S1P信号通路在肥厚心肌缺血后适应中的作用

目的探讨在缺血后适应(IPost)减轻肥厚心肌缺血再灌注(IR)损伤中S1P信号通路的作用。方法选取12周龄C57/BL小鼠,利用Langendorff灌流装置建立小鼠肥厚心肌IR模型,30 min全心缺血随后再灌注90 min。64只小鼠随机分为缺血再灌注组(IR组)、缺血后适应组(IPost组)、IPost+W-146组和IPost+PD98059组,每组14只,进行心脏血流动力学和心肌梗死范围检测,Western印迹方法检测S1P1、ERK1/2总蛋白及磷酸化蛋白表达水平。脱氧核苷酸转移酶介导的生物素原位缺口末端标记(TUNEL)法检测心肌细胞的凋亡。结果与IR组比较,IPost组小鼠心脏血流动力学指标左心室收缩压[(66±6)mm Hg vs(85±5)mm Hg]、左室压力上升最大速度[(2 820±220)mm Hg vs(3 778±230)mm Hg]显著降低(P<0.05),心肌梗死范围显著减小[(23.6±2.8)%vs(40.2±4.6)%]。IPost+抑制剂组显示在再灌注的最初15 min使用W-146、PD98059能消除IPost对肥厚心肌的上述保护作用并显著增加心肌梗死面积,与IR组水平相同。与IR组比较,IPost组在再灌注结束后心肌组织中的S1P1、ERK1/2蛋白磷酸化水平表达显著增加;IPost+W-146组与IPost+PD98059组分别与IR组比较,上述指标差异均无统计学意义(P>0.05);TUNEL法检测结果显示,IPost组Bcl-2的表达较其他各组明显升高,Bax的表达较其他各组明显降低,经比较各组之间Bcl-2和Bax的表达差异无统计学意义(P>0.05)。结论 IPost能有效地减轻离体小鼠肥厚心肌缺血再灌注损伤,IPost的心肌细胞保护作用可能是通过S1P结合S1P1后激活ERK1/2信号通路实现的。     

缺血后适应对压力超负荷肥厚心肌缺血再灌注损伤的影响

目的 探讨缺血后适应(IPost)在离体小鼠肥厚心肌缺血再灌注(I/R)损伤中的保护作用及可能的作用机制。方法 12周龄C57/BL小鼠通过主动脉弓缩窄4周建立心肌肥厚模型,利用Langendorff灌流装置建立小鼠肥厚心肌I/R模型,稳定灌流10 min后分为3组,空白组(SH组,给予灌流液持续灌流150 min)、缺血再灌注组(I/R组,予30 min全心缺血随后再灌注120 min)、缺血后适应组(IPost组,予30 min全心缺血后,采取缺血10 s及再灌注10 s的3次IPost周期,再灌注120 min)。使用微球囊进行心脏血流动力学检测,采用三苯基氯化四氮唑染色的方法确定梗死心肌面积及生化法测定心肌酶、检测心肌细胞超微结构,TUNEL法检测心肌细胞的凋亡。结果与SH组I、/R组比较,IPost组小鼠心脏血流动力学指标LVSP、dp/dtmax显著改善,心肌梗死范围减小,心肌酶释放减少,调亡指数显著降低(P均<0.05)。与I/R组比较,IPost组透视电镜下心肌细胞线粒体损伤明显减轻。结论 IPost能通过减少心肌梗死范围、减少线粒体损伤、抗心肌凋亡而有效地减轻离体小鼠肥厚心肌缺血再灌注损伤。     

ERK1/2信号通路在CEPO抗心肌缺血-再灌注损伤中的作用

目的:探讨细胞外信号调节激酶1/2(extracellularsignal-regulated kinase1/2,ERK1/2)信号通路在氨甲酰化促红细胞生成素(carbamylated erythropoietin,CEPO)抗心肌缺血-再灌注(ischemia-reperfusion,I/R)损伤中的作用.方法:建立家兔心肌缺血-再灌注模型,并随机分为假手术组、缺血-再灌注组(I/R组),CEPO预处理组(I/R+CEPO组),PD98059预处理组(I/R+PD98059组),CEPO+PD98059预处理组(I/R+CEPO+PD98059组),每组8只.心电图记录并比较ST段平均抬高的毫米数(ST↑,即∑ST↑除以标测点数)、ST↑≥2.0mm的标测点占总标测点的百分比(NST↑%)和出现病理性Q波的标测点占总标测点的百分比(NQ%),TUNEL法检测心肌细胞凋亡率.结果:I/R+PD98059组ST↑,NST↑%,NQ%及心肌细胞凋亡率较I/R组均无明显差异(P>0.05);I/R+PD98059+CEPO组ST↑,NST↑%,NQ%及心肌细胞凋亡率较I/R+CEPO组均升高(P<0.05);I...     

PD98059对11,12-EET及缺血预处置大鼠心功能保护作用的影响

为观察PD980 5 9对给予 11,12 EET或缺血预处置在体大鼠再灌注心功能的影响 ,了解磷酸化ERK1/ERK2的表达在上述心脏保护中的作用 ,使用雄性Wistar大鼠 ,通过结扎 (6 0min)和松开 (30min)冠状动脉左前降支 ,复制缺血 /再灌注模型 ;采用缺血 5min ,再灌注 5min 2次造成缺血预处置 ;6 .2 4× 10 -8mol/L 11,12 EET通过静脉给予。计算机记录再灌注过程中心功能的变化 ;实验结束时取心肌采用Western Blot法测定ERK1/ERK2的表达。结果显示 :再灌注 30min ,I/R组的 +dp/dtmax(收缩期左心室内压上升的最大变化速率 )、-dp/dtmax(舒张期左心室内压下降的最大变化速率 )和LVDP(左心室发展压 )均显著低于SI +I/R组和EET +I/R组 (P <0 .0 5 ) ;SI +I/R +PD组的 +dp/dtmax、-dp/dtmax及LVDP均明显低于SI+I/R组 (P <0 .0 5 ) ,EET +I/R +PD组的 +dp/dtmax、-dp/dtmax及LVDP明显低于EET +I/R组(P <0 .0 5 )。研究表明 :6 .2 4× 10 -8mol/L 11,12 EET及缺血预处置均有保护心功能的作用 ;这种保护作用通过激活缺血 /再灌注时ERK1/ERK2的表达而实现。     

11,12-EET心脏保护过程中NOS及ERK的交互作用

目的观察胞外信号调节激酶(extracellular signal regulated kinase 1/2,ERK1/2)抑制剂对11,12-环氧二十碳三烯酸(11,12-epoxyeicosatrienoic acid,11,12-EET)引起的结构型一氧化氮合酶(structural nitric oxide synthase,sNOS)变化的影响,了解NOS与ERK1/2在11,12-EET心脏保护中的作用方式。方法采用冠状动脉缺血60 min再灌注30 min的方法复制大鼠心肌缺血/再灌注模型。实验分为4组:缺血再灌注组(ischemia/reperfusion,I/R);假手术组(Sham);11,12-EET缺血再灌注组(EET+I/R);11,12-EET缺血再灌注加PD098059组(EET+I/R+PD)。观察缺血60 min再灌注30 min时心脏收缩期左心室内压上升的最大变化速率(+dp/dt max)及舒张期左心室内压下降的最大变化速率(-dp/dt max);采用化学比色法观察大鼠心肌组织sNOS活性。结果 I/R组的±dp/dtmax均低于Sham组及EET+I/R组(P<0.01);EET+I/R+PD组均低于EET+I/R组的±dp/dt max(P<0.01)。I/R组心肌sNOS低于Sham组(P<0.01)及EET+I/R组(P<0.01);EET+I/R组高于EET+I/R+PD组(P<0.01)。结论 11,12-EET对心功能的保护作用可能通过上调ERK进而增加sNOS的表达来实现。     

缺血后处理对肝缺血再灌注损伤后磷脂酰肌醇-3激酶和细胞外信号调节激酶的影响和意义

目的观察缺血后处理对肝缺血再灌注后磷脂酰肌醇-3激酶(PI3K)和细胞外信号调节激酶1/2(ERK1/2)表达的影响,探讨肝缺血后处理的作用机制。方法采用大鼠70%肝缺血再灌注损伤模型,进行3次循环的再灌注1 min-阻断1 min的缺血后处理,观察假手术(S)组、LY294002+假手术(LY+S)组、PD98059+假手术(PD+S)组、缺血再灌注(IR)组、缺血后处理(IPO)组、LY294002+缺血后处理(LY+IPO)组和PD98059+IPO(PD+IPO)组的肝功能、细胞凋亡、Akt和ERK1/2磷酸化程度的变化。结果缺血后处理能明显减轻缺血再灌注造成的肝功能损害,增加Akt和ERK1/2的磷酸化程度,应用LY294002或PD98059后都可以取消IPO的作用。结论缺血后处理可能通过激活PI3K和ERK1/2减轻肝缺血再灌注损伤。     

ERK1/2在缺血后适应减轻糖尿病小鼠心肌再灌注损伤中作用

目的 研究缺血后适应对糖尿病小鼠离体心脏缺血再灌注损伤的作用及细胞外信号调节激酶(ERK1/2)在缺血后适应心肌保护中的作用。方法将C57/BL小鼠随机分为6组:(1)空白对照组(N组);(2)缺血再灌注组(I/R组);(3)缺血后适应组(Post组);(4)糖尿病小鼠空白组(DN组);(5)糖尿病小鼠缺血再灌注组(D I/R组);(6)糖尿病小鼠后适应组(D post组)。观察后适应对心脏血流动力学、梗死心肌范围的影响及与ERK1/2表达水平的关系。结果与I/R组比较,左室舒张末期压力(LVDP)、左心室压力变化最大速率和最小速率(+dp/dtmax和-dp/dtmax)恢复率明显增加(P<0.05)。而D Post组与DI/R组比较上述变化均不明显(P>0.05)。Post组心肌梗死范围较I/R组显著减小(P<0.01),D Post与DI/R组比较差异无统计学意义(P>0.05)。各组小鼠体重、心重指数无明显差异。各组体外心脏组织中ERK1/2总蛋白表达无明显差异(P>0.05)。但与I/R组比较,Post组心肌磷酸化ERK1/2水平明显增加(P<0.01)。D Post组的心肌磷酸化ERK1/2水平与DI/R组比较未见明显增加(P>0.05)。结论缺血后适应能有效地减轻离体小鼠心肌再灌注损伤,改善心功能,而在糖尿病小鼠中,这种保护作用并不明显。糖尿病小鼠缺血后适应保护作用减弱可能与其不能明显激活ERK1/2有关。     

缺血后处理对肝缺血再灌注损伤后磷脂酰肌醇-3激酶和细胞外信号调节激酶的影响和意义

摘要：目的观察缺血后处理对肝缺血再灌注后磷脂酰肌醇-3激酶（PI3K）和细胞外信号调节激酶1/2（ERK1/2）表达的影响,探讨
肝缺血后处理的作用机制。方法采用大鼠70%肝缺血再灌注损伤模型,进行3次循环的再灌注1 min-阻断1 min的缺血后处
理,观察假手术（S）组、LY294002+假手术（LY+S）组、PD98059+假手术（PD+S）组、缺血再灌注（IR）组、缺血后处理（IPO）组、
LY294002+缺血后处理（LY+IPO）组和PD98059+IPO（PD+IPO）组的肝功能、细胞凋亡、Akt和ERK1/2磷酸化程度的变化。结
果缺血后处理能明显减轻缺血再灌注造成的肝功能损害,增加Akt和ERK1/2的磷酸化程度,应用LY294002或PD98059后都
可以取消IPO的作用。结论缺血后处理可能通过激活PI3K和ERK1/2减轻肝缺血再灌注损伤。
     

钙蛋白酶活化在小鼠心肌缺血再灌注损伤中的作用

目的:探讨钙蛋白酶在小鼠心肌缺血/再灌注(Ischemia/Reperfusion,I/R)损伤中的作用。方法:采用结扎/松解左冠状动脉前降支的方法建立小鼠心肌I/R模型。将实验动物随机分为假手术组、I/R组(冠状动脉结扎45 min,再灌注3h)及PD+I/R组(I/R前30 min静脉注射钙蛋白酶抑制剂-PD150606 1 mg/kg)。再灌注结束后,测定各组心肌梗死面积、细胞色素C含量、caspase-3活性。结果:与I/R组相比,PD150606预处理组心肌梗死区域面积明显减小,且PD150606能明显抑制由I/R引起的细胞色素C含量及caspase-3活性增加。结论:钙蛋白酶活化介导的心肌细胞凋亡在小鼠心肌I/R损伤中发挥了重要的作用。     

舒芬太尼后处理通过ERK1/2介导的p70S6K信号通路对大鼠心肌缺血再灌注损伤的保护作用

目的：探讨舒芬太尼后处理通过细胞外调节蛋白激酶1/2（ERK1/2）介导的p70核糖体蛋白S6激酶（p70S6K）信号传导通路对大鼠心肌缺血再灌注损伤（MIRI）的影响,阐明舒芬太尼后处理对大鼠MIRI的保护作用。方法：72只SD雄性大鼠随机分为假手术组、缺血再灌注（I/R）组、二甲基亚砜（DMSO）组、PD组（缺血末到再灌注开始后15min给予20 μmol·L^-1ERK的抑制剂PD98059）、舒芬太尼后处理组（Sufen组）和Sufen+PD组。除假手术组外,其余各组大鼠均缺血30min后再灌注2 h。于缺血前即刻（T0）和再灌注30min（T1）、60min（T2）、90 min（T3）、2h（T4）时记录心率（HR）、平均动脉压（MAP）,再灌注末测定大鼠心肌梗死面积,采用Western blotting法检测大鼠心肌组织中p-ERK1/2和p-p70S6K蛋白表达水平。结果：与T0时比较,T1~T4时I/R组、Sufen组、DMSO组、PD组和PD+Sufen组大鼠MAP和HR降低（P<0.05）;与假手术组比较,其余各组大鼠HR降低（P<0.05）,MAP升高（P<0.05）;与I/R组比较,T3时Sufen组大鼠HR降低（P<0.05）,MAP升高（P<0.05）。与I/R组比较,Sufen组大鼠心肌梗死面积明显减少（P<0.05）;与Sufen组比较,PD+Sufen组大鼠心肌梗死面积明显增加（P<0.05）。与假手术组比较,I/R组、Sufen组和DMSO组大鼠心肌组织中p-ERK1/2和p-p70S6K蛋白表达水平均明显升高（P<0.05）;与I/R组比较,Sufen组大鼠心肌组织中p-ERK1/2和p-p70S6K蛋白表达水平均进一步升高（P<0.05）;与Sufen组比较,PD+Sufen组大鼠心肌组织中的p-ERK1/2和p-p70S6K蛋白表达水平均明显降低（P<0.05）。结论：舒芬太尼后处理通过ERK1/2介导的p70S6K信号通路对大鼠MIRI起保护作用,可改善MIRI大鼠的心功能指标,减少心肌梗死面积。     

二氧化硫对大鼠离体灌注心脏心功能的影响

目的 观察二氧化硫(SO2)对大鼠离体心脏心功能的影响及可能的机制.方法 应用Langendorff大鼠离体心脏灌流模型,以不同浓度SO2供体(Na2SO3/NaHSO3)(1、10、100、1000μmoL/L)或0.5 μmol/L天冬氨酸异羟肟酸(HDX)灌流心脏5 min,并以生理浓度SO2供体(NA2SO3/NaHSO,)(10 μmol/L)持续灌流20 min,测量心率、左心室内压差(左心室收缩末压-舒张末压)、左心室内压变化速率(±dp/dtmax)以及冠脉流量;应用钙离子通道阻断剂尼卡地平预灌流后再给予生理剂量SO2供体(Na2SO3/NaHSO3)灌注,观察尼卡地平是否可以阻断SO2的心脏效应.结果 SO2呈浓度依赖性地抑制左心室±dp/dtmax、左心室内压差、心率以及冠脉流量(均P＜0.01);生理剂量SO2供体(Na2SO3/NaHSO3)持续灌流20 min,灌流20 min时,左心室内压差,+dp/dtmax、-dp/dtmax及心率分别为:(15±3)mm Hg(1 mm Hg=0.133 kPa),(485 ±74)mm Hg/s,(339 ±64)mm Hg/s,(114 ±26)次/min;均明显低于灌流5 min时的左心室内压差[(23±7)mm Hg]、+dp/dtmax[(595±93)mm Hg/s]、-dp/dtmax[(436±83)mm Hg/s]及心率[(159±31)次/min],均P＜0.05;0.5 μmol/L HDX灌注后左心室内压差降低,左心室±dp/dtmax减少、冠脉流量减少(P＜0.05或P＜0.01);尼卡地平可阻断生理剂量SO2对心功能的抑制效应.结论 外源性SO2对大鼠离体心脏的心功能具有负性肌力作用,其作用机理与电压门控钙通道有关.     

反向钠钙交换体在大鼠心脏钙预处理中的作用

目的探讨钙预处理时反向钠钙交换体对抗钙矛盾损伤的作用及机制。方法25只SD大鼠随机等分为5组：正常对照（Control）组、钙矛盾（Ca PD）组、钙预处理（CPC）组、反向钠钙交换体抑制剂（KB-R7943）＋CPC组和KB-R7943＋Ca PD组。采用离体大鼠心脏Langendorff逆行灌注模型,观察各组心脏冠状动脉流量（CF）、左心室发展压（LVDP）、左心室内压变化速率（dp/dt）及冠状动脉循环流出液心肌肌钙蛋白I（cTnI）浓度的变化,HE染色观察各组心脏组织形态。结果与Ca PD组相比,CPC组CF、LVDP、dp/dt均显著提高（P〈0.001）,冠状动脉循环流出液中cTnI水平显著降低（P〈0.001）。而钙预处理过程中加入反向钠钙交换体抑制剂KB-R7943,其心肌保护作用均被明显减弱（P〈0.05）。结论钙预处理能够有效对抗钙矛盾对心肌造成的损伤,其机制涉及钙预处理时钠钙交换体反向交换活性的上调。     

Salvianolate Reduces Murine Myocardial Ischemia and Reperfusion Injury via ERK1/2 Signaling Pathways in vivo

Objective

To analyze the effects of salvianolate on myocardial infarction in a murine in vivo model of ischemia and reperfusion (I/R) injury.

Methods

Myocardial I/R injury model was constructed in mice by 30 min of coronary occlusion followed by 24 h of reperfusion and pretreated with salvianolate 30 min before I/R (SAL group). The SAL group was compared with SHAM (no I/R and no salvianolate), I/R (no salvianolate), and ischemia preconditioning (IPC) groups. Furthermore, an ERK1/2 inhibitor PD98059 (1 mg/kg), and a phosphatidylinositol-3-kinase (PI3-K) inhibitor, LY294002 (7.5 mg/kg), were administered intraperitoneal injection (i.p) for 30 min prior to salvianolate, followed by I/R surgery in LY and PD groups. By using a double staining method, the ratio of the infarct size (IS) to left ventricle (LV) and of risk region (RR) to LV were compared among the groups. Correlations between IS and RR were analyzed. Western-blot was used to detect the extracellular signal-regulated kinase 1/2 (ERK1/2) and protein kinase B (AKT) phosphorylation changes.

Results

There were no significant differences between RR to LV ratio among the SHAM, I/R, IPC and SAL groups (P>0.05). The SAL and IPC groups had IS of 26.1%±1.4% and 22.3%±2.9% of RR, respectively, both of which were significantly smaller than the I/R group (38.5%±2.9% of RR, P<0.05, P<0.01, respectively). Moreover, the phosphorylation of ERK1/2 was increased in SAL group (P<0.05), while AKT had no significant change. LY294002 further reduced IS, whereas the protective role of salvianolate could be attenuated by PD98059, which increased the IS. Additionally, the IS was not linearly related to the RR (r=0.23, 0.45, 0.62, 0.17, and 0.52 in the SHAM, I/R, SAL, LY and PD groups, respectively).

Conclusion

Salvianolate could reduce myocardial I/R injury in mice in vivo, which involves an ERK1/2 pathway, but not a PI3-K signaling pathway.

     

七氟烷后处理通过调节Bcl-2家族蛋白表达减轻离体大鼠心肌细胞凋亡

目的 研究七氟烷后处理对离体大鼠心肌细胞凋亡蛋白表达的影响.方法 雄性SD大鼠30只,体重230～250 g,使用随机数字表法将实验动物随机分为3组(n=10):假手术组,缺血再灌注组(I/R组),七氟烷后处理组(SPC组).采用Langendroff离体心脏灌注模型,除假手术组外其余两组平衡灌注30 min,全心缺血40min,再灌注120 min.SPC组在再灌注即刻给予2.5%(约1.0MAC)七氟烷10 min后改用普通Krebs-Henseleit(K-H)液灌注.记录平衡灌注末,再灌注30、60、90、120min时左室收缩压(LVSP)、左室舒张末压(LVEDP)、左室发展压(LVDP)、左室内压上升最大速率(+dp/dt)、左室内压下降最大速率(-dp/dt)、心率(HR)以及冠脉流量(CF).分光光度法测量肌酸激酶(CK)和乳酸脱氢酶(LDH).再灌注末TTC染色法测定心肌梗死面积.Western印迹法测定凋亡蛋白Bcl-2、Bax表达情况.结果 SPC组LVSP、LVDP、±dp/dt和CF在再灌注30 min后各时点均高于I/R组(均P＜0.05),LVEDP均低于I/R组(均P＜0.05);HR较I/R组高,但差异无统计学意义(P＞0.05).SPC组LDH和CK释放量均低于I/R组(均P＜0.05),梗死面积低于I/R组(22.2%±2.8%比44.9%±6.6%,P＜0.05).与I/R组比较,SPC组Bcl-2表达高,Bax表达低(均P＜0.05).结论 七氟烷后处理可改善心功能,降低心肌梗死面积,通过调节凋亡蛋白表达减轻离体大鼠心肌细胞凋亡.

Abstract：

Objective To explore the effects of sevoflurane postconditioning on ischemic/reperfused myocardial apoptosis.Methods Isolated perfused rat hearts were randomly assigned into 3 groups:shamoperation ( sham), ischemia/reperfusion (I/R) and sevoflurane postconditioning (SPC).Except for the sham group, the hearts were subjected to 40 min global myocardial ischemia and 120 min reperfusion.Left ventricular systolic pressure (LVSP), left ventricular developed pressure (LVDP), left ventricular enddiastolic pressure ( LVEDP), maximum increase rate of LVDP ( + dp/dt), maximum decrease rate of LVDP ( - dp/dt), heart rate (HR) and coronary flow (CF) were measured at baseline, R (reperfusion) 30 min, R60 min, R90 ain and R120 min.Creatine kinase (CK) and lactate dehydrogenase (LDH) were measured at 5 min and 10 min post-reperfusion.Infarct size was determined by triphenyltetrazolium chloride staining at the end of reperfusion.The expressions of Bcl-2 and Bax were determined by Western blot.Results The values of LVSP, LVDP, ± dp/dt and CF were higher while that of LVEDP was lower in the SPC group than the I/R group at all time points of reperfusion ( P ＜ 0.05 ).The releases of CK and LDH and infarct size were significantly reduced in the SPC group versus the I/R group (22.2% ±2.8% vs L/R:44.9% ±6.6%, P ＜0.05).The expression of Bcl-2 increased significantly while that of Bax decreased in the SPC group verus the I/R group.Conclusion Sevoflurane postconditioning may improve myocardial functions, reduce infarct size and attenuate myocardial apoptosis.And the modulated expression of apoptotic proteins plays an important role in sevoflurane-induced myocardial protection.     

拮抗P2X7受体在保护大鼠脑缺血/再灌注损伤中的作用

目的：探讨拮抗P2X7受体(P2X7 receptor,P2X7R)在保护大鼠脑缺血/再灌注(ischemia/reperfusion,I/R)损 伤中的作用及其机制。方法：采用改良线栓法建立大鼠大脑中动脉栓塞(middle cerebral artery occlusion,MCAO)模型; 随后对其进行缺血2 h再灌注24 h处理,完成大鼠大脑局灶性脑I/R损伤模型的制备。采用Longa五分法对大鼠进行神 经行为学评分;2,3,5-氯化三苯基四氮唑(TTC)染色法检测大鼠大脑梗死体积的变化;Western印迹检测细胞外信号调 节激酶(extracellular signal-regulated kinase,ERK),磷酸化细胞外信号调节激酶(phosphorylation extracellular signal-regulated kinase,p-ERK),缝隙连接蛋白43(connexin 43,Cx43),Bax,Bcl-2及cleaved caspase-3蛋白表达的变化。结果：Longa五 分法与TTC染色法结果显示：与假手术组比较,I/R组大鼠神经行为学评分(P<0.05)和大脑梗死体积(P<0.01)均明显增 加。与I/R组大鼠相比,P2X7R拮抗剂明亮蓝(brilliant blue G,BBG)或ERK抑制剂PD98059均可明显降低大鼠神经行为 学评分(P<0.01)和大鼠大脑梗死体积(P<0.05)。在阻断P2X7R的基础上使用PD98059抑制ERK活性后,大鼠神经行为学 评分和大脑梗死体积进一步降低(P<0.05);Western印迹结果显示：BBG或PD98059均可降低p-ERK,Cx43,Bax/Bcl-2及 cleaved caspase-3蛋白表达量(P<0.05)。在阻断P2X7R的基础上使用PD98059抑制ERK活性后,p-ERK,Cx43,Bax/Bcl-2及 cleaved caspase-3等蛋白表达量进一步降低(P<0.05)。结论：拮抗P2X7R可减轻大鼠脑I/R损伤,其机制可能与抑制ERK 激活,进而降低Cx43和cleaved caspase-3蛋白表达及Bax/Bcl-2比值有关。     

ERK1/2信号转导通路在大鼠冠状动脉微栓塞致心肌炎症及心功能损伤的作用机制

目的 探讨ERK1/2信号通路对大鼠冠状动脉微栓塞(CME)致心肌炎症及心功能损伤的影响.方法 SD大鼠分为假手术组、微栓塞组和PD98059组(每组15只).采用夹闭升主动脉经左心室注射42 μm微球0.1 ml(3×10~4/ml,3000个)建立大鼠CME模型.PD98059组大鼠术前30 min静脉注射细胞外信号调节激酶(ERK1/2)抑制剂PD98059.应用Western印迹和免疫组化检测心肌组织ERK1/2磷酸化程度及分布;采用心脏超声评价心功能;HE染色观察心肌组织炎症细胞浸润情况;RT-PCR分析肿瘤坏死因子α(TNF-α)和巨噬细胞移动抑制因子(MIF)mRNA表达水平;应用电泳迁移率转变分析(EMSA)评价核转录因子(NF-κB)的活性.结果 微栓塞组比假手术组显著增加心肌组织ERK1/2蛋白磷酸化(0.92±0.10比0.61±0.04)、心肌炎症细胞数[(455±16)个比(47±7)个]、TNF-αmRNA(0.94±0.04比0.60±0.09)和MIFmRNA表达(1.30±0.44比0.63±0.25)以及NF-κB活化(541±25比311±65)(均P<0.05);左室射血分数显著下降[(73±3)%比(83±4)%,P<0.05].与微栓塞组相比,PD98059组阻断ERK1/2蛋白磷酸化(0.48±0.11比0.92±0.10,P<0.05),同时抑制了心肌炎症反应,TNF-α mRNA的表达减少(0.42±0.06比0.94±0.04,P<0.05),但MIFmRNA表达未见明显改变(1.17±0.37比1.30±0.44,P>0.05),NF-κB的活性降低(105±14比541±25,P<0.05),炎症细胞浸润减少[(401±12)个比(455±16)个,P<0.05],左室射血分数提高[(76±4)%比(73±3)%,P<0.05].结论 ERK1/2信号转导通路激活是CME致心肌炎症反应及心功能损伤的重要机制,提示抑制ERK1/2信号转导通路可能成为CME防治的潜在新靶点.     

金纳多对兔移植肺缺血再灌注损伤保护作用的实验研究

目的探讨金纳多对肺移植术供体肺缺血再灌注损伤的保护作用及机制。方法建立模拟的兔肺自体原位移植模型。分为单纯缺血再灌注(I/R)组(n=6),改良LPD液灌注(LPD)组(n=6)和金纳多治疗(LPD+E)组(n=6)。监测氧分压(PaO2)、血清肿瘤坏死因子(TNF-α)的变化,左肺作肺组织干/湿重比值(D/W)、丙二醛(MDA)含量、髓过氧化物酶(MPO)活力的测定,并在光镜下观察肺组织病理变化。结果(1)3组再灌注后15、60和90min的PaO2均有明显的下降,但LPD+E组明显好于I/R组(各时点分别为212.2mmHg±53.9mmHgvs122.5mmHg±20.7mmHg,240.5mmHg±52.5mmHgvs64.5mmHg±5.6mmHg,236.5mmHg±51.1mmHgvs100.0mmHg±8.6mmHg,P<0.01),LPD组与LPD+E组相比差异无统计学意义。(2)I/R组和LPD组再灌注后各时点及LPD+E组再灌注后60min、90min后TNF-α水平高于缺血前,但LPD+E组明显低于其余两组(分别为53.0ng/L±6.2ng/Lvs98.5ng/L±2.8ng/L、86.9ng/L±3.5ng/L,56.5ng/L±6.3ng/Lvs103.7ng/L±4.4ng/L、90.2ng/L±2.4ng/L,P<0.05)。(3)I/R组、LPD组和LPD+E组肺组织MDA含量分别为12.4nmol/mg±1.1nmol/mg、9.9nmol/mg±0.9nmol/mg、6.6nmol/mg±0.7nmol/mg,MPO活力分别为14.85U/g±1.40U/g、12.81U/g±1.04U/g、10.38U/g±1.07U/g,各组间比较P<0.01。(4)肺组织D/W比值:I/R组、LPD组和LPD+E组分别为0.1309±0.0122、0.1550±0.0096、0.1775±0.0073,各组间比较P<0.01。(5)病理学改变:I/R组肺组织损伤严重,肺泡间隔大量炎症细胞浸润,肺泡腔内炎症细胞聚集、炎性液体渗出,可见片状出血,LPD+E组病理改变最为轻微,炎症细胞浸润、炎性渗液不显著。结论金纳多对兔移植肺缺血再灌注损伤具有明显的保护作用,其作用机制可能通过与抗氧化、抑制中性粒细胞聚集和炎症因子TNF-α的释放有关。     

外源性硫化氢后处理对离体大鼠心肌细胞凋亡及Bcl-2、Bax蛋白表达的影响

目的探讨硫化氢（H2S）后处理对离体大鼠心肌缺血/再灌注（ischemia-reperfusion,I/R）损伤后心肌细胞凋亡的影响及与Bcl-2、Bax蛋白表达的关系。方法 42只雄性SD大鼠随即分为3组（n=14）：sham组、I/R组、H2S后处理组（N组）。采用离体心脏Langendorff灌注模型,平衡灌注20 min后停灌40 min复灌60 min。记录平衡末及灌注结束时的左室舒张压（LVEDP）、左室发展压（LVDP）、左室内压上升最大速率（＋dp/dt）、左室内压下降最大速率（-dp/dt）、心率（HR）、冠状动脉血流量（CF）;灌注结束时,TTC法染色计算心肌梗死面积百分比,TUNEL法检测心肌细胞凋亡计算凋亡指数（AI）,Western blot半定量Bcl-2、Bax蛋白表达水平。结果平衡灌注末各组间心功能指标（基础值）差异无统计学意义（P〉0.05）。灌注结束时,与I/R组比较,N组可改善再灌注损伤心功能的各项指标（P〈0.05）,使心肌梗死面积缩小和AI降低（P〈0.05）,Bcl-2蛋白表达水平升高,Bax蛋白表达水平降低（P〈0.05）。结论外源性H2S后处理通过调控Bcl-2与Bax表达减轻离体大鼠心肌缺血/再灌注时心肌细胞凋亡的发生。