逍遥散对慢性心理应激损伤大鼠海马神经元的影响

目的:观测逍遥散对多相性应激大鼠海马神经元结构的影响,探究逍遥散抵抗应激损伤大鼠海马神经元结构的机制.方法:大鼠采用慢性多相性应激模型,造模后取材进行Nissl体染色观测海马神经元内Nissl体及Sevier-Munger海马神经纤维,以Fura-2负载及荧光分光光度计检测大鼠海马突触体内Ca2 浓度.结果:造模组Nissl体数量明显减少,神经元胞体溃变、减少,神经纤维减少、排列紊乱;逍遥散治疗组Nissl体及神经元胞体及神经纤维数量有明显增加,排列更整齐;海马突触体内Ca2 浓度均明显升高.结论:多相性应激使大鼠海马神经元损伤从而致神经元内Nissl体减少,这种损伤是可逆或部分可逆的,逍遥散能明显抑制应激对大鼠海马神经元造成的损伤及神经元内Nissl体的减少.海马神经元细胞内Ca2 超载可能是慢性心理应激损伤大鼠空间学习记忆重要的神经机制,逍遥散也可能是通过抑制海马神经元细胞外Ca2 大量内流,阻止Ca2 超载,从而改善应激大鼠的学习记忆状况.     

逍遥散对应激大鼠海马神经元内Ca~(2+)浓度及NR_1 mRNA表达的影响

目的:研究逍遥散对慢性应激大鼠海马神经元内Ca2+浓度及NR1 mRNA表达的影响,探讨逍遥散对应激损伤学习记忆保护的作用机制。方法:采用慢性多相性应激大鼠模型,以Fura-2负载及荧光分光光度计检测大鼠海马突触体内Ca2+浓度,RT-PCR法检测海马神经元内NR1 mRNA表达的变化。结果:模型组大鼠海马突触体内Ca2+浓度及NR1 mRNA表达均明显上升(P0.01),而与模型组比较,逍遥散组大鼠突触体内Ca2+浓度及NR1 mRNA表达明显回落(P0.05,P0.01)。结论:抑制慢性应激所导致的大鼠海马神经元内NR1 mRNA的过度表达,减少神经细胞膜上NR的数量,从而减轻慢性应激状态下海马神经元内Ca2+超载所致的细胞毒性损伤。这可能是逍遥散抗应激损伤的关键机制。     

逍遥散对应激大鼠海马神经元内Ca^2＋浓度及NR1 mRNA表达的影响

目的：研究逍遥散对慢性应激大鼠海马神经元内Ca2＋浓度及NR1 mRNA表达的影响,探讨逍遥散对应激损伤学习记忆保护的作用机制。方法：采用慢性多相性应激大鼠模型,以Fura-2负载及荧光分光光度计检测大鼠海马突触体内Ca2＋浓度,RT-PCR法检测海马神经元内NR1 mRNA表达的变化。结果：模型组大鼠海马突触体内Ca2＋浓度及NR1 mRNA表达均明显上升（P〈0.01）,而与模型组比较,逍遥散组大鼠突触体内Ca2＋浓度及NR1 mRNA表达明显回落（P〈0.05,P〈0.01）。结论：抑制慢性应激所导致的大鼠海马神经元内NR1 mRNA的过度表达,减少神经细胞膜上NR的数量,从而减轻慢性应激状态下海马神经元内Ca2＋超载所致的细胞毒性损伤。这可能是逍遥散抗应激损伤的关键机制。     

清脑通络方对老年性阿尔茨海默病大鼠海马突触结构的重建作用

目的:观察清脑通络方对老年性阿尔茨海默病(Alzheimer's disease,AD)模型大鼠海马突触结构的影响。方法:将大鼠随机分为青年组、老年组、模型组、石杉碱甲组、清脑通络方组。除青年组和老年组外,其他各组大鼠注射D-半乳糖和鹅膏蕈氨酸到基底前脑进行造模。造模成功后,清脑通络方组大鼠灌胃清脑通络方6 g/(kg·d),石杉碱甲组大鼠灌胃石杉碱甲0.3 mg/(kg·d),青年组、老年组、模型组大鼠以等体积生理盐水灌胃,连续4周。电镜观察大鼠海马CA1区和CA3区分子层突触特征,用体视学方法分析海马CA1区和CA3区突触数密度(N_v)、突触连接带面密度(S_v)和突触连接带平均面积(S)。结果:老年组大鼠CA1区和CA3区突触数密度、突触面密度与青年组比较无明显变化。与老年组比较,模型组大鼠CA1区和CA3区突触数密度、突触面密度显著降低(P0.01)。与模型组比较,清脑通络方组大鼠在CA1区和CA3区的突触数密度、突触面密度显著增加(P0.05,P0.01);石杉碱甲组大鼠在CA1区和CA3区的突触数密度增加,在CA3区突触面密度增加(P0.01)。与石杉碱甲组比较,清脑通络方组大鼠在CA1区的突触面密度增加(P0.01)。结论:清脑通络方对老年性AD大鼠海马突触密度有显著的改善作用。     

逍遥散对应激大鼠海马突触体内PKC活性及Ca~(2+)浓度的影响

目的:探讨逍遥散对慢性心理应激大鼠海马突触体内Ca2+浓度及蛋白激酶C(PKC)活性的影响,进一步研究其对心理应激损伤学习记忆保护作用的机制。方法:Wistar大鼠随机分为五组,采用慢性多相性应激模型,以Fura-2负载及荧光分光光度计检测大鼠海马突触体内Ca2+浓度,采用琼脂糖凝胶电泳法检测突触体内PKC活性。结果:两个模型组大鼠海马突触体内Ca2+浓度及PKC活性均有上升(P<0.01),而逍遥散组与模型组比较,突触体内Ca2+浓度及PKC活性则明显回落(P<0.05或P<0.01)。结论:慢性多相性应激可升高大鼠海马突触体内Ca2+浓度及PKC活性,逍遥散具有对抗应激升高大鼠海马突触体内Ca2+浓度及PKC活性的作用。     

慢性束缚应激大鼠海马CA1区L-ENK的变化及逍遥散的调节作用

目的:研究慢性束缚应激时大鼠海马CA1区L-ENK的变化以及逍遥散的调节作用。方法:用特制束缚架连续束缚7d与21d,每天3h的方法制作大鼠束缚应激模型,用免疫组织化学方法结合图像分析检测中枢（海马CA1区、齿状回、大脑皮层）L-ENK的变化。结果:大鼠海马CA1区L-ENK免疫反应阳性细胞的平均光密度、积分光密度、平均总面积、面密度和数密度等在造模7d时都有不同程度的增强,到造模21d时大鼠海马CA1区L-ENK有极显著性增强;7d与21d两模型组、四君子汤组及金匮肾气丸组大鼠CA1区L-ENK免疫反应积分光密度与逍遥散组比较显著增强,而逍遥散组和正常对照组相比则没有明显差异;可见逍遥散组对大鼠海马CA1区L-ENK的积分光密度有显著的影响。结论:逍遥散、四君子汤和金匮肾气丸对慢性束缚应激时海马CA1区有不同程度的调节作用,而以逍遥散作用为优。     

慢性束缚应激大鼠海马CA1区L-ENK的变化及逍遥散的调节作用

目的：研究慢性束缚应激时大鼠海马CA1区L-ENK的变化以及逍遥散的调节作用.方法：用特制束缚架连续束缚7d与21d,每天3h的方法制作大鼠束缚应激模型,用免疫组织化学方法结合图像分析检测中枢（海马CA1区、齿状回、大脑皮层）L-ENK的变化.结果：大鼠海马CA1区L-ENK免疫反应阳性细胞的平均光密度、积分光密度、平均总面积、面密度和数密度等在造模7d时都有不同程度的增强,到造模21d时大鼠海马CA1区L-ENK有极显著性增强;7d与21d两模型组、四君子汤组及金匮肾气丸组大鼠CA1区L-ENK免疫反应积分光密度与逍遥散组比较显著增强,而逍遥散组和正常对照组相比则没有明显差异;可见逍遥散组对大鼠海马CA1区L-ENK的积分光密度有显著的影响.结论：逍遥散、四君子汤和金匮肾气丸对慢性束缚应激时海马CA1区有不同程度的调节作用,而以逍遥散作用为优.     

立论于肝脾同治研究逍遥散对老年性痴呆模型鼠行为学及神经可塑性的影响

目的:立论于肝脾同治研究逍遥散对老年性痴呆模型鼠行为学及神经可塑性生长相关蛋白(GAP-43)和突触素(SYN)的影响。方法:72只健康SPF级雄性大鼠,根据随机数子表法随机分为3组,假手术组、痴呆组和逍遥散组,每组各24只。痴呆组和逍遥散组进行老年痴呆AD大鼠的模型制备,假手术组:常规饲料饮水SPF级饲养;痴呆组:在空白组的基础上,给予等量0.2 m L/10 g无菌生理盐水灌胃;逍遥散组:在空白组的基础上,逍遥散水煎液,给予0.2 m L/10 g的逍遥散水煎液灌胃。1次/d,疗程6周。采用Y型迷宫进行大鼠的学习记忆行为检测,透射电子显微镜(TEM)观察海马CA1区突触结构,免疫组化检测海马CA1区生长相关蛋白(GAP-43)的表达情况,蛋白质印迹法(Western Blot)检测突触素(SYN)的表达情况。结果:1)与假手术组比较,痴呆组和逍遥散组中EN均增加(P0.05),CN均减少(P0.05);其中逍遥散组EN低于痴呆组(P0.05),CN则高于痴呆组(P0.05)。2)TEM下观察假手术组突触结构和形态正常,逍遥散组大鼠海马CA1区突触结构和形态均较痴呆组规则(P0.05)。3)与假手术比较,痴呆组和逍遥散组GAP-43和SYN表达均下调(P0.05),而逍遥散组中GAP-43和SYN的表达则高于痴呆组(P0.05)。结论:逍遥散(肝脾同治)有效改善老年性痴呆模型鼠的学习记忆行为学和突触结构形态,其机制可能与上调了生长相关蛋白(GAP-43)免疫组化8和突触素(SYN)神经可塑性相关蛋白有关。     

海马CA1区缺血再灌注损伤的形态学改变及三七总皂苷的影响

目的 :探讨大鼠海马CA1区神经元缺血再灌注损伤的病理学改变及三七总皂苷 (PNS)的影响。方法 :线栓法制备大鼠左侧大脑中动脉阻断局灶性脑缺血模型。以临床神经症状缺损程度、海马CA1区组织学分级、海马CA1区神经元密度等为评价指标。结果 :三七总皂苷组神经症状明显减轻 ,海马CA1区组织学分级降低、神经元密度增加 ,与模型组间差异有显著性意义。结论 :三七总皂苷能明显减轻脑缺血再灌注引起的神经损伤症状及海马CA1区神经元损伤的程度。     

慢性应激损伤对大鼠海马GABRD基因表达的影响及逍遥散干预机制的研究

目的:用逍遥散干预慢性应激损伤模型大鼠,观察其海马区GABRD基因的表达情况。方法:以45只Wistar大鼠随机分为空白对照组、慢性应激模型组、逍遥散治疗组3组,每组15只。造模方法采用Cart多相慢性应激大鼠模型并加以改进,逍遥散治疗组在造模同时给予逍遥散2 mL/只·d,连续造模21 d,于第22天处死大鼠并取材。运用Agilent表达谱芯片筛选各组差异基因,并选取GABRD基因,采用实时荧光定量PCR及免疫组织化学染色法对各组大鼠海马区域GABRD基因mRNA及其蛋白表达情况加以验证。结果:Agilent表达谱芯片结果显示慢性应激模型组大鼠海马GABRD下调,逍遥散干预后有上调趋势,但无统计学意义。RT-PCR及免疫组化法验证结果显示:慢性应激模型组大鼠海马GABRD mRNA及其相应蛋白表达均显著下调,中药复方逍遥散可从蛋白水平纠正这种下调的表达变化。结论:γ-氨基丁酸A受体δ亚型表达变化参与了慢性应激损伤的过程,逍遥散可能通过调控这一基因的表达而发挥对慢性应激损伤所致一系列神经、精神紊乱症状的保护性调节作用。     

补肾填精方对Aβ1-40所致老年性痴呆模型大鼠行为学及病理学的影响

目的:观察补肾填精方对Aβ1-40所致老年性痴呆模型大鼠行为学及病理学影响。方法:84只SD大鼠随机分为空白组,模型组,补肾填精方小剂量组、中剂量组、大剂量组,双益平组。采用大鼠双侧海马CA1区注射Aβ1-40复制老年性痴呆模型。造模24h后开始连续给药3周。Morris水迷宫法测试大鼠学习记忆能力,透射射电镜观察大鼠海马CA1区神经元、突触的变化。结果:补肾填精方可改善大鼠的学习记忆能力、改善海马CA1区神经元结构、减少突触的丧失。结论:补肾填精方能改善Aβ1-40所致老年性痴呆模型大鼠行为学及脑组织的病理损害。     

The effects of an herbal medicine Bu-Wang-San on learning and memory of ovariectomized female rat

ETHNOPHARMACOLOGICAL SIGNIFICANCE: Bu-Wang-San (BWS) is a traditional Chinese herbal medicine for the treatment of learning and memory impairment. The effect of BWS on neuroprotection and how BWS increases CA1 dendritic spine synapse density in menopaused women was investigated in the model of ovariectomized (OVX) rats. MATERIALS AND METHODS: Sixteen OVX rats were divided into two groups, the OVX group and OVX+BWS group. After 3 months, Morris water maze was used to assess spatial acquisition and spatial retention. Swim time, swim distance, swim speed, quadrant time and platform crossing were recorded. The ultrastructure of the pyramidal cell and spine synapse density were examined by transmission electron microscopy (TEM). RESULTS: In the spatial acquisition and spatial retention phase of testing, BWS group functioned significantly better than control group. Ultrastructural observation of the hippocampal CA1 region of OVX group showed swelling of mitochondria, the broken and reduced cristas and even crista dissolution; however, the mitochondria were protected well in BWS group. In addition, BWS significantly increased spine synapse density. CONCLUSIONS: These results suggested that BWS could improve cognitive ability of menopause-induced learning and memory impairment. The positive effect of BWS on rat learning and memory was associated with increase of spinal synapse density and protection of mitochondrial function of the pyramidal cell in hippocampal CA1 region from menopause-induced injury.     

电针“智三针”对血管性痴呆大鼠学习记忆及海马CA1区突触相关蛋白表达的影响

目的:观察电针"智三针"对血管性痴呆(VaD)大鼠学习记忆及海马CA1区突触后致密物-95(Psd-95)和突触囊泡膜蛋白(Syp)表达的影响,探讨电针"智三针"调控神经元突触可塑性从而改善VaD学习记忆的可能机制。方法:将48只造模成功的大鼠随机分为VaD模型组、尼莫地平组、电针智三针组,每组16只,采用改良Pulsinelli四血管阻断法(4-VO)制作VaD大鼠模型,另取12只未造模大鼠为假手术组。Morris水迷宫检测各组大鼠行为学,免疫组织化学法检测大鼠海马CA1区Psd-95和Syp阳性细胞表达,蛋白质印迹法检测大鼠海马CA1区Psd-95和Syp蛋白的表达情况。结果:与假手术组比较,VaD模型组大鼠在2 d后逃避潜伏期明显延长,而第三象限游泳时间和跨越平台次数明显减少(P<0.05);与VaD模型组比较,电针智三针组大鼠逃避潜伏期缩短、跨越平台次数增加(P<0.05)。与假手术组比较,VaD模型组大鼠海马CA1区Psd-95与Syp蛋白表达量明显减少(P<0.05);与VaD模型组比较,电针智三针组与尼莫地平组大鼠海马CA1区Psd-95与Syp蛋白表达量明显增加(P<0.05)。结论:电针"智三针"可能通过增加海马CA1区Psd-95和Syp的表达,调控海马CA1区突触可塑性,减少神经元突触丢失,从而达到改善VaD大鼠学习记忆的作用。     

熄风胶囊干预治疗对氯化锂-匹罗卡品癫痫大鼠海马突触损伤的影响

[目的]观察中药熄风胶囊单药和联合用药干预治疗对氯化锂-匹罗卡品癫痫大鼠海马突触损伤的影响。[方法]将SPF级健康雄性Wistar大鼠64只随机分为正常组、模型组、熄风胶囊高剂量干预组(熄高组)、熄风胶囊中剂量干预组(熄中组)、熄风胶囊低剂量干预组(熄低组)、熄风胶囊大剂量+托吡酯联合干预组(联高组)、熄风胶囊大剂量+托吡酯1/2剂量联合干预组(联低组)、托吡酯干预组(TPM组)各8只。运用氯化锂-匹罗卡品化学点燃法,复制癫痫大鼠模型,通过采用SABC免疫组化检测突触索(P38)表达水平来反映突触索的生长情况、原位杂交检测生长相关蛋白-43(GAP-43)mRNA的表达水平来反映GAP-43的水平。[结果]1)所有癫痫大鼠海马CA1、CA3及齿状回分子层及颗粒细胞层均可见深染的颗粒状免疫反应产物,呈点片状分布。所有治疗组海马CA1、CA3起始层及齿状回内分子层P38免疫反应产物总面积显著低于模型组(P0.01)。联高组海马CA1、CA3、齿状回区P38免疫反应产物总面积与正常组无统计学差异(P0.05),熄高组海马CA1及CA3区阳性反应物与正常对照组无统计学差异(P0.05)。在海马CA1区联高组和熄高组优于其余各治疗组(P0.05)。在海马CA3区联高组作用优于熄低组和TPM组(P0.05),与其余各治疗组比较无统计学差异(P0.05)。在海马齿状回区联高组作用与其余各治疗组均有统计学差异(P0.05)。2)各治疗组大鼠海马颗粒细胞GAP-43 mRNA表达显著低于模型组(P0.01)。其中海马CA1区联高组和熄高组两组无统计学差异(P0.05),优于熄中组和熄低组(P0.05)。在海马CA3区,各治疗组之间无统计学差异(P0.05)。在海马齿状回区联高组和熄高组与熄中组,熄低组和TPM组之间有统计学差异(P0.05)。[结论]熄风胶囊单药和联合用药能有效的干预氯化锂-匹罗卡品癫痫大鼠海马颗粒细胞层及内分子层P38和GAP-43的表达,从而起到减轻海马损伤的作用。     

电针对魏一凯二氏大鼠抑郁模型大鼠海马CA1区突触可塑性及5-羟色胺转运体蛋白的影响

目的：观察电针对WKY(Wistar Kyoto)抑郁大鼠行为学、海马CA1区突触可塑性、5-HTT蛋白表达的影响。方法：本实验选取10 只雄性Wistar 大鼠为正常组（Control）,30 只雄性WKY 大鼠随机分成模型组（Model）、电针组（EA）和假针组（Sham EA）。通过糖水偏好实验（SPT）、旷场实验（OFT）和强迫游泳实验（FST）进行行为学测试。采用电生理场电位实验,检测电针对抑郁模型大鼠海马CA1区LTP的作用,即对突触可塑性的影响。并使用Western blot方法检测大鼠海马CA1区5-HTT蛋白表达。结果：Model组糖水偏好比低于正常组（P < 0.01）,EA组糖水偏好比明显高于Sham EA组（P < 0.05）。OFT中,与正常组相比较,Model组中央运动时间,总运动时间,中央运动距离,总运动距离,垂直站立次数均减少,且差异有统计学意义。与Model组相比,电针EA组的中央运动时间和总运动时间明显增加（P < 0.05）。FST中,与正常组相比较,Model组大鼠的不动时间明显增加（P < 0.05）。与Sham EA组和Model组相比较,EA组的不动时间明显缩短（P < 0.05）。Sham EA和Model组LTP均诱导失败,EA治疗后两个脑区均可成功诱导出LTP。Model组兴奋性突触后场电位（Fieldexcitatory postsynaptic potential, fEPSP）斜率明显低于Control组（P < 0.001）,与Sham EA组相比,EA组fEPSP斜率明显升高（P < 0.001）。与Control组相比,Model组5-HTT蛋白的表达显著增高P < 0.001）。与Sham EA相比较,EA组5-HTT的表达降低（P < 0.001）。结论：电针能够改善WKY大鼠的抑郁样行为,下调海马CA1区5-HTT蛋白的过表达,从而修复受损的海马突触可塑性,这可能是电针治疗抑郁症的机制之一。     

补肾填精方对Aβ_（1-40）所致老年性痴呆模型大鼠行为学及病理学的影响

目的：观察补肾填精方对Aβ1-40所致老年性痴呆模型大鼠行为学及病理学影响。方法：84只SD大鼠随机分为空白组,模型组,补肾填精方小剂量组、中剂量组、大剂量组,双益平组。采用大鼠双侧海马CA1区注射Aβ1-40复制老年性痴呆模型。造模24h后开始连续给药3周。Morris水迷宫法测试大鼠学习记忆能力,透射射电镜观察大鼠海马CA1区神经元、突触的变化。结果：补肾填精方可改善大鼠的学习记忆能力、改善海马CA1区神经元结构、减少突触的丧失。结论：补肾填精方能改善Aβ1-40所致老年性痴呆模型大鼠行为学及脑组织的病理损害。     

抗痫增智胶囊对戊四唑点燃大鼠海马苔藓纤维发芽的干预作用

目的:探讨中药抗痫增智胶囊对戊四唑致痫大鼠海马苔藓纤维发芽的干预作用。方法:运用戊四唑点燃法,复制癫痫大鼠模型。实验大鼠随机分为中药高剂量组、中药中剂量组、中药低剂量组、丙戊酸镁组、模型组、正常对照组。造模成功分别灌药28天后应用Timm染色法观察各组大鼠海马苔藓纤维发芽的情况。结果:Timm染色结果显示模型组大鼠海马CA3始层及齿状回分子层苔藓纤维发芽明显增多,其单位面积的密度百分比显著高于正常对照组(P<0.05)。抗痫增智胶囊高、中剂量组的发芽密度百分比低于模型组(P<0.05),但仍高于正常对照组(P<0.05)。结论:抗痫增智胶囊对海马CA3区及齿状回苔藓纤维发芽有较强的干预作用。     

合欢花总黄酮的抗抑郁作用及其机制研究

目的:研究合欢花总黄酮的抗抑郁作用,并初步探讨其抗抑郁作用机制.方法:将90只SD大鼠随机分为正常组、模型组、盐酸文拉法辛组(0.012 5 g·kg-1)、合欢花总黄酮(0.10,0.05,0.025 g·kg-1)剂量组.应用孤养加慢性不可预见性应激建立抑郁症模型,造模同时ig给药,每天1次,连续给药21 d,正常组、模型组ig等体积蒸馏水.用旷场实验法测定各组大鼠行为变化,TUNEL原位杂交检测海马CA3区神经元细胞凋亡.结果:与正常组比较:模型组大鼠旷场实验3 min内水平运动、垂直运动得分均明显降低(P ＜0.05或P＜0.01),海马CA3区神经元凋亡细胞数、阳性细胞率均显著增加(P＜0.01);与模型组比较:盐酸文拉法辛组、合欢花总黄酮(0.10,0.05,0.025 g·kg-1)剂量组旷场实验3 min内水平运动、垂直运动得分均明显增高(P ＜0.05或P＜0.01),海马CA3区神经元凋亡细胞数及阳性细胞率均明显减少(P＜0.05).结论:合欢花总黄酮具有抗抑郁作用,其机制可能与拮抗CA3区海马神经元细胞凋亡有关.