米诺环素后处理对大鼠缺血再灌注损伤的影响及其机制

目的探讨米诺环素后处理对大鼠心肌缺血再灌注损伤的作用及其可能机制。方法 96只雄性Wistar大鼠随机分为假手术组、缺血再灌注组、低剂量米诺环素组(3 mg/kg)和高剂量米诺环素组(10 mg/kg)。通过结扎大鼠左冠状动脉前降支45 min,再灌注2 h及24 h。再灌注2 h,检测各组心肌缺血危险区、梗死范围;血清、心肌组织TNF-α、IL-1β含量及心肌组织MPO活性;心肌凋亡指数(AI)以及心肌组织形态学改变。再灌注24 h,检测大鼠心脏血流动力学、心肌缺血危险区、梗死范围。结果与缺血再灌注组比较,低剂量、高剂量米诺环素均能降低左心室舒张末压、心肌梗死范围、AI以及血清、心肌组织TNF-α、IL-1β含量及心肌组织MPO活性,同时升高心率、左心室收缩压、±dp/dtmax(P0.05或P0.01)。结论米诺环素后处理能够显著抑制心肌缺血再灌注损伤诱导的大鼠心肌细胞凋亡,减少梗死范围,明显改善心功能,其机制与减少局部与系统的炎症反应有关。     

Alpha-突触核蛋白寡聚体致帕金森病小鼠模型的行为学变化

目的观察家族型帕金森病(PD)alpha-突触核蛋白(α-Syn)突变体A53T和A30P寡聚体导致小鼠PD模型的行为学变化,探讨α-Syn寡聚体在体内的神经毒性作用。方法制备野生型α-Syn、家族型突变体A53T和A30P的聚集体,对C57BL/6小鼠进行纹状体注射。培养至第30、60天,进行爬杆实验、悬吊实验、滚轴实验和平衡木实验评估行为学改变。免疫组织化学方法检测黑质多巴胺能神经元改变。结果实验鼠纹状体α-Syn寡聚体注射后30 d出现PD样运动障碍表现,纹状体注射30 d和60 d后,各组小鼠的爬杆实验结果均与对照组无差异(P0.05)。注射30 d后,野生型α-Syn寡聚体组小鼠平衡木实验、悬挂实验、滚轴实验与对照组无差异(P0.05);A53T和A30P组小鼠平衡木时间比对照组长(P0.05),滚轴上时间比对照组小鼠缩短(P0.05),悬挂评分比对照组明显降低(P0.01),与野生型α-Syn寡聚体组相比有统计学差异(P0.05)。注射60 d后,野生型α-Syn寡聚体组小鼠平衡木实验平均通过时间比对照组小鼠长(P0.05)、悬挂实验评分较对照组小鼠降低(P0.05);A53T和A30P组小鼠各项行为学评估与对照组小鼠差异显著(P0.01)、与野生型α-Syn寡聚体组相比有差异(P0.05)。A53T和A30P组小鼠黑质多巴胺能神经元数目下降(P0.05)。结论纹状体注射α-Syn突变体A53T和A30P寡聚体,模型小鼠出现PD样行为学改变和黑质多巴胺能神经元减少。     

米诺环素对大肠杆菌生物膜抑制作用研究

目的研究不同浓度米诺环素对大肠杆菌生物膜的影响。方法采用腹膜透析液-腹膜透析管系统建立大肠杆菌生物被膜模型,根据米诺环素浓度不同分为4组。通过银染法染色、结晶紫半定量测定、连续稀释法计算活菌计数,观察腹膜透析管表面生物膜的形成情况。结果培养6 h,1/2最低抑菌浓度(MIC)米诺环素组、1/4MIC米诺环素组的载体表面银染快速鉴定均未发现形成生物膜,1/8MIC米诺环素组及对照组均形成早期生物膜。1/2MIC米诺环素组在培养12 h、24 h三个时间段内,生物膜内的活菌计数均少于对照组(P0.05);生物膜结晶紫半定量均小于对照组(P0.05);1/4MIC米诺环素组培养12 h生物膜结晶紫半定量均小于对照组及1/8MIC组。1/8MIC米诺环素组培养6 h、12 h、24 h,生物膜结晶紫半定量均低于对照组(P0.05)。结论米诺环素在体外可以抑制大肠杆菌生物膜的形成。     

免疫相关GTP酶1通过PI3K/AKT/mTOR信号通路调控巨噬细胞自噬

目的 探讨免疫相关GTP酶1(IRGM1)调控PI3K/AKT/mTOR通路对巨噬细胞自噬活动的影响。方法 小鼠RAW264.7细胞常规传代培养,siRNA-IRGM1序列通过Lipofectamine 2000转染RAW264.7细胞制备siRNA-RAW246.7细胞;利用脂多糖(LPS, 20 ug/mL)诱导RAW246.7构建细胞自噬模型,分为四组：RAW246.7组,siRNA-RAW246.7组,RAW246.7+LPS组,siRNA-RAW246.7+LPS组;Western blot检测各组IRGM1及自噬相关分析分子(LC3-Ⅱ/Ⅰ、P62)、AKT及mTOR磷酸化水平;qRT-PCR检测各组IRGM1及P62表达水平;利用流式细胞学比较各组细胞调亡率和ELISA检测各组IL-6炎症因子表达情况。结果 Western blot结果显示：与RAW246.7组、siRNA-RAW246.7组比较,LPS诱导巨噬细胞(RAW246.7+LPS组、siRNA-RAW246.7+LPS组)自噬相关基因LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ比例蛋白表达升高(P<0.05),P62表达明显...     

p21在小鼠急性呼吸窘迫综合征后肺纤维化中的作用

目的探讨p21在脂多糖(LPS)所致小鼠急性呼吸窘迫综合征(ARDS)后肺纤维化中的作用。方法本研究为实验研究。SPF级C57BL/6J小鼠共36只, 采用完全随机设计将小鼠分为生理盐水对照组、LPS-0 h组、LPS-6 h组、LPS-24 h组、LPS-48 h组和LPS-72 h组, 每组6只。HE染色观察纤维化程度, Masson染色评估纤维性增生的分布, 免疫组织化学观察α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、Ⅰ型胶原及p21蛋白的表达, 蛋白质印迹法(Western blot)检测肺组织中α-SMA、p21蛋白的表达。用10 mg/kg LPS气管滴药作用小鼠24 h后提取肺成纤维细胞, 使用Lipofectamine 2000转染试剂转染细胞, 敲低p21表达, 分为对照组(si-control)、si-control+LPS组(si-control+LPS-24 h)、LPS组(LPS-24 h)和si-p21+LPS组(siRNA-p21+LPS-24 h)。Western blot检测肺成纤维细胞中α-SMA、p21、p-IκBα及p-p38蛋白的表达。结果 LPS-24...     

急性胰腺炎小鼠对脂多糖耐受性及其机制的研究

目的　观察急性胰腺炎(AP)小鼠对脂多糖(LPS)的耐受性并探讨其可能机制。方法　210只C57BL/6J小鼠分为生理盐水(NS)+LPS组(n=105)和AP+LPS组(n=105),两组均以不同LPS剂量分为7个亚组。AP模型制备采用间隔1 h腹腔内注射雨蛙肽(50μg/kg),共7次,于第1次雨蛙肽注射后6 h腹腔内注射LPS;NS+LPS组以NS代替雨蛙肽。每个亚组随机分出10 只观察7 d死亡率,其余5只于第1 次雨蛙肽注射后12 h处死,留取血清及肝、肺、肾、胰腺等组织,检测血清淀粉酶(AMS)、乳酸脱氢酶(LDH)水平及各脏器病理学改变。应用含12 489条小鼠全长基因的寡核苷酸芯片分别检测NS+LPS(15 mg/kg)亚组和AP+ LPS(15 mg/kg)亚组小鼠血白细胞基因表达谱并重复3次,筛选两组间的表达差异基因。结果　NS+LPS组和AP+LPS组死亡率均随LPS剂量增加逐步升高,AP+LPS组死亡率均显著低于同等LPS剂量的NS+LPS组(P<0.05)。AP+LPS组LDH水平明显低于相同LPS剂量的NS+LPS组(P<0.05),而AMS水平显著高于相同LPS剂量的NS+LPS组(P<0.05)。AP+LPS组肝、肺、肾组织损伤较相同LPS剂量的NS+LPS组明显减轻。基因芯片筛选结果显示,AP+LPS(15 mg/kg)亚组与NS +LPS(15 mg/kg)亚组相比炎症反应基因、细胞内信号传导基因、转录调节基因表达下调。结论　AP可增强小鼠对LPS耐受性,其可     

半胱胺对帕金森病小鼠模型多巴胺能神经元的影响

目的 观察半胱胺对MPTP所致C57BL小鼠帕金森病(PD)模型多巴胺能神经元的影响.方法 取78只SPF级C57BL小鼠,随机分为6组:对照组,MPTP模型组,半胱胺预防性给药组(半胱胺20、75 mg/kg+ MPTP组),半胱胺治疗组(MPTP+半胱胺20、75 mg/kg组).半胱胺预防性给药组(20、75 mg/kg),2次/d×4 d,皮下注射,再给以MPTP;半胱胺治疗性给药与MPTP同天给药;总疗程均为14 d.高效液相谱检测纹状体多巴胺(DA)的含量;免疫组化检测黑质酪氨酸羟化酶阳性细胞.结果 半胱胺(20 mg/kg)预防组有效地减少MPTP导致的黑质DA能神经元和纹状体DA含量的降低(P＜0.01).结论 半胱胺(20 mg/kg)有效地预防MPTP引起的多巴胺能神经元损害,保护作用与剂量有关.     

SDF-1a模拟物CTCE-0214对重症肺炎的治疗作用及机制

目的 探讨基质细胞衍生因子(SDF)-1a模拟物CTCE-0214(CTCE)对脂多糖(LPS)诱导的小鼠重型肺炎(SP)的治疗作用及机制。方法 将成年CD-1小鼠分为正常对照组、LPS组、LPS+CTCE组、LPS+SDF-1α组各12只。LPS组小鼠气管内滴注LPS(5 mg/kg),正常组小鼠气管内滴注生理盐水(5 mg/kg),LPS+CTCE组和LPS+SDF-1α组在小鼠滴注LPS(5 mg/kg)2 h后通过尾静脉注射CTCE或SDF-1α(10 mg/kg)。在LPS造模24 h后处死小鼠并收集肺组织和支气管肺泡灌洗液(BAL)。测定各组小鼠肺毛细血管通透性、肺含水量和BAL细胞数量,采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测BAL中白细胞介素(IL)-6、巨噬细胞炎性蛋白(MIP)-1α、MIP-2和肿瘤坏死因子(TNF)-α的表达水平,实时荧光定量(qRT)-聚合酶链反应(PCR)检测肺组织中miR-126的表达水平,Western印迹检测肺组织中蛋白激酶B(AKT)、p-AKT和Rac1的表达水平。结果 与正常对照组比较,LPS组肺毛细血管通透性、肺含水量和BAL细胞...     

UII/UT系统对急性肝衰竭小鼠肝组织自噬水平的影响

目的探讨尾加压素Ⅱ(urotensin Ⅱ,UⅡ)及其受体系统(urotensin Ⅱ receptor,UT)对急性肝衰竭(acute liver failure,ALF)小鼠肝脏自噬水平的影响.方法♂Balb/c小鼠随机分为4组(每组6只).A组:健康对照组;B组:预处理对照组;C组:模型组;D组:预处理模型组.B组和D组给予0.6 mg/kg Urantide尾静脉注射预处理.30 min后,C组和D组立即以脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)联合D-半乳糖胺(D-galactosamine,D-Gal N)腹腔注射诱导急性肝衰竭.LPS/D-Gal N攻击6 h后采集小鼠血清和肝组织样本.测量血清谷丙转氨酶(alanine transaminase,ALT)、谷草转氨酶(aspartate transaminase,AST)水平以评价肝损伤情况.采用实时荧光定量PCR(realtime PCR,RT-PCR)检测Beclin-1、Atg5(autophagy related 5)、Atg7、Sqstm1(sequestosome 1)/p62和LC3 mRNA(microtubule-associated protein 1 light chain 3)水平,采用免疫印记技术(Western blot)检测LC3及p62蛋白质含量.结果模型组和预处理模型组ALT和AST水平与健康对照组和预处理对照组相比较均明显增高(P0.01),其中预处理模型组较模型组明显降低(P0.01).RT-PCR结果显示模型组和预处理模型组小鼠肝组织中Beclin-1、Atg5、Atg7、p62和LC3 mRNA水平均较健康对照组和预处理对照组低(P0.05);而模型组和预处理模型组、健康对照组和预处理对照组各自间比较均无统计学差异(P0.05).Western blot结果也显示,模型组和预处理模型组小鼠肝组织中L C3和p62蛋白水平均较健康对照组和预处理对照组低(P0.05);而模型组和预处理模型组、健康对照组和预处理对照组各自间比较均无统计学差异(P0.05).结论 UⅡ/UT系统对LPS/D-GalN诱导ALF小鼠下调的肝组织自噬水平无明显影响.     

血浆联合复方甘草酸苷注射液对LPS/D-GalN诱发的小鼠肝损伤的影响

目的:探讨血浆联合复方甘草酸苷注射液对肝损伤小鼠模型肝损伤的影响。方法:将40只清洁型ICR雄性小鼠随机分为4组(n=10):对照组:仅用生理盐水处理;LPS/D-galN组:仅用LPS/D-GalN处理(LPS50mg/ml,D-GalN 500mg/ml);LPS/DgalN+复方甘草酸苷(CG)组:在LPS/D-GalN诱导后2,4,8h腹腔注射5mg/ml的CG注射液3次;LPS/DgalN+复方苷草酸苷和血浆(CG和Plamsa)组:在LPS/D-GalN诱导后2,4,8h尾静脉注射150μl血浆3次,并腹腔注射CG注射液3次。12h后牺牲小鼠,收集血清和肝组织样本,利用AST和ALT检测试剂盒检测血清中AST和ALT的水平,ELISA法检测肝组织中IL-6、TNF-α和NF-κB的表达变化;肝组织进行HE染色,显微镜下观察肝组织病理学变化。结果:与LPS/D-GalN组对比,LPS/D-GalN+CG组和LPS/D-GalN+CG和Plasma组能够显著降低血清中AST和ALT水平(P0.05);炎症相关因子IL-6和TNF-α,转录因子NF-κB水平也明显降低(P0.05)。结论:血浆联合复方甘草酸苷注射液通过抑制炎症相关因子IL-6和TNF-α,并降低转录因子NF-κB的表达,改善LPS/D-GalN诱发的小鼠肝损伤。     

TNF-α中和对脂多糖致急性肺损伤小鼠肺组织凋亡的影响

目的 评价TNFR-Fc通过下调炎症反应、抑制组织细胞凋亡,对脂多糖(LPS)致急性肺损伤(ALI)小鼠肺组织的保护性作用.方法小鼠随机分为LPS组、TNFR-Fc+ LPS组和对照组.气管内滴人LPS复制ALI小鼠模型,TNFR-Fc+ LPS组在滴人LPS前24 h腹膜腔注射TNFR-Fc 0.4mg/kg体质量,在滴入LPS后2h收集标本.ELISA法检测血清肿瘤坏死因子α(TNF-α)及支气管肺泡灌洗液(BALF)中TNF-α、白介素1β(IL-1β)与IL-6浓度,BCA法检测BALF中蛋白含量,qRT-PCR法检测Bax基因转录强度,末端脱氧核苷酸转移酶介导的dUTP原位切口末端标记法检测肺组织细胞凋亡率,组织病理半定量评分评价肺组织损伤程度.结果 LPS气管内滴入后,BALF中TNF-α、IL-6浓度与肺泡蛋白含量显著升高(P＜0.05),肺组织Bax基因转录强度均显著增高(P＜0.05),给予TNFR-Fc预处理显著降低血清TNF-α浓度,BALF中IL-6浓度与蛋白含量也显著下降(P＜0.05),下调Bax基因的转录强度(P＜0.05).与LPS组相比,TNFR-Fc+ LPS组小鼠肺组织细胞凋亡率、病理评分均显著降低(P＜0.05).结论 中和TNF-α能下调肺局部炎症反应强度,减少LPS致ALI小鼠肺组织细胞凋亡,降低LPS气管内滴人引起的肺组织损伤程度.     

慢性低剂量LPS刺激对大鼠脑内黑质部小胶质细胞和多巴胺神经元的影响

目的 观察大鼠脑内黑质部反复多次低剂量脂多糖(LPS)注射,导致脑内慢性炎性刺激环境,引起脑内细胞因子释放及对小胶质细胞和多巴胺神经元的影响.方法 健康雄性SD大鼠两月龄(体重200 ～250 g)30只,随机分为LPS一次注射组、PBS四次注射组和LPS四次注射组.LPS一次注射组大鼠右侧黑质部注入亚损伤剂量LPS 0.5μg,LPS四次注射组大鼠腑右侧黑质部注入0.5 μg LPS,PBS四次注射组大鼠脑右侧黑质部注入等体积PBS,后两组每月注射一次,共注射四次.在每组最后一次注射后一个月取材.免疫组化检测三组大鼠黑质部小胶质细胞和多巴胺神经元生长情况.ELISA法检测三组大鼠黑质部TNF-α、IL-1β炎症介质含量变化.结果 仅一次注入低剂量LPS后,黑质部小胶质细胞形态在1个月后处于正常静止状态,多巴胺神经元也没有减少,LPS四次注射组大脑右侧黑质部小胶质细胞形态发生显著改变,多巴胺神经元数量相对于LPS一次注射组及PBS四次注射组大量减少(P＜0.05),ELISA检测LPS四次注射组大脑右侧黑质部TNF-α、IL-1β炎症介质含量也显著增加(P＜0.05).结论 黑质部反复多次注入亚损伤剂量LPS能够导致脑内慢性炎症环境,引起小胶质细胞形态和功能改变并对多巴胺神经元产生损伤作用.     

苦豆碱通过调控miR-210对脂多糖致心肌细胞凋亡及炎性因子表达的影响

目的:探讨苦豆碱对脂多糖(LPS)致心肌细胞凋亡和炎症反应的影响。方法:将大鼠心肌H9c2细胞分为NC组(不作任何处理)、LPS组、LPS+苦豆碱低剂量组、LPS+苦豆碱中剂量组、LPS+苦豆碱高剂量组、LPS+miR-NC组、LPS+miR-210组、LPS+苦豆碱中剂量组+anti-miR-NC组、LPS+苦豆碱中剂量组+anti-miR-210组。通过细胞计数试剂盒-8(CCK-8)、流式细胞术、蛋白免疫印迹法检测细胞增殖、凋亡及其相关蛋白表达情况;酶联免疫吸附试验(ELISA)检测白细胞介素-1β(IL-1β)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平;实时荧光定量聚合酶链式反应(RT-PCR)检测miR-210表达水平。结果:不同浓度苦豆碱处理后,LPS处理的心肌细胞活性及Ki-67、Bcl-2、miR-210蛋白表达水平增加,细胞凋亡率及p21、Bax蛋白表达水平降低,IL-1β、TNF-α水平降低,差异均有统计学意义(P<0.05)。过表达miR-210后LPS处理的心肌细胞活性、Ki-67、Bcl-2表达水平增加,细胞凋亡率及p21、Bax表达水平降低,IL-1β、TN...     

自噬诱导剂pp242对肿瘤坏死因子-α所致肠屏障损伤的影响

背景:肠屏障损伤和自噬异常均在炎症性肠病的发病中起重要作用,但自噬是否参与肠屏障损伤的发生、发展目前尚无报道。目的:探讨自噬诱导剂pp242对肿瘤坏死因子-α(TNF-α)所致肠屏障损伤的影响。方法:在Transwell小室中培养Caco-2细胞制备单层肠上皮屏障模型,并将其随机分为对照组(不给予干预)、TNF-α组(10 ng/m L TNF-α)、pp242组(1μmol/L pp242)和TNF-α+pp242组(10 ng/m L TNF-α+1μmol/L pp242)。以跨上皮细胞电阻(TEER)和FITC标记葡聚糖通透性评估肠上皮屏障功能,蛋白质印迹法检测自噬相关蛋白LC3B-Ⅱ和p62的表达情况。结果:与对照组相比,TNF-α组TEER显著降低(P0.05),FITC标记葡聚糖通透性显著升高(P0.05),LC3B-Ⅱ和p62蛋白表达均显著上调(P0.05)。与TNF-α组相比,TNF-α+pp242组TEER显著升高(P0.05),LC3B-Ⅱ蛋白表达显著上调(P0.05),p62蛋白表达显著下调(P0.05)。结论:自噬诱导剂pp242通过激活自噬流缓解TNF-α所致的肠上皮屏障损伤。     

紫杉醇水蛭素支架涂层复合物对LPS诱导的HCASMC炎性活化过程中核转录因子NF-κ B p65及其下游炎症因子的调控作用

目的探讨支架涂层复合物紫杉醇水蛭素对脂多糖(LPS)诱导人冠状动脉平滑肌细胞(HCASMC)炎性活化过程中核转录因子NF-κ B p65及其下游炎症因子表达的影响。方法选用4~6代的HCASMC,将细胞分为空白对照组(正常HCASMC,未做任何处理)、LPS模型组(LPS干预)、紫杉醇水蛭素高浓度组(1μmol/L紫杉醇+0.2 mg/ml水蛭素+LPS干预)、紫杉醇水蛭素低浓度组(1μmol/L紫杉醇+0.0125 mg/ml水蛭素+LPS干预)。每组设置3个复孔。ELISA法检测细胞上清肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白介素-6(IL-6)和白介素-1β(IL-1β)的表达水平,用Q-PCR法对各组细胞NF-κ B p65、TNF-α、IL-6和IL-1βm RNA进行检测,用Western Blotting检测NF-κ B p65蛋白表达水平。结果与空白对照组比较,LPS模型组NF-κ B p65、TNF-α、IL-6和IL-1β的m RNA表达水平明显升高,差异有统计学意义(P均0.05);HCASMC经高、低浓度紫杉醇水蛭素复合物预处理,LPS刺激后,上述指标低于LPS模型组,差异有统计学意义(P均0.05)。LPS模型组NF-κ B p65蛋白表达水平明显高于空白对照组,而紫杉醇水蛭素预处理组NF-κ B p65蛋白表达水平较LPS模型组明显降低,其中高浓度处理组降低更为显著。与空白对照组比较,LPS模型组TNF-α、IL-1β和IL-6表达水平升高,差异有统计学意义(P均0.05)。与LPS模型组比较,紫杉醇水蛭素低浓度与高浓度组TNF-α、IL-1β和IL-6水平明显降低,差异有统计学意义(P均0.05)。其中高浓度紫杉醇水蛭素干预后IL-1β表达下降较低浓度更为显著,差异有统计学意义(P0.05)。结论紫杉醇水蛭素支架涂层复合物对LPS诱导的HCASMC炎性活化过程中NF-κ B p65的激活具有明显的抑制作用,有效下调核转录因子NF-κ B p65的转录活性,显著抑制下游炎症因子TNF-α、IL-6和IL-1β的表达。     

Toll样受体2与异丙肾上腺素诱导的心肌纤维化的相关性研究

目的 探讨Toll样受体2(TLR2)对异丙肾上腺素(ISO)诱导的心功能不全和心肌纤维化的影响,探讨TLR2对ISO诱导的心脏成纤维细胞中自噬的影响及TLR2介导的高迁移率族蛋白1(HMGB1)导致心脏成纤维细胞中的自噬抑制进而导致心肌纤维化的机制。方法 使用雄性C57BL/6及TLR基因敲除小鼠各16只,分成4组,每组各8只,分别为:野生型对照组[WT(Vehicle)]、基因敲除对照组[TLR2-/-(Vehicle)]、野生型给药组(WT+ISO)、基因敲除给药组(TLR2-/-+ISO)。WT+ISO组、TLR2-/-+ISO组均通过肩胛皮下注射ISO制备了小鼠的心肌纤维化模型,WT(Vehicle)、TLR2-/-(Vehicle)组相应部位注射生理盐水。查超声心动图了解小鼠心脏功能,HE染色及天狼猩红染色评估心肌细胞损伤心肌纤维化程度,通过免疫印迹实验来检测心肌自噬相关蛋白哺乳动物雷帕霉素结合位点(mTOR)、p-mTOR、轻链3(LC3)、可溶性及不可溶性p62在成纤维细胞中的表达。通过电镜来观察心脏的超微结果和自噬小体。分离小鼠的心脏成纤维细胞,并用不同浓度的HMGB1刺激心脏成纤维细胞,同时免疫印迹实验来检测α平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、I型胶原和自噬标志性蛋白p-mTOR、mTOR、LC3、可溶性及不可溶性p62的表达。HMGB1与TLR2,α-SMA与p62之间的互相作用通过免疫共沉淀和免疫荧光共定位来检测。结果 HE病理结果和电镜结果可见WT+ISO组心肌损伤最重,TLR2-/-+ISO组心肌损伤最轻。天狼星染色可见,WT+ISO组心肌疤痕区胶原积聚较多,TLR2-/-(Vehicle)组则分泌减少,两者比相存在差异(P0.01)。免疫印迹实验证实,WT+ISO组心肌组织中collagen I(I型胶原)的表达与TLR2-/-+ISO组比较明显增加(P0.05)。免疫荧光共定位实验证实,WT+ISO组HMGB1含量增加最明显(P0.01)。免疫印迹检测自噬标志性蛋白的表达:与WT+ISO组可溶性P62增加最显著(P0.01),P-mTOR和mTOR的比值在WT+ISO组增加最明显(P0.01),WT+ISO组LC3II/I的比值的减小最明显(P0.01),此外,与其他组相比,WT+ISO组不可溶性P62堆积最明显,TLR2-/-组较少,存在显著性差异(P0.01)。在电镜下观察心肌细胞中的自噬小体,发现WT+ISO组自噬小体数量明显少于其他组,而TLR2-/-+ISO组自噬小体较野生组显著增加,且差异有统计学意义(P0.01,P0.05)。结论 TLR2介导细胞外的HMGB1使成纤维细胞内自噬流发生阻塞,使选择性自噬接头蛋白p62堆积,进而使α-SMA的转运及降解受阻,从而导致心肌纤维化。因此,可以将HMGB1作为治疗的靶点。     

丙泊酚对脂多糖诱导的小胶质细胞肿瘤坏死因子-α表达的影响

目的探讨丙泊酚能否通过抑制核因子(NF)-κB活化下调脂多糖(LPS)诱导的小胶质细胞肿瘤坏死因子(TNF)-α的表达。方法将BV2细胞分为4组即对照组、丙泊酚组、丙泊酚+LPS组和LPS组。在干预0 h和24 h时使用MTT法检测BV2细胞活性。在干预24 h后使用RTPCR法和Western印迹法对BV2细胞TNF-αmRNA和蛋白的表达水平进行检测;并使用Western印迹法对细胞NF-κB p65磷酸化水平(phospho-NF-κB p65/NF-κB p65比值)进行分析。结果在给予LPS干预24 h后BV2细胞活性明显降低(P均0.05);但丙泊酚+LPS组细胞活性较LPS组增加(P均0.05),同时对照组和丙泊酚组细胞活性无统计学差异(P均0.05)。与对照组相比较,在LPS干预24 h后BV2细胞TNF-αmRNA和蛋白的表达水平以及phospho-NF-κB p65/NF-κB p65比值均明显升高(P均0.05);但LPS组较丙泊酚+LPS组TNF-α表达的升高以及phospho-NF-κB p65/NF-κB p65比值的增加更加显著(P均0.05);同时对照组和丙泊酚组TNF-α表达水平和phospho-NF-κB p65/NF-κB p65比值无统计学差异(P均0.05)。结论丙泊酚可能通过抑制NF-κB的激活下调了BV2细胞TNF-α合成和释放。     

胸腺肽α1对衰老小鼠肌肉减少症的调控机制

目的 探讨胸腺肽α1对自噬接头蛋白SQSTM1/p62和衰老小鼠肌肉减少症的调节作用。方法 将小鼠成肌细胞(C2C12)分为对照组、地塞米松组、地塞米松+胸腺肽α1组、地塞米松+胸腺肽α1+p62沉默组。采用细胞计数试剂盒-8检测各组细胞增殖活性(450 nm波长的OD值)的变化,并检测各组C2C12的肌管细胞形成情况。另外,将30只SAMP8快速衰老小鼠用随机数表法分为SAMP8组、胸腺肽α1+SAMP8组及胸腺肽α1+p62沉默+SAMP8组,每组小鼠10只。检测各组小鼠的瘦体质量(LBM)与体质量(BM)的比值[LBM/BM(%)]。采用Western blotting法检测各组C2C12和小鼠肌肉组织中p62、肌球蛋白原D(MyoD)、肌原细胞转录因子(MyoG)、肌球蛋白重链(MyHC)、肌肉RING-指蛋白1(MuRF1)和肌肉萎缩相关蛋白(MAFbx)的表达。采用GraphPad PRISM 5.01软件进行数据分析。根据数据类型,组间比较采用t检验。结果 与对照组比较,地塞米松组细胞的增殖活性和肌管细胞形成能力均显著下调(均P<0.05),p62、MyoD、Myo...     

山姜素下调微小RNA146a-5p表达减轻血管内皮细胞氧化应激损伤

目的：探讨山姜素调控微小RNA(miR)146a-5p表达对内毒素诱导的血管内皮细胞氧化应激损伤的影响。方法：采用1μg/mL的脂多糖处理人脐静脉血管内皮细胞(HUVEC)构建细胞损伤模型。将HUVEC分为对照组、LPS组、LPS+山姜素低、中、高剂量组、LPS+anti-miR阴性对照组、LPS+anti-miR-146a-5p组、LPS+山姜素+miR-NC阴性对照组、LPS+山姜素+miR-146a-5p组。采用生化法检测超氧化物歧化酶(SOD)和谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性以及丙二醛(MDA)水平。采用流式细胞术检测HUVEC的凋亡率。采用实时定量聚合酶链式反应(RT-qPCR)检测miR-146a-5p表达。结果：与Con组比较，LPS组细胞凋亡率、MDA水平、miR-146a-5p表达显著升高，SOD和GSH-Px活性显著降低。与LPS组比较，LPS+山姜素低、中、高剂量组细胞凋亡率、MDA水平、miR-146a-5p表达显著降低，而SOD和GSH-Px活性显著升高(P均<0.05)。与LPS+anti-miR-阴性对照组比较，LPS+anti-miR-14...     

甘草次酸通过抑制p38丝裂原活化蛋白激酶信号通路促进脂多糖诱导的小胶质细胞M2极化

目的 探究甘草次酸(GA)通过抑制p38丝裂原活化蛋白激酶(p38 MAPK)信号通路促进脂多糖(LPS)诱导的小胶质细胞M2极化。方法 将小鼠BV2小胶质细胞分为阴性对照(NC)组、LPS组(100μg/ml LPS)、GA组(100μg/ml LPS+10μmol/L GA)、GA+抑制剂组(100μg/ml LPS+10μmol/L GA+10μmol/ml p38 MAPK通路抑制剂)、抑制剂组(100μg/ml LPS+10μmol/ml p38 MAPK通路抑制剂)和GA+激活剂组(100μg/ml LPS+10μmol/L GA+300 ng/ml p38 MAPK通路激活剂)。用细胞计数试剂盒8法测定细胞活力,酶联免疫吸附测定炎性因子水平,倒置显微镜观察细胞形态,Western blot检测精氨酸酶1(Arg-1)、诱导型一氧化氮合酶(iNOS)及p38 MAPK通路相关蛋白表达水平。结果 与LPS组比较,GA组和抑制剂组细胞足突增多、胞体变大、细胞间隔缩小,白细胞介素(IL)1β、IL-6、iNOS、P53蛋白、磷酸化p38 MAPK(p-p38 MAPK)表达显著降...