疏肝法对小鼠卵母细胞质量的作用与BMP15/Smads信号通路的关系

目的研究疏肝法对小鼠卵母细胞中BMP-15、BMPRII、ALK6、Smad1/5/8表达的影响,进一步揭示疏肝法提高控制性超排卵小鼠卵母细胞质量的作用机制。方法将200只雌性昆明小鼠随机分为四组:空白对照组、COH组、疏肝低剂量组和疏肝高剂量组,每组50只。按1ml/100g体重进行灌胃,空白对照组及COH组使用蒸馏水灌胃,疏肝低剂量组和高剂量组分别使用逍遥丸0.3g/ml、0.6g/ml灌胃,每日1次,连续10天,第11日疏肝低、高剂量组及COH组均腹腔注射孕马血清促性腺激素,48h后均腹腔注射人绒毛膜促性腺激素,16h后处死小鼠,获取MⅡ期卵母细胞,检测BMP-15、BMPRII、ALK6、Smad1/5/8蛋白及mRNA表达。结果与空白对照组比较,COH组BMP-15、BMPRII、ALK6、Smad1/5/8蛋白及mRNA表达无统计学意义(P0.05);疏肝低、高剂量组BMP-15、ALK6、Smad1/5/8蛋白及mRNA表达增强(P0.05);疏肝高剂量组BMPRII蛋白及mRNA表达增强(P0.05)。结论疏肝法可上调小鼠卵母细胞中BMP-15的表达,诱导其与Ⅱ型受体BMPRⅡ结合,进一步活化ALK6,从而启动信号传导,发挥影响小鼠卵母细胞质量的作用。     

逍遥丸对小鼠卵母细胞BMP-6/Smads通路表达的影响

目的:观察逍遥丸对小鼠卵母细胞BMP-6、BMPR II、ALK-2、ALK-6、Smad1、Smad5、Smad8和Smad4表达的影响。方法:将200只雌性小鼠按随机数字表法分为疏肝高、低剂量组、COH组和空白对照组4组各50只。应用免疫组化和real-time PCR方法分别测定卵母细胞中BMP-6、BMPR II、ALK-2、ALK-6、Smad1、Smad5、Smad8和Smad4蛋白和mRNA的表达。结果:与空白对照组比较,COH组BMP-6、BMPR II、ALK-2、ALK-6、Smad1、Smad5、Smad8和Smad4蛋白和mRNA表达差异无统计学意义,各治疗组BMP-6、ALK-2、ALK-6、Smad1、Smad5、Smad8和Smad4蛋白和mRNA表达增加,疏肝高剂量组优于低剂量组;疏肝高剂量组BMPR II蛋白和mRNA表达增加。结论:逍遥丸可使BMP-6表达上调,激活其Ⅱ型受体BMPRⅡ形成受体复合物,然后募集Ⅰ型受体ALK-2和ALK-6使其活化,活化的Ⅰ型受体进一步磷酸化细胞内信号Smad1/5/8,然后与Smad4结合,从而启动信号传导干预卵泡发育和卵母细胞的质量。     

逍遥丸含药血清对体外生长小鼠腔前卵泡卵母细胞中Smads表达的影响

目的探讨逍遥丸提高体外卵母细胞质量的可能作用机制。方法分离58只昆明小鼠腔前卵泡,分别以10%正常大鼠血清,10%逍遥丸低、中、高剂量大鼠含药血清,10%逍遥丸高剂量大鼠含药血清+10μmol/L K02288孵育,设为对照组,疏肝低、中、高剂量组,抑制剂组,培养6天。实时荧光定量PCR法检测卵母细胞中Smad1、Smad5、Smad8 mRNA表达,细胞免疫荧光检测Smad1、Smad5、Smad8和磷酸化的Smad1/5/8(p-Smad1/5/8)蛋白表达。结果疏肝高剂量组Smad1 mRNA和蛋白高于对照组(P0.05);疏肝各剂量组Smad5、Smad8 mRNA和蛋白及p-Smad1/5/8蛋白均高于对照组(P0.05),其中疏肝高、中剂量组Smad5 mRNA和蛋白比较差异无统计学意义(P0.05),均高于低剂量组(P0.05),Smad8 mRNA和蛋白及p-Smad1/5/8蛋白以疏肝高剂量组最高(P0.05);抑制剂组p-Smad1/5/8蛋白低于疏肝高剂量组(P0.05)。结论逍遥丸提高体外卵母细胞质量的作用可能与上调卵母细胞中Smad1、Smad5、Smad8 mRNA和蛋白及p-Smad1/5/8蛋白表达有关,以高剂量组效果更佳。     

补肾法、疏肝法对超促排卵小鼠卵母细胞数量及GDF-9表达的影响

目的 观察补肾法、疏肝法对超促排卵小鼠卵母细胞数量及质量的影响.方法 将90只雌性昆明小鼠随机分为对照组、正常组、补肾高剂量组、补肾低剂量组、疏肝高剂量组、疏肝低剂量组各15只,补肾高、低剂量组分别给予补肾调经方精制口服液5.4、2.7 g/ml,疏肝高、低剂量组分别给予逍遥丸混悬液0.6、0.3 g/ml,对照组和正常组用蒸馏水灌胃,各组小鼠按均1 ml/1009体重灌胃,连续10d.第11日除正常组外其余各组小鼠腹腔注射孕马血清促性腺激素,48h后腹腔注射人绒毛膜促性腺激素,16h后测定各组小鼠血清中雌二醇(E2)、促黄体生成激素(LH)和促卵泡生成激素(FSH)的水平,比较各组排卵数、优质卵泡数,检测卵母细胞中生长分化因子-9(GDF-9)蛋白和GDF-9 mRNA的表达. 结果 各给药组FSH、LH、E2表达和GDF-9蛋白及其mRNA显著高于对照组(P＜0.05);并且补肾高剂量组和疏肝高剂量组均显著高于补肾低剂量组和疏肝低剂量组(P＜0.05).各给药组优质卵泡数均高于对照组(P＜0.05).对照组及各给药组排卵数较正常组显著增加(P＜0.05). 结论 补肾法、疏肝法可增加小鼠卵母细胞数量、提高优质卵泡率、促进卵子排出,其作用机制可能与调控卵母细胞GDF-9表达相关.     

补肾助孕方、逍遥丸对超促排卵小鼠围着床期妊娠结局和子宫内膜容受性的影响

目的研究补肾助孕方、逍遥丸对超促排卵小鼠妊娠结局和子宫内膜容受性的影响及可能作用机制。方法将240只动情周期正常的昆明系雌性小鼠随机分为正常组、模型组、补肾组、疏肝组,每组各60只。除正常组,其余各组小鼠建立控制性超促排卵模型。造模第1天始补肾组、疏肝组分别给予补肾助孕方混悬液(浓度1.5 g/mL)和逍遥丸混悬液(浓度0. 09 g/mL),均0.4 mL/(30 g·d)灌胃,模型组及正常组给予同等剂量蒸馏水灌胃,连续11天。比较各组小鼠围着床期血清雌二醇(E_2)、孕酮(P)、NO含量及子宫内膜雌激素受体(ER)、孕激素受体(PR)、血管内皮生长因子(VEGF)、内皮型一氧化氮合酶(eNOS)蛋白及其mRNA表达,测量子宫内膜厚度,观察小鼠内膜胞饮突表达,统计各组小鼠妊娠数、胚胎着床数。结果与正常组比较,模型组小鼠妊娠数、胚胎着床数减少(P0.05),同时模型组血清E_2、P降低,子宫内膜ER、PR蛋白,VEGF、eNOS蛋白及其mRNA表达,子宫组织匀浆内NO含量均降低(P0.05),子宫内膜厚度变薄,胞饮突发育不良;与模型组比较,补肾组、疏肝组小鼠妊娠数及胚胎着床数增加,血清E_2、P含量及子宫内膜ER、PR蛋白,VEGF、eNOS蛋白及其mRNA表达,子宫组织匀浆内NO含量均升高(P0.05),子宫内膜厚度增加,胞饮突发育接近正常组。结论补肾法、疏肝法均能够增加超促排卵小鼠妊娠率及胚胎着床数,其作用机制可能与调节雌、孕激素水平及其受体,影响VEGF、eNOS表达,调控NO释放,改善小鼠子宫内膜组织形态及血管通透性有关。     

五子衍宗丸对GnRHa控制性超促排卵小鼠着床期S100A11基因的调控

目的:研究中药五子衍宗丸对GnRHa长方案控制性超促排卵(COH)小鼠着床期S100A11表达的影响,探讨COH影响胚胎着床的机制,寻求有效改善COH低妊娠率的中药方剂。方法:将60只小鼠随机分成3组:模型组(GnRHa+HMG+HCG),中药组(五子衍宗丸+GnRHa+HMG+HCG),对照组(生理盐水)。观察小鼠阴栓率和着床期子宫胚胎着床数及着床率;应用免疫组化法、RT-PCR和Western blot方法分别检测小鼠着床期子宫内膜S100A11 mRNA及蛋白的表达。结果:模型组胚胎着床数高于对照组和中药组(P0.01),但胚胎着床率和妊娠率均明显降低(P0.05)。模型组着床期子宫内膜S100A11mRNA及蛋白表达下降,与对照组和中药组比较均有明显差异(P0.05)。结论:中药五子衍宗丸可上调因GnRHa长方案COH所致下降的S100A11基因的表达,提高子宫内膜容受性,改善小鼠妊娠率和胚胎着床率。     

疏肝补肾法对慢性应激模型小鼠子宫内膜容受性的调节及作用研究

目的:研究疏肝补肾中药对于慢性应激模型小鼠子宫内膜容受性的调节及作用机制。方法:将60只SPF级6周龄KM雌性未孕小鼠随机分为4组,每组小鼠数量为15只,即空白对照组(空白组)、应激模型组(模型组)、阳性对照组(逍遥丸组)、中药观察组,除空白组外其余各组均接受21d应激刺激,在刺激期间各组分别灌药,造模成功后各组小鼠按雌雄2∶1合笼,仍接受慢性应激刺激,并给予孕后方药继续灌胃至见栓第5d。观察各组小鼠行为学指标、见栓率、着床数以及子宫内膜VEGF、LIF的表达水平。结果:各组间中央格停留时间、水平穿格数、直立次数、悬尾静止时间均具有统计学差异(P0.05);经进一步两两对比,各组间各项行为学指标均具有统计学差异(P0.05)。各组间见栓率具有统计学差异(P0.05),进一步对比观察组与空白组、模型组与阳性对照组间见栓率无统计学差异(P0.05);其余各组间均具有统计学差异(P0.05);观察组胚胎着床数高于其它各组,各组间胚胎着床数两两对比均具有统计学差异(P0.05)。各组子宫内膜VEGF、LIF表达水平均具有统计学差异(P0.05)。结论:疏肝补肾法能够有效改善慢性应激小鼠子宫内膜容受性,从而提高妊娠成功率,其作用较单纯应用逍遥丸治疗更为理想。     

四妙散对尿酸诱导人肾小管上皮细胞结缔组织生长因子及骨形成蛋白-7表达的影响

目的探讨四妙散药物血清防治肾间质纤维化的作用机制。方法将人肾小管上皮细胞(HK-2)分为空白组、模型组、对照组及药物血清高、中、低剂量组。实时荧光定量PCR检测结缔组织生长因子(CTGF)、骨形成蛋白-7(BMP-7),免疫组织化学检测CTGF、BMP-7蛋白的表达。结果尿酸诱导后CTGF的m RNA和蛋白表达量明显增加(P0.05),BMP-7的m RNA和蛋白表达量明显降低(P0.05);经药物血清干预后,随剂量增加CTGF的表达逐步下降(P0.05),BMP-7的表达逐步上升(P0.05),呈现一定剂量依赖性。结论四妙散抗肾间质纤维化的机制可能是通过下调CTGF的表达和上调BMP-7的表达抑制上皮细胞转分化完成的。     

电针对控制性超排卵小鼠子宫内膜IGF-1的影响

目的观察子宫内膜IGF-1在电针改善控制性超排卵(COH)小鼠妊娠率中的作用。方法将昆明纯种性成熟雌性小鼠随机分成自然周期组、COH组和电针组,每组又分为供体鼠和受体鼠,每组20只。采用控制性超促排长方案制备动物模型,并行胚胎移植,于HCG注射日行电针治疗,观察临床妊娠率和胚胎着床位点数,并采用Western blot和RTPCR检测子宫内膜IGF-1蛋白及其mRNA表达。结果 COH组妊娠率、平均着床位点数和子宫内膜IGF-1蛋白及其mRNA表达显著低于自然周期组(P0.01);电针治疗后,表达增加,且妊娠率、平均着床位点数显著提高(P0.05)。结论在IVF-ET治疗不孕症过程中,配合针刺可促进子宫内膜分泌IGF-1,从而提高临床妊娠率。     

骨碎补总黄酮对悬尾实验性骨质疏松模型大鼠骨密度及BMP-2mRNA的影响

目的:探讨骨碎补总黄酮对悬尾实验性骨质疏松模型大鼠骨密度(BMD)及骨形成蛋白(BMP-2mRNA的影响。方法:将48只6个月龄SD大鼠随机分为中药组、西药组、阴性对照组和空白对照组,每组12只。中药组予悬尾、骨碎补总黄酮灌胃(6.75 mg/mL);西药组予悬尾、阿仑膦酸钠灌胃(0.09 mg/mL);阴性对照组予悬尾、饮用水灌胃(1 mL/100g);空白对照组自由活动,持续灌胃28 d。采用双能X线检测大鼠的BMD,采用RT-PCR法检测骨组织BMP-2 mRNA表达情况。结果:中药组、西药组、阴性对照组大鼠骨密度及BMP-2 mRNA表达均低于空白对照组,差异均有统计学意义(P0.05);中药组和西药组大鼠骨密度及BMP-2 mRNA表达高于阴性对照组,差异均有统计学意义(P0.05);中药组与西药组比较,差异无统计学意义(P0.05)。结论:骨碎补总黄酮能上调悬尾实验性骨质疏松模型大鼠BMP-2m RNA的表达,提高大鼠骨密度。     

不同剂量骨碎补总黄酮对大鼠Masquelet技术诱导膜中BMP-2和VEGF表达的影响

目的:观察不同剂量的骨碎补总黄酮对大鼠Masquelet技术诱导膜中骨形成蛋白-2(Bone Morphogenetic Protein,BMP-2)和血管内皮生长因子(Vascular Endothelial Growth Factor,VEGF)表达的影响。方法:选取48只3月龄SD大鼠,雌雄不限,按随机数字表法分为4组:空白对照组、低剂量组、中剂量组及高剂量组,每组12只。所有大鼠均建立左侧胫骨长段骨缺损模型,并予以抗生素骨水泥填塞。术后低、中、高剂量组分别给予骨碎补总黄酮67.5,202.5和607.5mg/(kg·d)灌胃,空白对照组给予等量蒸馏水灌胃,连续灌胃6周后取出骨水泥,切取诱导膜,检测诱导膜中BMP-2和VEGF的表达情况。结果:灌胃6周后,各组BMP-2和VEGF表达组间比较,差异有统计学意义(P<0.05);各组两两比较,低、中、高剂量组BMP-2和VEGF表达均显著高于空白对照组,且高剂量组表达最明显,中剂量组次之,低剂量组再次之,呈剂量依赖关系,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论:不同剂量的骨碎补总黄酮均可促进大鼠Masquelet技术诱导膜中BMP-2和VEGF的表达,且呈剂量依赖关系,高剂量组最明显。     

寿胎丸对控制性超促排卵小鼠围着床期子宫内膜血管生成及let-7f和TSP-1表达的影响

目的 研究寿胎丸对控制性超促排卵(COH)模型小鼠着床胚胎数、内膜容受性、微血管密度、microRNA let-7f及其靶标蛋白TSP-1表达的影响。方法 60只ICR雌鼠随机分为3组：空白对照组、COH模型组和寿胎丸干预组，每组20只。寿胎丸干预组每日给予寿胎丸灌胃，即空白对照组和COH模型组每日给予生理盐水灌胃。灌胃3个动情周期，在第3个动情周期的动情后期，模型组与寿胎丸干预组建立COH模型(曲普瑞林+HMG+HCG)。HCG注射后，按雌雄比例2:1合笼，合笼后第4天和第6天，每组各处死10只小鼠，HE染色观察子宫内膜形态、厚度，免疫组化染色检测子宫内膜微血管密度，RT-PCR检测容受性标记因子HOXA10、LIF及let-7f的表达量，RT-PCR和Western blot检测TSP-1 mRNA及蛋白表达量。合笼后第8天，每组各处死5只小鼠，计算植入胚胎数。结果 寿胎丸干预显著提高COH模型组小鼠植入胚胎数(P<0.05);与空白对照组相比，COH模型组小鼠内膜厚度、腺体面积、微血管密度、容受性标记因子HOXA10及LIF mRNA表达水平显著降低(P<0.05),...     

健肾助孕方对着床障碍小鼠雌孕激素及子宫HOXA10表达的影响

目的:观察健肾助孕方对着床障碍小鼠血清雌孕激素浓度和子宫HOXA10表达的影响。方法:将30只孕鼠随机分为模型组3只、健肾助孕方低剂量组6只、健肾助孕方高剂量组6只、黄体酮组7只和正常对照组8只。从妊娠第1天开始,模型组、正常对照组每日给予生理盐水0.2 m L·只-1灌胃,黄体酮组皮下注射黄体酮溶液0.1 m L·只-1,健肾助孕方低剂量组、高剂量组每日灌胃0.2 m L·只-1。妊娠第4天皮下注射米非司酮诱导着床障碍小鼠模型。妊娠第8天处死小鼠,ELISA法检测血清中雌孕激素浓度,免疫组织化学法和Western blot法对子宫中HOXA10的表达和蛋白含量进行检测。结果:健肾助孕方低剂量组、高剂量组血清雌孕激素浓度较模型组明显升高,差异有统计学意义(P0.05)。健肾助孕方高剂量组、黄体酮组子宫中HOXA10的表达显著增多,与模型组比较,差异有统计学意义(P0.05);健肾助孕方低剂量组、高剂量组、黄体酮组子宫中HOXA10的蛋白含量明显高于模型组,差异有统计学意义(P0.05)。结论:健肾助孕方可以升调着床障碍小鼠血清雌孕激素水平,提高子宫中HOXA10的表达量,从而改善着床障碍小鼠的子宫内膜容受性,促进胚胎着床。     

补肾舒脊颗粒对人骨髓间充质干细胞BMP-4、Smad-4 mRNA及蛋白表达的影响

目的研究补肾舒脊颗粒对人骨髓间充质干细胞骨形态发生蛋白(BMP)通路BMP-4、Smad-4mRNA及蛋白表达的影响。方法体外培养人骨髓间充质干细胞,并将其分为空白组、西药组、模型组、中药高剂量组、中药中剂量组、中药低剂量组,向成骨细胞诱导,干预28天后提取mRNA及蛋白,通过逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)和免疫印迹试验(Western blot)检测BMP-4、Smad-4 mRNA及其蛋白的表达。结果(1)RT-PCR结果发现,与模型组比较,中药低剂量组BMP-4 mRNA表达水平降低(P0.05),中药中、高剂量组BMP-4、Smad-4 mRNA表达水平降低(P0.05)。与西药组比较,中药低、中、高各剂量组BMP-4、Smad-4 mRNA水平均降低(P0.05)。与中药低剂量组比较,中药中剂量组BMP-4 mRNA表达水平降低(P0.05),中药高剂量组BMP-4、Smad-4 mRNA表达水平降低(P0.05)。(2)Western blot结果发现,与空白组比较,模型组BMP-4蛋白表达降低(P0.05);与模型组比较,西药组、中药低、中剂量组BMP-4、Smad-4蛋白表达均降低(P0.05);与西药组比较,中药中剂量组BMP-4、Smad-4蛋白表达水平降低(P0.05)。结论补肾舒脊颗粒可能通过BMP通路抑制BMP-4及Smad-4的表达,从而起到延缓强直性脊柱炎异位骨化的作用。其中中药低剂量组可以降低BMP-4表达水平,而中、高剂量组可以降低BMP-4、Smad-4表达水平。     

从PTEN-PI3K-AKT信号通路探讨补肾疏肝方含药血清抑制人肺腺癌A549细胞增殖和转移的机制

目的:通过研究补肾疏肝方含药血清对PTEN-PI3K-AKT信号通路的影响,探讨补肾疏肝方抑制肺腺癌细胞增殖和转移作用机制。方法:大鼠60只,随机分为6组,每组10只,分别为生理盐水组(NS为2 m L),顺铂组(8 mg·kg-1),补肾疏肝方低剂量组(15 g·kg-1),补肾疏肝方高剂量组(30 g·kg-1),联合顺铂低剂量组(15 g·kg-1+8 mg·kg-1),联合顺铂高剂量组(30 g·kg-1+8 mg·kg-1),每只大鼠ig,2 m L,每天2次,共5 d。制备药物血清:经药物作用后的大鼠,经腹主动取血,分离血清,灭活,过滤,冻存。MTT法检测补肾疏肝方含药血清对A549细胞增殖的影响。三维细胞培养观察并计数各组细胞形成管状结构数量。RT-PCR检测含药血清对A549肺腺癌细胞AKT-1,Cyclin D1,NF-κB mRNA水平的表达,Western blot检测含药血清对PTEN,p-PI3K,p-AKT蛋白水平的表达。结果:低剂量补肾疏肝方含药血清对A549细胞有抑制作用,低剂量中药与顺铂联用有协同作用且以时间依赖方式,即补肾疏肝方低剂量组与联合顺铂低剂量组在48,72,96 h的抑制率均高于其他组(P0.05,P0.01);补肾疏肝方低剂量组与联合顺铂低剂量组拟态血管数目均低于其他组(P0.05,P0.01);补肾疏肝方低剂量组与联合顺铂低剂量组PTEN蛋白表达均高于其他组(P0.05,P0.01),补肾疏肝方低剂量组与联合顺铂低剂量组p-PI3K,p-AKT蛋白,Akt1,Cyclin D1,NF-κB的mRNA表达均低于其他组(P0.05,P0.01)。结论:补肾疏肝方含药血清可通过PTEN-PI3K-AKT信号通路抑制人肺腺癌A549细胞增殖和转移。     

补肾调经方和逍遥丸对体外培养小鼠卵泡中ADAM8 及 ADAMTS-1 影响的比较

目的?探讨补肾调经方和逍遥丸对体外培养小鼠卵泡中去整合素-金属蛋白酶8（ADAM8）和Ⅰ型血小板结合蛋白基序的解聚蛋白样金属蛋白酶（ADAMTS-1）表达的影响。方法?机械法分离昆明乳鼠窦前卵泡，随机分为空白组、正常组、补肾组、疏肝组，空白组不加血清，正常组加入正常大鼠血清，体外培养12天；补肾组加入补肾调经Ⅱ号方高剂量大鼠含药血清，疏肝组加入逍遥丸高剂量大鼠含药血清体外培养11天。11天时补肾组和疏肝组分别改为补肾调经Ⅲ号方高剂量和逍遥丸低剂量大鼠含药血清体外培养1天。培养12天加入人绒毛膜促性腺激素（hCG）后0、8、12、16 h采用RT-PCR法检测各组卵泡和卵丘卵母细胞复合体（COCs）中ADAM8、ADAMTS-1 mRNA表达，细胞免疫荧光染色法比较各组ADAM8、ADAMTS-1蛋白表达。结果?加入hCG后0、8、12、16 h，各组ADAM8、ADAMTS-1 mRNA及蛋白的表达逐渐升高，各时间点空白组与正常组比较，差异无统计学意义（P>0.05）。与本组0、8 h比较，补肾组12、16 h ADAM8、ADAMTS-1 mRNA及蛋白表达升高（P<0.05）。与本组0 h比较，疏肝组8 h ADAM8、ADAMTS-1 mRNA及蛋白表达升高（P<0.05）。与空白组和正常组比较，补肾组与疏肝组8、12、16 h ADAM8、ADAMTS-1 mRNA及蛋白表达升高，8 h疏肝组高于补肾组，12 h补肾组高于疏肝组（均P<0.05）。补肾组ADAM8、ADAMTS-1 mRNA及蛋白的表达高峰高于疏肝组（P<0.05）。结论?补肾调经方和逍遥丸均可通过增强ADAM8和ADAMTS-1的蛋白溶解作用，使卵泡壁破裂而诱发排卵，补肾法诱发排卵的作用优于疏肝法。     

疏肝泻火方对雌性中枢性性早熟大鼠下丘脑KISS-1/G蛋白偶联受体54系统的影响

目的观察疏肝泻火方对雌性中枢性性早熟(CPP)大鼠下丘脑KISS-1 mRNA、G蛋白偶联受体54(GPR54)mRNA表达水平的影响,探讨该方对KISS-1/GPR54系统的作用。方法将60只SD雌性大鼠随机分为正常对照组、模型组、亮丙瑞林组及疏肝泻火高、中、低剂量组6组,每组10只。除正常对照组外,均采用N-甲基-DL-天冬氨酸(NMA)诱导建立CPP模型,正常对照组、模型组予0.9%氯化钠注射液1.0 m L/只灌胃,疏肝泻火方高、中、低剂量组分别予8.5、4.25、2.125 g/kg的疏肝泻火方灌胃,亮丙瑞林组予注射用亮丙瑞林微球100μg/kg肌肉注射,用实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time RT-PCR)检测各组大鼠下丘脑KISS-1 mRNA、GPR54 mRNA表达水平。结果各造模组KISS-1 mRNA、GPR54 mRNA相对表达量均高于正常对照组(P0.05)。亮丙瑞林组及疏肝泻火方高、中、低剂量组KISS-1 mRNA、GPR54 mRNA相对表达量均低于模型组(P0.05,P0.01)。疏肝泻火方高、中剂量组KISS-1 mRNA相对表达量与亮丙瑞林组比较差异无统计学意义(P0.05);疏肝泻火方低剂量组KISS-1 mRNA相对表达量高于亮丙瑞林组(P0.05);疏肝泻火方高、中、低剂量组组间KISS-1 mRNA相对表达量两两比较均差异无统计学意义(P0.05)。亮丙瑞林组及疏肝泻火方高、中、低剂量组GPR54 mRNA相对表达量两两比较差异均无统计学意义(P0.05)。结论通过下调下丘脑KISS-1 mRNA、GPR54 mRNA表达水平可能是疏肝泻火方治疗CPP的机制之一。     

补肾养血方药对气态甲醛慢性染毒小鼠子宫内膜容受性的影响

目的:探讨补肾养血方药对气态甲醛慢性染毒小鼠子宫内膜容受性的影响。方法:将30只性成熟SPF级雌性昆明种小鼠随机分为空白对照组、染毒组和中药治疗组,每组10只,空白对照组给予吸入经过滤的新鲜空气,染毒组和中药治疗组给予1.0 mg/m3浓度气态甲醛动态吸入式染毒,6 h/d,同时中药治疗组每日予补肾养血中药灌胃,空白对照组和染毒组予等量生理盐水灌胃,连续14 d;将小鼠雌雄(2:1)合笼处理,于孕5 d处死小鼠,取出子宫,计算子宫脏器系数,观察胚胎着床情况;用RT-PCR和Real-time PCR法检测各组小鼠子宫Hoxa10、Hoxa11 m RNA的表达。结果:染毒组小鼠子宫脏器系数、子宫Hoxa10、Hoxa11 m RNA表达均低于空白对照组,差异均有统计学意义(P0.05或P0.01),胚胎着床数低于空白对照组,但差异无统计学意义(P0.05)。中药治疗组小鼠子宫Hoxa10、Hoxa11 m RNA表达高于染毒组,差异均有统计学意义(P0.05或P0.01)。结论:补肾养血方药能使气态甲醛慢性染毒小鼠子宫Hoxa10、Hoxa11 m RNA表达升高,从而改善子宫内膜容受性。     

"痹痛方"对胶原诱导关节炎模型小鼠血清和关节组织中炎症因子表达的影响

目的:观察痹痛方对胶原诱导关节炎(CollagenInducedArthritis,CIA)模型小鼠血清和关节组织中炎症因子表达的影响,探讨痹痛方治疗类风湿关节炎的抗炎作用机制。方法:将50只DBA/1小鼠随机分为5组,每组10只,分别为空白对照组、模型组和痹痛方小、中、大剂量组。除空白对照组外,其余各组采用牛Ⅱ型胶原诱导关节炎小鼠模型。造模成功后,痹痛方小、中、大剂量组分别予痹痛方0.108、0.432、1.728g/kg灌胃,模型组和空白对照组灌胃等量生理盐水,每日1次,连续灌胃28d。末次灌胃后处死小鼠并取材,酶联免疫吸附试验(ELISA)检测小鼠血清中白介素-6(IL-6)、IL-10、IL-17、肿瘤坏死因子(TNF-α)的表达,实时荧光定量法(RT-PCR)检测小鼠关节组织中炎症因子IL-6、IL-10、IL-23和干扰素γ(IFN-γ)、干扰素γ受体1(IFN-γR1)、IFN-γR2m RNA的表达,免疫印迹分析法(WesternBlot)检测小鼠关节组织中IL-6和IL-10蛋白的表达,苏木精-伊红染色法(HE)观察关节组织形态变化,免疫组织化学法(IHC)检测小鼠关节中IL-6的表达。结果:干预结束后,模型组小鼠血清中IL-6、IL-17、TNF-α表达,关节组织中IL-6、IFN-γR1m RNA和IL-6蛋白表达均较空白对照组明显升高(P0.001,P0.01)。HE染色和IHC显示模型组小鼠关节腔界限不清晰,腔内狭窄,大量炎性细胞浸润,可见大量的IL-6阳性细胞表达。痹痛方各剂量组小鼠血清中IL-6水平,关节组织中IL-6、IL-10、IFN-γR1m RNA和IL-6蛋白表达均明显低于模型组(P0.05,P0.01,P0.001);痹痛方小剂量和大剂量组小鼠关节组织中IL-23m RNA表达明显低于模型组(P0.05);痹痛方小剂量和中剂量组小鼠关节组织中IL-10蛋白表达明显低于模型组(P0.05,P0.01)。病理结果示,痹痛方各剂量组小鼠关节炎症减轻,IL-6表达减少。痹痛方各剂量组之间比较,血清中IL-17、TNF-α,关节组织中IL-6、IL-10、IL-23、IFN-γR1m RNA和IL-6、IL-10蛋白的表达均有统计学差异(P0.05,P0.01,P0.001)。结论:痹痛方可减轻胶原诱导关节炎模型小鼠关节炎症,其可能的作用机制为抑制IL-6为主的炎症因子的表达,同时升高抑炎因子IL-10的表达。     

特制接骨丸对Masquelet技术中诱导膜成骨因子表达的影响

目的:观察特制接骨丸对Masquelet技术形成的诱导膜中VEGF、BMP-2、TGF-β1成骨因子表达的影响。方法:选取48只雄性SD大鼠,以随机数字表法分为空白对照组、低剂量组、中剂量组、高剂量组4组,每组12只。建立大鼠胫骨骨缺损模型,缺损处植入抗生素骨水泥,术后给予不同浓度的特制接骨丸灌胃。空白对照组给予等量蒸馏水,连续给药4周,取出诱导膜,测量VEGF、BMP-2、TGF-β1的表达。结果:高、中、低剂量组成骨因子表达均高于空白组,且P0.05,差异有统计学意义;高剂量组表达最明显、中剂量组次之、低剂量组再次之,且两两之间差异有统计学意义,P0.05。结论:特制接骨丸对Masquelet技术中VEGF、BMP-2、TGF-β1成骨因子的表达具有明显上调作用,且对表达的影响与给药浓度相关。