口腔鳞状细胞癌和颊黏膜癌前病变基因表达和细胞通路的差异性研究?

目的：筛选出口腔鳞状细胞癌与颊黏膜癌前病变组织中的差异基因,并进行生物信息分析,探讨癌前病变转向鳞癌的分子机制。方法通过二羟甲基丁酸(DMBA)诱导金黄地鼠来建立颊黏膜癌前病变和鳞癌模型,提取病变组织总 RNA,合成单标 Cy3荧光标记的 cRNA,采用基因芯片技术,筛选出两组模型口腔组织中表达差异的基因,对筛选出的差异基因进行功能分类(GO)和信号通路(Pathway)分析,最后用 RT-PCR 验证其中部分差异基因。结果口腔鳞状细胞癌与颊黏膜癌前病变模型组织相比,有1981条基因差异表达(120条为未知基因),其中1037条为上调基因,944条为下调基因。GO 分析显示差异表达基因包括代谢、细胞结构、机体发育等14类相关的功能基因。通路分析结果显示有9条通路发生异常改变,在已知的1861条差异表达基因中,有14条基因富集于以上9条改变的通路上。结论颊黏膜癌前病变恶性转变到鳞癌共有1981条基因产生差异表达和9条通路发生异常改变,其中 Casp3和 CXCL12等14条基因参与了改变细胞通路,很可能就是癌前病变恶性转变成鳞癌的重要致病基因。     

用全基因芯片技术对金黄地鼠口腔颊黏膜癌前病变相关基因的筛选和分析

目的:利用全基因芯片技术筛选口腔颊黏膜癌前病变发生发展的相关致病基因.方法:用9、10-二甲基;1,2-苯并蒽(Dimethylbenzanthracene,DMBA)诱导建立金黄地鼠颊鳞癌模型,分别提取正常颊黏膜和癌前病变组织的总RNA并合成用Cy3荧光标记的cRNA,分别与含有41 000个基因/ESTs序列的Agilent大鼠全基因芯片杂交,以Log2Ratio≥2.5和Log2Ratio≤-2.5为阈值来确定差异表达基因,然后用Gene Ontology对差异表达基因行功能分类分析,最后用RT-PCR对部分差异表达基因进行验证.结果:金黄地鼠颊黏膜自正常黏膜到癌前病变发展过程中,共得到1 331条差异表达基因,其中上调基因747条,下调基因584条.Gene Ontology分析发现这些差异基因主要涉及到大分子代谢、信号传导等8大功能分类.对上调基因Atp6vOd2和下调基因Sfrp2行RT-PCR验证结果与芯片结果相符.结论:口腔颊黏膜癌前病变的发生涉及众多基因表达的改变,通过对这些基囚的进一步研究,将对探索口腔黏膜癌前病变的发病机制、有效的干预防止癌前病变的发生或逆转癌前病变具有重要意义.     

DMBA诱导金黄地鼠颊囊癌变的组织学动态变化研究

目的:观察分析金黄地鼠在致癌剂二甲基苯并蒽(9,10-Dimethyl-1,2 Benzanthracene,DMBA)作用下颊囊粘膜癌变不同时期在肉眼和光镜下的组织学动态变化过程.方法:用DMBA涂抹金黄地鼠颊囊粘膜,每周3次.在肉眼下动态观察颊囊粘膜的癌变过程;分别在第2、4、6、8、10、12、14周时处死动物,在光镜下动态观察颊囊粘膜癌变过程的显微组织学改变.结果:DMBA涂抹金黄地鼠颊囊粘膜2周时出现单纯增生改变,4周时出现轻度上皮异常增生,6周时出现中度异常增生,8周时出现重度异常增生,部分出现原位癌改变,10周时已发生癌变,实验中得到的癌症模型均为高分化鳞状细胞癌.结论:DMBA诱导的金黄地鼠颊囊粘膜癌和人类口腔鳞状细胞癌(Oral squamous cell carcinoma,OSCC)相似,是研究口腔鳞癌多阶段、多步骤动态发展的理想模型.     

近红外量子点表皮生长因子单克隆抗体荧光探针对金黄地鼠颊黏膜癌变过程的动态可视化荧光成像研究

目的 利用近红外量子点表皮生长因子单克隆抗体荧光探针对由9,10-二甲基1,2苯并蒽(9,10-dimethylen-1,2-benzanthracene,DMBA)诱导建立的金黄地鼠颊黏膜癌变过程进行动态可视化荧光成像研究.方法 (1)用0.5％DMBA丙酮液诱导建立金黄地鼠颊黏膜癌变各期模型;(2)将水溶性近红外荧光量子点(QD800)表面功能性的修饰藕连表皮生长因子受体单克隆抗体(EGFR mAb)后,形成具有靶向功能性的QD800-EGFR mAb荧光探针;(3)将QD800-EGFR mAb经金黄地鼠各期癌变模型尾静脉注射入血液循环系统以靶向适配原理显示其颊黏膜动态癌变过程荧光图像.结果(1)QD800-EGFR mAb能够通过血液循环系统与金黄地鼠颊黏膜癌变细胞上的EGFR特异性的靶向适配并荧光显影;(2)QD800-EGFR mAb显示的荧光图像随着金黄地鼠颊黏膜癌变程度的加深而增强,且能准确地显示癌灶的形状及浸润深度.结论 QD800-EGFR mAb 通过与口腔癌不同癌变阶段癌细胞表面的 EGFR 靶向性适配结合来显示个体化荧光图像,可能对以后临床研治口腔癌的发生发展及转移规律发挥巨大的影响.     

基于多重数据库的肾癌转移相关基因生物信息分析及功能初探

［摘要］目的: 通过生物信息学技术探讨肾癌转移瘤细胞与原发性肾癌细胞基因表达差异，寻找关键的差异基因及与其可能相关的分子机制。方法: 从GEO基因芯片数据库中下载人肾癌转移瘤和原发性肾癌的相关基因芯片数据GSE85258，用GCBI在线工具分析肾癌转移瘤和原发性肾癌的差异表达基因。分析差异表达基因GO及Pathway；筛选出既符合GO又符合Pathway的差异基因；将差异基因之间的相互作用及共表达关系构建基因网络图；构建差异基因Pathway网络图。通过体外细胞侵袭实验验证差异基因在肾癌细胞中的功能。结果： GSE85258数据集中共筛选出3 000个差异基因，其中表面活性蛋白2(SFTPA2)升高最显著，SLC17A3降低最明显。GO分析显示，差异基因主要参与DNA依赖性转录，信号转导，小分子代谢过程等多个生物学功能。Pathway分析显示，差异基因主要参与内质网蛋白质加工，代谢途径，癌症途径等生物学过程。差异基因相互作用分析显示MAPK1为核心信号传递中介，PRKCA、NRAS、NOS1等基因与其直接作用。差异基因间共表达既有正相关也有负相关，其中与周围基因关系最多的10个基因，互为正相关。Pathway网络分析显示MAPK信号通路是上下游通路最多的信号通路，其包含细胞周期、细胞凋亡、P53信号通路、癌症途径等与肿瘤发生相关的信号通路。侵袭实验显示，抑制SFTPA2表达可降低肾癌细胞的侵袭能力(t=18.44，P <0.01)。结论： 肾癌转移瘤细胞与原发性肾癌细胞存在表达差异基因，其中SFTPA2、MAPK1、PRKCA、NOS1可能是关键差异基因，其可能参与MAPK信号通路等，促进肾癌转移。     

地鼠颊囊黏膜癌变过程中Fas的表达及意义

目的：研究Fas蛋白在口腔黏膜癌变过程中的表达及变化规律。方法：用DMBA诱导的金黄地鼠颊囊癌变模型,采用免疫组化SP法检测在黏膜上皮癌变过程（正常黏膜、单纯增生、轻度增生、中度增生、重度增生与鳞癌）中Fas蛋白的表达。结果：Fas在正常地鼠口腔黏膜中广泛表达,在黏膜癌变过程的不同阶段中Fas表达下调,尤其在鳞癌组织中明显降低（P＜0．05）,且表达部位由细胞胞膜转向胞浆内。结论：Fas参与口腔黏膜肿瘤癌变过程,对口腔癌的早期诊断及治疗提供研究方向。     

颊癌模型中环氧合酶-2和诱导型一氧化氮合酶表达的意义

 [目的]研究环氧合酶-2（COX-2）和诱导型一氧化氮合酶（iNOS）在地鼠颊囊肿瘤发生发展中的表达,探讨两者可能的相关性。[方法]90只金黄地鼠被分成两组：实验组80只,对照组10只,利用二甲基苯并蒽（9,10-dimethyl-1,2-benz-anthracene,DMBA）诱导地鼠颊囊癌变,免疫组化法检测iNOS和COX-2的动态表达。[结果]在16周时所有存活的实验组地鼠颊囊全部发生癌变,iNOS从正常黏膜、异常增生到浸润癌阳性表达率增加,分别为0%,62%,82.14%,有显著性差异;COX-2从正常黏膜、异常增生到浸润癌阳性表达率增加,分别为11.11%,16.67%,56.25%,有显著性差异;iNOS,COX-2存在呈正相关性（γ=0.279,P〈0.05）。[结论]iNOS和COX-2表达在地鼠颊囊鳞癌发展中起重要作用,并呈正相关作用。     

颊癌模型中环氧合酶-2和诱导型一氧化氮合酶表达的意义

[目的]研究环氧合酶-2（COX-2）和诱导型一氧化氮合酶（iNOS）在地鼠颊囊肿瘤发生发展中的表达,探讨两者可能的相关性。[方法]90只金黄地鼠被分成两组：实验组80只,对照组10只,利用二甲基苯并蒽（9,10-dimethyl-1,2-benz-anthracene,DMBA）诱导地鼠颊囊癌变,免疫组化法检测iNOS和COX-2的动态表达。[结果]在16周时所有存活的实验组地鼠颊囊全部发生癌变,iNOS从正常黏膜、异常增生到浸润癌阳性表达率增加,分别为0%,62%,82.14%,有显著性差异;COX-2从正常黏膜、异常增生到浸润癌阳性表达率增加,分别为11.11%,16.67%,56.25%,有显著性差异;iNOS,COX-2存在呈正相关性（γ=0.279,P〈0.05）。[结论]iNOS和COX-2表达在地鼠颊囊鳞癌发展中起重要作用,并呈正相关作用。     

前列腺癌相关基因及功能的生物信息学分析

目的: 利用生物信息学方法和体外实验,寻找前列腺癌发生的关键基因。方法: 从GEO 数据库下载基因芯片数据 GSE60502,其中包括48例正常前列腺组织样本和47例前列腺癌组织样本。利用Morpheus(https:∥software.broadinstitute.org／morpheus／)在线工具分析前列腺癌组织和正常前列腺组织的差异表达基因,然后使用GCBI(https:∥www.GCBI.com.cn)在线进行差异表达基因的基因本体富集论(gene ontology,GO)分析、Pathway分析,对同时参与GO分析和Pathway分析的差异基因取交集,构建基因共表达网络和基因相互作用网络。最后通过CCK8实验进行验证。结果： 共筛选出6 903个表达差异的基因,差异最大的前15个基因中,有上调基因9个,下调基因6个,其中表达差异最大的基因为CRISP3。GO分析提示差异基因主要参与的分子生物学过程包括小分子代谢过程、信号转导、DNA依赖的转录过程、RNA聚合酶Ⅱ启动子转录的正调节等。Pathway分析提示差异基因主要参与的通路包括PI3K-Akt信号通路、代谢途径、MAPK信号通路以及Wnt信号通路等。CACNA1A基因位于共表达网络的核心位置,而ADCY5、PIK3CB基因位于基因相互作用网络的核心位置。 体外CCK8实验证实下调CACNA1A表达可明显抑制前列腺癌细胞增殖能力。 结论： CRISP3、CACNA1A、ADCY5、PIK3CB基因可能是影响前列腺癌发生的关键基因。     

HGF、c-met蛋白在家兔颊黏膜癌变过程中的表达

目的探讨肝细胞生长因子(HGF)、c-met蛋白在家兔口腔颊黏膜鳞状上皮细胞癌变过程中的表达。方法将含有致癌剂二甲基苯并蒽(DMBA)的溶液及药膜涂抹或贴附于家兔口腔颊黏膜后,应用DMBA 16周后,作病理组织学检查和免疫组织化学检查。结果口腔颊黏膜中、重度不典型增生发生率达64.6%,不典型增生程度越重,HGF及c-met蛋白表达率越高,染色越明显。结论应用致癌剂DMBA可初步构建家兔口腔颊黏膜鳞状上皮癌前病变模型,在癌变过程中间质成纤维细胞分泌的细胞因子可能起到重要的促进作用。