苯环喹溴铵药理毒理的研究进展

变应性鼻炎和慢性阻塞性肺病是当前两种发病率高、发病人群广泛、病程缠绵且危害显著的呼吸系统疾病。作为有针对性的新一代治疗药物,苯环喹溴铵是我国自主研发的具有自主知识产权的国家一类新药,具有广阔的应用前景。     

苯环喹溴铵对豚鼠鼻超敏反应的影响

目的:观察苯环喹溴铵对豚鼠超敏性鼻炎的治疗效果。方法:(1)以10%的2,4-二异氰酸甲苯酯(TDI)橄榄油溶液行豚鼠双侧鼻腔给药,建立豚鼠超敏性鼻炎的模型;另设溶媒对照组,以橄榄油溶液代替10%TDI橄榄油溶液行豚鼠双侧鼻腔给药。(2)将模型成功的豚鼠随机分模型对照组,苯环喹溴铵大、中、小剂量组和硫酸阿托品组;与溶媒对照组一起合计共6组。治疗2周后,观察各组豚鼠的症状、鼻分泌物、鼻黏膜组胺含量以及光镜下鼻黏膜组织形态学的变化。结果:模型组出现鼻痒、喷嚏、清涕、鼻黏膜组胺含量增高、嗜酸性粒细胞增多等变化。苯环喹溴铵治疗组上述变化明显减轻。结论:经鼻给予苯环喹溴铵,对于豚鼠鼻超敏性鼻炎有明显的治疗作用。     

苯环喹溴铵染毒的大鼠一般生殖毒性试验

目的通过在大鼠生殖细胞成熟周期给予不同剂量的苯环喹溴铵(BCQDB),观察BCQDB对大鼠生殖能力及生殖系统的影响,为评价BCQDB的安全性提供依据。方法SD大鼠240只,随机分为4组,每组60只,雌雄各半。设一个溶剂对照组和3个给药组,给药剂量分别为27、162和972μg/kg,分别相当于人临床拟用剂量的6、36和216倍。观察指标:给不同剂量BCQDB后大鼠一般状况、体重变化;对大鼠生殖功能影响的指标有交配率、受孕率、生育率、出生存活率、着床率、吸收胎率、出生体重、离乳体重、生殖系统组织学检查等。结果雄性大鼠中剂量组(B)在给药后第1周、第5周和第6周体重高于对照组(P<0.05),其他2个剂量组与对照组比较,差异无统计学意义(P>0.05)。雌性大鼠在给药期间各组体重增长差异无统计学意义。溶剂对照组、低剂量组、中剂量组、高剂量组的动物交配率分别为93.3%、90.6%、93.3%和90.9%;受孕率为92.9%、93.1%、85.7%和90.0%;生育率为86.7%、84.3%、80.0%和81.8%。镜下检查精子数目除高剂量组减少,与对照组比较差异有统计学意义(P<0.05),其他2个剂量组差异无统计学意义。精子形态畸形率各组之间差异无统计学意义。观察精子活力发现各组均以Ⅰ、Ⅱ级居多。大鼠解剖肉眼观察未发现明显的异常变化。雄性大鼠低剂量组的脾脏重量高于对照组,其他各组的脑、心、肝、脾、肺、肾、睾丸、附睾以及睾丸、附睾与脑重量比与对照组比较,差异无统计学意义(P>0.05)。病理组织学检查未发现各组有明显的组织病理学改变。雌鼠交配前2周至受孕第6天连续给药,结果各剂量组动物的全孕程体重增长与对照组比较,差异无统计学意义,也未见其他与给药相关的中毒症状。在仔鼠生长发育中,高剂量组的离乳窝重、平均体重和心重有增加趋势,与对照组比较差异有统计学意义(P<0.05);中剂量组的仔鼠也见体重有增加趋势,与对照组比较差异有统计学意义(P<0.05);其余各组均差异无统计学意义。结论在本实验条件下,BQCDB27~162μg/kg无明显生殖毒性作用,但972μg/kg对大鼠精子显示了一定的生殖毒性反应。     

苯环喹溴铵喷鼻剂的大鼠毒性作用研究

目的探讨苯环喹溴铵喷鼻剂对大鼠的急性毒性和慢性毒性作用。方法通过鼻黏膜给药,以Bliss法求出药物的半数致死量（LD50）;并以LD50的1／100,1／200,1／400作为大（3．00mg／kg）、中（1．50mg／kg）、小（0．75mg／kg）剂量,另设溶剂对照组,观察药物对大鼠的慢性毒性作用。结果大鼠鼻黏膜给药的LD50为300．38mg／kg,95％可信限为263．58～342．31mg／kg;各剂量组大鼠连续经鼻给药6个月,其一般体征、精神状态、毛发、体重、脏器系数、肾功能、肝功能、血液生化、血液学、大体解剖、组织病理学检查均未见明显毒性发生。用药期间大剂量组和中剂量组某些观察指标有些异常,但停药2周后均恢复。结论苯环喹溴铵喷鼻剂连续给药6个月,在设定剂量下,大、中剂量有一定的毒性反应出现,小剂量则无明显改变。     

苯环喹溴铵对大鼠变应性鼻炎的治疗作用

目的探讨苯环喹溴铵对大鼠变应性鼻炎的治疗作用及机制。方法以卵清白蛋白(Ova)和Al (OH)_3建立大鼠变应性鼻炎模型。将60只大鼠随机分为模型组,苯环喹溴铵大、中、小剂量组,倍氯米松组和溶媒对照组,每组10只大鼠。各组动物经鼻给予相应药物2 wk后,观察各动物的症状和鼻黏膜组织形态学的状况,对各动物单侧鼻分泌物进行称重,并检测血清和鼻黏膜中Ova特异性IgE。结果模型组大鼠症状评分、鼻分泌物重量、血清和鼻分泌物中Ova特异性IgE水平及鼻黏膜病理学评分均高于溶媒对照组(P<0.01)。与模型组相比,苯环喹溴铵各剂量组大鼠的鼻炎症状均得到明显改善(P<0.01);大、中剂量组大鼠鼻黏膜的组织形态改变明显减轻(P<0.01);大剂量组大鼠血清和鼻黏膜中的Ova特异性IgE水平以及鼻分泌物量均明显降低(P<0.01)。结论经鼻给予苯环喹溴铵,对于大鼠变应性鼻炎有明显的治疗作用,其作用机制之一可能是通过降低Ova特异性IgE来实现的。     

苯环喹溴铵的毒蕈碱样乙酰胆碱受体亚型选择性研究

目的探讨苯环喹溴铵对毒蕈碱样乙酰胆碱受体(M受体)亚型的选择性。方法以表达单一M受体亚型的CHO细胞株进行细胞与[3H]-QNB的饱和实验,并进行竞争抑制药和[3H]-QNB与M受体亚型的竞争结合实验,计算Kd值和Ki值。通过离体膀胱肌条实验评价苯环喹溴铵干预乙酰胆碱对离体膀胱肌条的收缩作用,计算pA2值。观察苯环喹溴铵对麻醉犬心率、心电图的影响及其对小鼠气管分泌功能的影响。结果苯环喹溴铵对3种细胞的抑制强度为CHOM3>CHOM1>CHOM2,对CHOM3和CHOM1的抑制能力相似,明显高于对CHOM2的抑制能力(P<0.01)。苯环喹溴铵可拮抗乙酰胆碱对离体膀胱肌条的收缩作用,使量效曲线平行右移,PA2值为7.09±s0.06。与溶媒组相比,苯环喹溴铵经鼻给药后对麻醉犬的心率和心电图无明显影响(P>0.05)。苯环喹溴铵大剂量组给药后1h、2h和中剂量组给药后2h能明显减少小鼠气管分泌物的分泌(P<0.01)。结论苯环喹溴铵是一种可选择性作用于M1和M3受体亚型的拮抗药。     

液-质联用法测定犬血浆中苯环喹溴铵的浓度

目的:建立HPLC-MS测定犬血浆中苯环喹溴铵浓度的方法。方法:色谱柱为Phenomenex C18(2)100A(Luna3μm,100mm×2.0mm),预柱为Luna C18(2)(3μm,10mm×2.0mm)柱,流动相为含1%甲酸的醋酸铵(8mmol.L-1)溶液-甲醇(47∶53),流速为0.20mL.min-1;ESI选择性正离子检测。结果:在5~3 600μg.L-1范围内,苯环喹溴铵血药浓度呈线性关系,r=0.999 4。最低检测限为3μg.L-1,日内、日间精密度RSD均小于9.3%。结论:本方法专属性强,灵敏度高,准确性好,适合狗血浆中苯环喹溴铵的药动学研究。     

大鼠和人肠道菌群对苯环喹溴铵代谢转化作用的研究

目的:研究大鼠和人肠道菌群对苯环喹溴铵(BCQB)代谢的影响。方法:采用体外肠道菌群代谢方法,将大鼠或人的粪便溶解于人工肠液中,搅拌混合后过滤,滤液加入1mg·mL-1的苯环喹溴铵溶液0.5mL,于37℃厌氧培养48h,采用高效液相色谱串联质谱法对大鼠或人肠内菌温孵液样品进行分离和定性分析,并设不加BCQB溶液的大鼠或人肠内菌温孵液为空白样品。结果:与空白样品比较,大鼠或人肠内菌温孵液样品中总离子流色谱中除BCQB峰外未见新增色谱峰,其质谱碎片信息显示只有BCQB的特征碎片离子,未检测到BCQB的代谢产物。结论:在离体条件下,BCQB不被大鼠和人的肠道菌群代谢。     

苯环喹溴铵在大鼠肝微粒体中的代谢转化研究

目的:建立检测大鼠肝微粒体中苯环喹溴铵代谢产物的方法,验证其在大鼠体内的代谢途径。方法:采用大鼠肝微粒体体外温孵法,建立液相色谱-质谱法测定并分析肝微粒体中苯环喹溴铵及其代谢物。色谱及质谱条件如下:色谱柱为TSK-gelODS-80Ts,流动相为甲醇-40mmol·L-1的乙酸铵水溶液(含0.1%甲酸)梯度洗脱;正离子模式,扫描型离子检测。结果:在体外代谢系统中,根据质谱碎片信息检测出6个代谢产物,分别是苯环喹溴铵的二羟基、单羟基和氧化产物。结论:建立的液相色谱-质谱法能够准确灵敏地测定大鼠肝微粒体中苯环喹溴铵的代谢产物,验证了在大鼠体内苯环喹溴铵的代谢部位在环戊烷基上。     

苯环喹溴铵长期经鼻给药对小鼠学习记忆能力的影响

目的观察苯环喹溴铵对小鼠学习记忆能力的影响及其形成原因。方法 50只筛选出的雄性昆明小鼠随机分为5组:溶媒组,苯环喹溴铵高、中、低剂量组(5.86、2.93、1.47mg·kg~(-1))及戊乙奎醚组(2.25mg·kg~(-1)),给药容量为5μL·10g~(-1),经鼻给药,每日1次,持续1mo。以Morris水迷宫和跳台实验测试苯环喹溴铵对其学习记忆能力的影响。另取50只昆明小鼠(雌雄各半)随机分为5组,以LC-ESIMS法测定小鼠在经鼻给予苯环喹溴铵5.86mg·k~g(-1)后10、45min及3、12、48h脑组织和血浆中苯环喹溴铵的浓度(给药后每个时间点各10只小鼠)。结果苯环喹溴铵各剂量组,对小鼠在Morris水迷宫和跳台实验中的学习记忆能力均无明显影响(P>0.05);小鼠在给药后各时间点,脑组织中苯环喹溴铵的浓度均在定量下限以下(苯环喹溴铵在脑匀浆中的定量下限为0.5405μg·L~(-1)),而给药后48h血浆中苯环喹溴铵的浓度为(4.01±0.52)μg·L~(-1)。结论苯环喹溴铵长期经鼻给药对小鼠的学习记忆能力没有影响,可能是由于其难以通过血脑屏障所致。     

LC-ESI-MS测定新的抗胆碱能化合物苯环喹溴铵在大鼠胆汁、尿液和粪便中的含量

目的：首次建立了LC-ESI-MS法测定大鼠胆汁、尿液和粪便中苯环喹溴铵的浓度,对该药在大鼠体内的排泄规律进行研究,为该药在大鼠体内的代谢转化途径的研究和临床试验提供依据。方法：生物样品经过C18固相小柱提取后,采用LC-ESI-MS法进行测定。以1-乙基-苯环喹溴铵为内标,在Hanbon Lichrospher5-C18色谱柱上,甲醇-（含40mmol/L醋酸铵和1%甲酸）水溶液（70：30,v/v）为流动相,流速为0.8mL/min分析胆汁样品;甲醇-（含40mmol/L醋酸铵和1%甲酸）水溶液（75：25,v/v）为流动相,流速为1.0mL/min分析尿液、粪便样品;以气动辅助电喷雾离子化（ESI）为接口技术,选择性正离子监测方式,苯环喹溴铵的分子离子（[M]^＋m/z330.2）和内标1-乙基-苯环喹溴铵的分子离子（[M]＋m/z344.2）作为测定离子。结果：胆汁、尿样、粪便中苯环喹溴铵的回收率均大于77%,日间和日内的变异系数均小于15%。胆汁中苯环喹溴铵在30.15～1507.50ng/mL浓度范围内线性关系良好（r=0.9995）,最低定量限为30.15ng/mL。尿液中苯环喹溴铵在3.02～1507.50ng/mL浓度范围内线性关系良好（r=0.9997）,最低定量限为3.02ng/mL。粪便中苯环喹溴铵在3.02～1507.50ng/mL浓度范围内线性关系良好（r=0.9995）,最低定量限为3.02ng/mL。结论：该方法专属性强,准确可靠,灵敏度高,可满足大鼠鼻腔给药排泄研究中药物浓度测定的要求。     

通脉愈伤胶囊抗炎镇痛作用的实验研究

目的研究通脉愈伤胶囊的镇痛、抗炎作用。方法采用二甲苯造成小鼠急性炎症模型,角叉菜胶、皮下包埋棉球法分别造成大鼠急、慢性炎症模型。采用热板法、腹腔注射醋酸法造成疼痛模型;将实验动物分为5组：空白对照组,阳性对照云南白药胶囊组,高、中、低剂量通脉愈伤胶囊组。以考察通脉愈伤胶囊的抗炎、镇痛效果。结果通脉愈伤胶囊能显著降低小鼠毛细血管通透性,减少炎性介质的渗出;明显抑制由二甲苯引起的小鼠耳廓肿胀及角叉菜胶所致的大鼠炎症反应,降低白细胞数目;对大鼠肉芽组织增生也有显著的抑制作用。通脉愈伤胶囊能提高小鼠痛阈,延长镇痛潜伏期,降低扭体次数,镇痛率分别为49.6%、43.5%、33.3%。结论通脉愈伤胶囊具有良好的抗炎、镇痛作用。     

Subchronic toxicity and toxicokinetics of long-term intranasal administration of bencycloquidium bromide: a 91-day study in dogs

The subchronic toxicity and toxicokinetics of Bencycloquidium bromide (BCQB) were evaluated after 91-day intranasal administration in dogs at daily dose levels of 2.5, 5.0, and 10.0 mg/kg. Following repeated exposure to medium- or high-dose of BCQB, apparent changes were observed in the levels of blood glucose, creatinine or blood urea nitrogen in both male and female dogs. The no-observed-adverse-effect level (NOAEL) of BCQB was considered to be 2.5 mg/kg/day under the present study conditions. There were no significant gender differences in most indexes of subchronic toxicity throughout the experimental period with the exception of food consumption and body weight, or in the parameters of plasma toxicokinetics after either single-dose or repeated administrations of BCQB at each dosage. In dog, BCQB did not accumulate in blood plasma, while much higher concentrations of BCQB residues were found in most tissues examined (especially the kidney) following 91-day repeated exposure relative to a single dose. In all tissues except the reproductive organs, BCQB concentrations reverted to low levels by 2 weeks post-dosing. The results indicate that blood glucose levels and renal function should be closely monitored when BCQB is used in long-term therapy.     

白族药紫地榆体内镇痛抗炎作用初步研究

目的：初步观察紫地榆的体内镇痛、抗炎作用。方法：采用醋酸扭体法观察紫地榆镇痛作用,采用二甲苯致小鼠耳肿胀法,醋酸致小鼠腹腔毛细血管通透性增加,小鼠棉球肉芽肿法观察紫地榆的抗炎作用。结果：抗炎实验中,与对照组比较,紫地榆高、中、低剂量组均可明显抑制二甲苯所致小鼠耳廓的肿胀度,抑制醋酸引起的小鼠毛细血管通透性增加;与模型组比较,紫地榆能减轻小鼠棉球肉芽肿质量。镇痛实验中,与对照组比较,紫地榆可延缓醋酸所致小鼠扭体反应的潜伏期,减少扭体反应次数。结论：紫地榆提具有明显的体内抗炎镇痛作用。     

苯扎溴铵溶液防治皮肤创伤愈合瘢痕的临床观察

目的:观察0.1%苯扎溴铵溶液对皮肤创伤愈合瘢痕的防治疗效。方法:将974例创伤患者随机分为治疗组及对照组各487例,用0.5%的络合碘溶液消毒皮肤,治疗组用3%过氧化氢溶液、0.9%氯化钠注射液、0.1%苯扎溴铵溶液依次清创伤口,缝合后用0.1%苯扎溴铵溶液湿敷包扎伤口,每2 d一次,至伤口愈合,对照组用3%过氧化氢溶液和0.9%氯化钠注射液清创伤口,缝合后常规包扎,观察两组远期皮肤愈合瘢痕的形成。结果:皮肤创伤愈合12月后两组的温哥华瘢痕量表评分差异显著,治疗组低于对照组的评分。结论:0.1%苯扎溴铵溶液对皮肤创伤愈合后的瘢痕形成有防治疗效。