为15.52%、1.72%,MRSA对10种抗菌药物的耐药率80%;MRSA对青霉素类、氨基糖苷类、红霉素、喹诺酮类、磺胺类、利福平、四环素、克林霉素的耐药率高于甲氧西林敏感金黄色葡萄球菌(MSSA)。2012—2015年万古霉素对MRSA的MIC均为1.0μg/mL,MIC90均为1.5μg/mL,2015年发现1株MRSA的万古霉素MIC为2.0μg/mL。116株MRSA分型结果显示,SCCmecII型11株(9.48%),SCCmecIII型85株(73.28%),SCCmecIV型4株(IVa和IVb型各2株,均为1.72%),未分型MRSA16株(13.79%),未检出SCCmecI和V型。结论 MRSA呈严重的多重耐药,对万古霉素MIC无漂移,临床MRSA分离株以SCCmecIII型为主,临床应采取感染控制措施,控制MRSA感染。