circPRMT5在结肠癌患者中的表达及其对结肠癌细胞生物学性质的影响

目的探讨环状蛋白精氨酸甲基转移酶5(circPRMT5)在结肠癌患者中的表达及其对结肠癌细胞生物学性质的影响。方法选择2018年10月至2019年10月该院收治的93例结肠癌患者为研究对象,收集手术切除的结肠癌组织及癌旁正常组织,采用免疫印迹法(Western blot)检测结肠癌组织及癌旁正常组织中circPRMT5蛋白表达量。将人结肠癌SW480细胞分为空白对照组、阴性对照组、试验组,空白对照组不作任何处理,阴性对照组转染10μg pEGFP-N1质粒,试验组转染10μg pEGFP-N1-circPRMT5质粒,采用CCK-8法检测各组SW480细胞增殖率,采用Transwell小室侵袭试验检测各组SW480细胞侵袭能力,采用流式细胞术检测各组SW480细胞凋亡率,采用Western blot检测各组SW480细胞中circPRMT5蛋白表达量。结果结肠癌组织中circPRMT5蛋白表达量显著高于癌旁正常组织(P<0.05);试验组SW480细胞增殖率、侵袭能力、circPRMT5蛋白表达量显著高于空白对照组、阴性对照组(P<0.05);试验组SW480细胞凋亡率显著低于空白对照组、阴性对照组(P<0.05);阴性对照组SW480细胞增殖率、凋亡率、侵袭能力、circPRMT5蛋白表达量与空白对照组比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论circPRMT5在结肠癌患者中呈高表达,circPRMT5高表达能够促进结肠癌细胞增殖、侵袭,抑制结肠癌细胞凋亡。     

MAP4K4沉默表达对结肠癌细胞生物学特性的影响

目的 分析沉默丝裂原活化蛋白激酶-激酶激酶4(MAP4K4)对结肠癌细胞生物学行为的影响。方法脂质体siRNA干扰技术转染人结肠癌细胞SW620细胞株,按转染情况分为MAP4K4干扰组(转染MAP4K4-siRNA 1. 5m L)、空载体组(转染无关siRNA 1. 5 m L)、空白对照组(不予细胞转染处理)。分别采用逆转录-聚合酶链反应(RTPCR)和蛋白印迹法(WB)测定各组MAP4K4 mRNA及蛋白表达,并检测各组SW620细胞增殖、侵袭及细胞凋亡情况。结果 ①空载体组与MAP4K4干扰组MAP4K4 mRNA、蛋白浓度低于空白对照组(P 0. 05),MAP4K4干扰组MAP4K4mRNA、蛋白浓度低于空载体组(P 0. 05);②MAP4K4干扰组不同时间增殖活性均低于空载体组和空白对照组(P 0. 05);③MAP4K4干扰组穿膜细胞比率低于空载组和空白对照组(P 0. 05),空载体组穿膜细胞比率低于空白对照组(P 0. 05);④MAP4K4干扰组细胞凋亡率高于空载组和空白对照组(P 0. 05),空载体组细胞凋亡率高于空白对照组(P 0. 05)。结论 siRNA干扰技术沉默结肠癌细胞MAP4K4表达可降低结肠癌细胞增殖及侵袭能力,促进癌细胞凋亡,或可能为结肠癌防治的新靶点。     

下调STC2基因表达对前列腺癌细胞增殖及凋亡的影响研究

目的探讨抑制斯钙素-2(stanniocalcin-2,STC2)基因表达对前列腺癌细胞增殖及凋亡的影响。方法通过Lipofectamine TM2000脂质体介导法将siRNA阴性对照组和STC2-siRNA组转染人前列腺癌PC-3细胞,未转染的细胞作为空白对照组,48 h后收集细胞,Western bloting检测各组细胞中STC2的蛋白表达;CCK8及流式细胞仪分别检测细胞的增殖及凋亡情况;Western bloting检测增殖相关蛋白ki67、B细胞淋巴瘤/白血病-2(Bcl-2)家族Bcl-2和Bcl-2相关X蛋白(Bax)及PI3K/AKT信号通路磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)和磷酸化的丝氨酸苏氨酸激酶(pAKT)的蛋白表达。结果 STC2-siRNA转染PC-3细胞后STC2的蛋白表达显著低于空白对照组(P0.05);阴性对照组细胞OD值及细胞凋亡率与空白对照组差异无统计学意义(P0.05),而STC2-siRNA组细胞OD值显著低于空白对照组,凋亡率显著高于空白对照组(P0.05);阴性对照组ki67、Bcl-2、Bax、PI3K和p-AKT蛋白表达与空白对照组差异无统计学意义(P0.05),STC2-siRNA组ki67、Bcl-2、PI3K和p-AKT蛋白表达均显著低于空白对照组,Bax蛋白表达显著高于空白对照组(P0.05)。结论 STC2基因表达的抑制可降低前列腺癌细胞的增殖,并诱导细胞凋亡,其机制与调节ki67、Bcl-2、Bax及PI3K/AKT信号通路表达有关。     

siRNA介导低表达VEGF、SDF-1对 血管内皮细胞增殖和凋亡的影响研究

目的 研究小干扰RNA(siRNA)介导低表达基质细胞衍生因子-1(SDF-1)、血管内皮生长因子(VEGF)对血管内皮细胞增殖和凋亡的影响。方法 采用体外实验培养人血管内皮细胞,细胞分别经siRNA介导下调表达SDF-1、VEGF处理,随机分为空白对照组(未进行任何转染)、阴性对照组(转染非特异性对照)、转染SDF-1-siRNA组、转染VEGF165-siRNA组。各组分别经相应处理。通过免疫印迹法测定细胞SDF-1和VEGF165蛋白的表达水平,用MTT实验测定人血管内皮细胞增殖情况,用流式细胞仪检测细胞凋亡情况。结果 空白对照组与阴性对照组SDF-1和VEGF165蛋白表达水平的比较,无显著差异(P 0. 05);相比空白对照组和阴性对照组,转染SDF-1-siRNA组细胞中SDF-1蛋白的表达水平显著下调(P 0. 01),VEGF165蛋白表达并无显著差异(P 0. 05);相比空白对照组和阴性对照组,转染VEGF165-siRNA组SDF-1和VEGF165蛋白表达水平均显著下调(P 0. 01);转染VEGF165-siRNA组SDF-1蛋白表达水平显著高于转染SDF-1-siRNA组,VEGF165蛋白表达水平显著低于SDF-1-siRNA组(P 0. 01)。空白对照组与阴性对照组细胞细胞凋亡率的比较,并无显著差异(P 0. 05);转染SDF-1-siRNA组、转染VEGF165-siRNA组细胞增殖抑制率和细胞凋亡率均显著高于空白对照组和阴性对照组(P 0. 01),转染VEGF165-siRNA组细胞增殖抑制率和细胞凋亡率均显著高于转染SDF-1-siRNA组(P 0. 01)。结论 SDF-1和VEGF165基因均可增强人血管内皮细胞增殖能力,阻滞细胞凋亡,从而参与糖尿病血管病变的病理过程,同时该病理过程中VEGF165具有调节SDF-1表达水平的作用。     

Kiss-1对结肠癌SW480细胞增殖的影响

目的以结肠癌细胞SW480为模型,探讨Kiss-1基因过表达对结肠癌细胞增殖的影响。方法将人结肠癌细胞株SW480培养后随机分为3组:阴性对照组(转染pEGFP-N1空载体)、实验组(转染pEGFP-N1-Kiss-1)及空白对照组(未转染)。实验组采用脂质体转染的方法将pEGFP-N1-Kiss-1重组质粒转染至SW480细胞,上调结肠癌细胞中Kiss-1的表达水平,经G418筛选出稳定表达株。采用Western-blot检测转染后细胞中Kiss-1的表达,采用CCK8试验分析Kiss-1对SW480细胞增殖的抑制效果。结果成功将pEGFP-N1-Kiss-1重组质粒转染至SW480结肠癌细胞。Kiss-1在实验组中高表达,而在空白对照组及阴性对照组中低表达,3组比较差异有统计学意义(P<0.05);培养48、72 h后,实验组SW480细胞数均明显低于空白对照组与阴性对照组(P<0.05),而空白对照组与阴性对照组SW480细胞数差异无统计学意义(P>0.05)。结论 Kiss-1基因在SW480-Kiss-1细胞中能稳定、高效地表达;Kiss-1可抑制结肠癌细胞的增殖。     

过表达DACT1通过调节凋亡相关蛋白对人白血病细胞增殖的抑制作用研究

目的研究过表达DACT1通过调节凋亡相关蛋白对人白血病细胞增殖的抑制作用。方法在人白血病K562细胞中,通过基因转染试剂对空载质粒vector与DACT1质粒分别进行转染,分别作为阴性对照组与观察组,并使DACT1呈现过表达。另设置一组未经任何处理的细胞为空白对照组。通过流式细胞术、CCK-8法对DACT1过表达后K562细胞周期、增殖、凋亡的影响进行检测。并采用Western blot法对DACT1过表达后调节凋亡相关蛋白的表达进行检测。结果观察组克隆形成率为(6. 33±0. 98)%,较空白对照组(20. 74±3. 12)%、阴性对照组(20. 43±3. 32)%均明显降低(P 0. 05)。细胞增殖实验结果发现,观察组细胞增殖活性较空白对照组、阴性对照组均显著降低。观察组细胞凋亡率为(28. 97±3. 04)%,较空白对照组(0. 85±0. 12)%、阴性对照组(0. 83±0. 09)%均显著升高(P 0. 05)。观察组细胞G0/G1期比例较空白对照组、阴性对照组显著增加(P 0. 05)。观察组半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(caspase-3)、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-9(caspase-9)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)等促凋亡蛋白表达较空白对照组和阴性对照组均显著上调,而B淋巴细胞癌-2(Bcl-2)等抗凋亡蛋白的表达较空白对照组和阴性对照组均显著降低。结论在人白血病K562细胞中,DACT1过表达可阻滞细胞增殖,促使细胞凋亡,亦会影响细胞周期,使得细胞出现G0/G1期阻滞。分析其原因,可能与DACT1过表达具有潜在的抗肿瘤作用,其作用机制可能与上调促凋亡蛋白(caspase-3、caspase-9、Bcl-2)表达和抑制抗凋亡蛋白(Bcl-2)表达密切相关。     

下调人四旋蛋白1表达后奥沙利铂耐药结肠癌细胞雌激素受体相关受体α水平变化

目的观察下调人四旋蛋白1表达后奥沙利铂耐药结肠癌细胞株增殖及凋亡及雌激素受体相关受体（estrogen receptor related receptor,ERR）α水平变化。方法以Western blot法和实时定量（qRT）-PCR法检测结肠癌细胞及奥沙利铂耐药细胞中人四旋蛋白1及ERRα在蛋白和mRNA水平表达,以ERRα抑制剂XCT790下调ERRα表达,Western blot法、流式细胞术及MTT检测L-OHP-SW620细胞人四旋蛋白1、凋亡及增殖。采用siRNA下调人四旋蛋白1表达,Western blot法、qRT-PCR、流式细胞术及MTT检测L-OHP-SW620细胞AKT,p-AKT,人四旋蛋白1及ERRα表达、凋亡及增殖。结果人四旋蛋白1及ERRα蛋白在L-OHP-SW620细胞株中表达高于SW620细胞（t＝6.127,P〈0.01,t＝12.579,P〈0.01）,TSPAN1mRNA在L-OHP-SW620细胞株中表达高于SW620细胞（t＝9.085,P〈0.01）。XCT790抑制ERRα表达后XCT790组L-OHP-SW620细胞早期凋亡率高于阴性对照（NC）组（t＝3.297,P〈0.01）;XCT790组细胞培养72 h后生存率为（45.264±6.249）%,低于阴性对照组（63.364±9.472）% （t＝4.537,P〈0.01）。siTSPAN1组与NC组对比,p-AKT蛋白水平上调（t＝8.139,P〈0.01）,ERRα蛋白水平下调（t＝6.452,P〈0.01）,小干扰人四旋蛋白1组细胞早期凋亡率为（17.541±2.317）%,低于NC组（32.892±3.296）% （t＝4.526,P〈0.01）,小干扰人四旋蛋白1组在培养72 h后细胞生存率为（49.653±5.945）%,低于NC组（67.376±7.834）% （t＝3.109,P〈0.05）。结论下调人四旋蛋白1表达上调p-AKT蛋白,降低ERRα蛋白表达,奥沙利铂耐药细胞株增殖降低,凋亡增加,耐药性减弱。     

下调长链非编码RNAHOXA-AS3靶向促进微小RNA-29b对结肠癌细胞LOVO凋亡和奥沙利铂敏感性的影响

目的 探讨下调长链非编码RNA(lncRNA)HOXA-AS3靶向促进微小RNA-29b(miR-29b)对结肠癌细胞LOVO凋亡和奥沙利铂敏感性的影响。方法 实时聚合酶链反应测定结肠癌细胞LOVO、SW1116、HCT116、SW620和正常结肠上皮细胞NCM460中HOXA-AS3表达变化。结肠癌细胞LOVO分成control组、si-NC组、si-HOXA-AS3组、L-OHP+si-NC组、L-OHP+si-HOXA-AS3组、si-HOXA-AS3+Anti-miR-NC组、si-HOXA-AS3+Anti-miR-29b组、L-OHP+si-HOXA-AS3+Anti-miR-NC组和L-OHP+si-HOXA-AS3+Anti-miR-29b组。采用MTT实验、流式细胞术和Western blot分别分析细胞增殖、凋亡以及细胞中Bax、Bcl-2蛋白表达情况。生物学信息学软件预测HOXA-AS3的靶miRNA,荧光素酶活性测定试剂盒验证HOXA-AS3和miR-29b的靶向关系。结果 与正常结肠上皮细胞NCM460相比,结肠癌细胞LOVO、SW1116、HCT116、SW...     

siRNA沉默细胞周期相关激酶基因对鼠结肠癌生长及其细胞凋亡的影响

目的探讨siRNA沉默细胞周期相关激酶(CCRK)基因对鼠结肠癌生长及其凋亡的影响。 方法将50只BALB/C(nu/nu)裸鼠皮下接种人类结肠癌SW480细胞,将其中建立移植瘤裸鼠模型成功的30只裸小鼠按照单纯随机抽样方法随机分为3组,分别接种siRNACCRK转染的人类结肠癌SW480细胞株(实验组)、正常培养的SW480细胞(空白对照组)和以转染携带无关序列片段sh RNA慢病毒的SW480细胞(阴性对照组)。第42天处死裸鼠后取下肿瘤组织,比较各组肿瘤重量、CCRKmRNA表达量、CCRK蛋白表达和细胞凋亡的变化。 结果转染siRNA组肿瘤重量、CCRK mRNA和CCRK蛋白表达[(0.54±0.15)g,1.14±0.24和0.18±0.05]表达显著低于空白对照组[(1.05 ± 0.14)g,2.41±0.42和0.49±0.07]和空siRNA载体组[(1.07 ±0 .12)g,2.39±0.47,0.47±0.09;F＝21.18,23.47,90.03;P<0.01];空白对照组与空siRNA载体组比较差异无统计学意义(q＝0.98,1.07,1.13;P>0.05)。实验组沉默CCRK基因后组织中细胞凋亡率为(21.23±1.12)%,明显高于空白对照组(6.78±0.37)%和阴性对照组(7.25±0.32)%,差异有统计学意义(F＝56.936,P<0.01);但空白对照组和空siRNA载体组之间差异无统计学意义(q＝1.78,P>0.05)。 结论CCRK靶向siRNA表达载体接种结肠癌裸鼠后能显著降低结肠癌瘤体的增长,抑制CCRK基因和蛋白表达;siRNA沉默CCRK基因能促进其凋亡,CCRK基因有望成为结直肠癌治疗的新靶点。     

miR-181d在结肠癌中表达失调并抑制癌细胞增殖及凋亡

目的检测结肠癌细胞系中miR-181d的表达水平,研究miR-181d对结肠癌细胞增殖及凋亡的影响。方法 RTqPCR检测结肠癌细胞HCT116,HT29,LoVo,SW480及SW620和永生化肠黏膜上皮细胞HIEC中miR-181d的表达。在LoVo细胞中转染miR-181d模拟物及对照,SW620细胞中转染miR-181d抑制物及对照,RT-qPCR检测转染效率,MTT法检测细胞增殖,流式细胞术检测细胞周期和细胞凋亡比例。结果 miR-181d表达水平在各结肠癌细胞系中均较正常肠黏膜上皮细胞HIEC显著降低(F=29.34,P0.01)。在LoVo细胞中过表达miR 181d能够显著减慢细胞体外增殖(F=5.403,P0.01),细胞周期检测示S期细胞比例降低(t=4.71,P0.05),凋亡细胞显著增多(t=3.47,P0.05)。在SW620细胞中抑制miR-181d的表达能够显著加快细胞体外增殖(F=20.82,P0.01),细胞周期检测示细胞周期加速,S期细胞比例增高(t=2.92,P0.05),细胞凋亡率显著减少(t=4.14,P0.05)。结论 miR-181d在结肠癌细胞系中表达普遍下调,有望成为结肠癌新的诊断标志物。miR-181d能够通过抑制结肠癌细胞增殖和促进凋亡,发挥抑癌基因的作用。     

microRNA-138通过靶向作用于CCND1抑制结肠癌细胞增殖

目的探讨人结肠癌细胞SW620中细胞周期蛋白1(CCND1)的表达情况及其异常表达对细胞增殖的影响,阐述microRNA-138(miR-138)在SW620增殖中的可能机制。方法采用实时荧光定量聚合酶链式反应(qRT-PCR)以及Western blot确定结肠癌组织和癌旁组织中CCND1的表达情况;随后采用qT-PCR检测结肠癌组织内miR-138的表达,并通过统计学分析miR-138与CCND1表达的相关性,培养SW620细胞并转染miR-138模拟物(mimics)后验证miR-138与CCND1的相关性,在SW620细胞内进一步转染miR-138模拟物后,Transwell和MTT检测不同处理组中细胞增殖和迁移能力的改变情况;继续转染CCND1 siRNA后,探索miR-138影响细胞生物学过程的可能机制。结果结肠癌组织中,与相应癌旁组织相比,CCND1表达显著升高,miR-138表达降低,差异有统计学意义(P<0.05);转染miR-138mimics后,与空白对照组(未转染组)相比,细胞迁徙能力下降,同时增殖降低,差异有统计学意义(P<0.05);转染CCND1 siRNA后,与未转染组相比,miR-138表达变化无显著差异(P>0.05),而细胞侵袭能力和增殖能力较未转染组相比显著改变,差异有统计学意义(P<0.05)。结论结肠癌组织中CCND1异常升高可能与miR-138的表达降低有关,且miR-138影响SW620细胞的迁移和增殖能力可能是通过影响CCND1的表达实现的。     

Gab2对结肠癌细胞细胞外黏附作用的影响

;目的探讨Gab2对结肠癌细胞外黏附作用的影响。方法选取SW620和HCT116两种结肠癌细胞系,建立Gab2表达降低和Gab2表达升高的稳定细胞株。将实验NOD/SCID小鼠分为3组,每组10只。(1)对照组;接种scr/MGC803体结肠癌细胞;(2)Gab2降低组;接种Gab2降低的siGab2/MGC803结肠癌细胞;(3)Gab2升高组;接种Gab2升高的Gab2/MGC803结肠癌细胞。检测细胞迁移能力,测量肿瘤的大小和侵袭范围及细胞凋亡情况。结果处理后3组细胞迁移数计算结果显示,Gab2降低组的细胞迁移数显著低于Gab2升高组和对照组(P<0.05)。各组NOD/SCID小鼠均在接种40 d后处死,比较接种前与接种后小鼠体质量,Gab2降低组显著低于Gab2升高组、对照组,对照组低于Gab2升高组。测量瘤体积,Gab2升高组高于Gab2降低组、对照组。Gab2降低组瘤体积抑制率显著高于对照组(P<0.05)。相关分析发现,MMP-2、MMP-9蛋白的表达与Gab2蛋白表达呈正相关。结论 Gab2可有效调控体外细胞迁移数,显著抑制小鼠结肠癌细胞侵袭及转移,通过调节MMP-2、MMP-9蛋白表达,从而抑制结肠癌生长及转移。     

TLR2通过PI3K/Akt和NF-κB通路促进结肠癌细胞增殖、迁移、侵袭

目的探讨Toll样受体2(TLR2)通过PI3K/Akt和NF-κB通路促进结肠癌细胞增殖、迁移、侵袭发生的机制。方法于陕西省咸阳市泾阳县医院普通外科采集20例配对的结肠癌组织及正常癌旁组织,其中男12例,女8例,采用免疫组化染色法检测人结肠癌组织及正常癌旁组织中TLR2表达。采用TLR2激动剂Pam3Cys(P3C)(0.1、1.0、10.0μg/mL)处理SW480及HCT116细胞作为观察组(P3C组),未作处理的细胞作为空白对照组。采用细胞计数试剂盒(CCK-8)检测人结肠癌细胞株HCT116、SW480增殖情况。采用划痕试验及Transwell小室检测细胞迁移能力及侵袭能力。采用蛋白免疫印迹法检测TLR2对结肠癌细胞PI3K/Akt和NF-κB通路的影响。结果免疫组化染色结果显示:结肠癌组织中TLR2蛋白表达阳性率为80%(16/20),明显高于正常癌旁组织的35%(7/20,P0.05)。划痕试验结果显示:HCT116经P3C处理后48h迁移率显著高于0h迁移率(P0.05);SW480经P3C处理后48h迁移率显著高于0h迁移率(P0.05)。Transwell试验结果显示:HCT116经P3C处理后穿透基底膜细胞数明显高于空白对照组(P0.01);SW480经P3C处理后穿透基底膜细胞数明显高于空白对照组(P0.01)。采用10.0μg/mL P3C刺激HCT116、SW480细胞,随着时间推移TLR2蛋白表达逐渐升高,磷酸化Akt及NF-κB表达显著升高。结论 TLR2高表达于结肠癌组织,可通过PI3K/Akt和NF-κB通路促进肿瘤细胞增殖、迁移、侵袭。     

冬凌草甲素干预SHH信号通路抑制人结肠癌细胞SW1116增殖的实验探讨

目的研究冬凌草甲素对结肠癌细胞SW1116增殖的影响及机制。方法用不同浓度的冬凌草甲素处理SW1116细胞,MTT测定细胞增殖情况,计算其半数抑制浓度。SW1116细胞分为对照组、冬凌草甲素组、Cyclopamine组、联合组,对照组细胞培养液中不添加任何药物,冬凌草甲素组细胞培养液中添加70μmol/L的冬凌草甲素,Cyclopamine组细胞培养液中添加10μmol/L的SHH信号通路抑制剂Cyclopamine,联合组细胞培养液中添加10μmol/L的SHH信号通路抑制剂Cyclopamine和70μmol/L的冬凌草甲素,MTT检测细胞增殖,细胞克隆实验检测克隆形成能力,流式细胞术检测细胞凋亡,Western blot检测细胞中音猬因子(SHH)、平滑蛋白(Smo)、锌指转录因子1(Gli-1)、剪切的Caspase-3(Cleaved Caspase-3)、B细胞淋巴瘤/白血病-2(Bcl-2)蛋白水平。结果冬凌草甲素处理后的SW1116细胞增殖能力明显降低,其半数抑制浓度为(69.65±6.32)μmol/L。冬凌草甲素处理后的SW1116细胞增殖、克隆形成能力明显降低,细胞凋亡率明显升高,细胞中SHH、Smo、Gli-1蛋白表达水平降低,Cleaved Caspase-3蛋白表达水平升高,Bcl-2蛋白表达水平降低,与未用冬凌草甲素处理的细胞比较,差异有统计学意义(P0.05)。SHH信号通路抑制剂处理也可以抑制SW1116细胞增殖和克隆形成,诱导SW1116细胞凋亡,促进细胞中Cleaved Caspase-3蛋白表达,减少细胞中Bcl-2蛋白表达。联合组的SW1116细胞增殖能力和克隆形成能力下降更多,细胞凋亡增加更多,细胞中Cleaved Caspase-3蛋白水平更高,Bcl-2蛋白水平更低,与单纯冬凌草甲素处理的SW1116细胞比较,差异有统计学意义(P0.05)。结论冬凌草甲素通过抑制SHH信号通路抑制结肠癌细胞增殖和克隆能力。     

RNA干扰抑制高迁移率族蛋白1表达对子宫内膜癌细胞株HEC-1A的增殖抑制作用及对细胞周期和细胞凋亡的影响

目的探讨通过RNA干扰阻滞高迁移率族蛋白1(HMGB1)的表达水平对子宫内膜癌(EC)细胞株HEC-1A中的细胞增殖、细胞周期及细胞凋亡的影响。方法将细胞分为以下三组:空白对照组(HEC-1A细胞未感染)、阴性对照组(HEC-1A细胞感染无关序列)、干预组(慢病毒转染HEC-1A细胞)。通过Western blot法对三组HEC-1A细胞中的HMGB1蛋白表达水平进行检测,并采用实时荧光定量PCR对HMGB1 mRNA相对表达量进行检测。采用MTT法对HEC-1A细胞增殖情况进行检测,用流式细胞术对HEC-1A细胞周期变化进行检测,同时用Annexin VFITC/PI法对HEC-1A细胞凋亡情况进行检测。采用Western blot法对转染HMGB1-siRNA后细胞cyclin D1、丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶(Akt)及磷酸化Akt(p Akt)蛋白表达进行检测。结果相比空白对照组与阴性对照组,干预组HEC-1A细胞中HMGB1蛋白表达水平显著下降(P 0. 01)。经实时荧光定量PCR检测结果可知相比空白对照组与阴性对照组,干预组HEC-1A细胞中HMGB1 mRNA相对表达量显著下降(P 0. 01)。相比空白对照组、阴性对照组,干预组cyclin D1和p Akt蛋白表达显著下降(P 0. 01);而三组Akt蛋白表达水平的比较,并无显著差异(P 0. 05)。相比空白对照组、阴性对照组,干预组HEC-1A细胞在570 nm波长处的吸光度值显著下降(P 0. 01)。干预组HEC-1A细胞G0/G1期比率在整个细胞周期分布中的比率最高,其较空白对照组、阴性对照组显著升高(P 0. 01);干预组HEC-1A细胞S期比率、G2/M期比率较空白对照组、阴性对照组显著下降(P 0. 01)。干预组HEC-1A细胞凋亡比率较空白对照组、阴性对照组显著升高(P 0. 01)。结论 HMGB1表达降低可有效阻滞EC细胞株HEC-1A的增殖,使得细胞于G0/G1期受阻,同时可有效促进细胞凋亡,其作用机制可能在于降低cyclin D1蛋白表达和干扰磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B(PI3K/Akt)信号通路。     

肝素酶siRNA抑制胰腺癌侵袭性的实验研究

目的 观察肝素酶(hparinase,Hpa)小干扰RNA(small-interfering RNA,siRNA)对胰腺癌侵袭力的影响.方法 设计3条Hpa干扰靶序列:Hpa1-siRNA,Hpa2-siRNA,Hpa3-siRNA,稀释退火后分别与线性化pGenesil-1.1质粒表达载体的连接制成pGenesil1.1/Hpa1-siRNA、pGenesil1.1/Hpa2-siRNA、pGenesil1.1/Hpa3-siRNA重组质粒.然后将上述目的基因转染SW1990胰腺癌细胞,并设空白对照和阴性对照组.RT-PCR检测Hpa-mRNA表达,Western blot检测Hpa蛋白表达.Transwell小室检测SW1990细胞体外侵袭力.结果 Hpa-mRNA和Hpa蛋白在基因转染前后的表达,NC和HK组无明显差别,Hpa1-siRNA,Hpa2-siRNA,Hpa3-siRNA三组均明显下降,Hpa2-siRNA抑制效率优于Hpa1-siRNA和Hpa3-siRNA(P＜0.05).Hpa2-siRNA明显抑制SW1990胰腺癌细胞侵袭力,抑制率均达42.6%.结论 Hpa2-siRNA是Hpa特异性干扰序列,对SW1990胰腺癌细胞侵袭力具有明显抑制作用.     

长链非编码RNA结肠癌相关转录物2(CCAT2)在膀胱癌中的表达及作用机制

目的探讨长链非编码RNA(lncRNA)结肠癌相关转录物2(CCAT2)在膀胱癌中的表达及作用机制。方法选取膀胱癌组织及癌旁正常组织、膀胱癌细胞(EJ、BIU87、T24、T24-ADM)及膀胱正常上皮细胞(sv-HUC-1),采用qRT-PCR检测CCAT2表达。选取膀胱癌细胞,分别转染siRNA-NC和siRNA-CCAT2,采用qRT-PCR检测细胞中CCAT2表达;采用CCK8法检测细胞增殖活性;流式细胞仪检测细胞凋亡;划痕实验检测细胞迁移;Western blot法检测凋亡相关蛋白表达。结果 CCAT2在膀胱癌组织中的表达明显高于癌旁正常组织(P0.05);与sv-HUC-1细胞比较,CCAT2在EJ、BIU87、T24、T24-ADM细胞中的表达明显增高(P0.05),其中以EJ、BIU87细胞最高。与转染siRNA-NC相比较,转染siRNA-CCAT2后细胞中CCAT2表达显著降低(P0.05)。与转染siRNA-NC相比较,转染siRNA-CCAT2后细胞增殖活性显著降低(P0.05)。与转染siRNA-NC相比较,转染siRNA-CCAT2后细胞凋亡率显著增高(P0.05)。与转染siRNA-NC相比较,转染siRNA-CCAT2后细胞迁移能力显著减弱(P0.05)。与转染siRNA-NC相比较,转染siRNA-CCAT2后细胞Bcl-2蛋白表达显著减少,而Bax蛋白表达显著增高(P0.05)。结论 CCAT2在膀胱癌组织和细胞中高表达,沉默CCAT2可抑制膀胱癌细胞增殖和迁移,并促进膀胱癌细胞凋亡,其机制可能与调控Bcl/Bax比率有关。     

真核翻译起始因子-3c在结肠癌细胞中的表达及其对细胞增殖的影响

目的:探讨真核翻译起始因子-3c(eukaryotic translation initiation factor 3c,eIF3c)在结肠癌细胞中的表达及其对细胞增殖的影响.方法:在5种结肠癌细胞株(RKO,HCT116,SW480,SW620和LoVo)中检测eIF3c的mRNA水平.构建eIF3c特异性siRNA慢病毒载体,用其感染结肠癌细胞,并设对照组.采用Real-time PCR和Western blotting方法分别从mRNA和蛋白质水平检测eIF3c基因的表达情况,通过MTT和集落形成实验观察结肠癌细胞的增殖率,评估eIF3c对结肠癌细胞增殖能力的影响.结果:5种结肠癌细胞株中eIF3c均为高表达,以RKO细胞中eIF3c表达最高,故被用于进一步RNA干扰研究.成功构建eIF3c-shRNA干扰体系并稳定转染RKO细胞后,与对照组比较,干扰组eIF3c mRNA下降了70％(P＜0.001),蛋白表达水平明显降低;MTT结果显示,干扰组细胞增殖水平明显低于阴性对照组(1∶60,P＜0.01);沉默eIF3c导致RKO细胞的集落数量显著减少,为对照组的35％ (P＜0.01),集落大小显著小于对照组;eIF3c与细胞周期相关,沉默eIF3c导致G0/G1期细胞的比例增加了8％ (P＜0.001),G2/M期细胞的比例增加了5％(P＜0.01),S期细胞的比例显著减少(12％),P＜0.001.结论:eIF3c在结肠癌细胞中高表达,沉默eIF3c基因可显著抑制结肠癌细胞的增殖能力,提示eIF3c在结肠癌的发生、发展中起重要作用,抑制eIF3c的表达有望被用于治疗结肠癌.     

不同浓度羟考酮对结直肠癌细胞生物学行为的影响

目的探讨羟考酮对结直肠癌(colorectal cancer,CRC)细胞生物学行为的影响。方法选择人CRC SW620细胞接种并孵育24 h后,分别以0、10、20和40μg/ml羟考酮处理24 h,然后使用CCK-8试剂盒孵育后,酶标仪板在490 nm波长下测量不同浓度组的光密度值,比较细胞增殖抑制率差异;采用流式细胞术FITC-Annexin V/PI检测不同浓度羟考酮对SW620细胞凋亡的影响;行划痕实验检测不同浓度羟考酮对SW620细胞迁移的影响;采用酶联免疫吸附法检测不同浓度羟考酮对SW620细胞中血管内皮生长因子(VEGF)的表达。结果相较于对照组(未经羟考酮处理组),10、20、40μg/ml羟考酮处理组SW620细胞增殖能力受到显著抑制。20和40μg/ml羟考酮处理组SW620细胞凋亡率与对照组比较差异有统计学意义(t=12.64,P=0.019;t=13.94,P=0.016)。20和40μg/ml羟考酮处理组SW620细胞迁移距离比例显著低于对照组(t=11.29,P=0.036;t=12.05,P=0.009)。20和40μg/ml羟考酮处理组SW620细胞VEGF表达水平显著低于对照组(t=12.62,P=0.031;t=13.61,P=0.013)。结论羟考酮能以剂量依赖的方式对CRC细胞的增殖和迁移起到抑制作用,抑制VEGF的产生和分泌,同时还能诱导细胞的凋亡。     

酒石酸锑钾对结肠癌的抑制作用

【目的】观察酒石酸锑钾(PAT)对人结肠癌细胞、结肠癌裸鼠移植模型抑瘤及凋亡诱导作用。【方法】将不同浓度PAT作用于体外培养人结肠癌SW480细胞。采用MTT法检测PAT对结肠癌SW480细胞的生长抑制作用,并计算生长抑制率;60只裸鼠皮下注射结肠癌细胞株SW480建立移植瘤模型,随机分为4组,每组15只。分别在荷瘤鼠腹腔内注射氟尿嘧啶、生理盐水及不同剂量的PAT,给药15d,末次给药24h后计算抑瘤率并观察肿瘤细胞的凋亡。利用TUNEL法进行凋亡检测。免疫组化分析凋亡调控基因Bcl-2的表达。【结果】PAT对结肠癌移植瘤生长有显著性抑制作用,肿瘤细胞凋亡增加;TUNEL法观察到棕褐色着染的凋亡阳性细胞;免疫组化显示PAT作用下Bcl-2基因阳性细胞数降低。【结论】PAT可通过诱导结肠癌SW480细胞的凋亡抑制结肠癌裸鼠皮下移植瘤。