HOXD10基因转染对人胃癌耐药SGC7901/VCR细胞增殖、凋亡及侵袭能力的影响

目的研究HOXD10基因转染人胃癌耐药细胞系SGC7901/VCR后表达情况及对细胞增殖、凋亡、侵袭能力的影响。方法将HOXD10基因表达质粒(pc DNA3.1-EGFP-HOXD10)转染至SGC7901/VCR中,利用Real-time PCR和Western blotting检测HOXD10基因转染后表达效果;MTT方法、平板单克隆实验、流式细胞术、Transwell方法分别检测HOXD10基因转染对细胞增殖、单克隆形成、细胞周期、凋亡、侵袭能力的影响;并用Western blotting检测HOXD10基因转染对肿瘤侵袭性相关因子MMP-2蛋白表达的影响。结果 HOXD10基因转染至人胃癌SGC7901/VCR细胞后其基因和蛋白表达水平均显著上升(P0.05),能够抑制SGC7901/VCR细胞增殖、单克隆形成、细胞周期,并提高顺铂作用下细胞凋亡率(P0.05),同时显著抑制细胞侵袭能力和MMP-2蛋白的表达(P0.05)。结论 HOXD10基因转染人胃癌耐药细胞系SGC7901/VCR后能够高表达,进而抑制细胞增殖、单克隆形成、细胞周期和侵袭能力并提高顺铂下细胞凋亡率,而其抑制细胞侵袭能力可能与MMP-2表达减少有关。     

小干扰RNA抑制MDM2对HepG2细胞的影响及机制

目的探讨小干扰RNA对HepG2细胞泛素蛋白链接酶(MDM2)基因表达的干扰效应和增殖影响的分子机制。方法建立装载靶向MDM2基因小干扰RNA(siRNA)的表达载体;用脂质体法将此表达载体转染HepG2细胞株,以转染阴性对照质粒组作对照;采用RT-PCR检测MDM2,p53,Bcl2和p21基因的表达;MTT法检测细胞增殖抑制情况,流式细胞仪检测细胞凋亡情况,划痕实验检测细胞迁移能力的改变。结果转染siRNA MDM2后的HepG2细胞MDM2和Bcl2基因表达明显减低,而p53和p21基因表达被明显增强,与空白组比差异具有显著性。siRNA MDM2明显抑制了HepG2的增殖并诱导其凋亡,同时使细胞迁移能力明显下降。但转染阴性对照质粒组未出现基因的表达变化和增殖抑制及凋亡。结论 siRNA MDM2可明显抑制HepG2增殖诱导其凋亡,并减弱肿瘤细胞迁移力。可能与抑制MDM2,增强p53表达,从而影响细胞周期和凋亡相关的基因表达变化有关。     

幽门螺杆菌感染所致人脐静脉内皮细胞功能异常及炎性反应的作用机制研究

目的 探讨幽门螺杆菌(Helicobacter pylori, Hp)通过激活转录激活因子3(STAT3)/核转录因子κB(NF-κB)通路对人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cell, HUVEC)增殖、迁移、凋亡及炎性反应的影响。方法 将HUVEC分为对照组(未感染Hp)和Hp感染组(Hp感染复数=25),通过倒置显微镜观察感染Hp的HUVEC形态变化;细胞计数试剂盒8细胞增殖实验和平板克隆实验检测2组HUVEC增殖能力,Transwell实验和划痕愈合实验检测HUVEC的迁移能力,流式细胞术检测HUVEC的凋亡率,实时荧光定量聚合酶链反应检测2组HUVEC中Hp细胞毒素相关基因A、白细胞介素(IL)-6、IL-8、IL-1β和肿瘤坏死因子α(TNF-α)信使核糖核酸表达情况;Western blot检测HUVEC细胞周期蛋白D1(CyclinD1)、原癌基因(C-Myc)、基质金属蛋白酶(matrix metalloproteinase, MMP)-2、MMP-9、增殖细胞核抗原(proliferating cell nuclea...     

VEGF对体外培养的脐静脉内皮细胞增殖和迁移能力的影响

目的探讨血管内皮细胞生长因子（VEGF）对体外培养的脐静脉内皮细胞（HUVEC）增殖和迁移能力的影响。方法以VEGF基因转染HUVECs和在培养液中加入VEGF蛋白后培养HUVEC,用RT-PCR法检测VEGF mRNA的表达鉴定转染的效果,用3H-TdR掺入法检测VEGF对HUVECs增殖的影响,用划痕实验观察VEGF对HUVECs迁移能力的影响。结果转染VEGF基因的HUVECs中VEGFmRNA的表达高于对照组,表明转染成功。3H-TdR掺入法和划痕实验显示,转染VEGF基因和在培养液中加入VEGF蛋白,都可促进体外培养的HUVECs增殖和迁移。结论VEGF能够促进体外培养的HUVECs增殖和迁移;将VEGF基因导入细胞与直接在培养基中加入VEGF蛋白具有相同的效果。     

siRNA干扰PDCD4表达对人食管鳞状细胞癌细胞株Eca109的影响

背景:研究发现PDCD4是一种新的肿瘤抑制基因,其表达与多种肿瘤的恶性转化相关。然而,PDCD4在食管鳞状细胞癌中的作用尚未完全明确。目的:探讨沉默PDCD4表达对食管鳞状细胞癌细胞株Eca109体外增殖、迁移、凋亡能力的影响。方法:选择未转染的Eca109细胞(空白对照组)、转染无义序列的Eca109细胞(阴性对照组)和转染PDCD4 siRNA的Eca109细胞(si-PDCD4组),采用蛋白质印迹法检测PDCD4蛋白表达,CCK-8法检测细胞增殖能力,平板单克隆形成实验检测细胞克隆形成能力,流式细胞术检测细胞凋亡率,Transwell细胞迁移实验检测细胞迁移能力。结果:与空白对照组、阴性对照组相比,si-PDCD4组细胞中PDCD4蛋白表达降低(P0.05),细胞增殖能力增强(P0.05),细胞克隆形成数目增多(P0.05),细胞凋亡率降低(P0.05),细胞迁移能力增强(P0.05)。结论:PDCD4 siRNA可在体外促进食管鳞状细胞癌Eca109细胞的增殖、迁移,并抑制细胞凋亡,为食管鳞状细胞癌的诊治提供了新的实验依据。     

干扰素-β基因对人膀胱移行细胞癌系253J B-VR 体外增殖及凋亡的影响

目的 为膀胱癌的基因治疗提供理论依据.方法 以重组腺病毒AdhIFN-β转染人膀胱移行细胞癌细胞(TCC)系253J B-VR,应用RT-PCR检测hIFN-β基因在253J B-VR中的表达,应用细胞生长抑制试验、集落形成能力试验检测hIFN-β基因对253J B-VR细胞体外增殖的影响;流式细胞术(FCM)检测细胞周期改变情况.结果 转染病毒量为40 MOI时即可获得＞95%的转染效率;外源性hIFN-β基因可在253J B-VR细胞中表达;转染hIFN-β基因后253J B-VR细胞凋亡率升高.结论 Ad介导的hIFN-β基因能诱导膀胱癌细胞在体外发生凋亡,此为膀胱癌的基因治疗提供了理论依据.     

Kiss-1在胃腺癌组织中的表达及对胃腺癌MKN-45细胞增殖、迁移能力的影响

目的探讨肿瘤抑制因子(Kiss)-1在胃腺癌组织中的表达及对胃腺癌细胞增殖、迁移能力的影响。方法 qRT-PCR检测50例胃腺癌组织和对应的癌旁组织中Kiss-1水平。分别将Kiss-1小干扰RNA(siRNA Kiss-1)和对照小RNA(siRNA control)、Kiss-1过表达载体(p EGFP-N1-Kiss-1)和对照空载体(p EGFP-N1)转染至胃腺癌细胞株(MKN-45)中,培养48 h后,Western印迹检测细胞中Kiss-1、基质金属蛋白酶(MMP)-9、MMP-2、β-连环蛋白(β-catenin)、C-myc蛋白水平,噻唑蓝(MTT)检测细胞增殖能力,细胞划痕实验检测细胞迁移能力。用Wnt/β-catenin信号通路抑制剂FH535作用胃腺癌细胞后,检测细胞增殖和凋亡情况。结果 Kiss-1在胃腺癌组织中的表达水平显著低于癌旁组织(P<0.01)。p EGFP-N1-Kiss-1组细胞存活率和迁移率显著低于p EGFP-N1组,siRNA Kiss-1组显著高于siRNA control组(P<0.01)。p EGFP-N1-Kiss-1组细胞中MMP-9、MMP-2、β-catenin、C-myc水平显著低于p EGFP-N1组,siRNA Kiss-1组显著高于siRNA control组(P<0.01)。抑制剂作用后的胃腺癌细胞增殖迁移趋势与p EGFP-N1-Kiss-1组一致。结论 Kiss-1在胃腺癌组织中低表达,Kiss-1通过Wnt/β-catenin信号通路抑制胃腺癌细胞增殖迁移能力。     

过表达AnnexinA2抑制食管癌Eca109细胞增殖和迁移

目的探讨AnnexinA2的表达对人食管癌细胞Eca109增殖、迁移、细胞周期和凋亡的影响。方法采用基因过表达技术上调Eca109细胞中AnnexinA2的表达,qRT-PCR和Western blot技术检测AnnexinA2 mRNA和蛋白水平变化;赛唑蓝(MTT)比色法研究其对Eca109细胞的存活、增殖能力的影响;采用划痕实验观察其对细胞迁移能力的影响;流式细胞术检测其对Eca109细胞周期及细胞凋亡的影响。结果 qRT-PCR和Western blot检测提示Eca109细胞转染AnnexinA2过表达质粒后mRNA和蛋白质表达水平均显著增高;MTT实验表明AnnexinA2过表达组细胞的增殖能力明显低于对照组(P0.05),同时细胞迁移能力也显著下降(P0.05);AnnexinA2在Eca109细胞中高表达将细胞阻滞于G2/M期,对细胞凋亡没有影响。结论 AnnexinA2在食管癌细胞中呈低表达,上调AnnexinA2蛋白水平可以明显抑制食管癌细胞的增殖、迁移能力。     

AnnexinA2-siRNA对甲状腺乳头状癌细胞增殖、侵袭和转移的作用及机制

目的观察siRNA靶向干扰膜联蛋白(Annexin)A2对甲状腺乳头状癌(PTC)K1细胞侵袭、迁移能力的影响,并探讨其可能的相关机制。方法首先利用实时荧光定量-聚合酶链反应(qRT-PCR)检测PTC、甲状腺良性肿瘤和正常组织中AnnexinA2 mRNA的表达;采用Western印迹检测细胞中AnnexinA2蛋白的表达水平。实验分为:空白对照组、siRNA-NC组和siRNA-AnnexinA2组;利用脂质体lipofectamine^TM 2000瞬时转染的方法沉默PTCK1细胞中AnnexinA2的表达,采用qRT-PCR和Western印迹验证K1细胞转染的干扰效果;采用噻唑蓝(MTT)比色法、Transwell小室法分别检测K1细胞的增殖能力、迁移和侵袭能力的变化,进一步采用qRT-PCR和Western印迹分别检测细胞中Wnt/β-catenin信号通路相关蛋白β-catenin和下游因子c-myc、细胞周期蛋白(cyclin)D1、基质金属蛋白酶(MMP)-2、MMP-9蛋白和mRNA的表达变化。结果小干扰RNA转染成功沉默了K1细胞中AnnexinA2基因的表达;转染成功后,与空白对照组和siRNA-NC组相比,siRNA-AnnexinA2组细胞的增殖活性明显受到抑制(P<0.05);siRNA-AnnexinA2组中细胞的迁移和侵袭能力显著受到抑制(均P<0.05);沉默AnnexinA2基因后明显抑制了β-catenin、c-myc、cyclinD1、MMP-2、MMP-9的表达水平(均P<0.05)。结论AnnexinA2基因的沉默抑制K1细胞的侵袭、转移能力,其机制可能通过调控Wnt/β-catenin信号通路的活性来实现的,从而为PTC分子生物治疗提供新的靶标。     

PIK3CA在食管鳞癌细胞系Eca 109中的功能

目的:探讨PIK3CA在食管鳞癌细胞系Eca109中的作用.方法:用脂质体介导siRNA瞬时转染Ecal09细胞,转染细胞分为3组:空白对照组(正常培养的Eca109细胞)、阴性对照组(转染随机序列的siRNA)及实验组(转染PIK3CA-siRNA).运用Western blot技术检测PIK3CA基因干扰后蛋白水平表达的变化;四甲基偶氮唑盐微量酶反应比色法(MTT法)和细胞划痕实验检测PIK3CA干扰后Eca109细胞增殖和迁移能力的改变;流式细胞仪检测PIK3CA干扰后细胞周期和凋亡率的变化.结果:干扰PIK3CA基因表达后,其蛋白水平表达较空白对照组及阴性对照组显著性降低(P0.05).MTT实验和划痕实验显示干扰PIK3CA的表达后,Eca109细胞增殖受到显著性抑制(P0.05),迁移能力显著性降低(P0.05).流式细胞仪检测下调P I K3C A的表达后细胞周期阻滞在细胞分裂的S期(P0.05),且使细胞凋亡率显著性增加(P0.05).结论:PIK3CA基因能够促进Eca109细胞的增殖和迁移能力,并具有抗凋亡作用.PIK3CA基因有望成为食管鳞癌治疗的潜在靶点.     

可溶性转化生长因子βⅡ型受体对LoVo细胞侵袭能力的影响

目的构建人转化生长因子βⅡ型受体细胞外区基因的真核表达载体,初步探讨可溶性转化生长因子βⅡ型受体(sTGFβRⅡ)对结直肠癌LoVo细胞侵袭能力的影响。方法采用DNA重组技术构建sTGFβRⅡ的表达载体pcDNA3.1( )/sTGFpRⅡ,用脂质体转染技术转染人结直肠癌LoVo细胞,以RT-PCR、Western印迹和细胞免疫荧光技术分别检测目的基因及蛋白表达;Matrigel~(TM)侵袭试剂盒检测sTGFβRⅡ对LoVo细胞侵袭能力和人脐静脉内皮细胞(HUVEC)血管生成能力的影响,RT-PCR检测sTGFβRⅡ对LoVo细胞基质金属蛋白酶-9(MMP-9)基因和血管内皮生长因子(VEGF)基因表达的影响。结果sTGFβRⅡ在LoVo细胞中获得表达,转染sTGFβRⅡ基因的LoVo细胞侵袭能力(穿膜细胞数为111.0±10.1)明显低于空载体转染组(171.3±3.2)和对照组(177.0±2.7,F=100.1,P相似文献   

TGFβ1转染hMSC对MHCC97-H影响的实验研究

目的观察经TGFβ1基因修饰的人骨髓间充质干细胞(hMSC)对高转移潜能肝癌细胞(MHCC97-H)增殖能力及侵袭能力的影响。方法构建TGFβ1慢病毒载体,eGFP为报告基因,转染hMSC。Transwell法检测hMSC与肝癌细胞共培养实验,检测MHCC97-H细胞侵袭能力的变化。CCK-8法检测与hMSC共培养前后MHCC97-H增殖能力的变化。PCR法检测转基因hMSC与MHCC97-H细胞共培养前后转移相关因子基因α-V、肿瘤生长因子TGFβ1和肿瘤凋亡因子PDCD4等基因表达。结果 MHCC97-H与hMSC细胞共培养后,MHCC97-H增殖能力增强,hMSC TGFβ1基因过表达组对MHCC97-H细胞增殖具有抑制作用。MHCC97-H与hMSC细胞共培养后,侵袭能力增强,hMSC TGFβ1基因过表达组对MHCC97-H细胞侵袭能力具有明显的抑制作用。hMSC基因转染组TGFβ1表达明显增高。hMSC基因转染共培养组MHCC97-H细胞TGFβ1基因表达明显低于对照组。hMSC基因转染共培养组MHCC97-H细胞α5基因表达降低。hMSC基因转染共培养组MHCC97-H细胞PDCD4基因表达降低。结论转基因hMSC具有抑制MHCC97-H细胞增殖、侵袭的作用。     

miR-206对血管内皮细胞增殖的影响及其机制

目的研究miR-206对血管内皮细胞增殖的影响及其机制,为临床动脉硬化疾病提供新的诊疗方向。方法收集临床病理首次确诊为糖尿病下肢动脉粥样硬化病变的患者病变处动脉内皮组织和正常内皮组织,qPCR检测miR-206的表达;而后通过基础实验研究将HUVEC分为未转染组、miR-206-mimics组和miR-206-inhibitor组,观察转染效率;三组细胞均采用CCK8检测细胞增殖情况,Transwell进行迁移能力评估,流式细胞仪检测细胞周期情况,Western blot检测Cx43表达情况。结果糖尿病动脉硬化患者下肢动脉(均为胫腓动脉)病变处内皮细胞miR-206的mRNA表达较正常组织内皮细胞明显增加(P0.05);HUVEC转染miR-206-mimics后,miR-206表达显著升高(P0.05),转染miR-206-inhibitor后,miR-206表达明显降低(P0.05);在HUVEC转染miR-206-mimics 24 h后,细胞增殖率相比于未转染组和miR-206-inhibitor组要明显降低(P0.05);在HUVEC转染miR-206-mimics后,细胞迁移能力明显降低(P0.05),细胞周期在G2期发生阻滞,而HUVEC转染miR-206-inhibitor后细胞迁移能力提高(P0.05);miR-206-mimics组细胞Cx43表达明显降低,而miR-206-inhibitor组细胞Cx43表达明显增加。结论 miR-206可以抑制血管内皮细胞的增殖,将内皮细胞阻滞在有丝分裂G2期,并且抑制内皮细胞迁移,其对内皮细胞增殖的影响可能是通过调节Cx43表达来实现的。     

组织蛋白酶B对人脐静脉血管内皮细胞增殖及凋亡的影响

目的:探讨组织蛋白酶B(CTSB)对人脐静脉血管内皮细胞系(HUVEC)增殖及凋亡的影响。方法:慢病毒转染HUVEC,获得稳定过表达CTSB的HUVEC细胞系HU-CTSB。CCK-8法检测转染前后各组细胞的增殖情况;流式细胞法检测各组细胞的凋亡情况;实时定量PCR法检测各组细胞内凋亡基因Bax;蛋白质印迹法检测各组细胞被剪切的内caspase3表达差异。结果:CCK8法检测发现,与转染前及空病毒对照组HU-MOCK相比,HU-CTSB细胞的生存率明显下降(P0.01);流式细胞法检测发现,HU-CTSB细胞的凋亡率明显增高(P0.01);实时定量PCR法检测发现,HU-CTSB细胞中Bax mRNA水平增高(P0.01);蛋白质印迹法检测发现,HU-CTSB细胞中Bcl蛋白表达下降,且被剪切的caspase3的量最多。结论:CTSB可以抑制HUVEC的生长,并通过上调Bax的表达,激活caspase3通路诱导HUVEC发生凋亡。     

干扰Wnt1基因表达对乳腺癌细胞侵袭、迁移能力的影响

目的探讨干扰Wnt1基因表达对乳腺癌细胞侵袭、迁移的影响及可能的作用机制。方法采用RNA干扰技术下调Wnt1基因表达,实验分为对照组(未做处理的细胞)、shRNA NC组(转染siRNA-NC)、shRNA Wnt1组(转染siRNA-Wnt1)。细胞划痕实验检测细胞的迁移能力,Transwell法检测细胞的侵袭能力,免疫印迹实验(Western印迹)观察细胞中Wnt1、β-连环蛋白(β-catenin)、细胞周期素(cyclin)-D1蛋白的表达量。结果转染siRNA-Wnt1到MCF-7细胞后,Wnt1蛋白的表达量受到显著抑制(P0.05);细胞的侵袭、迁移能力受到显著抑制(P0.05);β-catenin、cyclin-D1蛋白的表达下调(P0.05)。结论干扰Wnt1基因表达可以抑制MCF-7细胞的迁移和侵袭,其机制可能与Wnt1/β-catenin信号通路及其下游靶基因cyclin-D1蛋白表达下调有关。     

迁移侵袭抑制蛋白对人脐静脉内皮细胞生物学行为的作用

目的:研究迁移侵袭抑制蛋白(migration and invasion inhibitory protein, MIIP)对人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells,HUVEC)增殖能力、迁移侵袭能力等生物学行为的影响。方法:采用瞬时转染的方式在HUVEC中过表达MIIP,经蛋白质印迹(Western-blot)实验鉴定MIIP和VEGFR2的表达水平;采用5-乙炔基-2-脱氧尿苷(5-ethyny-2'-deoxyuridine,EdU)法检测MIIP对HUVEC增殖能力的影响,采用划痕愈合实验和穿透小室实验检测MIIP对HUVEC迁移侵袭能力的影响,采用小管形成实验检测HUVEC体外成管能力的变化,采用基质胶栓实验观察MIIP对HUVEC体内血管新生能力的影响。结果:通过瞬时转染可使MIIP在HUVEC中的表达上调2.8倍。与空载体转染的细胞相比,过表达MIIP的HUVEC的划痕愈合能力减弱;空载体转染组及MIIP过表达组的HUVEC在迁移实验中的穿膜细胞数分别为(350±24)个和(167±29)个(P0.01),在侵袭实验中的穿膜细胞数分别为(434±12)个和(286±8)个。在体外小管形成实验中形成的小管数分别为(27±4)个和(13±2)个。EdU阳性标记的细胞比例在2组分别为63%±4%和61%±2%。基质胶栓实验显示,过表达MIIP后,HUVEC的体内血管新生能力下降。蛋白质印迹结果显示,MIIP能够下调HUVEC中血管内皮细胞生长因子受体2(vascular endothelial growth factor receptor 2,VEGFR2)的表达。结论:MIIP能够抑制HUVEC的迁移侵袭能力、体外成管能力及体内血管新生能力。     

microRNA-1Ob促进人低转移肺癌细胞株95-C的增殖及侵袭

目的 探讨microRNA-10b(miRNA-10b)对人低转移肺癌细胞95-C的增殖、细胞周期、凋亡以及侵袭及迁移能力的影响.方法 用脂质体法将miRNA-10b真核表达质粒瞬时转染入95-C,实验设置空白对照组、空载体转染组和miRNA-10b质粒转染组,转染后荧光显微镜下观察转染效率,实时定量RT-PCR检测各组细胞miRNA-10b的表达,细胞增殖实验检测各组细胞的增殖情况,流式细胞仪检测各组细胞周期及细胞凋亡率,Transwell实验检测各组细胞侵袭能力,细胞划痕实验检测各组细胞迁移能力.结果 转染后miRNA-10b质粒转染组细胞增殖速度明显增快,细胞凋亡率降低,细胞侵袭及迁移能力增强,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 miRNA-10b可以促进95-C细胞的增殖,降低细胞凋亡,增加95-C细胞的侵袭及迁移能力.     

脆性组胺酸三联体基因对人肺腺癌A549细胞恶性表型的影响

目的研究外源性脆性组胺酸三联体(FHIT)基因在体内外对人肺腺癌A549细胞恶性表型的影响。方法用脂质体介导外源FHIT基因转染A549细胞,建立单克隆细胞系FHITA-549和PEGFP-A549。逆转录聚合酶链反应(RTPCR)、免疫组化方法检测外源FHIT基因在A549细胞的表达状况。采用细胞生长曲线、集落形成试验、流式细胞仪及裸鼠移植瘤试验研究外源FHIT基因对A549细胞体外增殖、凋亡、细胞周期和体内成瘤性的影响。结果RTPCR试验证实FHIT-A549中有FHITmRNA表达,免疫组织化学染色显示FHIT-A549细胞FHIT蛋白表达强阳性,而A549细胞和转空载体的PEGFPA549细胞FHIT基因和蛋白表达均阴性。FHIT-A549细胞的集落形成率为2.6%,显著低于A549细胞的50.1%和转染空载体PEGFPA549细胞的53.6%,三者相比差异有统计学意义(P<0.01)。流式细胞仪分析显示FHIT-A549细胞95.8%阻滞在G2期。FHITA549细胞移植瘤的瘤重为(0.04±0.03)g,显著低于A549细胞的(0.24±0.11)g和转染空载体PEGFPA549细胞的(0.25±0.07)g,三者差异有统计学意义(P<0.01)。结论A549细胞内外源FHIT基因的转导并表达能显著抑制其恶性增殖和分裂,诱导其凋亡,调节其细胞周期、抑制成瘤性。     

SOX1过表达抑制食管癌细胞的增殖并促进凋亡的发生

目的 探索SOX1过表达对食管癌细胞增殖及凋亡的作用及其机制。方法 构建SOX1过表达细胞株，检测SOX1 mRNA和蛋白表达，CCK-8检测细胞增殖，细胞划痕及结晶紫染色检测细胞的迁移及克隆形成能力，Hochest染色实验检测细胞凋亡情况，Western blotting检测GSK-3β及Wnt/β-catenin通路相关蛋白表达水平。结果 SOX1过表达组mRNA显著高于对照组(P<0.01)。CCK-8 OD值及增殖曲线绘制表明SOX1过表达组增殖速率显著降低(P<0.05);SOX1过表达组细胞的迁移速率和克隆形成能力明显下降(P<0.05);显微镜下观察到SOX1过表达组细胞的皱缩明显，提示凋亡的发生；Western blotting检测结果表明，SOX1过表达组GSK-3β上调，Wnt信号通路相关基因β-catenin、Cyclin D1、c-Myc蛋白表达明显下降(P<0.05)。结论 SOX1通过抑制Wnt/β-catenin信号传导抑制食管癌细胞的增殖和促进凋亡。     

表皮型脂肪酸结合蛋白-5基因沉默对人卵巢癌细胞A2780增殖、凋亡及侵袭力的影响

目的探讨通过siRNA干扰技术沉默表皮脂肪酸结合蛋白(FABP)-5基因表达对人卵巢癌A2780细胞增殖、凋亡及侵袭的影响。方法以人卵巢癌A2780细胞为研究对象,根据FABP-5 mRNA编码序列设计并合成干扰siRNA序列,实施瞬时转染卵巢癌A2780细胞。将人卵巢癌A2780细胞分为FABP-5 siRNA组,阴性对照组、空白对照组。用逆转录聚合酶链式反应(RTPCR)和Western印迹法分别从mRNA水平和蛋白水平检测FABP-5基因的表达。细胞计数试剂盒(CCK)-8法测定细胞体外增殖能力;流式细胞技术(FCM)检测各组细胞周期和凋亡的变化情况,划痕愈合实验、细胞侵袭实验评价沉默FABP-5基因对人卵巢癌A2780细胞迁移及侵袭能力的影响。结果 RT-PCR和Western印迹法显示,FABP-5 siRNA组较阴性对照组和空白对照组的FABP-5 mRNA和蛋白相对表达水平均显著降低。FABP-5 siRNA组细胞的生长速度明显减慢,细胞周期阻滞在G0/G1期,S期细胞数减少;与阴性对照组和空白对照组相比,FABP-5 siRNA组细胞的凋亡率明显升高(P0.01),迁移、侵袭力显著下降(P0.05)。结论特异性干扰FABP-5基因表达可抑制人卵巢癌A2780细胞的迁移和侵袭能力,并抑制肿瘤细胞增殖,因此,FABP-5的siRNA序列可能成为治疗宫颈癌的有效靶点。