半导体激光诱发脉络膜新生血管的研究

目的研究脉络膜新生血管的发生机制。方法用半导体激光建立脉络膜新生血管的动物模型，造模后1、2、3、4、8周行荧光素眼底血管造影检查，8周行光学相干断层扫描检查，HE染色观察。结果半导体激光造模后2周，荧光素眼底血管造影时开始渗漏，4周时渗漏达到高峰，8周时趋于稳定。造模后8周，光学相干断层扫描检查、HE染色可见脉络膜新生血管。结论半导体激光可诱导脉络膜新生血管动物模型，该模型可作为人类脉络膜新生血管模型进行实验研究。     

色素上皮衍生因子在大鼠脉络膜新生血管中的表达

目的：探讨激光诱导BN大鼠脉络膜新生血管（choroidal neovascularization，CNV）中色素上皮衍生因子（pigment epithelium—derived factor，PEDF）的表达及意义。方法：对3组18只BN大鼠行单眼视网膜氩绿激光光凝，诱导脉络膜新生血管形成。分别在光凝后1周、2周、3周摘除眼球，对光凝区进行病理学检查、Ⅷ因子相关抗原（FⅧR：Ag）的免疫组织化学检查。应用免疫组织化学检测CNV形成过程中PEDF的表达及变化。结果：病理学检查及FⅧR：如免疫组织化学检查显示，光凝后1周开始形成CNV，3周达到高峰。正常BN大鼠PEDF在视网膜神经节细胞、内核层部分细胞、视网膜色素上皮层表达。视网膜光凝后，PEDF阳性染色信号可见于视网膜神经节细胞层、内核层、视网膜色素上皮层、外核层和脉络膜的损伤区；光斑边缘近脉络膜侧PEDF阳性表达信号明显高于光斑内部。光凝后1周至3周，光斑区内FⅧR：Ag阳性染色密度逐渐增加（P〈0．05），PEDF阳性染色密度逐渐下降（P〈0．05），PEDF与FⅧR：Ag阳性染色密度呈负相关（r=-0．832，P〈0．05）。结论：CNV形成与PEDF表达量负相关，提示PEDF表达不足可能是CNV形成和增生的素因之一。     

整合素αvβ3、组织因子及血管内皮细胞生长因子在实验性脉络膜新生血管中的表达

目的：探讨整合素αvβ3、组织因子(tissue factor, TF)及血管内皮细胞生长因子（vascular endothelial growth factor, VEGF）在激光诱导的大鼠脉络膜新生血管（choroidal neovascularization, CNV）组织中的表达。方法：随机选取成年雄性棕色挪威大鼠25只,一眼为实验组,经氩激光（波长532 nm）光凝诱导CNV形成,另一眼为正常对照。分别于光凝后第3,7,14,21及28天随机取5只大鼠,行眼底照相、眼底荧光血管造影（fluorescence fundus angiography, FFA）检查,并取出视网膜,通过免疫组织化学方法检测整合素αvβ3,TF及VEGF在CNV中的表达及相互关系。结果：正常对照组无新生血管生成,无整合素αvβ3和TF的表达,但视网膜神经节细胞层、内核层、色素上皮层、视网膜及脉络膜血管内皮细胞中均有少量VEGF的表达。光凝7 d后, FFA检查发现实验眼光凝区有圆盘状荧光渗漏,表明有新生血管生成。光凝后3 d,光凝区视网膜神经节细胞层、内核层、外核层缺损区、视网膜及脉络膜血管内皮细胞均表达少量的VEGF、整合素αvβ3及TF,随着时间的延长,CNV逐渐形成,VEGF、整合素αvβ3及TF表达水平也逐渐增加(P<0.01),其中整合素αvβ3的表达于第7天达高峰;VEGF的表达于第14天达高峰;TF的表达于第21天达高峰。结论：整合素αvβ3,VEGF及TF分别表达于实验性大鼠CNV形成初期、中期及晚期,其在CNV中表达的顺序对临床选择抗新生血管药物的治疗时间具有十分重要的意义。     

CD146在聚乙二醇诱导的小鼠脉络膜新生血管模型中的表达及意义

目的：探讨在聚乙二醇（polyethylene glycol,PEG）诱导的小鼠脉络膜新生血管（choroidal neovascularization,CNV）模型中CD146的表达及意义。方法：将60只8周龄雄性C57BL/6J小鼠采用随机数字表法,将小鼠随机分为第5、10和15天组,每组各20只。设定每组小鼠左眼为正常对照眼,右眼为实验眼,采用在视网膜下注射PEG诱导形成脉络膜新生血管模型。造模后摘取各组小鼠眼球,制作视网膜组织切片及HE染色,鉴定CNV模型。通过比较各组视网膜HE染色切片外核层（outer nuclear layer,ONL）厚度,观察PEG的视网膜毒性作用。采用实时荧光定量PCR法检测小鼠神经视网膜和RPE/脉络膜复合体中CD146、血管内皮生长因子（vascular endothelial growth factor,VEGF）、血管内皮生长因子受体2（vascular endothelial growth factor receptor 2,VEGFR2）的mRNA水平变化。免疫组化染色法检测小鼠眼内CD146、VEGF和VEGFR2的表达。结果：HE染色和ONL层厚度比较均证实,视网膜下注射PEG造模成功且模型可靠,视网膜下注射后第5和10天均有CNV形成。实验组小鼠神经视网膜和脉络膜中CD146、VEGF、VEGFR2的mRNA表达水平与对照组相比明显升高,差异有统计学意义（F=30.412,P=0.000;F=84.974,P=0.000;F=117.423,P=0.000;F=918.786,P=0.000;F=319.110,P=0.000;F=113.896,P=0.000）。Person相关性分析提示在视网膜下注射PEG后,小鼠RPE/脉络膜复合体中CD146与VEGF和VEGFR2的表达量呈正相关（r=0.940,P=0.000;r=0.940,P=0.000;r=0.769,P=0.045;r=0.910,P=0.003;r=0.910,P=0.003;r=0.777,P=0.042）。免疫组化染色的结果显示,在造模第10天后,造模组与正常对照组相比较CD146、VEGFR2在神经节细胞层、内核层、外从状层、外核层的阳性表达均有不同程度增强（P=0.000,P=0.000,P=0.000）。结论：CD146伴随着CNV的形成表达上调,且与VEGF的表达量和VEGFR2的表达量呈正相关性,由此推断CD146可能在CNV形成的病理过程中起到至关重要的作用。     

YKL-40在激光诱导的小鼠脉络膜新生血管模型中的表达及意义

目的：探讨在激光诱导的小鼠脉络膜新生血管（choroidal neovascularization,CNV）模型中几丁质酶-3样蛋白-1（chiti－nase-3-like-1,YKL-40）的表达及意义。方法：将40只成年雄性C57BL/6J小鼠以随机数字表法按照造模后取材时间的不同随机分为光凝后7 d组和14 d组,各20只。设定每组小鼠左眼为正常对照眼,右眼通过532 nm激光光凝视网膜诱导小鼠脉络膜新生血管模型,分别于光凝后7 d和14 d心脏灌注2×106 F1TC-dextran荧光素,行视网膜色素上皮（retinal pigment epithelium,RPE）/脉络膜复合体铺片以及苏木精-伊红染色法（hematoxylin-eosin staining,HE）鉴定CNV模型。采用实时荧光定量PCR法检测各组小鼠视网膜神经层（简称神经视网膜）和RPE/脉络膜复合体中YKL-40与血管内皮生长因子（vascular endothelial growth factor,VEGF）的mRNA水平变化。免疫荧光染色法观察YKL-40在各组小鼠眼组织中的表达及定位。结果：脉络膜铺片及HE染色均证实激光造模成功,光凝后7 d和14 d均有CNV形成。在光凝后7 d组中,神经视网膜中YKL-40和VEGF的mRNA相对表达量明显升高[（1.939±0.209）,（4.017±1.312）],与正常组[（1.002±0.076）,（1.017±0.219）]相比差异均有统计学意义（t=13.320,P=0.006;t=5.457,P=0.012）,而RPE/脉络膜复合体中YKL-40和VEGF表达[（0.968±0.381）,（1.192±0.354）]较正常组[（1.004±0.101）,（1.021±0.240）]无明显改变（t=-4.519,P=0.053;t=2.450,P=0.134）;在光凝后14d组,神经视网膜和RPE/脉络膜复合体中YKL-40和VEGF的mRNA表达水平[（3.174±1.583）,（3.045±1.430）,（12.669±4.512）,（8.254±2.968）]与正常组[（1.013±0.173）,（1.043±0.371）,（1.037±0.347）,（1.078±0.462）]相比均明显升高,且差异具有统计学意义（t=4.777,P=0.041;t=3.508,P=0.039;t=4.827,P=0.040;t=12.800,P=0.006）。Pearson相关性分析提示在激光造模后YKL-40的表达与VEGF具有正相关性。免疫荧光发现YKL-40主要表达于光凝后小鼠视神经节细胞层、内丛状层和内核层,且光凝后7 d和14 d YKL-40表达[（0.141±0.004）,（0.105±0.018）]与正常组（0.008±0.001）相比明显升高（F=106.388,P=0.000）。 结论：YKL-40在CNV形成过程中表达上调,且与VEGF的表达具有正相关性,因此我们推断YKL-40可能在CNV形成这一病理过程中起着重要作用。     

息肉状脉络膜血管病和脉络膜新生血管患者房水中血管内皮生长因子和色素上皮衍生因子的表达水平

目的：研究活动性息肉状脉络膜血管病，（PCV）与继发于年龄相关性黄斑病变（AMD）和病理性近视的脉络膜新生血管（CNV）房水中血管内皮生长因子（VEGF）和色素上皮衍生因子（PEDF）的表达水平。设计：前瞻性对照研究。方法：收集32例PCV或CNV患者32只眼的房水。其中11只眼为活动性症状性PCV，12只眼为继发于AMD的活动性CNV，9只眼为继发于病理性近视的活动性CNV。市售酶联免疫吸附检测试剂盒检测VEGF和PEDF水平。收集10例白内障手术无其他眼部和全身疾病患者的房水作为对照组。结果：PCV患者、继发于AMD的CNV的患者和继发于病理性近视的CNV的患者房水中VEGF的浓度较对照组显著增加（ANOVA，P〈0．001）。PCV患者房水中VEGF水平显著低于渗出性AMD的患者（P=0．045）。组间PEDF的表达水平明显不同（ANOVA，P=0．001），PCV患者、继发于AMD的CNV患者和继发于病理性近视CNV患者房水中PEDF水平增加。结论：活动性PCV患者房水中VEGF和PEDF共表达，并具有正相关和增高性。PCV和AMD患者中两因子表达水平的不同提示两者独特的临床表现或不同的血管发生过程。     

脉络膜新生血管患者房水中血管内皮生长因子和色素上皮衍生因子的浓度

目的:研究血管内皮生长因子(VEGF)和色素上皮衍生因子(PEDF)在活动性脉络膜新生血管膜(CNV)患者房水中的表达。方法:应用酶联免疫吸附测定法对32例活动性CNV患者和10例白内障患者(对照组)的房水标本进行VEGF和PEDF检测。结果:CNV患者房水中的VEGF为(523.0±273.7)pg/m l,PEDF为(16.58.±13.11)ng/m l;对照组患者房水中的VEGF为(108.3±72.3)pg/m l,PEDF为(0.35±0.57)ng/m l。两组间的VEGF和PEDF均有显著性差异(均P=0.000)。结论:活动性CNV患者房水中VEGF和PEDF增高,可能与脉络膜新生血管的形成有关。     

血管内皮生长因子在氩激光诱导大鼠脉络膜新生血管中的表达

目的:探讨血管内皮生长因子(VEGF)在氩激光诱导BN大鼠脉络膜新生血管(CNV)形成过程中的表达及其意义。方法:BN大鼠18只,随机分成3组,每组6只,单眼视网膜氩激光光凝,诱导CNV形成。分别在光凝后1周、2周、3周摘除眼球,应用免疫组织化学技术对光凝区进行因子Ⅷ相关抗原(FⅧR:Ag)的检测以观测CNV形成,并检测CNV形成过程中VEGF蛋白的表达,分析其变化趋势。结果:FⅧR:Ag免疫组织化学检查结果显示,光凝后1周开始形成CNV,3周达到高峰。正常BN大鼠视网膜中,VEGF在视网膜神经节细胞层、内核层、色素上皮层、视网膜和脉络膜血管内皮细胞表达。视网膜光凝后,除上述部位外,VEGF在外核层和脉络膜的光凝损伤区阳性表达。光凝后1周~3周,光斑区内FⅧR:Ag、VEGF阳性染色密度逐渐增加(P<0.05),FⅧR:Ag与VEGF阳性染色密度正相关(r=0.83,P<0.05)。结论:CNV形成与VEGF表达正相关,VEGF表达增多可能是CNV形成和增殖的主要原因之一。     

实验性兔脉络膜新生血管模型研究

目的:探讨氩激光创建有色家兔脉络膜新生血管(choroidal neovascularization,CNV)模型的可行性,初步探讨CNV的有关发生机制,为其进一步防治研究奠定基础.方法:健康有色家免20只(40只限),每只兔一眼为实验眼,另眼为对照眼.以波长514.5 nm的氩绿激光(光斑直径50um,功率0.7W,时间0.1s),在距视盘2～3个视盘直径的颢侧髓线上下视网膜处密集照射20个点.分别于光凝后3,7,14,21,30天进行眼底荧光造影(fundus fluorescein angiography,FFA)及脉络膜造影(indocyanine green angiography,ICGA).检查后处死动物(4只/次),摘除眼球取眼后段组织制作石蜡切片.常规HE染色及用免疫组化(S-P法)检测血管内皮生长因子(VEGF)在视网膜的表达.结果:光凝后7天出现CNV,兔CNV发生率尚(63.8%),眼底造影和光镜下均有相应改变,FFA表现为视网膜血管无关的荧光素渗漏,ICGA见CNV充盈;光镜下可见到CNV结构;光凝后2周开始VEGF在视网膜神经节细胞以及内核层有表达.结论:氩激光诱导有色家免CNV模型成模时间短,成模率较高;VEGF参与了CNV的形成进程.     

血管内皮生长因子在氩激光诱导大鼠脉络膜新生血管中的表达

目的:探讨血管内皮生长因子(VEGF)在氩激光诱导BN大鼠脉络膜新生血管(CNV)形成过程中的表达及其意义。方法:BN大鼠18只,随机分成3组,每组6只,单眼视网膜氩激光光凝,诱导CNV形成。分别在光凝后1周、2周、3周摘除眼球,应用免疫组织化学技术对光凝区进行因子Ⅷ相关抗原(FⅧR:Ag)的检测以观测CNV形成,并检测CNV形成过程中VEGF蛋白的表达,分析其变化趋势。结果:FⅧR:Ag免疫组织化学检查结果显示,光凝后1周开始形成CNV,3周达到高峰。正常BN大鼠视网膜中,VEGF在视网膜神经节细胞层、内核层、色素上皮层、视网膜和脉络膜血管内皮细胞表达。视网膜光凝后,除上述部位外,VEGF在外核层和脉络膜的光凝损伤区阳性表达。光凝后1周~3周,光斑区内FⅧR:Ag、VEGF阳性染色密度逐渐增加(P&lt;0.05),FⅧR:Ag与VEGF阳性染色密度正相关(r=0.83,P&lt;0.05)。结论:CNV形成与VEGF表达正相关,VEGF表达增多可能是CNV形成和增殖的主要原因之一。     

内皮抑素抑制脉络膜新生血管及VEGF和bFGF表达的研究

目的 研究内皮抑素对实验性脉络膜新生血管的抑制作用。方法 50只雄性BN大鼠，40只为实验组，10只为空白对照组。用半导体激光光凝实验组BN大鼠的视网膜，随机分为4组，内皮抑素Ⅱ组、内皮抑素Ⅰ组、生理盐水组和激光损伤组，每组10只；由光凝后当天开始，至光凝后13d，每天分别给予腹腔注射内皮抑素20mg／kg、10mg／kg和生理盐水1.2mL，激光损伤组光凝后不做任何处理。空白对照组为未行激光光凝和给药处理的BN大鼠。于光凝后第7天及第14天行眼底血管荧光素造影检查、组织病理学检查、VEGF免疫组化检测和bFGF mRNA的原住杂交检测。结果随着内皮抑素剂量增加，荧光素渗漏率和渗漏强度减弱；激光光凝后7d，内皮抑素Ⅱ组与其他组相比，渗漏强度的差异有显著性；光凝后14d，两个内皮抑素组与生理盐水组和激光损伤组比较，荧光素渗漏强度差异均有显著性；生理盐水组和激光损伤组差异无显著性。激光光凝后7dVEGF和bFGFmRNA表达达高峰，光凝后14d下降，内皮抑素组vEGF和bFGFmRNA表达较激光损伤组减弱，并呈剂量依赖性趋势。结论 内皮抑素可以有效地抑制实验性CNV的形成。下调VEGF和bFGF的表扶可能是肉皮抑素抑制CNV的作用机制之一．     

RT-PCR测定大鼠脉络膜新生血管色素上皮衍生因子研究

目的建立氪激光诱导的BN大鼠脉络膜新生血管(choroidal neovascularization,CNV)模型,建立RT-PCR方法检测大鼠视网膜及相关组织色素上皮衍生因子(pigment epithelium-derived factor,PEDF)mRNA性。研究PEDF mRNA与CNV生长的关系,从而探讨在CNV生长中的作用。方法对6组24只BN大鼠应用氪激光(波长647nm)实验眼视网膜进行光凝,功率360mW、光斑直径50μm、曝光时间0.05s,围绕视盘等距光凝8个点,创建CNV模型。采用半定量反转录聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测PEDF mRNA在大鼠视网膜中的表达水平的变化。结果FFA光凝斑盘状荧光素渗漏,证实CNV形成。视网膜中PEDF mRNA表达水平呈先升高后降低的变化。结论氪激光诱导BN大鼠产生CNV模型,病理结构稳定,RT-PCR方法适合做大鼠动物模型PEDF mRNA的半定量检测,PEDF的变化与新生血管的发送更有关。     

EXPRESSION OF PEDF mRNA AND PROTEIN IN NORMAL MOUSE RETINA AND EXPERIMENTAL CHOROIDAL NEOVASCULARIZATION TISSUES

Objective To study the expression of pigment epithelium derived factor (PEDF) in normal mouse retina and experimental choroidal neovascularization (CNV) tissues. Methods CNV mouse models were induced by diode laser. The expression of PEDF mRNA and protein in normal mouse retina and CNV tissues were detected by in situ hybridization and immunohistochemical study. Results In normal mouse retina, PEDF mRNA was observed in the ganglion cell layer, inner nuclear layer and RPE cell layer, and PEDF protein was observed mainly in the nerve fiber layer, ganglion cell layer, photoreceptor cell layer and RPE cell layer, and lower level expression of PEDF protein was also observed in the inner plexiform layer and outer plexiform layer. In CNV tissues, the expression of PEDF mRNA and protein was also observed. 3d and 1 week after photocoagulation, the expression level of PEDF was relatively lower, and increased following the development of CNV. The level was the highest 2 weeks after photocoagulation, then decreased at 3 weeks. Conclusion PEDF was expressed in different layers of retina and was obviously expressed in the CNV tissues induced by laser photocoagulation. These findings suggest that PEDF may participate and modulate the development of CNV.     

Annexin A2 promotes choroidal neovascularization by increasing vascular endothelial growth factor expression in a rat model of argon laser coagulation-induced choroidal neovascularization

Background Choroidal neovascularization （CNV） is a common cause of visual loss in the elderly patients with age-related macular degeneration and represents the growth of subretinal new vessels in the macular region. This study aimed to investigate the relationship between annexin A2 （ANXA2） and vascular endothelial growth factor （VEGF） in CNV.Methods In a rat model of argon laser coagulation-induced CNV, the mRNA expressions of the annexins and VEGF protein expression in the retina were detected using fluorescent real-time polymerase chain reaction （PCR） and immunohistochemistry, respectively. The interactions between ANXA2 and VEGF in both a retinal pigment epithelial cell line RPE-J and the rat model of CNV were examined by means of RNA interference, real-time PCR, Western blotting, enzyme-linked immunosorbent assay （ELISA） and histopathological examinations. Results Fundus fluorescein angiography （FFA） showed that argon laser coagulation of the retina induced stable CNV models in the rats. Two to three weeks after the coagulation, ANXA2. and VEGF expressions in the coagulated area in the retina and choroid increased to the peak level, while the other annexin members （ANXA4, ANXA5, ANXA7 and ANXA11） showed no obvious changes. In RPE-J cells and the CNV model, RNA interference of ANXA2 gene significantly lowered the VEGF protein and mRNA expressions, and application of an adenoviral vector containing ANXA2 gene markedly increased VEGF expressions in the rat model of CNV, but produced no significant effects on the expressions of the kinase insert domain-containing receptor （KDR） or the fms-like tyrosine kinase （Fit-l）. The expression of KDR inhibited the increment in ANXA2 expression, but VEGF and Rt-1 did not directly affect ANXA2 expression. Conclusion Besides the role as a plasminogen and the receptor of tissue plasminogen activator, ANXA2, which is under regulation of KDR via a negative feedback mechanism, also participates in neovascularization by regulating VEGF expression through a positive feedback mechanism.     

类风湿性关节炎滑膜中VEGF、bFGF、PEDF的表达分析

目的 检测类风湿性关节炎（RA）患者髋或膝部滑膜组织中血管内皮生长因子（VEGF）、碱性成纤维细胞生长因子（bFGF）和色素上皮衍生因子（PEDF）的表达,以研究VEGF、bFGF、PEDF在RA发展中的作用.方法 采用免疫组织化学法对20例RA患者滑膜组织中PEDF、VEGF及bFGF的表达水平进行了检测,并与10例骨关节炎和6例正常滑膜组织进行对照研究.结果 VEGF和bFGF在RA患者的滑膜组织中呈高表达,而在正常人滑膜组织中表达水平则较弱;PEDF在正常人和RA患者的滑膜组织中表达水平均较弱或不表达.结论 RA患者滑膜组织VEGF、bFGF呈过度表达,而PEDF则呈弱表达或不表达.     

激光诱导恒河猴实验性脉络膜新生血管的研究

目的通过激光诱导恒河猴眼底脉络膜血管新生,建立与人类脉络膜新生血管类似的动物模型。方法8只成年恒河猴,采用532nm激光围绕黄斑中心凹光凝,光凝前及光凝后20d、34d、48d进行眼底彩色照相、荧光素眼底血管造影、光学相干断层扫描,光凝后49d处死动物进行组织学和免疫荧光化学染色检查。结果68.8%激光斑形成实验性脉络膜新生血管,荧光素眼底血管造影表现为早期强荧光斑,后期荧光素渗漏超越激光光斑边缘;光学相干断层扫描出现神经上皮下的高反射光团,局部视网膜增厚,病灶可维持长达48d,形成的脉络膜新生血管为含有与增殖相关的CD31、CD105染色阳性内皮细胞成分的纤维血管增殖膜并伴视网膜水肿,色素颗粒内移,外核层缺失。结论激光诱导的恒河猴脉络膜新生血管模型成模率高,模型稳定持久,是研究治疗与脉络膜新生血管相关眼底病理想的动物模型。