肝细胞癌中NY-SAR-35 NY-TLU-57和NY-ESO-1基因的表达及意义

目的:检测三种癌-睾丸抗原NY-SAR-35、NY-TLU-57和NY-ESO-1基因mRNA在广西地区肝细胞癌(Hepatocellularcarcinoma,HCC)中的表达,探讨其作为HCC特异性免疫治疗靶抗原的可能性。方法:利用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)方法,检测NY-SAR-35、NY-TLU-57和NY-ESO-1基因在63例HCC组织、56例HCC癌旁组织和4例正常肝组织中的表达,随机选择4例RT-PCR阳性产物直接进行DNA序列测定,并将其表达结果与临床病理指标进行统计学分析。结果:所检测的三种基因在4例正常肝组织中无表达;在63例HCC组织中,NY-SAR-35表达率为38.1%(24/63),NY-TLU-57为4.8%(3/63),NY-ESO-1为23.8%(15/63);在56例HCC癌旁组织中,NY-TLU-57和NY-ESO-1无表达,NY-SAR-35的表达率为26.8%(15/56)。基因表达与临床病理指标关系的分析显示,这三种癌-睾丸抗原的表达均与所分析的临床病理指标无关(P>0.05)。结论:癌-睾丸抗原NY-SAR-35、NY-TLU-57和NY-ESO-1基因可特异性的表达于HCC中,其中NY-SAR-35、NY-ESO-1具有一定的表达频率,提示它们有可能作为HCC特异性免疫治疗的靶抗原。     

p73基因在食管癌中的转录表达及其意义

目的：检测p73 mRNA在食管癌中的表达情况，探讨p73基因在食管癌发生、发展中的角色和作用机制。方法：采用逆转录多聚酶链反应技术（RT－PCR）检测37例食管鳞状细胞癌肿瘤组织、癌旁组织、区域淋巴结和相应正常食管组织中p73 mRNA的转录表达，并探其与食管癌临床病理特性的关系。结果：37例食管肿瘤组织中有21例（15．8％）p73 mRNA过度表达，其过度表达率显著高于相应的癌旁组织、区域淋巴结和正常组织（P＜0．05），但与食管癌TNM分期、细胞分化程度和病理类型均无明显关系（P＞0．05）。结论：食管肿瘤组织中存在p73基因的过度转录表达，可能参与了调控食管癌的发生过程，它的存在并没有阻止食管癌的进展，在食管癌中可能没有担当起主要的抑癌作用。     

11种癌-睾丸抗原基因在食管癌中表达的检测

目的 研究11种癌-睾丸（CT）抗原基因在食管癌中的表达,明确食管癌辅助免疫治疗疫苗的组成成分,为食管癌肿瘤疫苗的研制提供理论依据。方法 用逆转录-聚合酶链反应法（RT-PCR）检测35例食管癌肿瘤组织以及相对应的癌旁正常食管黏膜组织中11种CT抗原基因的表达。结果 所检测的11种CT抗原基因在正常食管黏膜中均无表达。在食管癌组织中表达率最高的为MAGE-3（62．9％）;其次为MAGE-4（31．4％）、LAGE-1（28．6％）、MAGE-1（25．7％）、CT10（20．0％）、NY-ESO-1（20．0％）、CT7（5．7％）和SCP-1（2．9％）,无一例食管癌组织表达SSX-1、SSX-2、SSX-4基因。在35例食管癌组织中,28例（80．0％）表达至少1种CT基因,21例（60．0％）表达2种以上的CT基因。其中,19．0％（4／21）同时表达4种及4种以上CT基因,占总数的11．4％（4／35）。不表达任何CT基因的7例中,Ⅱ期5例,Ⅰ期和Ⅳ期各1例。NY-ESO-1、LAGE-1、MAGE-1、MAGE-3和MAGE-4基因随肿瘤进展,其表达率增加;而SCP-1和CT10的表达主要集中在较早期的Ⅰ期及Ⅱ期食管癌组织。随着肿瘤分期的提高,CT基因的共表达率呈上升趋势,在Ⅲ期时达到最高,为28．6％。结论 （1）包含MAGE-3、MAGE-4和LAGE-1等抗原成分的CT抗原疫苗可应用于食管癌患者的免疫治疗;（2）对不同病理分期的食管癌患者应采取含有不同CT抗原成分的疫苗;（3）SSX-1、SSX-2、SSX-4在食管癌组织中无表达,其具体机制有待进一步研究。     

p73蛋白在食管癌中的表达及其临床意义

目的：研究p73蛋白在食管癌中的表达及其临床意义。方法：采用Western bloting技术检测37例食管鳞状细胞癌肿瘤组织、癌旁组织、区域淋巴结和相应正常食管组织中p73蛋白的表达,并探讨与食管癌临床特征的关系。结果：37例食管肿瘤组织中有18例（48．6％）p73蛋白过度表达,其阳性表达率显著高于相应的癌旁组织、区域淋巴结和正常组织（P＜0．05）,并与食管癌TNM分期、细胞分化程度和病理类型均无明显关系（P＞0．05）。结论：p73蛋白在食管肿瘤组织中呈高水平阳性检出率,p73蛋白可能参与了调控食管癌的发展过程。     

食管鳞癌中CAV-1基因的表达及甲基化状态

背景与目的：作为重要的表观遗传学现象之一,DNA甲基化对基因表达发挥着重要的调控功能。研究表明肿瘤细胞基因组正常DNA甲基化模式异常改变所导致的肿瘤相关基因功能异常可能参与肿瘤发生与发展。本研究通过检测食管鳞状细胞癌(esophageal squamous cell carcinomas,ESCC)组织中质膜微囊蛋白-1(caveolin-1,CAV-1)基因的表达及甲基化状态,探讨CAV-1基因在食管鳞癌发生及发展中的作用。方法：分别应用甲基化特异性PCR(MSP)、RT-PCR法、免疫组织化学SP法检测食管癌及相应癌旁正常黏膜组织标本中CAV-1基因甲基化状态、mRNA及蛋白表达情况。结果：CAV-1 mRNA在食管癌和癌旁正常组织中的表达量分别为0.86±0.56和0.40±0.36,食管癌组织中CAV-1 mRNA表达量明显高于癌旁正常组织,2者差异有统计学意义(P<0.05)。CAV-1 mRNA表达与患者的淋巴结转移及肿瘤组织学分级有关(P<0.05);食管鳞癌组织中,CAV-1蛋白表达阳性率为66.7%(34/51);显著高于正常食管黏膜组织(15.7%,8/51)(P<0.01)。CAV-1蛋白表达与患者的淋巴结转移有关(P<0.05),而与肿瘤的临床分期和分化程度无关(P>0.05)。51例食管癌组织中1例发生了基因启动子区甲基化,甲基化率为2.0%(1/51);而相应癌旁正常黏膜组织中未发现有该基因的甲基化现象。食管癌组织中该基因的甲基化率与相应癌旁正常组织相比,差异无统计学意义(P>0.05)。结论：CAV-1基因在食管鳞癌组织中mRNA及蛋白表达均明显高于癌旁正常黏膜组织,该基因的高表达对于肿瘤的发生及淋巴结的转移起到了一定的促进作用;癌及癌旁组织中该基因的表达异常均与该基因的甲基化状态无关。     

黑色素瘤抗原基因在胃癌组织中表达的研究

目的：探讨黑色素瘤抗原(MAGE)基因在胃癌组织中的表达，为应用MAGE基因产物对胃癌患者进行特异性抗肿瘤免疫治疗提供理论依据。方法：用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)技术检测30例胃癌组织及相应癌旁组织中MAGE-1、MAGE-2和MAGE-3基因的表达。结果：30例胃癌组织标本MAGE-1、MAGE-2和MAGE-3基因的表达率分别为46．7％、30．0％，和36．7％，有20例至少表达其中1种基因，而相应的癌旁组织均不表达MAGE。结论：MAGE基因在胃癌组织中有较高的表达率，其编码蛋白有望作为疫苗用于胃癌患者的免疫治疗。     

D10-86 cDNA片段在人食管癌中的表达

目的：D10－86 cDNA片段是通过mRNA差异显示技术分离的在食管癌中低表达的cDNA片段。由于mRNA差异显示技术具有较高的假阳性，故需进一步鉴定其在食管癌中的表达情况。方法：采用RT－PCR方法检测了41对食管癌组织及配对食管癌旁粘膜和食管癌细胞系EC9706和肺癌细胞系GLC82中D10－86 cDNA片段的表达。结果：D10－86 cDNA片段在41．5％（17／41）食管癌组织中的表达明显低于相应的癌旁粘膜，未检测到表达和微弱表达的分别为9．8％（4／41）和31．7％（13／41），食管癌组织中的表达高于相应的癌旁粘膜7．3％（3／41），表达无差别的51．2％（21／41）；在食管癌细胞系EC9706和肺腺癌细胞系GLC82未检测到表达；D10－86 cDNA片段表达下调与食管癌临床病理因素无显著相关性（P＞0．05）。结论：D10－86 cDNA片段在人食管癌中表达下调。     

食管癌中DNA修复基因MGMT启动子区CpG岛过甲基化研究

目的：探索O~0-甲基鸟嘌呤-DNA甲基转移酶(O~6-methylguanine-DNA methyltransferase,MGMT)基因启动子区过甲基化状态与食管癌的关系。方法：采用甲基化特异性聚合酶链反应(methylation-specific PCR,MSP)分析食管癌、癌旁和正常食管黏膜细胞中MGMT基因启动子区过甲基化状态。用免疫组织化学SP法检测上述组织中MGMT蛋白表达情况。结果：76例食管癌组织中有26例(34.2%)MGMT基因启动子过甲基化,相应的癌旁组织中有8例发生甲基化,而正常食管黏膜细胞中均无甲基化。所有甲基化的癌组织中均无MGMT蛋白表达,而所有非甲基化的癌组织、相应癌旁组织和8例正常组织中均有MGMT蛋白表达。结论：MGMT基因启动子区过甲基化而使其蛋白表达缺失,可能是食管癌发生的重要因素。     

肺癌相关基因HLCDG1的克隆和表达分析

背景与目的：比较基因组杂交和微卫星多态性位点全基因组扫描结果显示肺癌患者在染色体3p、5q、6q、9p、10q、llp、13q、17p、19p等区域存在高频率的杂合性缺失,提示可能有多个未知的易感基因或抑癌基因与肺癌的发生、发展相关。本研究选用在mRNA差异显示研究中获得的在肺癌组织中表达下调且代表新基因的表达序列标签(expressed sequence tag,EST)LXDDl为进一步研究对象,克隆其全长cDNA。方法：采用Northern杂交验证LXDDl在肺癌中的表达差异。并用MTN(Multiple Tissue Northern Blots^TM)膜检测其在正常组织中的表达及其所代表基因的转录本大小;克隆其全长cDNA,并利用生物信息学对该序列进行初步分析;用差异RT-PCR检测新基因在肺癌组织、配对癌旁非癌组织、肺癌细胞系和其它肿瘤细胞系中的表达。结果：成功地克隆了一个在肺癌中表达下调的新基因。HLCDGl(human lung carcinoma deleted gene 1),GenBank登录号为AF447582,全长cDNA为3．113kb,预测其开放阅读框编码一个含166个氨基酸的跨膜蛋白质。通过电子-聚合酶链反应(electric-polymerase chain reaction,e-PCR)将该基因定位于5q33。结论：HLCDGl基因是一个在肺癌中表达下调的新基因。这提示HLCDGl可能与肺癌的发生、发展相关。     

基因芯片筛选食管鳞癌患者癌及癌旁组织差异表达基因

 目的 探讨食管鳞癌（ESCC）患者癌组织基因表达谱。 方法 取3例无ESCC家族史的癌及癌旁组织等量混合,抽提RNA,将RNA逆转录合成相应cDNA,以Cy5和Cy3标记cDNA作为探针,在含 有14 000点人类基因组芯片(BiostarH-140s)上进行杂交。用Scanarray 4000扫描仪扫描芯片荧光信号图像,用GenePix Pro 3.0软件对扫描图像进行数字化处理和分析。 结果依Ratio(cy5/cy3)>2.0或<0.5的数据项为差异表达的基因共1 855个。含表达序列标签(EST)844个,下调基因378个,上调基 因466个。在1 011个已知功能的基因中,下调基因560个,上调基因451个。包含各类功能基因。同时与6例具有家族史ESCC组织差异基因进行了初步分析。经与NCBI基因库比对,有8个基因相同,且异常表达这与报道相符。 结论 基因芯片是一高效筛选食管癌相关基因的方法。在ESCC的发生、发展中存在着大量异常表达基因。     

癌-睾丸抗原NY-ESO-1在食管鳞状细胞癌中的表达及其意义

目的 检测NY-ESO-1蛋白在食管鳞癌中的表达,分析其与肿瘤临床病理参数的关系以及NY-ESO-1蛋白在晚期食管鳞癌免疫治疗中的意义.方法 选取113例中晚期食管鳞癌标本构建组织芯片,应用免疫组化EnVision二步法,检测NY-ESO-1蛋白的表达,SPSS统计软件分析所得数据.结果 109例有效标本中,有32例NY-ESO-1阳性(29.4%),阳性部位在细胞浆,10例正常食管黏膜中无-例表达NY-ESO-1蛋白.NY-ESO-1蛋白的表达主要集中在肿瘤细胞分化较好的Ⅰ级和Ⅱ级食管鳞癌,阳性率有显著性差异(P＜0.01),与肿瘤的大小,浸润深度及有无淋巴结转移无关(P＞0.05).结论 NY-ESO-1是目前已知的免疫原性最强肿瘤抗原,可诱导自发的体液免疫和细胞免疫反应,其在晚期食管鳞癌中的表达提示NY-ESO-1可作为食管癌的免疫治疗的靶点.     

MAL基因在人食管癌中表达显著下调

研究ＭＡＬ基因在人食管癌中的表达下调状况。方法采用Ｎｏｒｔｈｅｒｎ杂交和ＲＴ－ＰＣＲ方法检测了ＭＡＬ基因在４１对配对的食管癌组织和相应癌旁食管粘膜中的表达;应用ＰＣＲ和ＲＴ－ＰＣＲ方法分析了ＭＡＬ基因在３个食管癌细胞系ＥＣ１０９、ＥＣ８７１２和ＥＣ９７０６中的存在及其表达。     

食管鳞癌中癌-睾丸抗原NY-ESO-1及MAGE-1的表达

目的研究NY-ESO-1及MAGE-1蛋白在食管鳞癌中的表达，分析其与肿瘤临床病理参数的关系，为食管癌的免疫治疗提供理论依据。方法构建组织芯片并结合免疫组化的方法，检测NY-ESO-1及MAGE-1蛋白在113例食管鳞癌及10例正常食管黏膜中的表达。结果10例正常食管黏膜均不表达NY-ESO-1及MAGE-1蛋白，而其在食管鳞癌组织芯片109例有效标本中的阳性率分别为29.4%和37.4%（32/109，41/109），阳性部位均位于细胞质。其中，59例至少表达1种CT抗原，占总数的54.1%（59/109），13例同时表达2种CT抗原，占11.9%（13/109）；NY-ESO-1及MAGE-1蛋白的表达主要集中在肿瘤细胞分化较好的I级和II级食管鳞癌，阳性率有显著性差异（P〈0.01），与肿瘤的大小，浸润深度及有无淋巴结转移无关（P〉0.05）。结论NY-ESO-1及MAGE-1可作为食管癌免疫治疗的靶标之一，含有CT抗原的疫苗可用于食管癌患者的免疫治疗。     

NY-ESO-1 expression and its serum immunoreactivity in esophageal cancer

Purpose NY-ESO-1, a member of the cancer/testis antigen (CTA) family, elicits humoral and cellular immune responses in patients with advanced cancer. Unresectable or metastatic esophageal carcinoma patients do not benefit from the present multimodality treatment regimens in terms of survival. The objectives of this study were to analyze the antibody response to NY-ESO-1 antigen in patients with esophageal cancer and to determine the potential of NY-ESO-1 for use in tumor-specific immunotherapy.Methods Serum from 69 patients with esophageal cancer was investigated for antibody production against NY-ESO-1 by Western blot analysis. Also analyzed by immunohistochemistry were 56 tissue samples from these patients for NY-ESO-1 protein expression.Results NY-ESO-1 protein expression was found in 18 of 56 (32%) esophageal carcinomas. Serum immunoreactivity specific for NY-ESO-1 was found in 9 patients (13%) of whom 8 were in the advanced stage (stages III and IV). There was no relationship between clinicopathologic features and serum immunoreactivity for NY-ESO-1. NY-ESO-1 protein expression was detected in three of five antibody-positive patients whose tissue was available for analysis. Survival analysis showed no significant difference between antibody-positive and antibody-negative patient groups.Conclusions A humoral immune response to NY-ESO-1 antigen was established in patients with advanced esophageal cancer. NY-ESO-1 is a good candidate for vaccine-based immunotherapy for advanced esophageal carcinoma.     

NY-ESO-1蛋白在喉鳞状细胞癌中表达的意义

 目的　检测NY-ESO-1蛋白在喉鳞癌中的表达情况,探讨其作为喉癌免疫治疗靶标的实验依据及其与喉癌生物学行为的关系。方法　免疫组织化学PV-9000两步法检测69例喉鳞癌患者原发灶及其常规病理报告为阳性的121个颈淋巴结中NY-ESO-1的表达,同时采用Western blotting方法检测其在喉鳞癌标本的癌中心区、癌周0.5、1.0 cm及9例全喉切除术患者的喉正常黏膜组织（对照）中的表达。结果　69例喉鳞癌组织中,NY-ESO-1蛋白表达阳性率为43.48 %（30／69）,在癌中心区、癌周0.5、1.0 cm中的表达逐渐下降（P＜0.05）,NY-ESO-1在对照组喉正常黏膜组织中无表达。NY-ESO-1蛋白在不同T分级、病理分级和不同颈淋巴结转移喉癌中的表达率差异无统计学意义（P＞0.05）,颈转移淋巴结中NY-ESO-1的表达下调。结论　NY-ESO-1在喉鳞癌患者中特异性高表达,可能以某种方式参与了喉癌的发生、发展,是否能将其作为喉癌免疫治疗靶标有待深入研究。