紫草素对人非小细胞肺癌A549细胞增殖与凋亡的影响

目的研究紫草素对人非小细胞肺癌A549细胞增殖与凋亡的影响。方法利用四甲基偶氮唑盐(MTT比色法研究不同剂量紫草素(0μm、5μm、10μm、20μm)对肺癌A549细胞的增殖作用;通过膜联蛋白V-异硫氰酸荧光素(Annexin V-FITC)染色法进行细胞形态学分析;采用流式细胞术进行细胞凋亡分析; Western blot方法检测细胞色素C、Bcl-2/Bax、活化的含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶9(cleaved Caspase-9)及活化的含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶3(cleaved Caspase-3)蛋白表达变化;构建人非小细胞肺癌A549细胞裸鼠皮下移植瘤模型,分析不同剂量的紫草素的抑瘤作用。结果 MTT检测发现0μm、5μm、10μm、20μm紫草素处理后的A549细胞生长受到显著抑制,且表现出明显的剂量依赖性[(96. 25±3. 18)%、(87. 62±3. 21)%、(73. 57±2. 89)%和(59. 58±1. 87)%](P 0. 05);形态学染色和流式细胞术表明紫草素能够诱导肺癌A549细胞发生剂量依赖性凋亡[(1. 25±0. 78)%、(12. 37±3. 23)%、(22. 89±2. 23)%和(37. 62±5. 23)%](P 0. 05); Westernblot结果显示紫草素能够促进细胞色素C的释放,抑制Bcl-2蛋白表达,上调Bax、cleaved-caspase-9及cleaved-caspase-3蛋白表达量(P 0. 01);荷瘤鼠模型显示随着剂量的增加,移植瘤的质量明显降低(P 0. 05),抑瘤率显著增高(P 0. 05)。结论紫草素能够呈剂量依赖性促进人非小细胞肺癌A549细胞色素C的释放,抑制抗凋亡蛋白Bcl-2的表达,上调Bax、cleaved-caspase-9及cleaved-caspase-3蛋白表达量,激活细胞线粒体凋亡途径,诱导细胞凋亡,抑制肺癌A549细胞增殖。     

山豆根提取物体外抗肿瘤实验研究

目的:研究山豆根提取物对人非小细胞肺癌A549细胞的体外抗肿瘤作用。方法 :采用MTT法检测山豆根提取物对A549细胞增殖的抑制作用;流式细胞术检测细胞周期的变化;ELISA检测Bax、Bcl-2蛋白表达的变化。结果 :山豆根提取物可明显抑制肿瘤细胞的增殖(P0.05);山豆根提取物对A549细胞处理48 h后,细胞周期阻滞在G0/G1期。与对照组相比,山豆根组Bcl-2蛋白表达显著降低,Bax蛋白表达显著升高(P0.05)。结论:山豆根提取物体外对A549细胞有抑制作用,其作用机制与诱导肿瘤细胞的凋亡和干扰细胞周期分布有关。     

灯盏花素减轻顺铂对大鼠肾损害及肾细胞凋亡机制的研究

目的探讨应用灯盏花素减轻顺铂对大鼠肾损害及肾细胞凋亡的作用机制。方法48只SD大鼠分为对照组、模型组、25mg／kg灯盏花素组（灯盏花素1组）和50mg／kg灯盏花素组（灯盏花素2组）各12只。对照组给予羧甲基纤维素钠溶液灌胃,模型组、灯盏花素1组和2组均腹腔注射顺铂8mg／kg造模。灯盏花素1组和2组分别以25mg／kg和50mg／kg灯盏花素灌胃,给药7d后计算4组肾脏指数,采用原位缺15末端标记法检测肾细胞凋亡情况,左肾采用蛋白质印迹法检测肾皮质Bax、Bcl-2表达水平,右肾采用免疫组织化学法检测肾组织凋亡蛋白Bax和Bcl-2表达水平。结果模型组、灯盏花素1组和2组肾脏指数、凋亡指数及Bax、Bcl-2表达水平高于对照组（P〈0．05）;灯盏花素2组肾脏指数、凋亡指数、Bax表达水平及Bax／Bcl-2比值低于模型组、Bcl-2表达水平高于模型组（P〈0．05）;灯盏花素1组肾脏指数和凋亡指数高于2组（P〈0．05）。结论灯盏花素可增强凋亡蛋白Bcl-2表达、降低Bax表达,影响线粒体凋亡通路,从而减轻顺铂对肾损害大鼠肾细胞的凋亡。     

核糖体蛋白RPL41对人卵巢癌A2780细胞增殖和凋亡的影响及其机制

目的研究核糖体蛋白RPL41对人卵巢癌A2780细胞增殖和凋亡的影响,并分析其潜在凋亡机制。方法不同浓度RPL41(0μM、20μM、50μM、100μM)处理A2780细胞,分为对照组和RPL41低、中、高剂量组。采用MTT法检测人卵巢癌A2780细胞活力变化;采用Hoechst染色法检测A2780细胞凋亡情况;采用流式细胞仪检测A2780细胞周期;采用蛋白印记(Western Blot)法检测A2780细胞中B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)和Bcl-2相关X蛋白(Bax)的表达;采用RNA干扰技术沉默RPL41,分为NC组和si RPL41组,Western Blot检测沉默RPL41后A2780细胞中Bcl-2和Bax的表达。结果与对照组相比,糖体蛋白RPL41可以抑制人卵巢癌A2780细胞的增殖,具有剂量依赖性(P 0. 05);RPL41剂量依赖性引起A2780细胞凋亡(P 0. 05); RPL41可以显著上调Bax的表达、下调Bcl-2的表达,呈浓度依赖性(P 0. 05);沉默RPL41表达后,A2780细胞中Bcl-2的表达较NC组显著上升,Bax的表达较NC组显著下降(P 0. 05)。结论 RPL41可呈剂量依赖性抑制卵巢癌A2780细胞的增殖,并可能通过上调Bax表达、下调Bcl-2表达,参与细胞程序化死亡机制,导致A2780细胞凋亡。     

冬凌草甲素通过TPX2诱导前列腺癌细胞凋亡与周期阻滞的研究

目的研究冬凌草甲素对前列腺癌细胞凋亡和周期的影响及机制。方法用0 mg/L、15 mg/L、30 mg/L、60 mg/L、120 mg/L冬凌草甲素处理前列腺癌LNCa P细胞,CCK-8法检测细胞增殖,q RT-PCR和Western blot检测细胞中Xklp2靶蛋白(TPX2)表达变化。前列腺癌LNCa P细胞分成对照组(NC)、Oridonin、TPX2 si RNA、TPX2 si RNA+Oridonin共4组。NC、Oridonin为转染阴性对照慢病毒载体的LNCa P细胞,TPX2 si RNA、TPX2 si RNA+Oridonin为转染TPX2 si RNA重组慢病毒载体的LNCa P细胞,Oridonin、TPX2 si RNA+Oridonin细胞用含有70 mg/L冬凌草甲素细胞培养液培养。在LNCa P细胞中转染TPX2 si RNA慢病毒载体,q RT-PCR和Western blot检测干扰效果。用冬凌草甲素处理下调TPX2的LNCa P细胞,CCK-8法检测细胞增殖变化,PI单染法检测细胞周期分布变化,膜联蛋白V-异硫氰酸荧光素(Annexin V-FITC)/碘化丙啶(PI)双染法检测细胞凋亡,Western blot检测细胞中细胞周期蛋白(cyclin B)、P21、活化的Caspase-3(C-Caspase-3)蛋白水平。结果冬凌草甲素处理后的LNCa P细胞增殖能力降低,细胞中TPX2 m RNA和蛋白表达水平降低。下调TPX2、冬凌草甲素和下调TPX2联合冬凌草甲素处理均可以降低LNCa P细胞增殖能力,提高细胞G2/M期比率,提高细胞凋亡率,促进细胞中cyclin B、P21、C-Caspase-3蛋白表达,并且下调TPX2联合冬凌草甲素对细胞增殖抑制、细胞周期阻滞、凋亡促进和cyclin B、P21、C-Caspase-3蛋白表达促进作用增强。结论冬凌草甲素可以通过下调TPX2表达诱导前列腺癌细胞凋亡并阻滞细胞周期。     

全反式维甲酸对人肺癌细胞系A549细胞增殖及APLNR基因表达的影响

目的探讨全反式维甲酸(ATRA)对人肺腺癌细胞系A549细胞增殖及APLNR(apelin receptor)基因表达的影响。方法采用四甲基偶氮唑蓝(methyl thiazolyl tetrazolium,MTT)比色法检测ATRA对体外培养的A549细胞增殖的抑制情况,光学显微镜下观察细胞形态改变,流式细胞术检测细胞周期及凋亡,western blot检测APLNR蛋白、cyclin D1及p16蛋白的表达情况。结果经ATRA作用后,A549细胞增殖受到明显抑制且抑制程度呈剂量及时间依赖性(P均0.01);其细胞形态发生明显变化,细胞周期被阻滞于G_0/G_1期且细胞凋亡率明显升高(P0.01);western blot结果显示,随着ATRA浓度的升高,APLNR蛋白及cyclin D1蛋白的表达水平降低,而p16蛋白的表达水平升高(P均0.01)。结论 ATRA可抑制A549细胞增殖并促进其凋亡,且能下调APLNR基因的表达。     

米诺环素对缺血性血管性痴呆小鼠白质损伤和少突胶质细胞丢失的影响分析

目的研究米诺环素对缺血性血管性痴呆(SIVD)小鼠白质损伤和少突胶质细胞丢失的影响。方法 60只C57BL/6小鼠随机分为假手术组、模型组、米诺环素(MNO)高剂量治疗组(H-MNO:50 mg/kg)和低剂量治疗组(LMNO:5 mg/kg),每组15只。模型组和米诺环素治疗组小鼠用手术缝合线永久性结扎右颈总动脉,假手术组只做创伤,不结扎。术后第1天米诺环素高、低剂量治疗组小鼠分别接受剂量为50 mg/kg和5 mg/kg的腹腔注射;模型组与假手术组小鼠腹腔注射等体积量的生理盐水,1次/d注射28 d。分别在治疗1 d、7 d、14 d、28 d用mNSS评分系统评估各组小鼠的神经功能;术后29 d起进行Morris水迷宫测试,记录各组小鼠逃避潜伏期、目标象限内的穿台次数和停留时间;检测结束后取小鼠的脑组织进行HE染色和免疫组化染色,分析各组小鼠脑白质区病理损伤和CX47蛋白表达阳性细胞数; TUNEL染色分析细胞凋亡情况; Western blot检测小鼠脑组织中nestin、Bcl-2、Bad和cleaved-caspase-3蛋白表达量。结果与假手术组相比,模型组mNSS评分显著增加,小鼠的神经功能和学习认知功能明显下降(P 0. 05);随着米诺环素治疗周期的延长,与模型组相比,小鼠的神经功能和学习认知功能明显得到恢复和改善,且高剂量治疗组的效果明显优于低剂量治疗组(P 0. 05)。与假手术组相比,模型组小鼠脑组织细胞水肿和坏死严重;与模型组相比,米诺环素高剂量治疗能够改善小鼠脑组织细胞水肿和坏死。与假手术组相比,模型组小鼠CX47表达的阳性细胞数、nestin蛋白和抑凋亡Bcl-2蛋白的表达量显著下降(P 0. 05),凋亡细胞比率、促凋亡蛋白Bad和cleaved-caspase-3蛋白的表达显著增高;与模型组相比,米诺环素治疗组CX47表达的阳性细胞数、nestin蛋白和抑凋亡Bcl-2蛋白的表达量显著增加,凋亡细胞比率、促凋亡蛋白Bad和cleaved-caspase-3蛋白的表达显著受到抑制,且米诺环素高剂量治疗组变化优于低剂量治疗组,差异均有统计学意义(P 0. 05)。结论高剂量的米诺环素能够通过抑制脑细胞凋亡,促进少突胶质细胞的再生改善SIVD小鼠白质损伤。     

三氧化二砷诱导A549细胞凋亡的实验研究

【目的】研究三氧化二砷诱导A549细胞凋亡的发生机制。【方法】对三氧化二砷作用A549细胞后诱导的细胞凋亡进行光镜、电镜下的形态学观察和采用流式细胞仪定量计数凋亡细胞的比例改变，并通过WesternBlotting和RT-PCR检测凋亡相关因子Caspase3蛋白和Bcl-2133．RNA的表达，从分子水平分析探讨其机制。【结果]Caspase3蛋白和Bcl-2mRNA的表达与对照组相比较有显著差异（P〈0．05）。【结论】三氧化二砷作用于A549细胞后，使Bcl-2mRNA表达水平下调，Caspase3蛋白表达水平上调，从而诱导并调控了A549的凋亡。     

JAK/STAT3通路在瘦素促进肺癌细胞增殖机制中的作用

目的:探讨瘦素在促进肺癌细胞增殖过程中的可能机制,并探讨其在肺癌发生发展中的作用.方法:MTT法检测瘦素对肺癌A549细胞的促增殖作用.流式细胞术检测不同浓度瘦素处理组肺癌A549细胞的增殖率.免疫细胞化学法检测经不同浓度瘦素处理的A549细胞中STAT3、p-STAT3及Bcl-2蛋白的表达.结果:STAT3、p-STAT3及Bcl-2蛋白在A549细胞中均有表达.瘦素处理后的A549细胞中STAT3、p-STAT3及Bcl-2的表达随着处理浓度增加而增强,且100ng/mL瘦素处理组表达增加最明显,与对照组比较差异有显著性(P＜0.05);瘦素刺激A549细胞24h后增殖效应最明显,且100.ng/mL组G2/M期细胞所占的比例较对照组和10ng/mL组显著增加(P＜0.05).结论:瘦素可能通过JAK/STAT3通路,活化STAT3介导抗凋亡基因Bcl-2的过度表达而使肺癌细胞呈持续增殖.     

Vinorelbine对肺癌细胞增殖、凋亡以及细胞周期的影响

目的探究长春瑞滨(Vinorelbine)对人肺癌A549细胞增殖、凋亡、细胞周期的影响以及可能作用机制。方法采用前瞻性研究通过不同浓度长春瑞滨(5μg/ml、10μg/ml、20μg/ml、30μg/ml、40μg/ml)作用于肺癌A549细胞。四甲基噻唑蓝(MTT)法检测细胞的增殖抑制率,膜联蛋白V-FITC(Annexin V-FITC)/碘化丙啶(PI)双染法分析细胞的凋亡率,流式细胞术检测细胞周期变化,Caspase-3活性检测试剂盒观察含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶3(Caspase-3)活性,蛋白质印迹法(Western Blot)检测细胞中B细胞淋巴瘤/白血病-2(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)蛋白的水平。结果与对照组相比,不同浓度长春瑞滨显著增加细胞的增殖抑制率(P0.05),且其抑制作用随着浓度的增加而增强;与对照组相比,长春瑞滨显著升高细胞的凋亡率(P0.05),上调细胞周期G2/M期和Casapse-3活性(P0.05),明显增加Bax/Bcl-2(P0.05)。结论长春瑞滨抑制肺癌细胞增殖,诱导其凋亡,阻碍细胞周期G2/M期,可能通过Caspase-3信号通路发挥作用。     

丙泊酚通过上调microRNA-218的表达抑制人胶质瘤细胞U251的增殖、侵袭、迁移和凋亡

目的探讨丙泊酚对人胶质瘤细胞U251的增殖、侵袭、迁移和凋亡的影响。方法采用对数生长期的人胶质瘤细胞U251,分别给予不同浓度(0. 5mM、2mM、5mM)的丙泊酚处理,分组为对照组、丙泊酚0. 5mM组、丙泊酚2m M组、丙泊酚5mM组。CCK-8检测细胞毒性;丙泊酚分别处理细胞24 h、48 h、72 h、96 h后检测各组细胞活力; Transwell实验检测细胞侵袭能力,划痕实验检测细胞迁移能力;检测凋亡相关蛋白Caspase-3 mRNA、Caspase-9 mRNA、迁移相关蛋白血管内皮生长因子(VEGF) mRNA和miRNA-218的表达情况。结果 CCK-8细胞毒性试验表明,0. 5mM丙泊酚、2mM丙泊酚以及5mM丙泊酚均不能达到对U251细胞的细胞毒性(P 0. 05),10mM丙泊酚的细胞毒性明显大于5mM丙泊酚(P 0. 05),当丙泊酚≥10mM以上时,显示出对U251细胞有明显细胞毒性(P 0. 05)。与对照组相比,丙泊酚(0. 5mM、2mM、5mM)可显著抑制U251细胞的增殖、侵袭和迁移能力(P 0. 05),细胞凋亡率明显升高(P0. 05),凋亡相关蛋白Caspase-3mRNA和Caspase-9mRNA的表达水平上升(P 0. 05);丙泊酚可显著上调U251细胞microRNA-218的表达,抑制VEGF表达(P 0. 05)。结论丙泊酚可抑制人胶质瘤细胞U251的增殖、侵袭和迁移能力,其作用机制可能与上调microRNA-218、Caspase-3mRNA和Caspase-9mRNA以及下调VEGFmRNA的表达有关。     

奥氮平对肺癌细胞A549增殖凋亡的影响及机制

目的研究奥氮平对肺癌细胞A549增殖凋亡的影响及机制。方法用0μM、50μM、100μM、150μM、200μM的奥氮平处理A549细胞,MTT测定细胞增殖情况,细胞克隆实验检测细胞克隆形成能力,计算半数抑制浓度。用半数抑制浓度的奥氮平处理A549细胞,流式细胞术测定细胞周期和细胞凋亡情况,Western blot测定细胞中细胞周期依赖性蛋白激酶4(CDK4)、剪切型Caspase-3(Cleaved Caspase-3)、细胞周期蛋白D1(Cyclin D1)、p27蛋白水平。结果50μM、100μM、150μM、200μM的奥氮平作用后的A549细胞增殖能力和克隆形成能力均明显低于0μM作用组(P0.05)。A549细胞经半数抑制浓度的奥氮平作用后,细胞G0/G1期比率升高,细胞凋亡增多,细胞中Cleaved Caspase-3、p27蛋白水平升高,CDK4、Cyclin D1蛋白水平降低,与未经奥氮平处理的细胞比较,差异具有统计学意义(P0.05)。结论奥氮平可以在体外抑制肺癌A549细胞的增殖,阻滞细胞周期,诱导细胞凋亡,作用机制与下调CDK4、Cyclin D1蛋白,促进Cleaved Caspase-3、p27蛋白表达有关。     

血小板对人肺癌细胞株A549凋亡的影响及机制初探

目的探讨血小板(PLT)对肺癌细胞株A549的影响及其可能的机制。方法通过流式细胞术检测PLT对A549细胞的凋亡作用;Westernblot检测PLT和A549细胞共培养后A549细胞中ERK1/2、JNK、p-ERK、p-JNK、MMP–2、M M P–9、 B c l–2、 B a x蛋白的表达情况。结果应用流式细胞术的检测结果发现,血小板抑制A 549细胞的凋亡并能阻止化疗药物吉西他滨诱导的A549细胞凋亡。Westernblot结果显示PLT和A549细胞共培养48h后,A549细胞中ERK1/2、JNK、p-E R K、 p-J N K、 M M P-2、 M M P-9、 B c l-2蛋白表达明显增加, B a x蛋白表达明显降低。结论血小板可增加A 549细胞中ERK1/2、JNK、p-ERK、p-JNK磷酸化,增加MMP-2、MMP-9和Bcl-2蛋白的表达;降低Bax蛋白表达,并抑制肺癌细胞株A549的凋亡。血小板可抑制A549细胞的凋亡,且与血小板的浓度呈正相关。     

125I籽源持续照射对人肺癌细胞凋亡及DNA-PK蛋白表达的影响

目的探讨125I籽源低剂量率持续照射诱导人肺癌细胞凋亡以及对DNA依赖蛋白激酶复合物(DNA-PK)表达的影响.方法选择A549和NCI-H446两种辐射敏感性不同的人肺癌细胞株,采用9粒125I籽源组成的平面照射装置进行持续照射,吸收剂量为2 Gy.应用流式细胞术检测细胞凋亡和细胞周期的变化,免疫组化方法检测DNA-PKcs蛋白表达.结果125I籽源照射2 Gy后,A549和NCI-H446细胞的凋亡率分别为(11.14±1.12)%和(25.27±5.65)%,分别是对照组的5倍和8倍左右,其中NCI-H446细胞的凋亡率较A549细胞显著升高(P＜0.05),显示NCI-H446细胞更敏感.两种细胞的细胞周期均出现明显的G2/M期阻滞(P＜0.05).A549细胞自身蛋白表达显著高于NCI-H446细胞(P＜0.05).结论125I籽源低剂量率持续照射诱导肺癌细胞凋亡的效果与DNA-PK修复基因的状态和受照射后的变化密切相关.     

虫草素调节非小细胞肺癌细胞株细胞周期、凋亡及相关抑癌基因的实验研究

目的 研究虫草素对非小细胞肺癌细胞株H358细胞周期、凋亡及相关抑癌基因的调节作用。方法 培养非小细胞肺癌细胞株H358并分组,空白对照组用不含药物的DMEM处理,虫草素组用含有50μmol/L、100μmol/L、200μmol/L虫草素的DMEM处理,处理24 h后测定细胞周期分布、细胞凋亡率、抑癌基因表达水平。结果 不同剂量虫草素处理后,H358细胞的S期比率、凋亡率及PTEN、p53、p16及Caspase-3、Caspase-8、Caspase-9的mRNA表达水平明显高于空白对照组,G2/M期比率明显低于对照组(P <0. 05),且200μmol/L虫草素处理后,H358细胞的S期比率、凋亡率及PTEN、p53、p16及Caspase-3、Caspase-8、Caspase-9的mRNA表达水平明显高于其他浓度虫草素处理的细胞,G2/M期比率明显低于其他浓度虫草素处理的细胞(P <0. 05)。结论 虫草素处理非小细胞肺癌细胞株能够使细胞周期停滞、细胞凋亡加剧,增加抑癌基因表达是虫草素发挥以上调节作用的分子途径,并呈剂量依赖性。     

5-Aza-2＇-deoxycytidine对肺癌A549细胞WWOX基因甲基化状态及其生物学行为的影响

【目的】探讨5-Aza-2＇-deoxycytidine（5-Aza-CdR）对肺癌 A549细胞 WWOX基因甲基化状态及其生物学行为的影响。【方法】将培养肺癌 A549细胞分为两组,一组加入5-Aza-CdR培养（观察组）,一组未处理（对照组）,采用甲基化特异性聚合酶连反应（MSP）检测两组 WWOX 基因甲基化状况;Western blot 法检测细胞WWOX蛋白的表达;MTT比色法检测细胞的增殖;流式细胞仪检测 A549细胞凋亡;然后将 A549细胞皮下注射到小鼠腋下,比较两组体内成瘤率及大小。【结果】对照组细胞出现完全甲基化,而观察组 A549细胞未出现甲基化;与对照组相比,观察组A549细胞WWOX蛋白表达、凋亡率明显上升,细胞增殖的A值显著降低,其差异均有统计学意义（P＜0．05）;观察组成瘤率及肿瘤的大小均低于对照组（P＜0．05）。【结论】5-Aza-CdR做为一种常用的甲基化抑制剂,抑制 WWOX基因启动子的甲基化,上调 WWOX基因的表达,抑制细胞的增殖,促进细胞的凋亡,从而抑制体内成瘤能力。     

表没食子儿茶素没食子酸酯对人非小细胞肺癌细胞增殖的作用及机制研究

目的探讨表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)对人非小细胞肺癌细胞增殖的作用及机制。方法人肺癌A549细胞随机分为三组:对照组、实验1组与实验2组,分别用含0μM、50μM、100μM浓度EGCG的DMEM培养液处理,24 h、48 h后CCK-8检测细胞增殖指数,流式细胞术检测细胞凋亡指数,48 h后流式细胞术检测细胞周期,24 h、48 h后蛋白质印迹法检测Caspase-3蛋白表达水平。结果细胞处理后24 h、48 h,实验2组与实验1组细胞增殖指数显著低于对照组(P 0. 05),实验2组也显著低于实验1组(P 0. 05)。实验2组48 h的细胞增殖指数显著高于24 h,其余两组在这两个时间点的对比无显著差异。实验2组与实验1组的细胞凋亡指数、Caspase-3蛋白相对表达水平显著高于对照组(P 0. 05),实验2组也显著高于实验1组(P 0. 05)。对照组48 h的细胞凋亡指数显著高于24 h,其余各组的细胞凋亡指数及三组的Caspase-3表达在这两个时间点的对比无显著差异。细胞处理后48 h,实验2组与实验1组的G1期细胞比率显著高于对照组(P 0. 05),G2期细胞比率显著低于对照组(P 0. 05)。结论表没食子儿茶素没食子酸酯呈剂量依赖式抑制人非小细胞肺癌细胞的增殖,促进其凋亡,调节其细胞周期,促进Caspase-3的表达,可发挥潜在的抑瘤作用。     

土贝母含药血清对人肺癌细胞增殖和凋亡的影响

目的观察土贝母含药血清对人肺癌细胞增殖、凋亡的影响,初步探讨其作用机制。方法采用灌胃SD大鼠土贝母水提物的方法制备其含药血清。应用不同浓度(0.0%、2.5%、5.0%、10.0%、20.0%、40.0%)含药血清处理人肺癌A549和H1299细胞。采用MTT、免疫荧光法观察含药血清对人肺癌细胞增殖的影响,采用流式细胞术检测含药血清对人肺癌细胞凋亡的影响,采用Western blot方法检测含药血清对肺癌细胞中凋亡相关的裂解型胱天蛋白酶(Cleaved-Caspase-3、Cleaved-Caspase-8、Cleaved-Caspase-9、Bax和Bcl-2)蛋白表达水平的影响。结果土贝母含药血清可明显抑制人肺癌A549和H1299细胞的增殖,诱导其凋亡;土贝母含药血清处理人肺癌细胞的Cleaved-Caspase-3、Cleaved-Caspase-9和Bax蛋白水平增加,Bcl-2蛋白水平降低。结论土贝母含药血清可明显抑制人肺癌A549和H1299细胞的增殖,诱导其凋亡,其机制可能与细胞线粒体途径诱导细胞凋亡有关。     

人参皂甙Re对大鼠急性缺血再灌注心肌细胞凋亡及相关基因蛋白表达的影响

背景心肌细胞缺血再灌注损伤近来已成为临床研究的热点,但人参及其提取物对急性缺血再灌注损伤后心肌细胞凋亡的作用尚未阐明.目的观察人参皂甙Re对急性缺血再灌注心肌细胞凋亡及Bcl-2,Bax,Bad和Fas基因蛋白表达的影响,探讨人参皂甙Re抑制心肌细胞凋亡的可能机制.设计随机对照实验研究.地点、对象和干预本实验在湖北省武汉市同济医院动物实验中心完成.实验共用Wistar大鼠15只,雌雄不分.按随机数字表法分为假手术组、缺血再灌注组、人参皂甙Re治疗组,每组各5只.建立Wistar鼠缺血再灌注心脏模型.应用原位末端标记法检测心肌凋亡细胞,并进行细胞计数;原位杂交和免疫组化检测Bcl-2mRNA和基因表达产物的蛋白质,通过图像分析系统测量阳性染色区域的平均吸光度值进行量化分析,以观察人参对大鼠心肌缺血再灌注心肌细胞凋亡的影响及基因表达.主要观察指标人参皂甙Re治疗与否对急性大鼠缺血再灌注心肌细胞凋亡及Bcl-2,Bax,Bad和Fas基因蛋白表达的影响.结果①假手术组未发现心肌凋亡细胞.缺血再灌注组心肌凋亡细胞数为(134±46)个/视野,人参皂甙Re治疗组为(91±19)个/视野,两组间差异有显著性意义(t=4.63,P＜0.01).②免疫组织化学检测发现缺血再灌注组及人参皂甙Re治疗组Bcl-2,Bax,Bad和Fas基因蛋白的表达较假手术组明显增加(t=2.79,P＜0.05),人参皂甙Re治疗组bcl-2的表达与缺血再灌注组比较,差异无显著性意义(t=2.67,P＞0.05),而Bax,Bad,Fas的表达明显下降(t=2.81,P＜0.05),人参皂甙Re治疗组Bcl-2/Bad,Bcl-2/Bad,Bcl-2/Fas比值均较假手术组与缺血再灌注组明显增大(t=2.84,P＜0.05).结论人参皂甙Re治疗可以抑制急性缺血再灌注诱导的心肌细胞凋亡,其作用机制可能是抑制了促凋亡基因bax,bad,fas的表达,从而使Bcl-2/Bax,Bcl-2/Bad,Bcl-2/Fas比值增大.     

冬凌草甲素抗Ph染色体阳性急性淋巴细胞白血病效应的实验研究

目的 探讨冬凌草甲素对Ph染色体阳性(Ph+)急性淋巴细胞白血病(ALL)的抗白血病效应及其机制.方法 以Ph+ALL细胞株SUP-B15为研究对象,应用改良MTT法测定冬凌草甲素对SUP-B15细胞增殖的影响,计算72 h的半数抑制浓度(IC50);光学显微镜下观察冬凌草甲素处理后SUP-B15细胞的形态学变化;用流式细胞术检测药物作用前后SUP-B15细胞的凋亡率;以K562细胞为对照,应用Western blot法比较药物作用前后SUP-B15细胞Akt/mTOR、Raf/MEK/ERK、STAT5信号转导通路活化水平,以及凋亡调节蛋白Bcl-2和Bax的变化.结果 ①冬凌草甲素呈浓度及时间依赖地抑制SUP-B15细胞增殖,作用72 h的IC50值为(7.08±1.21)μmol/L;②冬凌草甲素处理24 h后光学显微镜下SUP-B15细胞边界不清晰,部分细胞崩解;③0、5、10 μmol/L冬凌草甲素作用24 h后,SUP-B15细胞凋亡百分率分别为(6.67±0.83)%、(18.30±1.79)%、(37.63±7.12)%;④冬凌草甲素明显抑制SUP-B15细胞ABL酪氨酸激酶及其下游Akt/mTOR、Raf/MEK/ERK、STAT5多条信号转导通路的活化;下调SUP-B15细胞抗凋亡蛋白Bcl-2的表达,上调促凋亡蛋白Bax的表达.结论 冬凌草甲素通过抑制ABL酪氨酸激酶及其下游Akt/mTOR、Raf/MEK/ERK、STAT5信号转导,以及上调促凋亡蛋白Bax、下调抗凋亡蛋白Bcl-2而发挥抗Ph+ALL作用.