COX2抑制剂对大鼠肺泡巨噬细胞生长及炎症反应的影响及机制研究

目的探讨环氧合酶2(COX2)抑制剂塞来昔布对肺泡巨噬细胞凋亡、炎症反应及吞噬能力的影响。方法四甲基偶氮唑盐(MTT)比色法检测0. 1μmol/L、1μmol/L、5μmol/L、10μmol/L、20μmol/L塞来昔布对大鼠肺泡巨噬细胞株NR8383的细胞毒性,选择合适的塞来昔布浓度。将NR8383细胞随机分为3组,即对照组、LPS组和LPS+塞来昔布组。对照组:细胞培养板加等体积磷酸盐缓冲液(PBS); LPS处理组:细胞用终浓度为1μg/ml的脂多糖(LPS)处理; LPS+塞来昔布组:10μmol/L的塞来昔布处理细胞1 h后,加1μg/ml的LPS处理细胞24 h。流式细胞术检测细胞凋亡率; Western blotting检测NF-κBp65、IκBα、Bax和Bcl-2蛋白表达; qRT-PCR检测炎症因子TNF-αmRNA表达;激光共聚焦技术检测巨噬细胞的吞噬能力。结果 0. 1～10μmol/L塞来昔布处理对NR8383细胞无细胞毒性,20μmol/L塞来昔布处理可抑制NR8383细胞活力。LPS组与对照组比较,细胞凋亡率升高,NF-κBp65和Bax蛋白表达升高,IκBα和Bcl-2蛋白表达降低,TNF-αmRNA表达升高,细胞吞噬能力降低(P 0. 05),LPS+塞来昔布组与LPS组比较,细胞凋亡率降低,NF-κBp65和Bax蛋白表达降低,IκBα和Bcl-2蛋白表达升高,TNF-αmRNA表达降低,细胞吞噬能力升高(P 0. 05)。结论塞来昔布可通过下调NF-κB信号抑制LPS诱导的NR8383细胞凋亡及炎症反应,并维持吞噬功能,从而对肺损伤起保护作用。     

小白菊内酯通过NF-κB信号通路对LPS诱导的气道上皮细胞IL-8分泌水平影响的研究

目的探究小白菊内酯(PTL)对脂多糖(LPS)诱导的气道上皮细胞IL-8的分泌水平影响以及具体的作用机制。方法 CCK8法检测0μg/ml、5μg/ml、10μg/ml、20μg/ml、40μg/ml、80μg/ml的LPS对气道上皮细胞的毒性作用,RT-q PCR和Western blot检测不同浓度LPS对IL-8表达水平的影响。添加0μmol/L、10μmol/L、20μmol/L、40μmol/L、80μmol/L、160μmol/L PTL后,CCK8法检测细胞活性变化; RT-q PCR和Western blot检测白介素8(IL-8)表达水平的变化; Western blot检测PTL对NF-κB p65和IκBα蛋白表达水平的影响。结果 LPS呈时间和浓度依赖性抑制气道上皮细胞活性; LPS呈时间依赖性促进IL-8表达水平;添加LPS能够使IκB表达下调,NF-κB p65表达上调。添加适当浓度的PTL能够缓解LPS对细胞的毒性影响,使IL-8表达下调,具有浓度依赖性;并且促使IκB下调,NF-κB p65上调。结论小白菊内酯能够通过NF-κB信号通路抑制气道上皮细胞炎症因子IL-8的分泌水平。     

过表达锌指蛋白A20可抑制肺泡巨噬细胞炎症反应

目的:通过建立A20过表达肺泡巨噬细胞株,研究A20对肺泡巨噬细胞炎症反应的影响及调控机制。方法:构建携带A20基因的慢病毒载体,转染大鼠肺泡巨噬细胞(NR8383),筛选出稳定过表达A20基因的细胞株并行体外培养。向培养基中加入脂多糖(LPS,1μg/mL)进行干预,并于刺激后0.5、1、2、4h收集上清液及细胞。ELISA法测定上清液中细胞因子(TNF-α、IL-1β)及核因子κB(NF-κB)活性。Western印迹方法检测A20蛋白及核内p65含量。实时荧光定量PCR法测定A20mRNA含量。结果:LPS刺激后,A20过表达组(A20组)及正常对照组(VEC组)A20蛋白及mRNA含量都升高,并于1h达高峰,之后逐渐下降;且A20组较VEC组A20水平明显升高(P0.05)。与VEC组相比,A20组培养上清液中细胞因子(TNF-α、IL-1β)水平明显降低(P0.05);NF-κB DNA结合活性及核内p65含量也降低(P0.05)。结论:A20能够抑制肺泡巨噬细胞NF-κB活性及TNF-α、IL-1β分泌,进而抑制肺泡巨噬细胞炎症反应活性。     

紫檀芪对棕榈酸诱导巨噬细胞炎症因子分泌的影响

目的:研究紫檀芪(pterostilbene,PTE)对棕榈酸(palmitic acid,PA)诱导巨噬细胞炎症因子分泌的影响及可能机制。方法:采用MTT法检测PTE对巨噬细胞RAW264.7活性的影响;先用不同浓度的PTE预处理RAW264.7,后用PA处理,ELISA法检测巨噬细胞培养上清液中炎症因子IL-18、IL-1β和TNF-α水平,采用蛋白质印迹法检测巨噬细胞中NLRP3、凋亡相关斑点样蛋白(apoptosis-associated speck-like protein containing CARD,ASC)、半胱天冬酶1(caspase-1)、核转录因子-κB p65(NF-κB p65)、p-NF-κB p65的表达。结果:与对照组比较,0～200 μmol/L浓度的PTE对巨噬细胞的活力无影响。50 μmol/L和100 μmol/L的PTE可显著抑制PA诱导的巨噬细胞炎症因子IL-18、IL-1β和TNF-α水平的升高,降低PA诱导巨噬细胞中NLRP3、ASC、caspase-1蛋白表达的升高。PTE可减少PA诱导胞质中p-IKK和p-NF-κB p65表达的升高,以及IκBα表达的降低。PTE还可降低PA诱导的p-NF-κB p65的核转位。结论:PTE可抑制PA诱导巨噬细胞炎症因子表达的升高,其机制可能与其抑制炎症小体活化的通路有关。     

阿奇霉素对胃癌细胞增殖、凋亡及炎症因子表达水平的影响

目的 探讨阿奇霉素对人胃癌细胞(AGS细胞)上清液中炎症因子表达、增殖和凋亡的影响及核转录因子-κB(NF-κB)信号通路的调控作用。方法 体外培养AGS细胞,将其分为对照组(不进行干预)和不同水平(12.5、25.0、50.0、100.0μg/mL)阿奇霉素组,干预24 h,筛选阿奇霉素最适水平用于后续实验。细胞分组：对照组、阿奇霉素组(50.0μg/mL阿奇霉素)、阳性药物组(50.0μg/mL 5-氟尿嘧啶)、抑制剂组(50.0μg/mL阿奇霉素+1.0μmol/L NF-κB通路抑制剂BAY11-7082)和激活剂组(50.0μg/mL阿奇霉素+1.0μmol/L NF-κB通路激动剂Prostratin),干预24 h。采用细胞计数试剂盒-8(CCK-8)检测细胞活力;采用酶联免疫吸附试验(ELISA)测定细胞上清液中的炎症因子[白细胞介素(IL)-10及IL-1β]水平;采用5-乙炔基-2′脱氧尿嘧啶核苷(EdU)测定细胞增殖率;采用Hoechst33258染色试剂盒测定细胞凋亡率;采用蛋白免疫印迹(WB)法测定增殖细胞核抗原(PCNA)、半胱氨酸蛋白酶-3(Caspase...     

地塞米松对人外周血单核细胞核因子-κB活化和肿瘤坏死因子-α释放的影响

目的探讨地塞米松(dexamethasone,DXM)对脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)诱导的人外周血单核细胞核因子(nuclear factor kappaB,NF-κB)活化和肿瘤坏死因子(tumor necrosis factor-α,TNF-α)产生的影响。方法收集人外周血单核细胞接种于培养板后,分生理盐水对照组、LPS组、LPS DXM1μmol/L组、LPS DXM10μmol/L组。LPS诱导0、0.5、2、6、12、16h后留取细胞及细胞培养上清。采用免疫细胞化学染色法检测细胞NF-κBp65阳性表达率,酶联免疫吸附法检测细胞培养上清中TNF-α的含量。结果LPS诱导0.5h后NF-κB表达开始增加,2h达高峰。2h时TNF-α合成开始增加,6h达高峰。在2、6、12h时,LPS DXM1μmol/L组和10μmol/L组TNF-α含量均比LPS组各相应时间点低(P<0.05或0.01)。在0.5、2、6h时LPS DXM1μmol/L组NF-κB阳性表达率和在2、6h时LPS DXM10μmol/L组NF-κB阳性表达率均比LPS组低(P<0.05或0.01)。LPS DXM1μmol/L和10μmol/L组NF-κB阳性表达率和TNF-α含量在各时间点差异均无统计学意义。结论LPS在体外诱导人外周血单核细胞NF-κB的活化和TNF-α的产生;DXM通过抑制NF-κB的活化和TNF-α的释放而发挥抗炎作用,并且这种抑制效应可能不随剂量的增加而增强。     

核因子-κB对胰腺AR42J细胞肿瘤坏死因子-α表达的调控

目的 探讨脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)对胰腺腺泡AR42J细胞细胞因子表达的影响及其可能机制,进一步阐明急性胰腺炎的发病机制.方法 用不同质量浓度的LPS(0.001,0.01,0.1,1,10,100 mg/L)刺激AR42J细胞18 h,同时用10mg/L的LPS刺激AR42J细胞不同时间(2,6,12,18,24h),RT-PCR检测核因子-κB(NF-κB)P65和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)mRNA表达的变化,放射免疫法(RIA)检测培养液上清TNF-α蛋白浓度的改变.对NF-κB(P65)mRNA的表达与TNF-α mRNA的表达进行相关和回归分析.结果 RT-PCR结果表明0.001 mg/L的LPS处理AR42J细胞时即可出现TNF-α及NF-κB(P65)mRNA表达的明显上调,且呈量效关系;用10 mg/L的IPS处理后,在2 h后即可出现TNF-α及NF-κB(P65)mRNA表达的明显上调,并且呈时效关系.RIA结果表明用0.01 mg/L的LPS处理AR42J细胞后即可出现TNF-α蛋白表达的明显上调,且呈量效关系;用10mg/L的LPS处理后,在6 h后即可出现TNF-α蛋白表达的明显上调,并且呈时效关系.TNF-α mRNA的表达与P65 mRNA的表达呈正相关.结论 LPS可以以时间剂量依赖方式地刺激AR42J细胞NF-κB(P65)和TNF-α的表达,NF-κB(P65)mRNA的表达与TNF-αmRNA的表达呈正相关.针对NF-κB靶点,抑制其活性,可为包括AP的治疗提供一条新的途径.     

核因子κB抑制剂PDTC对颈椎病大鼠椎间盘炎症反应的抑制作用

目的探讨核因子κB(NF-κB)抑制剂吡咯烷二硫基甲酸盐(PDTC)对颈椎病大鼠椎间盘炎症反应的抑制作用。方法构建动静力失衡性颈椎病大鼠模型,将造模成功大鼠分为模型组,PDTC低、中、高剂量组,另外设立假手术组(仅切开颈部皮肤),每组大鼠10只,PDTC低、中、高剂量组大鼠每天分别腹腔注射50 mg/kg、100 mg/kg、200 mg/kg PDTC,假手术组及模型组腹腔注射等量生理盐水,连续28 d。酶联免疫吸附试验(ELISA)检测各组大鼠椎间盘组织中肿瘤坏死因子-α(TNF-α),白介素-1β(IL-1β)及IL-6含量,Realtime PCR检测TNF-α,IL-1β及IL-6 mRNA表达,Western blot检测各组大鼠椎间盘组织中NF-κB p65、NF-κB抑制蛋白(IκBα)表达。结果与假手术组比较,模型组中大鼠椎间盘组织中TNF-α,IL-1β及IL-6 mRNA及蛋白含量提高(P <0. 05),p-NF-κB p65、p-IκBα表达量上调(P <0. 05)。与模型组比较,PDTC低、中、高剂量组大鼠椎间盘组织中TNF-α,IL-1β及IL-6 mRNA及蛋白含量降低(P <0. 05),p-NF-κB p65、p-IκBα表达量下调(P <0. 05),并呈剂量依赖性。结论 PDTC能显著地抑制颈椎病大鼠椎间盘炎症反应,并其作用呈剂量依赖性。     

对白细胞介素-1β激活核转录因子-κB介导A549细胞分泌细胞间黏附分子-1作用的研究

目的 研究白细胞介素-1β(IL-1β)对A549细胞表达细胞间黏附分子-1(ICAM-1)的诱导作用及相关细胞内信号通路的激活和转导机制.方法 以1 μg/L终浓度的IL-1β刺激经SC-514[核转录因子-κB(NF-κB)的IKK-2复合物抑制物]预处理的A549细胞,用蛋白质免疫印迹法(Western blotting)检测IL-1β刺激5、10、30、60 min时细胞内磷酸化NF-κB抑制蛋白(pIκBα)和IκBα蛋白表达水平;激光扫描共焦显微镜(LSCM)显像检测NF-κB p65的核转移过程;按试剂盒说明测定NF-κB DNA结合活性;p65抗体染色质免疫沉淀结合聚合酶链反应(ChIP-PCR)技术检测乙酰化组蛋白H4和p65与ICAM-1基因启动子的结合;逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测4 h后的ICAM-1 mRNA表达;酶联免疫吸附法(ELISA)检测24 h后细胞表面的ICAM-1蛋白表达.结果 IL-1β刺激后细胞内pIκBα蛋白表达水平明显升高,IκBα蛋白表达水平明显下降;LSCM检测显示激活的p65蛋白从胞质向胞核转移,p65与DNA结合活性明显升高(P<0.01).ChIP-PCR扩增发现,IL-1β促使乙酰化组蛋白H4和p65与ICAM-1基因启动子区域的DNA片断结合.IL-1β刺激4 h后ICAM-1 mRNA表达明显升高,刺激24 h后A549细胞表面ICAM-1蛋白表达亦明显升高(P均<0.01).SC-514阻断了pIκBα蛋白的升高和IκBα蛋白的下降;减少了p65蛋白的核转移和DNA结合活性;降低了ICAM-1的mRNA及蛋白表达水平(P均<0.01).结论 IL-1β通过激活NF-κB 介导了A549细胞表达ICAM-1.     

黄芩素对IL-1β诱导的软骨细胞炎症反应的影响

[目的]探讨黄芩素对白介素-1β(IL-1β)诱导的软骨细胞炎症反应的影响.[方法]将软骨细胞分为正常组(加入不含任何刺激物的培养基),IL-1β组(10 ng/mL的IL-1β),黄芩素低、中、高剂量组(12.5,25,50 μmol/L 黄芩素+10 ng/mL的IL-1β).MTT法检测细胞活力,硝酸还原酶法测一氧化氮(NO)含量,酶联免疫吸附法(ELISA)检测肿瘤坏死因子-α(TNF-α),白介素-γ(IFN-γ)及IL-6含量,western blot检测核因子-κB (NF-κB p65)及p38 丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)磷酸化水平.[结果]低、中、高剂量组黄芩素能显著提高软骨细胞活力(P<0.05).与正常组比较,IL-1β组中细胞活力降低(P<0.01),TNF-α,IFN-γ,IL-6及NO含量提高(P<0.01),p-NF-κB p65及p-p38 MAPK表达量上调(P<0.01);与IL-1β组比较,黄芩素低、中、高剂量组中细胞活力提高(P<0.01),TNF-α,IFN-γ,IL-6及NO含量降低(P<0.01),p-NF-κB p65/NF-κB p65及p-p38 MAPK/p38 MAPK值下调(P<0.01);与低剂量组比较,中、高剂量组中细胞活力提高(P<0.01),TNF-α,IFN-γ,IL-6及NO含量降低(P<0.01),p-NF-κB p65/NF-κB p65及p-p38 MAPK/p38 MAPK值下调(P<0.01);与中剂量组比较,高剂量组中细胞活力提高(P<0.01),TNF-α,IFN-γ,IL-6及NO含量降低(P<0.01),p-NF-κB p65及p-p38 MAPK表达量下调(P<0.01).[结论]黄芩素能通过阻断NF-κB及p38 MAPK信号通路进而抑制IL-1β诱导的软骨细胞炎症反应,为临床OA的治疗提供理论依据.     

氟伐他汀对人THP-1细胞TLR4及下游信号转导通路的影响

目的探讨氟伐他汀对脂多糖(LPS)刺激的人急性单核细胞白血病细胞系(THP-1)Toll样受体4(TLR4)及下游信号转导通路的干预作用。方法采用不同剂量的氟伐他汀、LPS处理THP-1细胞,MTT法检测细胞增殖情况,实时荧光定量RTPCR(qRT-qPCR)检测细胞中TLR4和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)mRNA的表达,western blot检测TLR4及下游磷酸化胞外信号调节激酶(ERK)、磷酸化核因子κB(NF-κB p65)蛋白的表达水平。ELISA法测定细胞培养上清中TNF-α蛋白的含量。结果氟伐他汀(10 mg/L)降低LPS刺激的THP-1细胞TLR4(蛋白质和mRNA)的表达(t分别为7.55、7.80,P均0.05),1、5、10mg/L氟伐他汀能显著抑制LPS刺激的下游分子ERK的磷酸化(q分别为11.78、18.15、18.88,P0.05);亦能抑制LPS刺激的NF-κB p65的磷酸化(q分别为5.13、6.87、11.68,P0.05)。同时,氟伐他汀(10 mg/L)能显著干预LPS刺激的细胞TNF-α(蛋白质和mRNA)的表达(q分别为4.23、3.01,P0.05)。结论氟伐他汀可通过干预LPS刺激的TLR4表达及下游分子ERK、NF-κB p65的磷酸化,抑制THP-1细胞TNF-α的表达,可能为氟伐他汀的抗炎机制之一。     

C反应蛋白激活单核细胞核因子-κB 及辛伐他汀干预

目的观察C反应蛋白(CRP)刺激人外周血单核细胞核因子-κB(NF-κB)活化及白细胞介素-6(IL-6)表达,予辛伐他汀干预,探讨CRP/NF-κB在动脉粥样硬化(AS)致病机制中的作用和辛伐他汀的抗AS效应.方法密度梯度离心法分离人外周血单核细胞,免疫细胞化学观察CRP致单核细胞NF-κB p65活化的时间效应,ELISA法观察IL-6产生的时间-浓度效应,其峰值分别与辛伐他汀抑制剂组比较.结果CRP刺激单核细胞NF-κB活化呈时间依赖性,高峰在2 h,单核细胞表达IL-6呈时间与浓度依赖性,在24 h达高峰.辛伐他汀(1×10-8mol/L～1×10-6mol/L)呈剂量依赖性抑制NF-κB活化与IL-6表达.结论CRP激活正常人单核细胞NF-B信号途径,并诱导单核细胞产生IL-6,辛伐他汀抑制单核细胞NF-κB活性与IL-6表达,提示CRP/NF-κB信号途径在促进AS发病机制中起重要作用,辛伐他汀抑制NF-κB有可能减轻或抑制AS进展.     

骨化三醇调节VDR-NF-κB轴抑制心肌细胞肥大的研究

目的研究骨化三醇对心肌细胞肥大的抑制作用及作用机制。方法采用血管紧张素Ⅱ(1μmol/L)诱导大鼠心肌细胞株H9c2以获得心肌细胞肥大模型;采用鬼笔环肽染色观察细胞面积;采用免疫印迹法和免疫荧光法检测维生素D受体(VDR)和核转录因子-κB(NF-κB)的表达及核移位;实时荧光定量聚合酶链反应(RT-PCR)检测肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和白细胞介素-6(IL-6)的表达。结果骨化三醇(≥10nmol/L)显著抑制血管紧张素Ⅱ诱导的心肌细胞肥大;骨化三醇显著上调肥大心肌细胞模型的VDR表达及核移位,同时显著抑制肥大心肌细胞模型的NF-κB/p50亚基表达和核移位,从而下调促炎细胞因子TNF-α和IL-6表达。结论骨化三醇对心肌细胞肥大具有抑制作用,其机制与调节VDR-NF-κB轴从而抑制炎症因子表达有关。     

乳香酯对ox-LDL诱导的巨噬细胞表达单核细胞趋化因子的影响

目的探讨乳香酯对氧化型低密度脂蛋白(ox-LDL)所致的巨噬细胞单核细胞趋化因子(MCP-1)释放的影响及相关分子机制。方法以ox-LDL、ox-LDL加不同浓度的乳香酯处理人单核细胞THP-1,采用酶联免疫吸附测定细胞上清液中MCP-1的浓度,免疫印迹法检测细胞质中p65/NF-κB和IκBα的表达水平以及细胞核内p65/NF-κB的表达水平。结果乳香酯能够显著减少ox-LDL所致的巨噬细胞MCP-1的表达,且p65/NF-κB的核移位减少,IκBα的降解水平明显降低。结论乳香酯减少ox-LDL所致的巨噬细胞MCP-1的表达与其调节磷酸化IκBα的表达和NF-κB的核-浆转位有关。     

miRNA-146a-5p对癫痫大鼠海马神经元NF-κB信号转导通路的影响

目的观察miRNA-146a-5p(miR-146a-5p)对癫痫大鼠海马神经元核因子κB(NF-κB)信号转导通路的影响。方法体外培养新生SD大鼠海马神经元,随后制备癫痫海马神经元模型,随机分为三组,空白对照组(control组):转染时添加等体积opti-MEM培养基;阴性对照组(NC组):转染80 n M浓度NC至癫痫大鼠海马神经元; miR-146a-5p组:转染80 n M浓度miR-146a-5p mimics至癫痫大鼠海马神经元。转染后培养24 h,再用200 ng/ml脂多糖(LPS)诱导6 h,采用免疫荧光双染法鉴定体外培养海马神经元,采用膜片钳技术检测正常大鼠海马神经元和癫痫大鼠海马神经元自发性放电频率,采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测未经LPS诱导各组海马神经元miR-146a-5p表达水平及经LPS诱导后各组海马神经元核因子κB抑制蛋白α(IκBα)、磷酸化IκBα(p IκBα)、NF-κB P65、IKB激酶-β(IKKβ) mRNA表达水平,采用Western blot法检测经LPS诱导后各组海马神经元IκBα、p IκBα、NF-κB P65、IKKβ蛋白表达水平,采用酶联免疫吸附(ELISA)法检测经LPS诱导后各组细胞培养液中肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素1(IL-1)、白细胞介素6(IL-6)、细胞间黏附分子1(ICAM-1)表达水平。结果体外培养7 d的癫痫大鼠海马神经元与正常大鼠海马神经元相比较形态未见明显异常;癫痫大鼠海马神经元自发性放电频率明显较正常大鼠海马神经元明显增加(P 0. 05); miR-146a-5p组海马神经元miR-146a-5p表达水平明显高于control组和NC组(P 0. 05);经LPS诱导后miR-146a-5p组海马神经元p IκBα、NF-κB P65、IKKβmRNA及蛋白表达水平明显低于control组和NC组(P 0. 05),而IκBαmRNA及蛋白表达水平明显高于control组和NC组(P 0. 05);经LPS诱导后miR-146a-5p组细胞培养液中TNF-α、IL-1、IL-6、ICAM-1表达水平明显低于control组和NC组(P 0. 05)。结论miR-146a-5p可抑制LPS诱导的癫痫大鼠海马神经元NF-κB信号转导通路中p IκBα、NF-κB P65、IKKβmRNA及蛋白表达,促进IκBαmRNA及蛋白表达,减少TNF-α、IL-1、IL-6、ICAM-1等炎症因子的释放。     

轮状病毒感染合并惊厥患儿外周血核转录因子-κB及相关炎性因子表达

目的探讨轮状病毒感染合并惊厥患儿外周血核转录因子-κB(nuclear factor-kappa B,NF-κB)、外周血白细胞介素(interleukin,IL)-6、肿瘤坏死因子(tumor necrosis factor,TNF)-α和IL-1β表达情况及其临床意义。方法 104例轮状病毒感染合并惊厥患儿为观察组,32例轮状病毒感染无惊厥患儿为对照组,2组采用Western blot法检测外周血白细胞NF-κB P65蛋白表达水平,采用反转录-PCR法检测IL-6、TNF-α和IL-1βmRNA表达水平,采用ELISA法检测血清IL-6、TNF-α和IL-1β水平。结果观察组患儿外周血白细胞IL-6mRNA(8.06±1.25)、TNF-αmRNA(12.13±3.73)、IL-1βmRNA(3.97±1.35)及白细胞细胞核NF-κB P65表达水平(1.21±0.42)明显高于对照组(1.15±0.65、2.64±1.06、0.93±0.34、0.41±0.13)(P0.05),白细胞细胞质NF-κB P65蛋白表达水平(0.25±0.10)明显低于对照组(1.87±0.32)(P0.05);观察组患儿血清IL-6[(228.31±54.40)μg/L]、TNF-α[(236.14±36.78)μg/L]和IL-1β[(618.17±30.42)μg/L]水平明显高于对照组[(69.12±12.15)、(57.87±15.43)、(148.14±29.04)μg/L](P0.05)。结论轮状病毒感染合并惊厥可诱发患儿外周血白细胞胞质内NF-κB P65核转位及IL-6、TNF-α和IL-1β等炎性因子表达,对判断病情进展、指导临床治疗有一定意义。     

成年房间隔缺损患者核因子κB活化与细胞因子分泌的相关性研究

目的 探讨成年房间隔缺损(atrial sepml defect,ASD)患者外周血单个核细胞(PBMCs)核因子κB (NF-kB)表达与肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素6(IL-6)分泌的相关性.方法 30例ASD患者和30例健康对照组PBMCs NF-κB的表达由免疫组化染色检测,血清细胞因子的含量由酶联免疫吸附试验(ELISA)测定.对两组的指标进行t检验及相关分析.结果 ASD患者PBMCs NF-κB胞核染色阳性率和血清TNF-α、IL-6含量显著高于健康对照组,分别为(43.67±19.16)%vs(22.97±12.77)%,(0.79±0.11)μg/L vs(0.23±o.09)μg/L,(0.46±0.07)μg/L vs(0.03±0.02)/.μg/L,均P<0.01,且NF-kB胞桉染色阳性率和血清TNF-α、IL-6含量呈显著正相关(rs=0.783,0.589,均P<0.01).结论 成年ASD患者NF-κB表达增高,细胞因子TNF-α及IL-6分泌增多.在成年ASD,炎症基因转录激活,可能通过NF-κB表达的上调致使炎性细胞因子(TNF-α、IL-6)的增加.     

罗格列酮对冠心病患者巨噬细胞表达核因子-κB和金属蛋白酶-9的影响

目的 探讨罗格列酮(Ros)干预在调节冠心病患者外周血单核细胞源性巨噬细胞(MDMs)表达核因子-κB(NF-κB)、金属蛋白酶-9(MMP-19)中的作用及可能机制.方法 本研究为临床病例对照研究.于2007年3月至4月间,从湘雅二医院心内科行冠脉造影患者中,选取急性冠脉综合征患者48例(ACS组)、稳定型心绞痛(SA)患者20例(对照组)为研究对象,排除脑血管意外、急性感染和创伤、肝肾功能不全、肿瘤等患者.提取外周血单个核细胞,用巨噬细胞集落刺激因子刺激,转化为MDMs;随机分亚组后,分别用0μmol/L1μmol/L,10 μmol/L,20 μmol浓度Ros干预48h;RT-PCR检测各亚组MDMs表达过氧化物酶增殖体激活受体-γ([PPAR-γ)和MMP-9 mRNA,免疫组化法检测NF-κB P65表达强度.用ANOVA检验比较组间及亚组内MDMs在表达PPAR-γ,MMP-9,NF-κB P65的差异.结果 干预前,ACS组MDMs表达PPAR-γmRNA水平低于对照组,表达NF-κB P65及MMP-9mRNA水平高于对照组;Ros干预后,ACS组及对照组PPAR-γmRNA表达明显上调,ACS组PPAR-γ的表达量与Ros浓度呈正变关系;MMP-9 mRNA表达下调,在ACs组其下调程度与Ros浓度呈反变关系;两组NF-κB P65表达量均呈现非剂量依赖性降低.结论 ACS患者外周血MDMs的PPAR-γRNA表达被抑制、NF-γB活性及MMP-9 mRNA表达增强.Ros干预可通过增加PPAR-γ的表达,从而抑制NF-κB活性和MMP-9的表达.     

吡咯烷二硫代氨基甲酸盐增强TNF-α对宫颈癌HeLa细胞的毒性作用及相关机制

目的研究核因子-κB(NF-κB)抑制剂吡咯烷二硫代氨基甲酸盐(PDTC)联合TNF-α对宫颈癌HeLa细胞生长及凋亡的影响,并初步探讨其作用机制。方法应用噻唑蓝(MTT)法检测不同浓度PDTC、TNF-α及两者联合作用对HeLa细胞生长抑制率的影响;采用光镜及DAPI法观察细胞形态学变化及凋亡情况;Westernblot法检测HeLa细胞A20和caspase-3蛋白的表达。结果 PDTC(50,100μmol/L)或TNF-α(30,60,120mg/L)可明显抑制细胞的增殖;低浓度PDTC(25μmol/L)不影响细胞增殖,但与TNF-α联合应用与单用TNF-α比较,细胞增殖抑制率明显增加(P<0.01);光镜与DAPI染色结果显示,不同浓度药物组的细胞均有明显的细胞凋亡特征,且联合用药组细胞凋亡率增高(P<0.01);PDTC(25μmol/L)与TNF-α(60mg/L)联合用药与单用TNF-α(60mg/L)或PDTC(50μmol/L)比较,胞质A20蛋白表达无明显变化,但caspase-3蛋白的表达明显增加(P<0.05)。结论 PDTC可增强TNF-α对宫颈癌HeLa细胞的毒性作用,其机制可能与PDTC抑制TNF-α诱导的核转录因子NF-κB的活性,最终上调凋亡蛋白caspase-3表达有关。     

消退素D1对非压迫性腰椎间盘突出症模型大鼠背根神经节炎症的作用

目的:研究消退素D1(Resolvin D1,Rv D1)对非压迫性腰椎间盘突出症模型大鼠背根神经节(dorsal root ganglion,DRG)炎症的影响及内在机制。方法:选取30只雄性大鼠建立非压迫性腰椎间盘突出症模型。随机分为假手术组、模型组、Rv D1组(100 ng)。术后连续3天模型组和Rv D1组分别鞘内注射10μl磷酸盐缓冲液、Rv D1。于术前1天及术后连续7天检测各组大鼠术侧50%缩足阈值(50%paw withdrawal threshold,PWT)。术后第7天,酶联免疫吸附测定术侧L5 DRG中TNF-α和IL-1β的蛋白表达量,免疫组化法检测DRG中p-ERK及NF-κB/p65的阳性表达。结果:术后各时间点,模型组大鼠50%PWT较假手术组明显降低(P<0.01);TNF-α和IL-1β表达明显升高(P<0.01);p-ERK、NF-κB/p65蛋白水平明显升高(P<0.01)。术后第2~7天,Rv D1组与模型组相比,50%PWT显著升高(P<0.05);TNF-α和IL-1β的蛋白表达明显降低(P<0.01);p-ERK及NF-κB/p65蛋白水平明显降低(P<0.01)。结论:Rv D1促进背根神经节炎症的消退,可能与调节炎症介质TNF-α和IL-1β的表达及ERK和NF-κB/p65通路活性有关。