食管癌高发区人食管癌组织中DNA聚合酶β基因突变检测

目的：研究林州市食管癌高发区病例的食管癌组织中DNA聚合酶β基因(polβ)的突变情况。方法：利用PT-PCR、SSCP和序列分析对食管癌高发区50例食管癌及癌旁组织标本中polβ基因进行检测。结果：50例食管癌标本中有22例polβ发生变异,突变率为44％(22／50);而癌旁组织仅2例异常,突变率为4％(2／50)。突变形式有：58bp(177位到234位)的基因片段缺失;375位A→G(Ⅱe→Val),454位T→C(Phe→Ser),462位G→T(Glu→终止码),466位G→A(Gly→Glu),613位A→T(Lys→Ⅱe),648位G→C(Gly→Arg),660位A→G(Arg→Gly)。结论：食管癌高发区食管癌组织存在polβ基因突变,且突变率较高;该酶基因突变可能与食管癌的发生、发展相关。     

非食管癌高发区食管癌组织中DNA聚合酶β基因突变检测

目的：探讨非食管癌高发区病例的食管癌组织中聚合酶β基因的突变情况。方法：利用RT-PCR、SSCP及DNA序列分析的方法,对河南省非食管癌高发区25例食管癌及其癌旁组织中聚合酶β基因的变异情况进行分析。结果：25例食管癌组织标本中,5例SSCP结果异常,序列分析显示,1例613位A→T,导致氨基酸序列167位Lys→Ⅱe;2例660位A→G,导致第183位Arg→Gly;2例670位A→G,导致186位Glu→Gly;而对应的癌旁组织标本SSCP结果均无异常。结论：非高发区食管癌组织中有polβ突变存在。     

人食管癌组织中DNA聚合酶β基因突变的研究

目的：研究人食管癌组织中DNA聚合酶β（POLB）基因的突变情况。方法：利用逆转录聚合酶链反应（RT－PCR）、单链构象多态性（SSCP）和序列分析对30例人食管癌标本组织中DNA聚合酶β基因进行了检测。利用DNASIS、OMIGA等软件分析测序数据。结果：手术切除浸润癌组30例食管癌标本中有13例POLB发生变异,突变率为43．3％（13／30）;而癌旁对照29例正常,仅1例异常。早期原位癌组14标本中有5例POLB发生变异,突变率为35．7％（5／14）;另外,在1例食管鳞状上皮增生中也发现有POLB变异发生。在7例癌组织中存在相同58bp(177位到234位）的基因片段缺失;共有8种点突变形式：（1）375位A→G（Ile→Val),(2)454位T→C（Phe→Ser),(3)462位G→T（Tlu→终止码）,（4）466位G→A（Gly→Glu）,（5)613位A→T（Lys→Ile),(6)648位G→C（Gly→Arg),(7)660位A→G（Arg→Gly)(8)670位A→G（Glu→Gly)。结论：本研究首次在食管癌中发现POLB基因突变;该酶基因突变可能与食管癌的发生、发展相关。     

人食管癌组织DNA聚合酶β基因表达水平及定位

目的 :探讨人食管癌组织中DNA聚合酶 β基因 (polβ)表达水平及定位。 方法 :取 17例食管癌患者的癌组织、癌旁组织及其距癌灶 4～ 5cm处的正常组织。每块组织分 2等份 ,其中 1份常规石蜡包埋切片进行原位杂交 ,另 1份提取总RNA进行RNA斑点印迹 ,并以TLC扫描数值。结果 :蓝紫色杂交信号颗粒定位于胞质。弱信号见于正常组织的上皮基底细胞 ;癌旁组织的增殖细胞信号增强 ;癌组织分化较高的癌巢信号较弱 ;浸润的癌细胞信号强。原位杂交信号积分值与TLC扫描数值在癌、癌旁及正常组织中依次降低 (P <0 .0 5或P <0 .0 0 1)分别为 :癌组织 (32 .1± 7.8)和 (35 .8± 8.7) ,癌旁组织 (2 2 .1± 5 .3)和 (2 8.1± 6 .8) ,正常组织 (11.2± 2 .4 )和 (11.2± 2 .7)。结论 :人食管癌组织polβ基因呈高表达 ,DNA聚合酶 β较高表达可能是癌变早期事件。     

宫颈癌组织中DNA聚合酶β基因突变检测

目的：观察宫颈癌组织中DNA聚合酶β基因(polβ)突变的情况。方法：利用RT—PCR、SSCP及DNA序列分析法,对18例正常宫颈组织和21例宫颈癌组织(I～Ⅱ期10例,Ⅲ-Ⅳ期11例)标本中polβ基因的突变情况进行分析。结果：8例宫颈鳞癌组织(8／21)发现SSCP异常,正常宫颈组织无SSCP异常。2例正常宫颈组织polβ基因片段测序结果完全正确,而2例SSCP异常的癌组织polβ基因在660位核苷酸由A变为G。polβ在I～Ⅱ期及Ⅲ-Ⅳ期宫颈癌中突变率分别为10％(1／10)和63．64％(7／11),2者间差异有统计学意义(P=0．024)。结论：宫颈癌中存在DNA聚合酶β基因突变现象,可能与宫颈癌的发生发展相关。     

人食管癌组织中DNA聚合酶β与XRCCl表达的相关性

目的 :观察XRCC1及DNA聚合酶 β(POLB)在人食管癌、癌旁及相邻的正常组织内的表达。方法 :应用免疫组化方法对 17例食管癌患者的癌组织、癌旁组织及相邻的正常组织中POLB和XRCC1的免疫反应性 (IR)进行定位及表达水平的比较。结果 :POLB IR和XRCC1 IR在癌组织、癌旁组织及正常组织中依次减弱 (P <0 .0 1或P <0 .0 0 1) ,2者在上述组织中定位相似 ,且表达呈显著正相关 (P <0 .0 1)。结论 :POLB和XRCC1在癌旁组织表达的相对提高可能为癌变的早期事件 ;2者表达的定位近似 ,提示 2者在形态和功能上密切相关。     

食管癌DNA聚合酶β基因突变研究中分子生物学软件的应用

目的：尝试应用分子生物学软件研究DNA聚合酶β基因突变后,其编码蛋白、酶结构功能的改变。方法：应用DNASIS、OMIGA、SWISS-PORT等分子生物学软件对前期实验中检测到的DNA聚合酶β基因的某些突变进行推测、评价。结果：核酸一级结构的改变直接导致了相应蛋白一级结构、空间结构的改变。结论：可利用计算机模拟蛋白质空间结构进而推测其功能,但对被研究对象功能、结构的最终评价仍需依赖传统研究方法的证实。     

胃癌组织中DNA聚合酶β基因突变特点分析

目的:探讨人胃癌DNA聚合酶β(polβ)基因突变的特点. 方法:对32例人胃癌组织及32例正常对照组织中提取总RNA,进行RT-PCR,SSCP,对PCR产物克隆后以Sanger's法测序,并采用Omiga及Dansis软件分析结果. 结果:人胃癌标本的polβ基因突变率21.9%. 测序分析了7例SSCP异常中的3例,其突变分别为196位A→G,268位A→G,790位A→T;经OMIGA软件分析,这3个polβ的点突变均导致了氨基酸的改变,具体形式为:核酸196位A→G导致氨基酸28位Asn→Ser;核酸268位A→G导致氨基酸52位Lys→Arg;核酸790位A→T导致氨基酸226位Asp→Val. DNASIS软件Chou-fasman算法推测,polβ的196位A→G突变可以导致polβ酶蛋白的二级结构图明显改变. 结论:人胃癌组织polβ基因突变率达21.9%;这3个polβ的点突变都导致了氨基酸的改变,196位A→G突变可以导致polβ酶蛋白的二级结构明显改变.     

食管癌组织中发现DNA聚合酶β基因突变(摘要)

食管癌是一常见、多发性恶性肿瘤,尤以我国北方太行山区发病率最高.流行病学和病理学研究提示食管癌是一个多阶段、进行性发展过程;分子生物学研究发现组织细胞中有P53、Rb及ras等基因的突变及在食管癌不同阶段的表达.吴 教授对食管癌遗传学的研究发现:食管癌患者外周血细胞对DNA损伤后的修复能力降低,DNA脆性增加,癌组织细胞中有许多染色体明显改变,故可以推测在食管癌发生发展过程中,一定伴有DNA的损伤修复.然而,在食管癌中有无DNA复制和修复酶类的变化,尤其是DNA聚合酶β(DNA polymerase beta POLB)基因的突变,尚未见报道,为此,作者对河南省食管癌组织中DNA聚合酶β基因的变异情况进行了初步的探索和分析.     

胃癌组织中DNA聚合酶β基因突变检测

目的:了解胃癌组织中DNA聚合酶β(polβ)基因的突变情况。方法:利用RT-PCR、单链构象多态性(SSCP)和序列分析对38例胃癌组织及其相应癌旁正常组织标本polβ基因进行检测。利用DNASIS、OMIGA等软件分析测序数据,Chou&Fasman算法推测polβ氨基酸序列二级结构。结果:38例胃癌组织标本中SSCP异常9例(23.7%);而对应的癌旁正常组织均未见异常。polβ在低分化胃癌中的突变率达57.1%(8/14),而在中、高度分化胃癌中的突变率为4.2%(1/24),差异有统计学意义(P<0.05)。突变分别为196位A→G(28位Asn→Ser),268位A→G(52位Lys→Arg),790位A→T(226位Asp→Val)。其中196位A→G突变可导致polβ酶蛋白的二级结构明显改变。结果:胃癌组织中的polβ基因突变可能与胃癌的发生、发展有关。     

人肺癌组织中DNA聚合酶β表达及意义

目的:通过检测DNA聚合酶β(DNApolymerasebeta,DNApolβ)基因在人肺癌,人正常肺组织中蛋 白水平的表达情况来探讨其在肺癌发生发展过程中的作用和意义。方法:应用免疫组化的方法对67例肺癌, 27例正常肺组织中DNApolβ进行定位及蛋白表达低下率的比较,建立数据库,采用SPSS10.0软件对数据进 行统计学分析,以揭示DNApolβ蛋白表达与肺癌发生的关系。结果:在肺癌组织中,有50.7%(34/67)的人 DNApolβ表达低下;正常肺组织中,有14.80%(4/27)的人表达低下,二者表达低下率存在显著差异,χ2= 10.31,P<0.05,OR=5.92,95%C.I为(2.00,17.51),提示DNApolβ表达低下是肺癌发生的一个危险因素。 且DNApolβ表达与暴露因素如:肿瘤家族史、性别、吸烟状况有关,吸烟可以抑制其表达。肺鳞癌,细胞癌的 低下率远高于其他组织类型,有依鳞癌、小细胞癌、腺癌和其他类型依次降低的趋势χ2trend=9.36,P=0.02。 DNApolβ蛋白表达与TNM分期、细胞分化程度的高低、有无淋巴结转移、3年生存率没有显著相关。结论: DNApolβ表达在肺癌的发生中起着重要的作用,该基因的表达低下可能是肺癌发生的一个分子标志。     

食管癌中DNA聚合酶β的突变

目的研究DNA聚合酶β基因在采自食管癌高发区的食管癌标本中的突变情况.方法提取总RNA反转录合成cDNA,经PCR扩增后以SSCP检测其变异情况.结果在食管癌组织标本中存在pol β基因的突变:20例癌组织标本中发现9例突变(45%、9/20),癌旁组织中发现1例突变(5%、1/20).结论在食管癌组织标本中确实存在pol β基因的突变,推测在食管癌的的发生发展过程中pol β基因突变是一个始动因素,是各种致癌因子作用的枢纽,由于该基因的突变可能使得癌基因、抑癌基因如:ras、p53、Rb等的原发性损伤得不到及时正确修复,导致细胞周期的失控、增殖过多,促进恶性转化.     

宫颈癌组织中DNA聚合酶β基因突变检测

目的：探讨宫颈癌组织中有无DNA聚合酶β基因(polβ)突变。方法：采用RT-PCR法、PCR-SSCP分析法对12例正常宫颈组织、18例宫颈上皮内瘤样病变(CIN)及34例宫颈鳞癌组织进行poll3突变检测。结果：CIN及宫颈癌组织中存在polβ突变,宫颈癌组织中的突变率(13／34)高于CIN(2／18),后者高于正常宫颈组织。测序结果表明宫颈癌组织中polβ 660位发生A→G突变。结论：宫颈癌组织中的DNA聚合酶β基因突变可能与宫颈癌的发生发展有关。     

脑胶质瘤组织中DNA聚合酶β基因突变检测

目的:研究人脑胶质瘤组织中DNA聚合酶β基因(polβ)的突变情况。方法:应用RT-PCR及SSCP检测22例脑胶质瘤、4例脑膜瘤、3例垂体瘤及1例肺部转移性鳞癌标本中polβ的表达,利用DNASIS、OMIGA软件及Chou&Fasman算法对扩增产物进行序列分析及蛋白质二、三级结构分析。结果:脑胶质瘤组织中DNApolβ突变率为6/22,共8个突变位点,2例发生504位A→G(131位Lys→Glu)、748位A→G(212位His→Arg)突变,2者蛋白质二级结构亦明显改变;598位T→C(162位Val→Ala)突变2例,但2者蛋白质二级结构无明显改变;2例Ⅲ级星形细胞瘤分别有2个和3个突变位点,但其各有1个相应的氨基酸未发生变异。Ⅱ级以下脑胶质瘤及脑膜瘤、垂体瘤等良性脑肿瘤组织均未发现DNApolβ基因突变。1例肺癌脑部转移性鳞状细胞癌DNApolβ基因出现5个突变位点,737位A→C(208位Pro未变异)、744位T→G(211位Lue→Val)、830位C→G(239位Cys→Trp)、866位A→C(251位Pro未变异)、870位A→C(253位Arg未变异),但蛋白质二级结构未改变。蛋白质三维结构图显示脑胶质瘤组织中6个氨基酸变异位点中,5个位于掌部,1个位于拇指部。结论:脑胶质瘤细胞中存在DNApolβ基因突变,且这些突变位点均为DNApolβ基因(尤其是掌部)活化结构域。提示脑胶质瘤的发生和发展可能与DNApolβ基因突变有关。     

食品管癌中DNA聚合酶β的突变

目的：研究DNA聚合酶β基因在采自食管癌高发区的食管癌标本中的突变情况。方法：提取总RNA反应录合成cDNA，经PCR扩增后以SSCP检测其变异情况。结果：在食管癌组织标本中存在polβ基因的突变：20例癌组织标本中发现9例突变（45％、9／20），癌旁组织中发现1例突变（5％、1／20）。结论：在食管癌组织标本中确实存在polβ基因的变，推测在食管癌的发生发展过程中polβ基因突变是一个始动因素，是各种致癌因子作用的枢纽，由于该基因的突变可能使得癌基因，抑癌基因如ras,p53,Rb等的原发损伤得不到及时正确修复，导致细胞周期的失控，增殖过多，促进恶性转化。     

食管正常、癌前及癌变组织中DNA聚合酶β mRNA检测

目的观察不同演进过程食管组织中DNA聚合酶β(polβ)mRNA的表达.方法采用含有内对照的半定量RT-PCR方法,检测31例食管浸润癌(鳞癌27例,腺癌4例)、4例原位癌、6例不典型增生以及31例正常食管黏膜组织中polβ mRNA的表达.结果食管浸润癌、原位癌和不典型增生组织中polβ mRNA的表达水平差异无统计学意义(P＞0.05),但均高于正常食管黏膜组织中的表达水平(P均＜0.05).食管鳞癌和腺癌组织中polβ mRNA表达水平差异无统计学意义(P＞0.05).结果在食管癌组织中存在着polβ的高表达,且发生于癌变早期.     

前列腺癌及良性增生组织中DNA聚合酶β基因突变检测

目的：研究前列腺癌(Pca)及良性前列腺增生(BPH)组织中DNA聚合酶β基因(polβ)的突变情况。方法：采用RT—PCR、DNA序列分析技术对12例Pca及20例BPH组织中的polβ进行检测,并利用DNASIS、OMIGA等软件分析测序数据。结果：Pca组织中polβ突变率为4／12,BPH组织中polβ突变率为1／20。突变形式如下：①点突变：325位A→G转换(71位Glu→G1)),721位A→G转换(203位Glu→Gly),768位C→T转换(219位Gln→终止码),801位A→G转换(230位Lys→Glu),853位A→G转换(247位Glu→Gly),1071位A→G转换(320位Phe→Leu),177．188位CT→AA(22位Leu→Asn)。②58bp片段缺失(181～238位),导致移码及提前终止。结论：Pca组织中polβ的突变以点突变A→G转换为主要突变形式。181～238位的58bp的大片段缺失系国内外首次发现的突变形式DNA polβ突变可能与Pca的发生、发展密切相关。     

RNA斑点印迹法检测人食管癌DNA聚合酶β的基因表达

目的 :探讨人食管癌组织DNA聚合酶 β(polβ)RNA水平的表达。 方法 :提取 5 1例食管癌患者的手术标本组织 ,包括 :17例癌灶组织 ,17例癌旁组织 ,17例“正常”组织细胞总RNA ,以生物素标记的polβcDNA探针进行RNA斑点印迹。结果 :DNApolβRNA水平的表达癌组织高于癌旁组织 (P <0 .0 5 ) ,癌旁组织高于“正常”组织 (P <0 .0 5 ) ,癌组织高于“正常”组织 (P <0 .0 1)。结论 :人食管癌组织及癌旁组织的DNApolβ基因RNA水平表达显著高于“正常”组织 ,提示DNApolβ的过表达可能在食管癌的发生、发展中起 作用。