吸附色谱法分离红树林内生真菌Fusarium proliferatum次级代谢产物1403B

1403B是具有抗肿瘤功能的海洋生物活性物质,是1403C制备过程中的主要杂质.本文阐述了建立的1403B粗晶制备方法;以PS30-300为介质从1403B粗晶中分离纯化1403B,通过高效液相色谱对解吸溶剂的比例和解吸pH条件进行快速筛选,得到1403B分离纯化工艺为:用1％乙酸的30％乙醇溶解1403B粗晶上柱,用1％乙酸的55％乙醇解吸,流速为0.8 ml/min;获得的1403B峰纯度≥96％,收率≥95％.     

蓖麻凝集素—Sepharose 4B柱层析纯化人绒毛膜促性激素

本文报导一种新的制备和纯化HCG的方法。正常2-5个月妊娠妇女尿用苯甲酸钠吸附的脱附品，经50%乙醇抽提、40-60%乙醇分级、DEAE-纤维素柱层析和Sepharose 4B-蓖麻凝集素柱层析纯化后，低温酒精沉淀干燥，可得到生物活性4600IU/mg的HCG精品。     

丝状真菌Zalerion arboricola来源的抗真菌化合物pneumocandin B0的分离纯化

pneumocandin B0(PB0)是新型棘白菌素类抗真菌药物卡泊芬净的前体.通过离心、溶剂抽提和大孔树脂脱色等方法从丝状真菌Zalerion arboricola发酵液中分离PB0,得到纯度为77.6%的PB0粗制品,进一步纯化后,得到纯度为97.2%的PB0精制品.     

5型肺炎球菌荚膜多糖纯化工艺的建立与优化

目的 建立一种应用脱氧胆酸钠沉淀和离子交换色谱技术纯化5型肺炎球菌荚膜多糖的方法。方法  5型肺炎球菌发酵液经离心、超滤、脱氧胆酸钠沉淀处理后,再经过Capto Q离子交换层析,得到精制多糖原液。依据中国药典2020年版三部的相关制检规程对精制多糖原液进行检定分析。结果  发酵液中蛋白质和核酸杂质去除率分别达到97.0%和99.9%以上,糖醛酸含量不低于18.4%,氨基己糖含量不低于22.7%,各项指标均符合中国药典标准;且多糖收率达到60.0%以上。结论  建立的5型肺炎球菌荚膜多糖纯化工艺可替代使用乙醇或苯酚的工艺,且操作步骤简便,具有很好的规模化应用前景。     

大肠杆菌发酵液中唾液酸的提取

大肠杆菌发酵液经超滤和乙醇沉淀获得聚唾液酸粗品，在80℃水浴、pH2的条件下水解3h，中和，离心后，上清液用离子交换色谱分离纯化，冷冻干燥后得到唾液酸成品，纯度达98．1％。     

青霉素酶分离纯化及酶学性质研究

本文对蜡状芽孢杆菌CMCC(B)63301产青霉素酶的分离纯化工艺及酶学性质进行了研究。粗酶液通过硫酸铵分级盐析、超滤除盐浓缩、SephadexG-75凝胶层析纯化后得到的青霉素酶液的比活力为68.2×106u/mg,纯化倍数为11.32,酶活回收率为35.04%。经SDS-PAGE检测为单一区带。该酶作用的最适温度为37℃,最适作用pH范围为6.5～7.0,在0～20℃下存放比较稳定。酶液中添加5%NaCl或5%甘油可提高酶的保存稳定性。     

膜分离制备右旋糖酐40中细菌内毒素的控制

摘要：目的:将细菌内毒素作为膜分离制备右旋糖酐40工艺过程中的一个标的进行检测,使细菌内毒素含量成为右旋糖酐40原料药的质量指标,与国际标准接轨。方法:右旋糖酐发酵液经过板框过滤、陶瓷膜微滤和超滤等预处理,盐酸水解后通过100,10,50 kDa超滤除杂分离纯化为右旋糖酐40。结果:右旋糖酐发酵液预处理,果糖的去除率79%～89%。6%右旋糖酐发酵液处理液盐酸水解,还原糖的变化为5.72～8.68 mg·ml-1,总糖收率90%以上。水解液经过截留相对分子质量（Mr）分别为100,10,50 kDa超滤处理,绝大部分内毒素被去除,100 kDa和50 kDa截留干品（杂质）Mr均在50 000以上。截留Mr 50 kDa超滤膜的滤过液经减压浓缩,50%～60%乙醇沉淀制取右旋糖酐40内毒素含量＜3.0 EU·g-1,优于＜10.0 EU·g-1的国际标准,右旋糖酐40 Mr分布达到中国药典标准。结论:右旋糖酐发酵液经过陶瓷膜、超滤预处理之后盐酸水解,超滤（100,10,50 kDa）分离纯化水解液可以得到右旋糖酐40,同时对其细菌内毒素的含量加以控制,右旋糖酐40原料药的细菌内毒素指标优于国际标准。     

B群链球菌荚膜多糖抗原的分离纯化工艺研究

目的为提高荚膜多糖抗原得率,降低荚膜多糖中残余蛋白质含量和核酸含量,提高荚膜多糖抗原纯度,优化B群链球菌荚膜多糖的提取纯化工艺条件。方法研究pH值,沉淀核酸和荚膜多糖的乙醇浓度,乙醇沉淀多糖所需的温度和时间;比较蛋白酶K法、Sevag法和冷酚抽提法去除荚膜多糖中杂蛋白质的效果。结果建立起25%乙醇沉淀去核酸,冷酚抽提法去蛋白质分离纯化荚膜多糖,55%乙醇沉淀多糖的方法。3批GBSⅢ发酵液中获得的荚膜多糖的唾液酸含量为12.4%~14.8%;分配系数(Kav)≤0.5的多糖回收率达90%以上;荚膜多糖得率为0.021~0.027 g/L,抗原纯度较高。结论从发酵液中提取纯化荚膜多糖抗原的工艺是可行有效的。     

猪血中高纯度血红素的提取工艺

目的:确立最佳溶血方法,建立高产量、高纯度血红素提取工艺。方法:新鲜抗凝猪血为原料,比较了水溶胀法、乙醇法以及超声波法对红细胞溶血效果,以盐酸丙酮配比,盐酸丙酮与溶血液体积比对猪血中血红素提取的影响。结果:确立超声波法进行红细胞溶血,36.5%浓盐酸与丙酮的体积为1%的血红素抽提液,与溶血液的体积比为5∶1抽提10分钟,最终可从新鲜猪血中得到红素6.0g/L,纯度达99.8%。结论:用超声法溶血效果明显优于水溶胀法、乙醇法,溶血率达100%;36.5%浓盐酸与丙酮的体积比为1%的血红素抽提液,有利于规模化生产。     

白首乌C_(21)甾苷提取及大孔树脂纯化工艺

目的:筛选优化白首乌中C21甾体酯苷类成分的提取工艺及大孔树脂纯化工艺。方法:采用正交试验设计,以C21甾苷得率为指标,优化乙醇回流提取工艺;比较AB-8及HP-20型大孔树脂的吸附效果,并以纯化后C21甾苷收率及浸膏中甾苷的质量分数为指标,优选纯化工艺。结果:C21甾苷的最佳提取工艺为:6倍量90%乙醇提取3次,每次1h。AB-8型大孔树脂对C21甾苷有较好的吸附分离性能,优选的纯化工艺为:上样液质量浓度1g.mL-1,以6倍量80%乙醇洗脱,纯化后总甾苷含量可达46.91%。结论:优选工艺简单稳定,对C21甾苷提取精制效果好,可为其工业制备提供参考依据。     

纳豆激酶的分离纯化及酶学性质研究

目的研究纳豆激酶分离纯化工艺及酶学性质。方法纳豆激酶发酵液的粗提物经Superdex 75凝胶色谱和聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)分离纯化,采用TAME法测定酶的活性,通过SDS-PAGE对纯化结果进行了检验。结果SDS-PAGE中显示单一色带,相对分子质量28000,以TAME为底物时纳豆激酶的米氏常数(Km)为35.47mmol/L,最适宜的温度37℃,最适宜pH为8.6。结论该分离纯化方法可以得到较纯的纳豆激酶。     

正交试验优选蔓荆子总黄酮微波辅助提取纯化工艺

目的:优选蔓荆子总黄酮的微波辅助提取纯化工艺。方法:以乙醇浓度、反应温度、微波作用时间、微波功率、料液比为考察因素,以总黄酮含量为指标,通过正交试验优化提取工艺。用D101大孔吸附树脂纯化黄酮粗品。结果:最佳提取工艺为乙醇浓度60%、反应温度80℃、微波作用时间40min、微波功率600W、料液比1∶15;黄酮粗品经纯化后纯度可达84.93%以上。结论:优化后的工艺稳定、可行,可为蔓荆子总黄酮提取纯化工艺的产业化提供理论参考。     

番荔枝和Ipomoea fistulosa的抗生育作用

鳢肠(Eclipta prostrata)、Ⅰ.fistu-losa、肉托果(Semecarpus anacardiumL.)气生部分、番荔枝(Annon asquamosa)种子及沙漠似马齿苋(Trianthema portu-acastrum)根部五种新鲜材料各100克,阴干后粉碎。然后置于索氏提取器以50％乙醇抽提。抽提液在60℃以下减压浓缩,最后经真空干燥而得到的抽提物用于动物筛选。     

黑顶卷柏木脂素类化学成分研究

目的研究卷柏属植物黑顶卷柏木脂素类化学成分。方法采用大孔吸附树脂、硅胶、Sephadex LH-20/HW-40C柱色谱及半制备高效液相等分离方法对黑顶卷柏75%乙醇提取物进行分离纯化,根据化合物的理化性质和波谱数据进行结构鉴定。结果从黑顶卷柏75%乙醇提取物中分离鉴定得到6个木脂素类化合物,分别为syringaresinol(1)、3,3',5-trimethoxy-4',7-epoxy-8,5'-neoligan-4',9,9'-triol(2)、4,9-dihydroxy-4',7-epoxy-8',9'-dinor-8,5'-neolignan-7'-oic acid(3)、(+)-isolariciresinol(4)、3-O-caffeoyl quinic acid methyl ester(5)、3,4-di-O-caffeoyl quinic acid methyl ester(6)。结论化合物1~6为首次从该植物中分离得到,其中化合物4和5为首次从卷柏属植物中分离得到。     

离子交换纤维分离纯化葛根素的研究

目的:研究用离子交换纤维分离纯化葛根素的方法和工艺.方法:将葛根的浸提液在预处理过的纤维上吸附过瓣,再用70%乙醇洗脱,得纯化的葛根素.结果:最佳浸提葛根素的工艺参数:60%的乙醇浸提液pH=8,浸提温度60℃,提取时间3 h,浸提2次.得到的葛根素粗品收率为10.92%,纯度为4.56%.最佳分离纯化葛根素的工艺参数:在上柱药液pH=9,流速3 BV·h-1,药液浓度为1.703 mg·mL-1,体积为50 mL的条件下,解吸剂为70%乙醇和2 mmol·mL-1乙酸的混合液(体积比4:1)4 BV,洗脱流速6 BV·h-1.葛根素经离子交换纤维分离提纯后,产品纯度由4.56%提高到23.25%,产品总收率由10.92%降到2.89%.离子交换纤维对葛根素的吸附率为95.52%,解吸率为96.29%.结论:离子交换纤维分离纯化葛根素方法可行.     

水蛭活性肽的纯化工艺

目的：对水蛭活性肽进行纯化,并对水蛭活性肽进行树脂纯化条件考察。方法：采用DA201-C大孔吸附树脂进行极性分离,后经D201阴离子交换树脂进行电荷分离,最终得到纯化的水蛭活性肽组分。结果：DA201-C大孔树脂,上样肽浓度20 mg·mL^-1,流速1.0 BV·h^-1,依次用25%乙醇、50%乙醇和75%乙醇溶液洗脱,各洗脱部位得率及活力较高,但总体活性成分被分散,以上各洗脱部位经D201离子交换树脂,pH 4.0,上样肽浓度30 mg·mL^-1,流速3.0 BV·h^-1,分别用2.5%氯化钠的25%乙醇、2.5%氯化钠的50%乙醇、2.5%氯化钠的75%乙醇溶液洗脱,2.5%氯化钠的25%乙醇和2.5%氯化钠的50%乙醇洗脱部位有明显的抗凝活性,经过分析性RP-HPLC验证后,基线平稳,各组分分离度良好。结论：经DA201-C大孔树脂和D201离子交换树脂纯化后的水蛭活性肽,2.5%氯化钠的25%乙醇和2.5%氯化钠的50%乙醇洗脱部位活力较高,分离度好。     

大孔吸附树脂分离纯化葛根素的研究

目的 研究大孔吸附树脂分离纯化葛根素的工艺，为充分合理利用葛根药材资源及葛根素的工业化生产提供实验依据。方法 量取已处理好的AB-8型大孔吸附树脂75 mL，装入层析柱，加入葛根水浸液，每次100 mL，流速为6 mL·min^-1，收集最后20 mL流出液用高效液相色谱法测定葛根素含量。对已吸附饱和的AB-8型大孔吸附树脂柱，用纯化水150 mL以同样流速洗涤，弃去水洗液，再以70%乙醇洗脱，每次75 mL，接取最后1 mL供高效液相色谱法测定葛根素含量，直至无葛根素被检测出为止。结果 AB-8型大孔吸附树脂动态饱和吸附量以干树脂计为31.96 mg·g^-1；以70%乙醇为洗脱剂，洗脱率为90.49%；稳定性试验中第10个周期以70%乙醇为洗脱剂，洗脱率为82.51%。结论 AB-8型大孔吸附树脂性能优越，适合葛根素的分离纯化。     

溶媒法或喷雾干燥法制备头孢菌素C钠盐

目的　比较溶媒结晶法和喷雾干燥法两种制备头孢菌素 C钠盐的方法。方法　头孢菌素 C发酵液经提取纯化制成钠盐浓缩液于无水乙醇中结晶或喷雾干燥法制备头孢菌素 C钠盐。结果　溶媒结晶法制备的头孢菌素 C钠盐含量和透光率均值分别为 84 .0 3%和 98.90 % ,喷雾干燥法分别为 75 .4 9%和85 .90 % ,两方法相比 P<0 .0 5。溶媒结晶法合格率为 10 0 % ,而喷雾干燥法合格率仅为 2 0 %。结论　溶媒结晶法制备头孢菌素 C钠盐的质量优于喷雾干燥法。     

正交试验优选山茱萸总环烯醚萜苷的提取、纯化工艺

目的优选山茱萸总环烯醚萜苷的提取、纯化工艺。方法以总苷含量为指标,选择料液比、乙醇浓度和提取温度为考察因素,采用L9(34)正交试验来优选提取工艺;选择洗脱剂浓度及用量为考察因素,采用单因素试验考察SP825型大孔吸附树脂的纯化工艺。结果山茱萸总环烯醚萜最佳提取工艺为料液比1∶25、乙醇浓度10%、提取温度95℃。纯化工艺为10%乙醇洗脱10 BV。结论优选的山茱萸总环烯醚萜苷提取工艺稳定可行,SP825型大孔吸附树脂可富集山茱萸总环烯醚萜苷。     

工业色谱法纯化山银花中绿原酸的工艺研究

目的 探索工业色谱法纯化山银花中绿原酸的最优工艺参数。方法 以绿原酸的转移率为评价指标,以山银花水提液过大孔树脂后的20%乙醇洗脱液为原料液,采用单因素及响应面设计试验,对采用工业色谱纯化山银花中绿原酸工艺中的原料液浓缩程度、固定相类型、流动相乙醇浓度、乙醇流速、进样量等主要工艺参数进行优化,确定了最优工业色谱纯化山银花中绿原酸的工艺条件。结果 工业色谱纯化山银花中绿原酸的最优工艺条件：以60℃,-0.1 MPa为浓缩条件,将原料液浓缩至原体积的0.166 7（1/6）,工业色谱UV检测波长为230 nm,以PIPO-02色谱填料为固定相,以18.54%乙醇作为流动相,流速为14.57 mL·min^-1,进样量为13.15 mg。该工艺绿原酸的平均转移率为95.49%,RSD=1.91%,绿原酸产品纯度为97.45%,RSD=3.30%。结论 经过工艺优化与验证,创立了一条工业色谱纯化山银花中绿原酸工艺路线,该工艺制备的绿原酸产品纯度>97%,绿原酸转移率高,工艺简单、无毒,溶剂易于回收,适合于山银花中绿原酸纯化的工业化生产。