DIM对雌激素非依赖性乳腺癌细胞增殖的影响

目的探讨3,3-二吲哚基甲烷(DIM)对雌激素非依赖性乳腺癌细胞MDA-MB-468体外增殖和体内成瘤能力的影响及其机制。方法 6×10~6个MDA-MB-468细胞接种BALB/c裸鼠,建立乳腺癌细胞异种肿瘤移植模型,5 mg/(kg·d)DIM喂食,检测DIM对MDA-MB-468肿瘤细胞致瘤及生长能力的影响。体外实验,不同浓度(0,30,60μmol/L)的DIM处理MDA-MB-468细胞,采用CCK-8法检测DIM对细胞增殖的影响;流式细胞仪测定细胞周期和细胞凋亡;Western印迹检测细胞周期调控蛋白(CyclinD 1),CDK4,CDC25A的表达水平。结果异种肿瘤移植模型中,DIM可显著抑制MDA-MB-468细胞的成瘤能力。体外实验,DIM对乳腺癌MDA-MB-468细胞增殖的抑制作用呈时间和剂量依赖性。流式细胞仪结果显示;DIM可改变MDA-MB-468细胞进程,将其阻滞于G1/S、G2/M期,并且60μmol/L DIM作用组有明显的诱导凋亡作用。DIM作用MDA-MB-468细胞48 h后,细胞周期因子CyclinD I,CDK4及CDC25A蛋白表达呈剂量依赖性下降(P0.05)。结论 DIM可有效抑制雌激素非依赖性乳腺癌细胞的体外增殖和体内成瘤,其机制可能与细胞周期重要调控蛋白表达下调有关。     

探究乌司他丁和多西他赛对人乳腺癌细胞MDA-MB-231增殖、侵袭的影响

目的探究分析乌司他丁和多西他赛对体外培养的人乳腺癌细胞MDA-MB-231增殖、侵袭和迁移能力的影响。方法将人乳腺癌细胞MDA-MB-231随机分为乌司他丁组、多西他赛组、乌司他丁联合多西他赛组以及对照组四个组,分别予以800 U/ml乌司他丁、3. 7μg/ml多西他赛、800 U/ml乌司他丁+3. 7μg/ml多西他赛以及等量生理盐水干预。分别在干预后0 h、24 h、48 h、72 h时点采用CCK8法检测MDA-MB-231的增殖能力,在干预后48 h采用Transwell法检测MDA-MB-231的侵袭、迁移能力。结果与对照组相比,乌司他丁组、多西他赛组、乌司他丁联合多西他赛组24 h、48 h、72 h等各时点MDA-MB-231的增殖能力均明显降低(P 0. 05),且多西他赛组的增殖能力较同时点乌司他丁组较低(P 0. 05),乌司他丁联合多西他赛组各时点增殖能力则明显降低(P 0. 05),组间比较差异明显,具有统计学意义。与对照组相比,乌司他丁组、多西他赛组、乌司他丁联合多西他赛组各组MDA-MB-231细胞侵袭、迁移能力明显降低(P 0. 05),且乌司他丁联合多西他赛组细胞侵袭、迁移能力明显低于多西他赛组及乌司他丁组水平(P 0. 05),多西他赛组细胞侵袭、迁移能力明显低于乌司他丁组(P 0. 05),组间差异具有显著统计学意义。结论乌司他丁与多西他赛均可在一定程度上抑制人乳腺癌细胞MDA-MB-231的增殖、侵袭和迁移,且乌司他丁和多西他赛联合应用抑制效果优势明显。     

西妥昔单抗体外增强人鼻咽癌细胞对紫杉醇化疗敏感性的实验研究

目的 观察西妥昔单抗(C225)体外增强人鼻咽癌CNE-1细胞对紫杉醇(PTX)化疗敏感性作用,并探讨可能的作用机制。方法 将人鼻咽癌CNE-1细胞株随机分为对照组、PTX组、联合用药组,PTX组采用30μg/ml PTX处理,联合用药组采用30μg/ml PTX+250μg/ml C225处理,对照组加入等体积的二甲基亚砜(DMSO)。MTT法检测细胞的PTX耐药性,取对数期的CNE-1细胞分为9组,4组分别加入浓度为0. 01μmol/L、0. 1μmol/L、1μmol/L、10μmol/L的PTX;另有4组也加入PTX,同时加入C225,使C225最终浓度为250μg/ml,空白对照组中加入等体积的DMSO,培养48 h。MTT法检测细胞抑制率,流式细胞仪检测细胞凋亡率及细胞周期分布,Western blotting、RT-PCR分别检测细胞周期蛋白D1(Cyclin D1)、B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)、BCL2-相关X蛋白(Bax)蛋白水平及其基因相对表达量。结果 PTX组CNE-1细胞抑制率为(15.99±2. 13)%,联合用药组CNE-1细胞抑制率为37. 10%(37. 10±2. 48)%,差异有统计学意义(t=11.184,P=0.000)。与对照组相比,PTX组、联合用药组的细胞凋亡率、G0～G1期细胞比率均升高(P 0. 05),而S期细胞比率降低(P 0. 05)。与PTX相比,联合用药组的细胞凋亡率、G0～G1期细胞比率升高(P0. 05),S期细胞比率与M期细胞比率均明显降低(P 0. 05)。MTT检测PTX耐药性结果显示,空白对照组、C225组细胞的细胞活性随着PTX浓度增加而降低,空白对照组、C225组CNE-1细胞的PTX IC50分别为4. 179μmol/L、0. 25μmol/L。与对照组相比,PTX组、联合用药组Cyclin D1、Bcl-2蛋白水平与基因相对表达量均明显降低(P 0. 05),而Bax蛋白水平与基因相对表达量均明显升高(P 0. 05)。与PTX相比,联合用药组Cyclin D1、Bcl-2蛋白水平与基因相对表达量均明显降低(P 0. 05),而Bax蛋白水平与基因相对表达量均明显升高(P 0. 05)。结论 在PTX化疗的基础上增加C225处理,可以促进PTX对人鼻咽癌CNE-1细胞的增殖抑制作用以及促凋亡作用,降低细胞的CNE-1细胞的PTX IC50,增强CNE-1细胞对PTX敏感性。     

miR-181a-5p介导虎杖苷体外诱导乳腺癌MDA-MB-231细胞凋亡的机制研究

【目的】探讨虎杖苷体外干预对乳腺癌MDA-MB-231细胞增殖及凋亡的影响。【方法】以不同浓度(0、2、4、6、8、16μmol/L)的虎杖苷处理乳腺癌MDA-MB-231细胞,MTT方法检测细胞增殖变化。乳腺癌MDA-MB-231细胞分成对照组(常规培养)、虎杖苷组(6μmol/L虎杖苷处理)、虎杖苷+Anti-NC组(转染inhibitor control,6μmol/L虎杖苷处理)、虎杖苷+Anti-miR-181a-5组(转染miR-181a-5 inhibitor,6μmol/L虎杖苷处理)。流式细胞术检测MDA-MB-231细胞凋亡情况,Western blot检测MDA-MB-231细胞Bax和c-caspase-3、caspase-3蛋白表达水平,Realtime PCR方法测定MDA-MB-231细胞miR-181a-5p表达水平。【结果】与对照组比较,2、4、6、8、16μmol/L的虎杖苷处理后的细胞吸光值显著降低(均P<0.05)。与虎杖苷+Anti-NC组比较,虎杖苷+Anti-miR-181a-5组乳腺癌细胞中miR-181a-5p水平降低,吸光值升高,细胞凋亡率降低,细胞中Bax、c-caspase-3、caspase-3蛋白水平降低(P<0.05)。与对照组比较,虎杖苷组乳腺癌细胞凋亡率升高,细胞中凋亡蛋白Bax、c-caspase-3、caspase-3水平升高,miR-181a-5p表达水平升高(P<0.05)。【结论】虎杖苷通过上调miR-181a-5p抑制乳腺癌MDA-MB-231细胞增殖并诱导细胞凋亡。     

内皮抑素基因对ACHN RCC细胞增殖和凋亡的影响

目的利用已构建的带有内皮抑素基因真核表达载体质粒导入裸鼠ACHN肾细胞癌（renal cell carcinoma,RCC）细胞中,研究内皮抑素基因对RCC细胞增殖和凋亡的影响。方法ACHN细胞浓度1×10^7个/L,经裸鼠右侧背部皮下注射0.2 ml,共注射24只裸鼠。荷瘤裸鼠随机分为3组,每组8只。治疗组：每只裸鼠瘤内3点注射复合物100μl（内含30μl梭华-SofastTM和30μg pSecES质粒）;对照组：每只裸鼠瘤内3点注射复合物100μl（内含30μl梭华-SofastTM和30μg pcDNA3.1质粒）;空白组：每只裸鼠瘤内3点注射生理盐水100μl。各组每只裸鼠间隔3 d注射1次,连续注射3次。以增殖细胞核抗原（PCNA）作为细胞增殖状态,按链霉亲和素生物素法（SABC）进行免疫组化染色。细胞凋亡检测用TUNEL法。结果内皮抑素真核表达质粒能显著抑制裸鼠ACHN RCC肿瘤体积增长,pSecES治疗组平均瘤重明显小于空白组和对照组（P〈0.01）,与空白组的肿瘤生长抑制率为34.48%,与对照组的肿瘤生长抑制率为40.68%。治疗组肿瘤细胞的凋亡指数（AI）明显高于对照组和空白组（P〈0.01）。pSecES治疗组肿瘤组织的AI/PI比值明显高于对照组和空白组（F=189.27,P〈0.05）。Spearman相关分析表明,肿瘤体积与细胞增殖之间无明显相关性（r=-0.041 2,P〉0.05）,肿瘤体积与细胞凋亡呈负相关（r=-0.734 6,P〈0.01）。结论内皮抑素基因治疗可使裸鼠ACHN RCC肿瘤细胞凋亡增加,肿瘤细胞的数量减少,在总体上表现为肿瘤的生长变慢、体积变小。     

二甲双胍对三阴乳腺癌细胞MDA-MB-231体外抑制作用的研究

目的探讨二甲双胍对三阴乳腺癌细胞的抑制作用和可能的损伤机制。方法利用MTT、流式细胞仪检测二甲双胍对MDA-MB-231乳腺癌细胞周期的影响及诱导凋亡作用;应用Western blot技术检测加药后MDA-MB-231乳腺癌细胞外信号调节激酶1和2(ERK1/2)磷酸化表达水平变化。结果不同浓度二甲双胍作用MDA-MB-231乳腺癌细胞系24、48h后细胞增殖被不同程度抑制,并呈时间和浓度依赖性(P0.05);可促进MDA-MB-231乳腺癌细胞系凋亡,并呈浓度依赖性(P0.05);细胞周期检测,与对照组比较,G0/G1期比例增加(P0.05),S期比例逐渐降低(P0.05),G2/M期比例无明显变化(P0.05);药物处理MDA-MB-231乳腺癌细胞系24h后,Western blot检测示随药物浓度的增加,细胞外信号调节激酶1和2(ERK1/2)磷酸化表达水平下降(P0.05)。结论二甲双胍对三阴性乳腺癌细胞MDA-MB-231增殖有抑制作用,下调P-ERK1/2的表达可能是其抗肿瘤机制之一,可能成为三阴乳腺癌潜在的维持治疗药物。     

槲皮素对人脑胶质瘤干细胞生物学行为及miR-29s家族的影响分析

目的探讨槲皮素对人脑胶质瘤干细胞生物学行为及微小RNA-29s(miR-29s)家族的影响。方法采用悬浮细胞培养人脑胶质瘤SHG44干细胞。根据槲皮素浓度不同分为0μg/ml(对照组),6μg/ml组、12μg/ml组、24μg/ml组、48μg/ml组、96μg/ml组,采用MTT法检测人脑胶质瘤SHG44增殖活性。用0μg/ml、12μg/ml、24μg/ml、48μg/ml培养48 h,采用细胞迁移实验和细胞侵袭实验检测细胞迁移数目和细胞侵袭数目;采用RT-PCR检测miR-29s家族表达。结果培养24 h和48 h,槲皮素各组抑制率高于对照组,且随着浓度增加抑制率不断增加,差异均有统计学意义(P 0. 05);培养48 h,槲皮素各组抑制率高于培养24 h,差异均有统计学意义(P 0. 05)。与对照组比较,槲皮素各组细胞迁移数目和细胞侵袭数目减少,差异均有统计学意义(P 0. 05);槲皮素48μg/ml组细胞迁移数目和细胞侵袭数目少于12μg/ml组和24μg/ml组,且24μg/ml组少于12μg/ml组,差异均有统计学意义(P 0. 05)。与对照组比较,槲皮素各组miR-29a和miR-29b表达升高,差异均有统计学意义(P 0. 05);槲皮素48μg/ml组miR-29a和miR-29b表达高于12μg/ml组和24μg/ml组,且24μg/ml组高于12μg/ml组,差异均有统计学意义(P 0.05)。结论槲皮素对人脑胶质瘤干细胞SHG44具有良好抑制作用,且具有剂量依赖性,降低体外迁移及侵袭能力,及促进miR-29a和miR-29b表达。     

熊果酸对人卵巢癌 SKOV3细胞增殖与凋亡的影响

【目的】探讨熊果酸(Ursolic acid,UA)对人卵巢癌 SKOV3细胞增殖与凋亡的影响。【方法】常规培养人卵巢癌 SKOV3细胞,应用 UA 浓度为5、10、20、40和80μmol/L 分别干预12 h、24 h 和48 h,采用 MTT 法检测细胞增殖;采用流式细胞仪检测细胞凋亡和细胞周期变化,应用 Western blot 技术检测细胞周期相关蛋白 P21、CyclinD1的表达水平。【结果】与空白对照组(0μmol/L UA)比较,40和80μmol/L UA 分别作用 SKOV3细胞12 h、24 h 和48 h 后 OD 值均显著降低(P <0.05);10、20和40μmol/L UA 作用24 h 后 SKOV3细胞早期凋亡率、晚期凋亡率和 G0/G1期比率较对照组升高,20和40μmol/L UA 作用24 h 后 SKOV3细胞周期蛋白 Cyclin D1明显降低而 P21水平显著升高(P <0.05)。【结论】体外实验中,UA 可抑制人卵巢癌 SKOV3细胞增殖和促其凋亡,其机制可能与细胞周期蛋白 Cyclin D1表达降低和 P21表达升高有关。     

硫酸乙酰肝素对MDA-MB-231内质网应激、肝素酶表达及凋亡的影响

目的:探讨硫酸乙酰肝素(heparin sufate,HS)以及HS与衣酶素(tunicamycin,TM)合用对乳腺癌MDA-MB-231细胞内质网应激、葡萄糖调节蛋白78(glucose-regulated protein,GRP78)表达、肝素酶(HPSE)表达及凋亡的影响.方法:用HS(1000 μg/mL)、TM(3 μmol/L)和HS(1000 μg/mL)+TM(3 μmol/L)分别处理MDA-MB-231细胞不同时间(0、6、12、24、36、48 h),Westem blot 法检测GRF78 和 HPSE表达的变化,溴化丙啶(propidium iodide,PI)染色法检测细胞凋亡率.结果:HS能提高MDA-MB-231细胞凋亡率达(29.71±1.24)%,并能下调GRP78以及HPSE的表达.TM能提高MDA-MB-231细胞细胞凋亡率达(22.62±0.78)%,但能上调GRP78以及HPSE的表达:HS与TM合用可使细胞凋亡率上升到(58.85±0.72)%,但对GRP78以及肝素酶的表达没有什么影响.结论:HS可抑制内质网应激状态下GRP78和HPSE的表达,并促进MDA-MB-231细胞的凋亡.     

DNALK5抑制乳腺癌增殖的分子机制研究

目的探讨显性负性突变ALK5(DNALK5)是否可通过抑制转化生长因子-β(TGF-β)/SMAD信号通路来抑制人乳腺癌癌细胞MDA-MB-231增殖。方法采用荧光定量PCR检测乳腺癌细胞中ALK5受体表达;通过流式细胞术和MTT检测DNALK5对三阴性乳腺癌MDA-MB-231增殖和周期的改变;采用western blot检测DNALK5感染MDA-MB-231后对乳腺癌细胞中TGF-β/SMAD信号通路中SMAD2/3总蛋白和磷酸化蛋白表达及其下游靶基因ID1表达的影响。结果乳腺癌细胞系中存在ALK5的普遍表达,其中MDA-MB-231表达最高;DNALK5腺病毒感染MDA-MB-231后,MTT显示第3天DNALK5组细胞吸光度值(0.35±0.04)显著低于RFP组(0.58±0.06),流式细胞术显示其周期阻滞于G+0期;荧光定量PCR和western blot显示ID1和CyclinD1表达降低,进一步研究发现TGF-β/SMAD信号通路中关键蛋白SMAD2/3磷酸化蛋白表达降低。结论 DNALK5抑制乳腺癌MDA-MB-231增殖,可通过抑制TGF-β/SMAD信号通路的激活,下调肿瘤增殖相关基因ID1和CyclinD1表达来实现。     

二甲双胍联合紫杉醇对乳腺癌细胞生长停滞和细胞凋亡作用及对PARP-1/p53信号通路的影响

目的探究二甲双胍(DMBG)联合紫杉醇(PTX)对乳腺癌细胞MCF-7生长停滞和细胞凋亡的作用及对聚腺苷酸二磷酸核糖转移酶-1(PARP-1)/p53信号通路的影响,以期为疾病的临床治疗提供新思路。方法在细胞培养基(不添加药物处理,空白组)、含有DMBG的细胞培养基(培养基中添加16. 56 mg/ml DMBG,DMBG组)、含有PTX细胞培养基(培养基中添加10μg/ml PTX,PTX组)、含有PTX、DMBG的培养基(培养基中添加16. 56 mg/ml DMBG和10μg/ml PTX,联合组)中分别培养乳腺癌MCF-7细胞,MTT法检测细胞增殖情况;平板细胞克隆实验检测菌落形成情况; Hoechst33342染色法观察细胞形态变化;流式细胞仪检测细胞凋亡以及周期分布情况;蛋白免疫印迹法(WB)检测PARP-1、p53、Cyclin D1、Cleaved Caspase-3蛋白表达情况。结果与正常乳腺上皮细胞MCF-10A相比,MCF-7细胞PARP-1PARP-1、p53蛋白表达明显增加(P 0. 05)。空白组细胞形态、大小均正常,DMBG组、PTX组细胞体积明显变小,细胞核荧光强度增高,部分出现碎片化,联合组细胞核固缩现象更加明显。与空白组相比,DMBG组、PTX组细胞抑制率、凋亡率、G1期DNA量、Cleaved Caspase-3蛋白表达升高;细胞菌落数、PARP-1、p53、Cyclin D1蛋白表达降低(P 0. 05)。与DMBG组、PTX组相比,联合组细胞抑制率、凋亡率、G1期DNA量、Cleaved Caspase-3蛋白表达升高;细胞菌落数、PARP-1、p53、Cyclin D1蛋白表达降低(P 0. 05)。结论 DMBG联合PTX可能通过抑制PARP-1和p53的表达,引起细胞周期G1期阻滞,从而抑制乳腺癌细胞MCF-7增殖,促进其凋亡,发挥抗肿瘤作用。     

miR-543调控肾透明细胞癌细胞增殖和侵袭的机制分析

目的探讨与分析miR-543调控肾透明细胞癌(CCRCC)细胞增殖和侵袭的机制。方法 CCRCC细胞系ACHN随机分为三组:空白组、阴性对照(NC)组与miR-543组,NC组与miR-543组分别转染照NC与miR-543模拟剂,空白组不进行转染。MTT检测细胞增殖抑制率,流式细胞仪检测细胞凋亡率,Transwell检测细胞转移与侵袭比率,Western blot检测蛋白表达水平。结果转染后24 h与48 h,与NC组与空白组相比,miR-543组的细胞增殖抑制率显著增加(P0. 05),细胞凋亡率显著增加(P 0. 05),细胞转移与侵袭相对数显著降低(P 0. 05),SDF-1、CXCR7蛋白相对表达量显著降低(P 0. 05),NC组与空白组比较差异无统计学意义(P 0. 05)。且miR-543对细胞增殖抑制率、细胞凋亡率、细胞转移与侵袭、SDF-1和CXCR7蛋白相对表达量的影响均不具有时间依赖性。结论 miR-543能抑制调控肾透明细胞癌细胞增殖和侵袭,促进细胞凋亡,且不具有时间依赖性,其作用机制可能与抑制SDF-1/CXCR7表达有关。     

裙带菜多糖对人食管癌Eca-109细胞抑制作用的实验研究

目的观察裙带菜多糖（PUP）体外抑制食管癌细胞增殖的作用及其作用机制。方法以食管癌Eca—109为研究对象,MTT法检测PUP对其增殖的抑制作用;用流式细胞术分析Eca-109细胞的凋亡率和检测Survivin蛋白的表达水平。结果不同浓度的裙带菜多糖均可明显抑制食管癌细胞的增殖（P均〈0．05）,浓度越高细胞凋亡率越高,100μg／ml的裙带菜多糖可诱导Eca-109细胞凋亡率达72．25％,可使Eca-109细胞Survivin蛋白表达水平均明显降低（P〈0．01）。结论裙带菜多糖可抑制Eca-109细胞生长,诱导细胞凋亡,其作用可能与下调细胞Survivin蛋白的表达有关。     

去甲斑蝥素对骨肉瘤模型裸鼠的抑瘤作用及对IL-2、TNF-α和s VCAM-1的影响

目的研究去甲斑蝥素体内外对人骨肉瘤Saos-2细胞生长的抑制作用。方法培养Saos-2细胞,24 h后随机分为空白对照组和去甲斑蝥素组(5～160μg/ml),分别于培养24 h、48 h、72 h后MTT法检测细胞增殖情况;培养细胞,随机分为空白组和去甲斑蝥素组(10μg/ml,20μg/ml,40μg/ml),流式细胞术检测Saos-2细胞凋亡率;建立Saos-2细胞裸鼠异种移植瘤模型,随机分为阴性对照组,5-Fu阳性对照组以及去甲斑蝥素组(10μg/ml,20μg/ml,40μg/ml),连续腹腔注射给药12 d后处死裸鼠,剥瘤称重并计算抑瘤率;处死前取血,酶联免疫吸附(ELISA)法检测血清中白细胞介素2(IL-2)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)和可溶性血管粘附分子(s VCAM-1)含量。结果去甲斑蝥素六个剂量体外均能明显抑制Saos-2细胞的生长,具有剂量和时间依赖性;可明显促进Saos-2细胞凋亡;体内抑制荷瘤裸鼠肿瘤的生长;提高血清IL-2和TNF-α水平,降低s VCAM-1水平,差异均具有统计学意义。结论去甲斑蝥素体内外均可抑制Saos-2细胞的生长,其抑瘤作用可能通过诱导Saos-2凋亡及上调机体血清IL-2、TNF-α细胞因子水平,下调s VCAM-1水平而发挥作用。     

芦荟粗多糖对体外培养人表皮细胞增殖活性及细胞周期的影响

目的研究芦荟粗多糖对体外培养人表皮细胞增殖活性及细胞周期的影响。方法在芦荟粗多糖(75、150、300、600、1200 μg／ml)的作用下,光镜观察表皮细胞形态及细胞融合时间,电镜观察细胞超微结构,MTT法以及[3H]-TdR渗入量观察细胞增殖状况,流式细胞仪检测细胞周期。结果与对照组比较,芦荟粗多糖作用后表皮细胞形态学变化不明显,但芦荟粗多糖组细胞融合时间明显缩短(P< 0．05);细胞超微结构观察发现,300、1200 μg/ml芦荟粗多糖组的细胞核内以常染色质为主,而对照组与 75μg／ml芦荟粗多糖组则以异染色质为主;从生长曲线上看,芦荟粗多糖作用2 d后细胞增殖明显增快; [3H]-TdR渗入量与对照组比较呈显著性上升(P<0．05);流式细胞分析显示,G0／G1期细胞所占百分率显著性减少,G2／M期和S期细胞所占百分率显著性增加(P<0．01)。结论芦荟粗多糖可通过影响表皮细胞的DNA合成及细胞周期来促进细胞增殖。     

低频低强度超声辐照微泡对三阴性乳腺癌MDA-MB-231/DOX细胞耐药性的影响

目的 探讨低频低强度超声辐照微泡(LILFU-MB)对MDA-MB-231/DOX细胞耐药性的影响。方法 筛选LILFU-MB非毒性照射时间;选取不同浓度(10-2μM,10-1μM,100μM,101μM,102μM,103μM)阿霉素(DOX)分别处理细胞24h,测定DOX对耐药细胞的半抑制浓度(IC50)。将细胞分为对照组、DOX组、LILFU-MB组、DOX+LILFU-MB组,检测细胞增殖、迁移、凋亡情况以及P-gp、Bcl-2、Cyt-c和Caspase-3蛋白表达水平。结果 LILFU-MB非毒性照射时间为30s,能降低DOX对耐药细胞的IC50。与单独DOX处理和LILFU-MB处理相比,DOX+LILFU-MB组细胞增殖率和迁移率最低,细胞凋亡核型改变最明显,细胞凋亡率、Cyt-c和Caspase-3蛋白表达水平均升高(P＜0.05),Bcl-2蛋白表达水平显著降低(P＜0.05),同时DOX+LILFU-MB组明显下调P-gp蛋白的表达(P＜0.05)。结论 LILFU-MB通过下调P-gp蛋白表达,抑制MDA-MB-231/DOX细胞增殖、迁移并促进细胞凋亡,进而逆转三阴性乳腺癌MDA-MB-231/DOX细胞耐药性。     

姜黄素对人类绒毛膜癌细胞增殖、凋亡的影响及机制

目的探讨姜黄素对人类绒毛膜癌细胞增殖、凋亡的影响及机制。方法将人类绒毛膜癌细胞JEG-3细胞株随机分为对照组和姜黄素干预组。姜黄素干预组加入100μl不同浓度的姜黄素与细胞孵育24 h;对照组只加入PRMI 1640培养液与等体积的二甲基亚砜(DMSO),MTT检测检测细胞抑制率。姜黄素干预组加入100μl姜黄素(终浓度为40μmol/L)与细胞孵育24 h后,TUNEL法检测细胞凋亡情况,Western blot检测增殖相关蛋白Ki-67和细胞周期蛋白D1(Cyclin D1)的表达,以及凋亡相关蛋白半胱氨酸蛋白酶(Caspase-3)、B淋巴细胞瘤-2(Bcl2)和Bcl2相关X蛋白(Bax)的表达。结果与对照组相比,姜黄素干预组JEG-3细胞培养24 h后吸光度显著下降(P 0. 05);姜黄素对JEG-3细胞抑制作用呈药物浓度依赖性,半抑制浓度(IC50)为(39. 33±1. 02)μmol/L;与对照组相比,JEG-3细胞的凋亡率明显升高,增殖相关蛋白Ki-67和Cyclin D1的表达显著降低(P 0. 05),凋亡相关蛋白Caspase-3和Bax的蛋白表达量显著升高(P 0. 05),Bcl-2的表达量显著降低(P 0. 05)。结论姜黄素可以下调人类绒毛膜癌细胞增殖相关蛋白的表达,上调凋亡相关蛋白的表达,调控其增殖和凋亡。     

青蒿琥酯诱导人肝癌细胞株HepG2凋亡及其机制

目的探讨青蒿琥酯作用人肝癌细胞株HepG2后,对细胞凋亡的影响。方法常规培养人肝癌细胞株HepG2,设立空白对照组、青蒿琥酯不同浓度组(3.125μg/ml、6.25μg/ml、12.5μg/ml、25μg/ml、50μg/ml),对HepG2作用48h后,应用流式细胞术检测细胞凋亡率,同时采用瑞氏染色法观察细胞凋亡;用RT-PCR检测caspase-3mRNA的表达,采用灰度分析比较表达的变化。结果青蒿琥酯(3.125μg/ml、6.25μg/ml、12.5μg/ml、25μg/ml、50μg/ml)处理HepG2细胞48h,呈浓度依赖性诱导细胞凋亡,且当青蒿琥酯浓度在6.25μg/ml以上时,各组凋亡率与对照组比较差异具有统计学意义(P<0.01),瑞氏染色后光镜下可见处理组细胞发生凋亡形态学改变。与对照组比较,各实验组caspase-3的表达显著增加(P<0.01)。结论青蒿琥酯能显著诱导HepG2细胞凋亡,其机制可能与增强凋亡相关基因caspase-3的表达有关。     

银杏叶提取物通过激活PI3K/AKT通路抑制IL-1β诱导血管内皮细胞的凋亡

目的研究银杏叶提取物对白细胞介素-1β(IL-1β)诱导的血管内皮细胞凋亡的抑制作用及其作用机制。方法对人脐静脉血管内皮细胞进行培养,用IL-1β诱导血管内皮细胞建立细胞凋亡模型:分为对照组、IL-1β组、不同剂量的银杏叶提取物处理组(20μg/ml、50μg/ml、100μg/ml、200μg/ml、400μg/ml),对照组为空白对照,IL-1β刺激组给予10 ng/ml IL-1β处理细胞,银杏叶提取物处理组给予相应剂量银杏叶提取物处理细胞。通过CCK-8法检测不同剂量的银杏叶提取物对IL-1β诱导的血管内皮的增殖影响,流式细胞术检测银杏叶提取物对细胞凋亡的影响,Western blot检测通路蛋白PI3K、AKT、p-AKT和凋亡蛋白caspase 3、Bax和Bcl-2的表达情况,RT-PCR检测凋亡相关基因caspase 3、Bax和Bcl-2的表达变化。结果不同剂量的银杏叶提取物能显著提高IL-1β诱导血管内皮细胞的增殖能力,尤其是200μg/ml的银杏叶提取物组对IL-1β诱导血管内皮细胞的增殖能力作用非常显著。与对照组比较,IL-1β组细胞凋亡率、凋亡相关蛋白caspase 3和Bax的表达明显上升,抗凋亡蛋白Bcl-2表达明显下降。与IL-1β组比较,银杏叶提取物预处理组细胞凋亡率、凋亡相关蛋白caspase 3和Bax的表达明显下降,抗凋亡蛋白Bcl-2表达明显上升(P 0. 05)。同时与对照组比较,IL-1β组细胞通路蛋白PI3K和p-AKT蛋白的表达明显下降,而给予银杏叶提取物预处理后,其PI3K和p-AKT蛋白的表达明显上升(P 0. 05)。结论银杏叶提取物对IL-1β诱导的血管内皮细胞的凋亡具有一定的抑制作用,且其具体的抑制机制与激活PI3K/AKT信号通路有关。     

小檗胺对K562细胞体外及体内作用的实验研究

为了探讨小檗胺(berbamine,BER)在体外及体内抗人白血病细胞株K562细胞的作用及其可能的机制,用MTr法测定K562细胞的增殖抑制,用流式细胞术检测凋亡细胞,用RT-PCR方法检测bcr/abl基因表达,用Westem blot方法检测BCR/ABL蛋白质水平表达,利用K562细胞荷瘤裸鼠模型观察小檗胺治疗后瘤体大小、组织病理及bcr/abl基因表达的改变.结果表明小檗胺对K562细胞有明显的增殖抑制作用,呈时间-浓度依赖关系.经8.0μg/ml BER作用24、48、72小时,对K562细胞的抑制率分别为(26.63±3.57)%,(61.84±4.74)%,(75.32±1.95)%,与对照组相比,P＜0.01.IC50值(72小时)为(5.227±1.307)μg/ml.与空白对照组相比,经8.0μg/ml小檗胺处理72小时后,K562细胞凋亡率明显增加[(61.77±4.35)%vs(0.50±0.14)%,P＜0.01].小檗胺能下调K562细胞bcr/abl mRNA表达和P210水平,且呈浓度-时间依赖效应,并与细胞凋亡率有一定的相关性.经8.0μg/ml BER处理后,与同浓度点对照组相比,72小时组的表达明显地减弱(0.97±0.01vs1.38±0.02,P＜0.01).4.0-16.0μg/ml BER处理24小时后,P210的相对表达量由未加药对照组的1.04±0.02降至16.0μg/ml组的0.63±0.01(P＜0.01),与所设的对照组药物酪氨酸蛋白激酶抑制剂STI571的作用结果相似.在K562荷瘤裸鼠模型,小檗胺治疗组瘤重较未治疗对照组的明显减少[(1.46±0.43)g vs(2.90±0.94)g,P＜0.01],抑瘤率为49.66%.瘤体细胞的bcr/abl mRNA的表达水平明显下调.结论小檗胺在体外对K562细胞具有明显的增殖抑制作用及明确的诱导凋亡作用,并呈时间-浓度依赖关系;小檗胺诱导细胞凋亡可能与其下调bcr/abl基因和(或)P210的表达水平有关;在荷瘤裸鼠体内,小檗胺同样具有显著的抑制K562细胞生长的作用,尤其能下调瘤体组织细胞bcr/abl mRNA的表达水平.