β—缆香烯对不同分化程度胃癌细胞株端粒酶活性及细胞凋亡的影响

目的：探讨β－缆香烯治疗胃癌的作用机制。方法：应用四唑蓝（MTT）比色法、端粒重复扩增（TRAP）－微孔板杂交法、光镜检查和DNA末端原位标记染色法（TUNEL）研究β－缆香烯对胃癌细胞株SGC－7901（中分化）、MKN－45（低分化）和MKN－28（高分化）的细胞毒作用及其对端粒酶活性、细胞形态变化和细胞凋亡的影响。结果：β－缆香烯对不同分化程度的胃癌细胞均具有较强的细胞毒作用;其抗癌作用与抑制端粒酶活性和诱导凋亡有关。β－缆香烯抑制端粒酶活性及诱导凋亡的数量与作用时间、浓度及细胞分化程度相关。结论：β－缆香烯对胃癌细胞具有很强的细胞毒作用,这一作用与抑制端粒酶活性和诱导凋亡有关。     

紫杉醇体外诱导人胃癌细胞凋亡及对端粒酶活性的影响

目的研究紫杉醇诱导人胃癌细胞凋亡及端粒酶活性变化.方法采用0.001～1 μmol·L-1的紫杉醇处理SGC 7901细胞后,用MTT法测定胃癌细胞的生长抑制率,通过形态学观察及流式细胞术检测细胞凋亡率,半定量TRAP-银染法测定端粒酶活性变化.结果不同浓度的紫杉醇对胃癌细胞均有明显抑制作用,且呈时间依赖性及剂量依赖性.光镜及流式细胞术分析表明,0.01μmol·L-1的紫杉醇处理后24 h,细胞即出现明显的凋亡形态特征及凋亡峰,对端粒酶活性的同步检测结果显示,紫杉醇在诱导细胞凋亡的同时伴随端粒酶活性下调,且随紫杉醇浓度增大,抑制作用逐渐增强,12 h相对端粒酶活性为96,24 h为58,48 h为28,72 h起变为阴性.结论紫杉醇对胃癌细胞具有明显抑制作用,诱导细胞凋亡并抑制端粒酶活性可能是其发挥抗癌作用的机制之一.     

叠氮胸苷对胃端粒酶活性及细胞增殖的影响

目的 探讨反转录酶抑制剂叠氮胸苷对端粒酶活性的影响及抑制端粒酶活性以控制３胃癌生长的可能性。方法 采用端粒重复片段扩增法（ｔｅｌｏｍｅｒｅ ｒｅｐｅａｔ ａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎ ｐｒｏｔｏｃｏｌ，ＴＲＡＰ）。和流式细胞术等检测胃癌细胞经叠氨胸苷处理前后的端粒酶活性和细胞增殖能力。结果 经叠氮胸苷处理后，培养的胃癌细胞端粒酶活性较末处理组降低８４．１％，出现衰老形态的细胞，处理１４和２１天后生长     

β-榄香烯对不同分化程度胃癌细胞株端粒酶活性及细胞凋亡的影响

目的:探讨β-榄香烯治疗胃癌的作用机制.方法:应用四唑蓝(MTT)比色法、端粒重复扩增(TRAP)-微孔板杂交法、光镜检查和DNA末端原位标记染色法(TUNEL)研究β-榄香烯对胃癌细胞株SGC-7901(中分化)、MKN-45(低分化)和MKN-28(高分化)的细胞毒作用及其对端粒酶活性、细胞形态学变化和细胞凋亡的影响.结果:β-榄香烯对不同分化程度的胃癌细胞均具有较强的细胞毒作用;其抗癌作用与抑制端粒酶活性和诱导凋亡有关.β-榄香烯抑制端粒酶活性及诱导凋亡的效果与作用时间、浓度及细胞分化程度相关.结论:β-榄香烯对胃癌细胞具有很强的细胞毒作用,这一作用与抑制端粒酶活性和诱导凋亡有关.     

叠氮胸苷对胃癌端粒酶活性及细胞增殖的影响

目的探讨反转录酶抑制剂叠氮胸苷对端粒酶活性的影响及抑制端粒酶活性以控制胃癌生长的可能性。方法采用端粒重复片段扩增法（ｔｅｌｏｍｅｒｅｒｅｐｅａｔａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎｐｒｏｔｏｃｏｌ,ＴＲＡＰ）和流式细胞术等检测胃癌细胞经叠氮胸苷处理前后的端粒酶活性和细胞增殖能力。结果经叠氮胸苷处理后,培养的胃癌细胞端粒酶活性较未处理组降低８４．１％,出现衰老形态的细胞,处理１４和２１天后生长抑制率分别为５９．３％和８０．９％,细胞存活分数明显降低,分别为０．５４和０．３３,并对细胞周期具有一定影响。结论叠氮胸苷可明显抑制胃癌细胞端粒酶活性,诱导细胞衰老和增殖能力的降低,临床上应用端粒酶抑制剂限制端粒扩充治疗胃癌可能具有广阔的前景。     

端粒保护蛋白过表达对HeLa细胞染色体端-端融合和端粒酶活性的影响

目的 观察人端粒保护蛋白1（human protection of telomeres1，hPOT1）基因过表达对HeLa细胞染色体端-端融合和端粒酶活性的影响。方法 利用先前构建的hPOT1基因真核表达重组质粒pcDNA3-hPOT1，经脂质体介导瞬时转染HeLa细胞介导hPOT1基因过表达；秋水仙碱阻滞细胞周期于分裂中期，DAPI荧光染色分析染色体端-端融合；Telomerase PCR-ELISA试剂盒检测端粒酶活性。结果 pcDNA3-hPOT1重组质粒转染HeLa细胞5d后，染色体端-端融合几率增加，对端粒酶活性无明显影响。结论 提示hPOT1蛋白可导致染色体端-端融合。     

人端粒酶逆转录酶干扰对肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体诱导肝癌细胞凋亡的影响

目的研究人端粒酶逆转录酶(hTERT)干扰对肝癌．HepG2、SMMC-7221细胞生物学形为的影响和对肿瘤坏死因子相关的凋亡诱导配体(TRAIL)诱导凋亡的影响。方法将HepG2细胞和SMMC-7721细胞分为转染组 (转染重组质粒真核表达载体)、对照组(转染空载体质粒)和未转染组。采用聚合酶链反应方法检测hTERT干扰序列, 逆转录聚合酶链反应方法检测hTERT表达,HE染色、生长曲线和流式细胞术方法分别检测细胞形态、增殖情况和细胞周期,β-半乳糖苷酶染色方法检测细胞状态,Armexin V／PI染色流式细胞术检测细胞凋亡。结果转染组细胞内均存在hTERT干扰序列,HepG2和SMMC 7221细胞hTERT干扰率分别为100％和43．3％;与未转染组细胞相比, 转染细胞核质比明显缩小,增殖率下降差异有统计学意义(P<0．05),老化细胞和G2-M期细胞明显增加(P<0．05)。细胞老化率分别由未转染组的0增加到转染组的20．4％,由3．60%,增加到10．O％;G2-M期分别由未转染组的7．1％、6．9％增加到转染组的10．6％、7．9％。hTERT干扰显著增加肝癌细胞凋亡和TRAIL诱导凋亡敏感性(P<0．05)。两株肝癌细胞凋亡率分别由未转染组的3．5％、4．8％增至转染组的5．2%、7．9％;100 ng／ml TRAIL作用24 h后两株肝癌细胞凋亡率分别由未转染组的5．3％、13．9％增加到转染组的10．4％、77．2％,而对照组细胞各指标均无显著变化。结论 hTERT干扰明显影响肝癌细胞的生物学行为,显著增加细胞凋亡和TRAIL诱导凋亡的敏感性。     

三氧化二砷对裸鼠膀胱癌细胞凋亡的影响

目的探讨三氧化二砷(As2O3)抑制膀胱癌细胞生长的作用。方法体外培养膀胱癌T24细胞,取指数生长期T24细胞裸鼠皮下接种,成瘤后连续7 d尾静脉分别注射As2O3(5、10 mg·kg-1·d-1)、丝裂霉素(MMC)及生理盐水。应用电镜、流式细胞术和免疫组化等方法检测了癌细胞的超微结构变化、细胞的凋亡和Caspase3蛋白的表达。结果电镜下As2O3组可见典型癌细胞凋亡的形态学改变;流式细胞分析,As2O3组可见癌细胞凋亡峰,凋亡率分别为10．67％和23．42％,明显高于对照组(0．83％);免疫组化检测As2O2组Caspase 3蛋白表达(33．54％和56．22％)也明显高于对照组(6．25％)。结论As2O3可以通过诱导膀胱癌细胞凋亡,抑制膀胱癌细胞生长。     

丙型肝炎病毒核心区蛋白和细胞凋亡对细胞端粒酶活性的影响

丙型肝炎病毒(HCV)核心区编码的HCV-C蛋白维持病毒外形，还有较强的免疫调节功能，是细胞免疫的主要识别位点，在HCV致病过程中起着重要作用。端粒酶活性上调被认为是肿瘤发生的一种机制，HCV引发肝细胞癌(HCC)是否与上调肝细胞端粒酶活性有关?本实验拟对上述问题进行初步探讨，以部分阐明HCV导致HCC发生的机制。     

三氧化二砷对类风湿关节炎滑膜细胞凋亡影响的体外研究

目的 探讨类风湿关节炎(RA)患者滑膜细胞的凋亡异常,以及三氧化二砷(As_2O_3)对体外培养RA的滑膜细胞凋亡的诱导作用.方法 用光镜、电镜、流式细胞仪检测As_2O_3对体外培养的RA滑膜细胞凋亡的诱导作用,As_2O_3,作用于RA滑膜后酶联免疫吸附试验(ELISA)检测凋亡过程中细胞色素C的变化,反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测Caspase-3.Bel-2 mRNA表达,采用单因素方差分析和LSD-t检验、Dunnet-t检验进行统计学处理.结果 流式细胞仪检测发现不同浓度的As_2O_3作用后,滑膜细胞的凋亡较空白对照组(NC)增加[NC(0.95±0.87)%,RA(0.21±0.12)%,P<0.05],呈一定的剂量依赖性,尤其以80 μmol/L药物浓度最为明显.凋亡早期(6 h)细胞色素C水平升高80 μmol/L组升高明显[NC(0.34±0.27),80 μmol/L组(32.04±1.62),P<0.05];不同浓度的As_2O_3作用后细胞中Caspase-3 mRNA表达显著增强[NC(0.144±0.022),RA(0.323±0.047),(0.824±0.109),(1.213±0.196),P<0.05],Bcl-2的mRNA表达显著减弱[NC(1.08±0.23),RA(0.94±0.15),(0.46±0.08),(0.22±0.06),P<0.05].结论 RA患者滑膜细胞凋亡较健康埘照减少,As_2O_3通过升高细胞色素c及Caspase-3,抑制Bcl-2诱导RA滑膜细胞凋亡.     

bcl-2反义寡核苷酸联合三氧化二砷对膀胱癌细胞生长的抑制作用

目的观察bcl-2反义寡核苷酸（antisense oligonucleotides，ASODN）与三氧化二砷（As2O3）对膀胱癌细胞生长的抑制作用，比较联合或单独用药的抑制效果。方法人工合成包含bcl-2翻译起始位点的ASODN及无义核酸（NSODN），以质脂体（Lipofectamine）作为载体转染T-24膀胱癌细胞株。分为对照组（加PBS）、反义组（ASODN 1μmoL/L）、无义组（NSODN 1μmoL/L）、As2O3组（2μmoL／L）、As2O3＋反义组（联合用药组：As2O3 1μmol／L，ASODN0．5μmol／L）。采用肿瘤细胞生长曲线、四氮唑蓝（MTT）实验和集落形成实验，观察药物对肿瘤细胞生长的抑制作用，流式细胞仪检测肿瘤细胞的凋亡情况。结果从细胞生长曲线看出，与对照组相比，联合用药组肿瘤细胞数减少了62．09％，反义组减少了31．04％，As2O3组减少了39．08％，无义组减少了21．84％。MTT实验，肿瘤细胞抑制率联合用药组为（86．11±7．35）％，As2O3组为（67．21±8．99）％，反义组为（50．23±5.46）％，无义组为（8．22±0．33）％，组间比较差异有统计学意义（F=180．2，P〈0．01）。半数抑制浓度（IC50）联合用药组为（0．98±0．12）μmol／L，As2O3组为（1．53±0．32）μmol／L。反义组的为（1．96±0．22）μmol／L，无义组为（4．33±0．33）μmol／L，组间比较差异有统计学意义（F=354.0，P〈0．01）。肿瘤细胞集落生存率联合用药组为53．76％，反义组为76．32％，As2O3组为75．25％，无义组为90．33％。肿瘤细胞凋亡率联合用药组为（22．66±1．66）％，组间比较均差异有统计学意义（F=232．15，P〈0．01）。结论Bcl-2反义寡核苷酸与As2O3联合应用可明显提高对膀胱癌细胞生长的抑制作用。     

三氧化二砷诱导小细胞肺癌细胞凋亡及p53、bcl-2基因表达的研究

目的：研究三氧化二砷（As2O3）诱导小细胞肺癌细胞凋亡及其机制。方法：采用末端脱氧核苷酰转移（TUNEL）法检测细胞凋亡，免疫组织化学（SABC）法分析As2O3对小细胞肺癌细胞（NeI-H细胞）p53、bcl-2基因蛋白表达的影响。结果：As2O30.5μmol/L、1.0μmol/L、2.0μmol/L作用72h，NeI-H细胞均可呈现凋亡所特有的亚G1峰，凋亡比率随药物作用浓度增加和作用时间延长而增高。实验组p53基因蛋白表达较对照组明显增多，药物浓度越高表达越多（P=0.001）；bcl-2基因蛋白表达较对照组明显减少，药物作用浓度越高表达越少（P=0.001）。结论：As2O3抗肿瘤作用主要是通过诱导细胞凋亡实现的，其机制与上调p53基因表达及下调bcl-2基因表达有密切关系。     

翻白草油对呼吸道合胞病毒感染宿主HeLa细胞凋亡的影响

目的 探讨翻白草油抗呼吸道合胞病毒(RSV)的作用.方法 RSV感染宿主HeLa细胞后,进行翻白草油干预,采用流式细胞术检测宿主HeLa细胞凋亡百分比;Western印迹和免疫荧光检测caspase-3蛋白的表达.结果 翻白草油(除药物预处理作用)组与RSV病毒组比较,宿主HeLa细胞凋亡百分比及caspase-3蛋白的表达明显降低(P＜0.01).结论 翻白草油在三种作用方式下(直接灭活阶段、病毒复制阶段、病毒吸附阶段)有抗RSV作用,可能与降低宿主HeLa细胞凋亡及caspase-3蛋白的表达有关.     

三氧化二砷对裸鼠结肠癌腹腔转移的抑制作用

目的　研究Ａｓ２Ｏ３ 对裸鼠结肠癌腹腔转移的影响及其作用机制。方法　ＢＡＬＢ／Ｃｎｕ／ｎｕ裸鼠腹腔内接种结肠癌Ｌｏｖｏ 细胞后,随机分为５ 组,分别腹腔内注射生理盐水、表阿霉素及不同剂量的Ａｓ２Ｏ３ ,观察各组的致瘤率、腹水生成及生存时间。结果　表阿霉素、低剂量Ａｓ２Ｏ３ 与对照组相比可明显抑制裸鼠腹水的生长,延长生存期（ Ｐ＜ ０．０１） ;中高剂量Ａｓ２Ｏ３ 除上述作用外还可通过诱导肿瘤细胞凋亡消除腹腔内肿瘤细胞,抑制腹水生成,并使裸鼠寿命明显延长。结论　Ａｓ２Ｏ３ 可诱导结肠癌细胞凋亡,抑制或消除裸鼠肿瘤性腹水的生成,不同程度地延长生存期。     

氧化砷诱导胰腺癌细胞凋亡的实验研究

目的：观察As2O3对胰腺癌细胞株体外生长和裸鼠腹腔种植腹水生成的影响及其作用机制。方法：0．125－2μmol/L的As2O3与胰腺癌细胞株SW－8902共同孵育，观察不同浓度、不同作用时间对胰腺癌细胞生长的抑制作用、作用后胰腺癌细胞的凋亡特征及Fas Fas-L表达的变化。80只BALB／C－nu/nu裸鼠腹腔内接种胰腺癌细胞株SW－8902，并随机分为4组，然后分别腹腔内注射生理盐水及不同剂量的As2O3，观察各组裸鼠的生存时间。结果：1－2μmol/L的As2O3作用后，胰腺癌细胞呈典型的凋亡特征性改变，流式细胞仪检测在G1期前出现亚二倍体凋亡峰，DNA电泳呈现特征性Ladder, 细胞核内可见染色质浓缩、碎裂和边聚。As2O3也可显抑制荷胰腺癌裸鼠腹水的生成，延长生存期（P＜0．01）,Fas、Fas-L表达在As2O3作用后2d上升，3d达最高，以后表达量下降。结论：As2O3诱导胰腺癌细胞凋亡，抑制裸鼠胰腺癌腹腔种植及腹水的生成，延长生存期。Fas、Fas-L表达上调是As2O3诱导肿瘤细胞凋亡的途径之一。     

反义端粒酶基因与顺铂诱导原代胃癌细胞凋亡作用的研究

目的　探讨端粒酶反义寡核苷酸 (PS- ASODN)与顺铂 (DDP)联合应用对原代胃癌细胞凋亡作用的影响。方法　常规组织块培养法进行胃癌细胞原代纯化培养 ,取第 3代对数生长期细胞分六组进行实验。其中四组在培养 2 4小时及 4 8小时分别加入相同剂量的培养液 ,终浓度为 PS- ASODN3μM,N- ASODN3μM,DDP2 .0μg/ ml。作用 2 4小时后分别在 PS- ASODN组及 N- ASODN组加入终浓度为 2 .0 μg/ ml的 DDP;分别于培养后 2 4、4 8、72及 96小时收集各组细胞。以台盼蓝拒染法计算各组细胞生长抑制率 ,观察 PS- ASODN联合 DDP对原代胃癌细胞生长的影响 ;流式细胞学观察细胞凋亡率及细胞周期变化。结果　终浓度为 3μM的 PS- ASODN作用于原代胃癌细胞 2 4小时后加入 DDP 2 .0μg/ m l,能明显抑制胃癌细胞增殖 ,流式细胞学可检测到凋亡峰 ,细胞受阻于G0 / G1 期 ,作用 4 8及 72小时的凋亡细胞百分率 (35 .1%、4 5 .7% )明显高于 N- ASODN组、PS- ASODN组、DDP组及 N- ASODN+DDP组 ,差异有显著性 (P<0 .0 5 )。其作用呈时间依赖性及序列特异性。结论　以端粒酶 RNA模板区为靶点的 PS- ASODN可促进 DDP诱导的胃癌细胞凋亡 ,对胃癌具有治疗价值     

反义寡核苷酸转染对SGC-7901胃癌细胞端粒酶活性及细胞凋亡的影响

目的：探讨端粒酶反义寡核脱氧核苷酸（PS－ASODN）对SGC－7901胃癌细胞端粒酶活性及细胞凋亡的影响。方法：脂质体介导的PS－ASODN作用于SGC－7901细胞后，台盼蓝拒染法计算细胞生长抑制剂，采用半定量TRAP－银染法检测端粒酶活性，用流式细胞仪观察细胞凋亡率及细胞周期变化，采用光镜及电镜观察细胞凋亡形态。结果：终浓度为3、2及1μM的PS－ASODN对SGC－7901细胞均有抑制作用，抑制率与对照组比较，差异有显著性（P＜0．01）；PS－ASODN转染后48h，端粒酶活性明显降低（P＜0．05）。以上抑制作用呈剂量依赖性及序列特异性。流式细胞仪检测到凋亡峰，细胞受阻于G0/G1期；光镜及电镜显示典型的细胞凋亡形态改变。对照寡核苷元上述作用。结论：以端粒酶RNA模板区为靶点的反义寡核苷不但明显抑制胃癌细胞的增殖，降低端粒酶活性，而且具有促凋亡作用，对胃癌具有重要治疗价值。     

端粒酶逆转录酶基因反义寡核苷酸抑制肺癌细胞端粒酶活性和诱导细胞凋亡

目的 研究端粒酶逆转录酶（hTERT)基因反义寡核苷酸（ASODN）对肺癌细胞端粒酶活性和细胞凋亡的影响。方法 实验分为ASODN组、正义寡核苷酸（SODN）组和空白对照组,所用ASODN和SODN的浓度分别为10μmol/L,脂质体为16mg/L,采用端粒重复扩增法、逆转录－聚合酶链反应、Western Blot及流式细胞术分别观察各组端粒酶活性、hTERP mRNA和蛋白质表达以及细胞凋亡。结果 ASODN组显著下调或抑制肺癌细胞端粒酶活性和hTERT表达,但直到第21天才出现细胞凋亡增多。结论 端粒酶活性与hTERT表达密切相关。     

乙型肝炎病毒X基因对肝细胞系细胞凋亡及端粒酶活性的影响

目的探讨乙型肝炎病毒x基因对肝细胞恶性变的作用机制.方法将带C基因、S基因的载体电转染导入HepG2细胞,筛选表达细胞克隆,复苏带X基因的HepG2细胞.PCR-ELISA检测各株细胞的端粒酶活性.用反义寡核苷酸诱导细胞凋亡,流式细胞仪观测转染了x基因、C基因、S基因细胞的凋亡情况.结果表达细胞克隆经同步化处理,39.50%转染X基因的细胞进入细胞S周期,其端粒酶活性指数395±0.07明显高于其它各组细胞.反义寡核苷酸诱导后,转染X基因细胞凋亡峰明显减小,凋亡率仅1.75%;其细胞活性与反义寡核苷酸浓度成反比.结论乙型肝炎病毒X基因上调肝源细胞端粒酶活性,抑制细胞凋亡,这可能是诱导肝细胞恶性变的又一机制.     

复方丹参注射液对H2O2诱导的PC12细胞凋亡的保护作用

目的　探讨复方丹参注射液 (ISM)对 H2 O2 诱导的 PC1 2细胞凋亡的保护作用机制。方法　在 H2 O2 诱导 PC1 2细胞凋亡模型的基础上 ,采用 MTT比色分析测定细胞存活率 ,Hoechst- PI荧光染色和流式细胞仪检测分析细胞凋亡情况 ,RT- PCR检测 par- 4和 caspase- 3基因 m RNA表达 ,Western blot检测 par- 4蛋白表达和 caspase- 3P2 0活性片段 ,比色法检测 caspase- 3相对活性。结果　不同剂量 ISM预处理 1 h可提高 PC1 2细胞存活率 ,降低 par- 4和 caspase- 3的 m RNA表达以及 Par- 4的蛋白表达 ,caspase- 3 P2 0活性片段和 caspase- 3相对活性减少 ,但变化不明显。结论　 ISM可剂量依赖性地对抗 H2 O2的神经毒性作用 ,其机制可能与凋亡基因 par- 4表达有关 ,与 caspase- 3的关系尚需进一步探讨。