HCA587蛋白疫苗的抗肿瘤效应及效应细胞亚群

目的探讨HCA587蛋白疫苗对荷瘤小鼠的抗肿瘤效应并揭示抗肿瘤效应的免疫细胞亚群。方法在C57BL/6小鼠左侧胁腹部皮下接种肿瘤细胞建立肿瘤模型,给予HCA587蛋白疫苗等免疫策略治疗2次,观察抗肿瘤效果。用苏木精-伊红(HE)染色法分析疫苗治疗后肿瘤组织中淋巴细胞的浸润。用SDS-PAGE电泳分析自行制备的抗CD4和CD8分子单抗的相对分子质量和纯度,并用流式细胞术对其体内阻断效果进行鉴定。将上述单抗腹腔内注射入小鼠体内,以实现免疫细胞在体清除。结果与单一蛋白治疗组、佐剂对照组相比,HCA587蛋白疫苗具有显著的抗肿瘤作用(P0.05)。在HE染色中,HCA587蛋白疫苗治疗后肿瘤局部可见大量的免疫细胞浸润。经流式细胞术鉴定,自行制备、纯化的抗CD4和CD8分子单抗在体能完全清除相应的CD4+T和CD8+T细胞亚群。当在体清除CD4+T细胞后,HCA587蛋白疫苗的抗肿瘤效应完全消失,而CD8+T细胞的清除不影响其抗肿瘤效应。结论 HCA587蛋白疫苗具有显著的抗肿瘤效应,其诱导的CD4+T细胞在抗肿瘤效应中起着至关重要的作用。     

编码AFP-CTLA4融合蛋白的DNA疫苗诱导小鼠抗肿瘤免疫的研究

目的构建能够表达AFP和CTLA4融合蛋白的DNA疫苗并检测其诱导特异性CTL反应及抗产生AFP肿瘤的能力。方法利用RT-PCR从Hepa1-6细胞总RNA中克隆mAFP基因。连接mAFP基因和编码小鼠CTLA4膜外部分的基因构建质粒DNA疫苗。对此疫苗进行酶切、测序和表达鉴定。用pmAFP稳定转染EL-4细胞建立EL-4(mAFP)细胞系。以此DNA疫苗免疫小鼠,用ELISPOT检测免疫后小鼠脾脏细胞中产生IFN-γ的细胞频数。以EL-4(mAFP)肿瘤细胞攻击免疫后小鼠,观察肿瘤的生长情况。另外,对免疫的小鼠采血进行肝、肾功能检测。结果利用RT-PCR从Hepa1-6细胞总RNA中成功克隆出1．8 kb的mAFP基因。酶切、测序和表达鉴定证实编码mAFP-CTLA4融合蛋白的DNA疫苗构建成功。RT-PCR证实EL-4(mAFP)细胞中有mAFP mRNA的表达。ELISPOT检测结果显示:pmAFP-CTLA4免疫组产生IFN-γ的细胞频数显著高于pmAFP组、pcDNA3．1组和PBS组。pmAFP- CTLA4免疫组小鼠的肿瘤体积为(385．93±52．9)mm3,明显小于pmAFP组(1042．42±123．71)mm3、pcD- NA3．1组(2292．38±276．94)mm3和PBS组(2303．5±233．13)mm3,P均<0．01。各组肝、肾功能差异无统计学意义。结论编码mAFP-CTLA4融合蛋白的DNA疫苗能诱导产生AFP特异性的CTL增殖并诱导小鼠产生明显的抗肿瘤免疫力,此疫苗对小鼠肝、肾功能不产生影响。     

表达CRT-E2融合蛋白肿瘤疫苗诱导特异性抗肿瘤免疫应答

目的:探讨表达钙网蛋白(Calreticulin,CRT)和HPV E2融合蛋白的肿瘤疫苗在小鼠体内诱导的抗肿瘤免疫应答.方法:转染重组质粒得到高表达CRT、E2和CRT-E2融合蛋白的肿瘤细胞,作为肿瘤疫苗隔周两次腹腔注射免疫小鼠,17天后观察成瘤率,检测NK细胞杀伤活性、特异性T细胞增殖能力、CIL活性以及睥淋巴细胞分泌IFN-γ水平,并观察荷瘤小鼠生存期.结果:高表达CRT-E2融合蛋白肿瘤疫苗免疫小鼠后,其成瘤率明显低于其他实验组,NK细胞杀伤活性、特异性T细胞增殖能力、CTL活性和脾淋巴细胞分泌IFN-γ水平均显著高于其它实验组(P＜0.01),生存期也明显延长(P＜0.01).结论:小鼠体内实验显示,表达CRT-E2融合蛋白肿瘤疫苗能够诱导特异性CD8+T细胞免疫应答和NK细胞活性,显著抑制了肿瘤生长.     

卡介苗作为抗肿瘤重组蛋白疫苗佐剂的研究

目的：探讨卡介苗（BCG）能否增强抗肿瘤疫苗HSP-MUC1的特异性抑瘤作用，从而将BCG开发为肿瘤疫苗的新型佐剂。方法：动物水平上，BCG和HSP-MUC1共免疫小鼠，观察BCG能否增强HSP-MUC1所激发的特异性抑瘤作用。细胞水平上对BCG发挥佐剂作用的机制进行探讨，将BCG和HSP-MUC1共刺激树突状细胞（DC），观察BCG能否协同HSP-MUC1刺激DC表面的CD86分子表达的上调；并对DC培养上清中IL-6、TNF-α的水平进行测定。结果：BCG＋HSP-MUC1组小鼠的肿瘤重量显著地低于HSP-MUC1组（P〈0.05）。细胞学试验显示，BCG能够显著增强HSP-MUC1对DC的激活作用，使DC表面的CD86分子显著上调。BCG＋HSP-MUC1组的DC培养上清中细胞因子IL-6、TNF-α的水平显著地高于HSP-MUC1组（P〈0.05）。结论：BCG能够显著地增强HSP-MUC1的抗肿瘤活性，具有肿瘤疫苗佐剂的良好功效。     

基于HCA587的HLA-A2限制性表位肽的体内免疫原性研究

目的检测来源于HCA587的HLA-A2限制性表位肽免疫HLA-A2转基因小鼠后产生细胞应答的水平,筛选出体内具有免疫原性的HLA-A2限制性表位肽。方法将来源于HCA587的候选HLA-A2限制性肽与MHC-Ⅱ类限制性肽HBV-core128-140、不完全弗氏佐剂、Cp G ODN1826联合应用皮下免疫HLA-A2转基因小鼠,用酶联免疫斑点实验(ELISpot)检测小鼠脾细胞表位肽特异性细胞免疫应答的水平,流式细胞术检测表位肽特异性的CD8+T细胞比例。结果在检测的4个表位肽中,p248-256诱导HLA-A2转基因小鼠产生的细胞免疫应答最强,HLA-A2-H-2Kb-p248-256四聚体染色进一步表明p248-256免疫后可产生p248-256特异性的CD8+T细胞。结论来源于HCA587的HLA-A2限制性表位肽中,p248-256具有较强的体内免疫原性。     

抗肿瘤单链抗体融合蛋白的研究进展

尽管有手术、放疗和化疗等综合治疗手段,在过去20多年,恶性脑胶质瘤特别是多形胶质母细胞瘤的预后并无明显改善。然而,在成人颅内恶性肿瘤中,多形胶质母细胞瘤每年的发病率占到50%以上[1]。虽然常规手术配合放化疗可以延长患者的生命,但是浸润性生长的特性决定了上述方法都无法有效清除肿瘤细胞,导致肿瘤在短时间内复发,患者的中位生存期一般不超过15个月[2]。免疫治疗通过激发和补     

肝细胞癌抗原587基因甲基化调节HCA587-TAF9互作介导肝细胞癌的侵袭和迁移

目的：研究肝细胞癌抗原587（HCA587）在肝细胞癌（HCC）组织中的表达和启动子区甲基化状态,探 讨HCA587对肝细胞癌细胞迁移和侵袭的调节机制。方法：纳入肝细胞癌肿瘤组织114 例,分为HCC组和癌旁 非癌组织（NT）组。荧光定量PCR 检测HCA587的mRNA表达量;免疫组织化学和免疫印迹检测HCC组和NT 组组织中HCA587的蛋白表达。基于甲基化敏感酶和甲基化依赖酶酶切,并结合荧光定量PCR 方法分析肝细胞 癌组织中HCA587基因启动子区甲基化状态。构建重组HCA587过表达质粒（pcDNA3.1-HCA587）,培养人肝 细胞癌细胞系BEL-7404,转染pcDNA3.1-HCA587 或者使用甲基化抑制剂5-Azacytidin 处理细胞。细胞分为对照 组、5-Azacytidin 组、pcDNA3.1-HCA587 组和pcDNA3.1-HCA587 空载体（EV） 组。免疫沉淀法分析HCA587 与TATA 盒结合蛋白相关因子9（TAF9）的结合,Transwell 小室检测细胞的迁移和侵袭能力。结果： 与癌旁非 癌组织组比,HCC组的HCA587在mRNA和蛋白水平均上调。免疫组织化学证实HCC组组织中HCA587阳性表 达。HCC组中HCA587的启动子区CpG 岛甲基化水平降低。体外实验结果显示,5-Azacytidin 促进BEL-7404 中 HCA587的表达、HCA587与TAF9的结合、BEL-7404 细胞的迁移和侵袭能力,但抑制HCA587甲基化水平;另外, HCA587过表达增强BEL-7404 细胞的迁移和侵袭能力。结论：HCA587高表达或抑制其启动子区甲基化可以促进 HCA587与TAF9的结合及导致肝细胞癌细胞的迁移和侵袭。     

热休克蛋白70诱导抗肿瘤免疫的机制研究

目的　研究肿瘤热休克蛋白 70 (HSP70 )诱导的抗肿瘤免疫产生的机制。方法　用液相色谱法提纯小鼠肿瘤细胞株中的HSP70。通过动物实验观察HSP70的抗肿瘤作用 ,并用流式细胞技术测定HSP70免疫后小鼠外周血中T细胞亚群的变化。用ELISA法测定HSP70免疫后小鼠体内细胞因子的水平。结果　用HSP70免疫后 ,小鼠外周血中CD8+T细胞及几种主要Th1型细胞因子 (IL 2、TNF α、TNF β和IFN γ)均升高 ,与对照组相比较 ,差异显著 (P <0 .0 1)。结论　HSP70免疫后 ,小鼠外周血中CD8+ T细胞及Th1型细胞因子均有明显升高。此作用可能是其诱导特异性抗肿瘤免疫的重要机制     

卵巢癌独特型抗体疫苗诱导小鼠细胞免疫体外实验研究

卵巢癌是最为棘手的妇科恶性肿瘤,其早期诊断困难,手术后易复发,化疗易耐药,５年生存率仅３０％左右,因此,许多学者对卵巢癌的主动免疫治疗和预防进行了深入研究。近年来,对肿瘤独特型抗体的研究表明,抗独特型抗体可以模拟肿瘤抗原与相应的抗体起作用［１,２］,但在诱导细胞免疫方面研究不多［３］。本研究用卵巢癌内映象独特型抗体６Ｂ１１免疫杂交一代小鼠ＢＣＦ１,观察免疫小鼠淋巴细胞体外对卵巢癌细胞的作用,探讨６Ｂ１１作为卵巢癌疫苗的可能性。１　材料与方法ＢＣＦ１小鼠,６～８周龄,６Ｂ１１抗独特型抗体为本室自行…     

DNA疫苗与抗肿瘤免疫

DNA疫苗是近年发展起来的新一代疫苗，能够诱导宿主体内细胞毒T细胞反应和抗体反应。本量实验研究证明，注射抗肿瘤DNA疫苗能获得肿瘤保护性免疫效应，在肿瘤免疫治疗中应用前景看好。本文对DNA疫苗抗肿瘤免疫的机制，影响因素及应用作一综述。     

HBsAg基因疫苗诱导小鼠抗体产生的观察

将携带编码乙型肝炎病毒(HBV)表面抗原主要蛋白的S基因的质粒,直接注射小鼠肌肉中,小鼠4周后产生抗-HBs,阳转率83.3%(5/6),加强组阳转率66.7%(2/3),未加强组阳转率为100%(3/3);两组小鼠抗体持续时间可达28周以上;4周以后小鼠体内未检测到HBsAg.     

DNA疫苗与抗肿瘤免疫

DNA疫苗是近年发展起来的新一代疫苗 ,能够诱导宿主体内细胞毒T细胞反应和抗体反应。大量实验研究证明 ,注射抗肿瘤DNA疫苗能获得肿瘤保护性免疫效应 ,在肿瘤免疫治疗中应用前景看好。本文对DNA疫苗抗肿瘤免疫的机制、影响因素及应用作一综述     

MAGE1纳米蛋白疫苗的研制及其抗肿瘤效应

目的制备纳米乳剂包裹基因工程MAGE1(melanoma antigen1)抗原,研究其生物学特性及抗肿瘤免疫效应。方法采用界面聚合法,制备包裹MAGE1抗原的纳米乳剂(NEMAGE1),测量粒径、包裹率、载药量。检测乳剂包裹对小鼠DC摄取抗原能力的影响。用NEMAGE1免疫小鼠,运用酶联免疫斑点法(ELISPOT)和细胞毒性杀伤实验(LDH)检测NEMAGE1激活机体细胞免疫反应的状况,并观察纳米蛋白疫苗对荷瘤小鼠的治疗作用。结果成功制备粒径为(15±5)nm的纳米乳剂,包裹率为91%,载药量0.091gPL,4℃放置6个月后性质稳定。DC摄取NEMAGE1的能力明显强于对游离蛋白抗原的摄取。ELISPOT和细胞毒性杀伤实验显示,NEMAGE1可以诱导机体产生针对MAGE1的CTL,特异性杀伤表达MAGE1的肿瘤细胞。荷瘤小鼠的治疗实验显示,NEMAGE1对表达MAGE1的肿瘤有明显疗效,其效果优于单独使用游离MAGE1蛋白。结论纳米乳剂具有较高包裹率和稳定性。纳米乳剂包裹的肿瘤特异性抗原可以有效激活机体产生抗肿瘤免疫效应,是具有临床应用前景的新型抗肿瘤疫苗。     

CEA 迷你肽表位基因疫苗诱导小鼠抗肿瘤免疫的研究

目的:利用含有CEA625-667 基因的单倍体疫苗pcDNA-CEA625-667 及三串联体的DNA 疫苗pcDNA-triCEA625-667 免疫小鼠后,观察其诱导的抗肿瘤免疫效应。方法: 采用4 ~ 6 周纯系BALB/ c 小鼠,肌肉注射法分pc-DNA3.0、pcDNA-CEA625-667 、pcDNA-triCEA625-667 三组免疫小鼠,对其激发的机体特异性及非特异性免疫反应进行研究。流式细胞术检测免疫小鼠脾细胞的T 细胞亚群和CD4+ / CD8+比值;3 H-TdR 掺入法检测免疫小鼠的特异性淋巴细胞增殖;Western blot 杂交及ELISA法检测免疫小鼠血清中的CEA 特异性抗体;ELISA 法检测免疫动物脾细胞体外诱导IFN-β、IL-4、GM-CSF 的分泌水平。结果:实验组与对照组的CD4+ / CD8+比值差异无统计学意义;经过基因疫苗免疫的小鼠与天然小鼠相比,其脾细胞在体外与短肽共孵育之后,会在更短的时间内出现更明显的细胞增殖;免疫了CEA 迷你基因串联体肿瘤疫苗的小鼠血清中可以产生低滴度的抗体,提示HTL 的活化;免疫小鼠脾细胞上清中IFN鄄酌的含量明显高于对照组,而pc-DNA3.0,pcDNA-CEA625-667 ,pcDNA-tri-CEA625-667各组IL-4 的含量均很低,差异无统计学意义;迷你基因三倍体疫苗所引发的增殖效应以及释放细胞因子的水平均高于迷你基因一倍体,说明我们所采用将目的基因多倍串联的抗原改造的方式起到了增强免疫效应的作用。结论:CEA 迷你肽表位基因单倍体及三倍体疫苗均不能显著改变动物体内CD4/ CD8 比值,但均能诱导HTL 活化,使被免疫机体T 细胞趋向于Th1 效应且三倍体疫苗的免疫原性强于单倍体疫苗。     

抗肿瘤抗体药物的研究趋势

抗体药物是发展最快的生物药物之一,为创新药物市场带来了巨大的利益,其中抗肿瘤抗体药物占主导地位[1]。自1979年第一个治疗癌症的抗体药物利妥昔单抗被美国FDA批准上市以来,已有17个抗体药物被批准用于癌症治疗,但是其中的吉妥单抗撤出了市场[2-3]。2013年的统计显示,目前处于临床研究的抗体药物大约有350个,其中大部分都处在早期评估阶段[4]。处在III期临床研究的治疗性抗体包括28个单抗药物和1个单抗混合物,主要用于癌症、炎症或免疫疾病、高胆固醇、骨质疏松症、阿尔茨海     

细胞因子对乙肝病毒基因疫苗诱导产生抗体的影响

将构建的三套乙肝病毒基因疫苗（分别编码Ｓ蛋白、ｐｒｅＳ１＋ｐｒｅＳ２＋Ｓ蛋白及ｐｒｅＳ２＋Ｓ蛋白）注射于Ｃ５７ＢＬ／６小鼠胫前肌内。基因疫苗接种３天后，以同样部位注射ｒｈＩＬ－２、ｒｈＩＬ－４、ｒｈＩＬ－６、ｒｈＩＦＮ－γ。运用ＥＬＩＳＡ检测不同时间小鼠血清中乙肝表面抗原（ＨＢｓＡｇ）及抗－ＨＢｓ。结果显示：注射基因疫苗３天内，小鼠体内即可表达ＨＢｓＡｇ；两周后，血清中可测到抗－ＨＢｓ，两月后抗体水平达到高峰，并保持高水平至少两月以上；肌内注射的几种细胞因子均可提高血清中抗－ＨＢｓ水平，与对照组相比差异有极显著性（Ｐ＜０．０１），其中，ｒｈＩＬ－４、ｒｈＩＬ－６、ｒｈＩＦＮ－γ较ｒｈＩＬ－２作用强。提示，细胞因子可作为基因疫苗的佐剂。该研究为增强基因疫苗免疫效果提供了新途径。     

006 DNA疫苗与抗肿瘤免疫

DNA疫苗是近年发展起来的新一代疫苗,能够诱导宿主体内细胞毒T细胞反应和抗体反应.大量实验研究证明,注射抗肿瘤DNA疫苗能获得肿瘤保护性免疫效应,在肿瘤免疫治疗中应用前景看好.本文对DNA疫苗抗肿瘤免疫的机制、影响因素及应用作一综述.     

非自身肿瘤热休克蛋白可用作抗肿瘤疫苗

科学研究业已证明 ,免疫系统能识别和破坏癌细胞是毋庸置疑的。事实上 ,大量肿瘤相关抗原或肿瘤特异性抗原都已经得到了鉴定 ,通常是在通过癌症患者T细胞的识别基础上得出结论的。细胞毒性T淋巴细胞 (CTL)杀灭肿瘤细胞的能力被人们认为是肿瘤免疫疗法中最重要的发现之一。有一种源自非自身肿瘤但又与肿瘤有关的热休克蛋白(hsp)能引出或激活有效的T淋巴细胞已被最近的研究结果证明 ,源自人黑素瘤的hsp70体外运用CTL为已知的黑素瘤抗原作了特异性克隆。采用 6～ 12周龄BALB/c(H 2 d)和C5 7BL/ 6 (H 2 b)小鼠、卵白蛋白转染的B16细胞 (…     

非自身肿瘤热休克蛋白可用作抗肿瘤疫苗

科学研究业已证明。免疫系统能识别和破坏癌细胞是毋庸置疑的。事实上，大量肿瘤相关抗原或肿瘤特异性抗原都已经得到了鉴定，通常是在通过癌症患者T细胞的识别基础上得出结论的。细胞毒性T淋巴细胞(CIL)杀灭肿瘤细胞的能力被人们认为是肿瘤免疫疗法中最重要的发现之一。     

SARS冠状病毒棘突蛋白的S1蛋白诱导小鼠产生中和抗体的研究

目的 研究SARS冠状病毒棘突蛋白受体结合部位S1的免疫原性，为SARS的实验诊断和新型疫苗的研究提供依据。方法 用克隆有哺乳动物细胞密码子优化的SARS-CoV S1基因的质粒pcDNA3．1／S1或P-S1Ig转染293T细胞，用细胞的上清液纯化S1蛋白。以pcDNA3．1／S1质粒对BALB／c小鼠进行2次基因免疫，以纯化的S1蛋白进行加强免疫。用ELISA法检测小鼠抗SARS-CoV的特异性IgG抗体，并在Vero E6细胞上做体外中和实验，检测中和抗体。结果 S1蛋白诱导小鼠产生抗SARS-CoV的特异性抗体；1：1499．68稀释的S1蛋白免疫的小鼠血清可保护50％的细胞对1000TCID50的病毒攻击，而阴性对照血清不能保护细胞对病毒的感染。结论 SAPS冠状病毒棘突蛋白受体结合部位S1能有效诱导机体产生具有高效保护作用的中和抗体免疫反应，可望发展成为理想的SARS棘突蛋白亚单位疫苗。