天丝饮对Aβ25-35所致阿尔茨海默病模型大鼠的影响

目的 研究天丝饮对侧脑室注射β-淀粉样蛋白（Aβ25-35）致阿尔茨海默病（AD）模型大鼠相关病理变化的作用.方法 将40只大鼠随机分为正常组、假手术组、模型组、天丝饮组,每组10只.采用单侧侧脑室注射Aβ25-35建立AD大鼠模型,Morris水迷宫检测各组大鼠空间学习记忆能力、苏木精-伊红（H-E）染色法观察各组海马神经元形态、比色法测量各组大鼠脑组织中超氧化物歧化酶（SOD）活力、丙二醛（MDA）含量.结果 与空白组、假手术组比较,模型组大鼠学习记忆能力明显减退（P＜0.01）,脑组织中SOD活力显著降低（P＜0.01）,MDA含量明显升高（P＜0.01）;与模型组比较,天丝饮组学习记忆能力得到明显改善（P＜0.01）,脑组织中SOD活力显著升高（P＜0.01）、MDA含量明显降低（P＜0.01）.结论 天丝饮对Aβ25-35诱导的AD模型大鼠的空间学习记忆障碍及神经元损伤均具有显著改善作用,其作用可能与其具有抗自由基,保护、营养神经元,抑制脑组织损伤有关.     

Aβ杏仁核注射对大鼠异常磷酸化tau蛋白表达的影响

目的：观察AD对异常磷酸化tau蛋白表达的影响。方法：本研究采用Aβ5～35片段单侧杏仁核注射，建立SD大鼠痴呆及记忆障碍动物模型。通过Morris水迷宫试验、放射免疫法、免疫组化法等观测大鼠空间学习记忆能力、胆碱能系统、tau蛋白异常磷酸化的改变。结果：模型大鼠的空间学习记忆能力明显障碍；ChAT活性及M受体Rt值均显著降低；海马及额皮层异常磷酸化tau蛋白AT8表达显著增高。结论：Aβ杏仁核单侧注射可诱导大鼠空间学习记忆障碍及胆碱能系统功能损害，同时伴有皮层、海马部位tau蛋白的异常磷酸化。AB是AD发生、发展的关键因素。     

电针对Aβ_（25～35）所致AD模型大鼠海马cAMP的影响

目的观察电针对β淀粉样蛋白25～35片段（Aβ25～35）所致阿尔茨海默病（Alzheimer＇s diseases,AD）模型大鼠环磷酸腺苷（cAMP）的影响。方法 12月龄雄性SD大鼠,按随机数字表分为四组,即正常组、假手术组、模型组、电针组,各10只。采用双侧海马一次性注射凝聚态Aβ25～35制备AD大鼠模型,电针组选取双侧肾俞穴、内关穴和大椎穴,接G6805-Ⅱ型电针治疗仪,2 Hz连续波,强度1 mA,通电20 min,每天1次,每周6次,共治疗2周。采用放射免疫法检测各组大鼠海马cAMP的变化。结果模型组大鼠海马cAMP的含量明显降低,与假手术组比较,差异有统计学意义（P〈0.01）;电针组大鼠海马cAMP含量与模型组比较有显著提高（P〈0.05）。结论电针改善AD大鼠学习记忆能力的机制之一可能是通过提高海马cAMP实现的。     

PTEN与磷酸化tau蛋白水平在Aβ25-35诱导的AD样细胞模型中的变化

目的探讨在Aβ25-35诱导人神经母细胞瘤细胞系SH-SY5Y细胞和大鼠胎鼠皮层原代神经元细胞的过程中PTEN及磷酸化tau(Ser396)蛋白水平的变化。方法 40μmol/L和20μmol/L的Aβ25-35分别孵育SH-SY5Y细胞和大鼠原代皮层神经元,孵育后的不同时间点MTT法测定细胞活力,显微镜观察细胞形态的变化,免疫印迹法观测各时间点磷酸化tau(Ser396)蛋白水平来确定模型的建立;同时观察在此过程中PTEN蛋白水平的变化。结果随着Aβ25-35孵育时间的延长,SH-SY5Y细胞和大鼠皮层原代神经元细胞逐渐出现细胞活力下降,细胞胞体变圆,突起回缩甚至消失,细胞间连接断裂等现象,细胞磷酸化tau(Ser396)蛋白水平于诱导后6h升高,12～24h达到高峰;PTEN蛋白水平于3h左右开始升高,6～12h达到高峰,后逐渐下降,48h甚至低于正常对照组,且PTEN蛋白水平的升高先于磷酸化tau(Ser396)蛋白水平的升高。结论 PTEN与Aβ25-35诱导的阿尔茨海默病样细胞模型的发生发展可能具有一定的关联性,在其发生早期PTEN表达可能增强。     

Aβ25-35单侧杏仁核注射对大鼠异常磷酸化tau蛋白激酶mRNA表达的影响

背景：β淀粉样蛋白酶是阿尔茨海默痴呆的主要致病因素,然而对于其神经毒性的具体作用机制目前尚不清楚,本研究的主要目的在于研究是否它能通过增加tau蛋白异常磷酸化从而促进痴呆的发生发展。 研究方法：采用Aβ25-35片段单侧杏仁核注射,建立SD大鼠痴呆及记忆障碍动物模型。免疫组化法检测AT8、PHF-1蛋白的表达,原位杂交法检测GSK-3、P38MAPK mRNA的表达。 结果：相比于对照组和假手术组,模型组大鼠额叶皮层tau蛋白异常磷酸化蛋白激酶GSK-3 mRNA、P38MAPK mRNA表达明显增强(GSK-3-mRNA: in CA2: 0.384±0.012 vs 0.190±0.015, 0.258±0.064; in frontal cortex: 0.398±0.018 vs 0.184±0.031, 0.218±0.049. P38MAPK mRNA: in CA2: 0.409±0.038 vs 0.161±0.041, 0.189±0.035; in frontal cortex: 0.423±0.070 vs 0.160±0.032, 0.203±0.053）;同时伴有异常磷酸化tau蛋白AT8、PHF-1表达 (AT8: in CA2: 0.318±0.037 vs 0.135±0.028, 0.136±0.031; in frontal cortex: 0.278±0.040 vs 0.130±0.028, 0.190±0.037. PHF-1:0.386±0.034 vs 0.139±0.010, 0.193±0.041; 0.395±0.050 vs 0.159±0.030, 0.190±0.044)显著增高。 结论：Aβ杏仁核单侧注射可通过增加GSK-3β和P38MAPK的表达从而促进阿尔茨海默痴呆的发生、发展。     

Aβ25-35诱导阿尔茨海默病模型大鼠海马神经元NT3及trkC的表达

观察Aβ_25-35诱导阿尔茨海默病（Alzheimer disease, AD）模型大鼠海马神经营养素3（neurotrophin-3,NT3）及其受体trkC的表达,并探讨其与AD的关系。方法：30只雄性Wistar大鼠随机分为对照组和模型组。采用立体定向下双侧海马注射Aβ_25-35建立AD模型,对照组大鼠采用相同方法注射等量生理盐水。2周后,用水迷宫实验测试大鼠学习和记忆功能;然后处死,光镜下观察海马组织结构,免疫组织化学法检测NT3和trkC蛋白的表达。结果：NT3与其受体trkC在两组大鼠海马各区表达变化不同。AD组大鼠海马CA1、CA2、CA3区NT3免疫反应阳性细胞数少于对照组,差异有统计学意义,尤以CA1和CA3区较为明显（P＜0.01）,而CA4区和hilar区NT3免疫反应阳性细胞数以及海马各区trkC免疫反应阳性细胞数在两组之间差异无统计学意义（P＞0.05）。结论：海马神经元NT3的表达含量减少而非其受体trkC的下调与AD模型大鼠学习和记忆功能损害相关,提示补充外源性NT3可有助于减轻Aβ_25-35的神经元毒性,从而改善其学习和记忆功能。     

Aβ25-35对体外培养大鼠神经干细胞分化的影响

目的 探讨β淀粉样蛋白（Aβ25-35）对体外培养神经干细胞分化的影响和机制.方法 分离培养新生SD大鼠经干细胞,加入10%的胎牛血清使其分化7 d时,一部分细胞用Aβ25-35作用12 h,观测细胞生长状态,运用免疫细胞化学和免疫蛋白印记迹术研究各组Tau蛋白在Ser396,Ser262位点磷酸化水平变化及活化型GSK-3β[pTyr279,216]的表达水平.结果 呈球形生长的神经干细胞在加入胎牛血清培养液后,逐渐从球的周边分化出神经细胞,长出神经细胞样的触突,在Aβ25-35作用下,分化细胞的突起粗大且生长速度较快.免疫细胞化学染色和Western-blot结果显示,所有分化细胞都有Tau[pS396]、Tau[pS262]、GSK-3β[pTyr279,216]表达,但经Aβ处理后表达量增高.结论 Aβ25-35可通过上调GSK-3β的表达提高Tau蛋白磷酸化水平,促进神经干细胞向神经细胞分化.     

阿魏酸钠对β淀粉样蛋白25-35诱导的体外培养神经细胞损伤的保护作用

目的研究阿魏酸钠(SF)对β淀粉样蛋白25-35(A β25-35)诱导的原代培养神经细胞损伤的保护作用.方法以原代培养孕17～18d的SD大鼠胎鼠的大脑皮层神经细胞为观察对象.倒置显微镜下观察给药前后神经细胞的形态学变化,用MTT比色实验检测神经细胞活性,依据LDH漏出率检测神经细胞膜的损伤程度,以MDA生成量推测生物膜不饱和脂肪酸过氧化程度.结果与正常对照组相比,A β25-35(20μmol/L)处理24h,可使神经细胞活性显著下降(P<001),SF(10μmol/L,50μmol/L,100μmol/L,500μmol/L, 1ol/L)能剂量依赖地减轻A β25-35的细胞毒性.结论 SF能够对抗A β25-35诱导的培养皮层神经细胞的损伤.     

侧脑室注射链脲霉素引起大鼠脑Aβ1-40、Aβ1-42和tau^202、tau^396．tau^404表达增加

目的 探讨用链脲霉素(Streptozotocin，STZ)阻断脑内胰岛素信号传导，引起脑能量代谢障碍与Aβ表达及tau蛋白过度磷酸化的关系。方法 24只SD大鼠随机分为实验组和生理盐水组，实验组双侧侧脑室注入STZ3mg/kg，第3天重复此剂量；生理盐水组手术操作相同，但注入等量的生理盐水代替STZ。21d后，采用免疫组化方法观测各组大鼠大脑皮层和海马区的Aβ1-40、Aβ1-42、tau^202、tau^396．tau^404阳性细胞表达。结果 与生理盐水组相比，实验绀皮层和海马Aβ1-40、Aβ1-42、tau^202、tau^396、tau^404阳性细胞明显增多。结论 侧脑室注射STZ可以引起脑内Aβ表达增多和tau蛋白过度磷酸化。     

钠氢交换蛋白1在β淀粉样蛋白25-35诱导大鼠阿尔茨海默病神经元模型中的作用

目的 探讨钠氢交换蛋白1（NHE1）的表达对AD神经细胞凋亡的影响及神经生长因子的保护作用。方法 培养大鼠大脑皮质神经元细胞,应用Aβ25-35构建AD细胞模型,并加入神经生长因子干预,四甲基噻唑蓝比色法（MTT）测定神经细胞活力,Western印迹分析法测NHE1及Capase3表达。结果 经Aβ25-35诱导的AD细胞模型NHE1表达抑制,神经生长因子可通过激活NHE1表达有效增强神经细胞活力（P＜0.01）,抑制Capase3表达（P＜0.01）,抑制神经元细胞凋亡。结论 NHE1表达抑制在AD神经元凋亡中发挥重要作用,NHE1表达增强可有效抑制细胞凋亡。     

天麻素对Aβ25-35诱导的Alzheimer病细胞模型的保护作用

目的研究天麻素(GAS)对诱导的阿尔茨海默病(AD)神经细胞的作用。方法以β-淀粉样肽25-35片段(Aβ25-35)20μmol/L诱导原代培养的大鼠大脑皮层、海马神经细胞建立AD细胞模型,以人参总皂甙作为阳性对照,通过形态学观察、MTT等方法检测细胞活力。结果与对照组比较,Aβ25-35诱导的培养神经元发生明显的形态学变化,MTT检测显示细胞活力明显下降,乳酸脱氢酶(LDH)释放增多,与对照组比较,差异有显著性(P<0.05);当预先加入不同质量浓度的天麻素、人参总皂甙时,Aβ25-35对神经细胞的损伤明显减轻,细胞活力明显增强,LDH释放减少,与实验对照组对比差异均有显著性(P<0.05)。结论天麻素具有预防和治疗AD的潜在功效。     

乙酰葛根素对 Aβ25-35诱导BV-2小胶质细胞活性的影响

目的：研究乙酰葛根素对β淀粉样蛋白（ Aβ25-35）诱导的BV-2小胶质细胞活性的影响。方法体外培养BV-2小胶质细胞,用Aβ25-35诱导小胶质细胞建立AD细胞模型,加入不同浓度的乙酰葛根素,显微镜下观察细胞的形态变化;MTT法检测细胞的存活率;ELISA法检测细胞中IL-1β,TNF-α的含量。结果 Aβ诱导后小胶质细胞由分枝状的静息状态转变为阿米巴样的激活状态,而乙酰葛根素可以减轻细胞发生的变化,细胞状态介于空白组与模型组之间;MTT显示乙酰葛根素不会对小胶质细胞的存活率产生影响;ELISA结果显示,与空白组相比,模型组的IL-1β,TNF-α表达水平明显升高,而乙酰葛根素能够降低Aβ诱导IL-1β,TNF-α的表达水平。结论乙酰葛根素能够抑制Aβ25-35诱导的小胶质细胞激活减轻炎性因子的分泌,对阿尔茨海默病具有保护作用。     

β-淀粉样蛋白25-35片段诱导PC12细胞凋亡

目的　探讨 β -淀粉样蛋白 2 5 - 35片段 (Aβ2 5-3 5)对体外培养的PC12细胞的毒性作用机制。方法　用四甲基偶氮唑蓝 (MTT)代谢率检测 ,光镜吖啶橙荧光染色术 ,透射电镜以及流式细胞仪技术研究Aβ2 5-3 5损伤PC12细胞的途径。结果　用Aβ2 5-3 5处理PC12细胞 2 4h ,Aβ2 5-3 5剂量依赖性地引起PC12细胞的MTT代谢率减少 ,荧光染色及电镜观察发现经Aβ2 5-3 5处理的PC12细胞表现出凋亡细胞的特征 ,流式细胞仪检测发现 ,对照组 2 0 μmol/L及 5 0 μmol/L的Aβ2 5-3 5组PC12细胞的凋亡率分别为 0 .0 8%± 0 .0 1% ,14 .8%± 1.13% ,2 5 .9%± 2 .34%。结论　Aβ对PC12细胞的损伤主要通过细胞凋亡的途径     

调心方对阿尔茨海默病大鼠学习记忆的影响

目的：观察调心方对阿尔茨海默病（AD）模型大鼠学习记忆等行为学及海马组织胆碱酯酶（CHE）和单胺氧化酶（MAO）的影响，探讨调心方抗AD的作用机制。方法：持续注射D-半乳糖法致亚急性衰老大鼠模型。根据脑立体定位图谱，用鹅膏蕈氨酸（IA）化学损毁大鼠双侧Meynert基底核。以“Y”型电迷宫进行学习记忆观察，用分光光度法测定大鼠海马CHE和MAO的活性。结果：调心方可以提高模型大鼠的记忆能力（P〈0．05），提高模型大鼠海马组织中CHE活性（P〈0．01），降低MAO活性（P〈0．01）。结论：调心方可以提高AD模型大鼠学习记忆能力。其作用机制可能与大鼠海马组织中CHE和MAO活性改变有关。     

调心方对β淀粉样蛋白所致大鼠海马神经元凋亡的调控作用

目的 探讨调心方的药效及作用机制。方法 原代培养大鼠海马神经元,Aβ 1-42诱导神经细胞毒模型。采用FDA与PI双染检测神经元存活率,Hoechst 33258染色、TUNEL判断神经元凋亡,免疫细胞化学研究Caspase-3表达,Northern Blot、RT-PCR研究凋亡相关基因(bcl-2、bax、c-jun、c-fos)表达。结果 神经元经Aβ 1-42处理后,活细胞数减少,染色质浓缩、核碎裂,TUNEL染色阳性神经元增多,Caspase3表达增加,bcl-2 mRNA表达减少,而bax与c-jun表达增加、c-fos的表达变化不明显。调心方可显著改善上述变化。结论 调心方对Aβ 1-42神经细胞毒有保护作用,可提高细胞存活率,抑制凋亡。其机制可能通过提高bcl-2 mRAN水平,降低bax和c-jun mRAN水平,减少Caspase-3表达而实现。     

β-淀粉样蛋白25-35杏仁核注射对大鼠海马Caspase-3及P38MAPK mRNA表达的影响

目的 观察β-淀粉样蛋白(AB)25-35对大鼠海马Caspase-3及P38MAPK mRNA表达的影响.方法 雄性Sprague-Dawley(SD)大鼠24只,随机分为正常对照、假手术、类阿尔茨海默病(AD)模型组,每组8只.类AD模型采用Aβ25-35片段单侧杏仁核注射建立.采用免疫组织化学法检测Caspase-3蛋白的表达,原位杂交法检测P38MAPK mRNA的表达.结果 类AD模型组大鼠的海马及额叶皮层Caspase-3及P38MAPK mRNA 表达的阳性细胞数均显著高于正常对照及假手术组(P值均＜0.01),光密度值亦均显著高于正常对照及假手术组(P值均＜0.05).结论 Aβ25-35杏仁核单侧注射可诱导大鼠P38MAPK活性增加,并进一步促进Caspase-3等凋亡蛋白的过度表达,促使神经细胞凋亡的发生.     

尼古丁对Aβ25-35诱导的细胞毒性拮抗作用

目的:研究尼古丁对神经细胞的保护作用及其机制。方法:通过检测细胞形态变化、细胞活力及细胞周期的变化,研究不同浓度尼古丁对PC12细胞的影响。结果:人β淀粉样蛋白25-35(Aβ25-35)对PC12的细胞毒性作用呈时间、剂量依赖。尼古丁浓度为1μmol/L至100μmol/L时具有细胞保护作用,但不能逆转Aβ25-35对于细胞的损伤,而高浓度尼古丁(1 000μmol/L)则失去细胞保护作用。结论:Aβ25-35诱导细胞活性下降具有时间、剂量依赖性,此作用可被适宜浓度的尼古丁部分拮抗。     

Aβ25-35诱导PC12细胞周期变化与凋亡的关系

目的探讨β-淀粉样肽25-35(βamyloid peptide-25-35,Aβ25-35)诱导体外去血清培养的PC12细胞周期变化与凋亡的关系。方法用常规的去血清培养使细胞同步于G0期,采用终浓度为0~45μmol/L Aβ25-35处理PC12细胞24h,用MTT比色法分析细胞存活率;Hoechst33258荧光染色观察细胞核凋亡的形态学改变;DNA电泳观察细胞凋亡时特异性梯状条带(DNA-Ladder);流式细胞仪检测分析细胞周期的改变与凋亡的时间关系。结果随着Aβ25-35剂量的增加,PC12细胞存活率降低(P<0.01);用25μmol/L Aβ25-35处理PC12细胞12、24h,荧光染色结果显示24h出现典型的凋亡,表现为核固缩、核碎裂;DNA电泳结果显示凋亡特异性梯状条带;流式细胞仪分析表明去血清培养24h可使约90%PC12细胞停滞于G0/G1期,25μmol/L Aβ25-35诱导组8、16、24h与对照组比较,S期细胞比例增加(P<0.01),16h后细胞凋亡率增加(P<0.01),可见明显的亚二倍体峰(Ap峰)。结论Aβ25-35降低去血清培养的PC12细胞存活率,诱导同步化于G0/G1的PC12细胞重新进入细胞周期并随之出现凋亡,提示Aβ25-35诱导的PC12细胞凋亡可能与细胞周期紊乱有关。     

调心方有效部位TX0201对类AD模型大鼠脑内APP mRNA与Caspase-3表达的影响

目的：观察调心方有效部位TX0201对Aβ1-40双侧杏仁核注射所致的类阿尔茨海默病（AD）模型大鼠脑内APP mRNA、Caspase-3表达的影响。方法：应用β淀粉样蛋白1-40片段（Aβ1-40）注射入大鼠双侧杏仁核建立类AD的动物模型。实验设正常对照组、类AD模型组、TX0201组、调心方组、安理申组,均采用灌胃给药20d;分别用RT—PCR法、免疫组化法检测大鼠脑部皮层和海马的APP mRNA、Caspase-3表达。结朵：TX0201和调心方均能明显降低大鼠皮层、海马APP（MPI） mRNA和APP（KPI） mRNA的表达。模型大鼠大脑海马CA2区和皮层Caspase-3蛋白阳性细胞表达明显增多,调心方和TX0201均能明显调低Caspase-3蛋白阳性细胞的表达。结论：TX0201可能通过降低皮层、海马部位APP mRNA的表达,下调Caspase-3,减轻神经细胞凋亡,从而发挥保护神经元作用。     

齐墩果酸对Aβ25-35诱导PC12细胞凋亡的影响及机制研究

目的 研究琐琐葡萄提取物齐墩果酸(oleanolic acid,OA)对β淀粉样蛋白25-35(Aβ25-35)诱导PC12细胞凋亡的保护作用及其机制.方法 采用20μmol/L Aβ25-35诱导PC12细胞损伤构建阿尔茨海默病(AD)细胞模型,20、40和80μg/mL OA干预,CCK-8法检测各组细胞的存活率,乳酸脱氢酶(LDH)法检测细胞膜通透性及完整性,Annexin V-FITC流式细胞术检测细胞凋亡率,实时荧光定量PCR(real-time PCR)检测细胞凋亡相关基因bcl-2和bax表达.结果 与模型组比较,20、40和80μg/mL OA预处理可有效提高PC12细胞存活率,减少乳酸脱氢酶渗漏,降低细胞凋亡率,下调bax mRNA表达(P＜0.05),40、80μg/mL OA预处理上调bcl-2 mRNA表达(P＜0.05).结论 OA对Aβ25-35诱导的PC12细胞凋亡损伤具有明显的保护作用,其机制可能与OA通过调节细胞凋亡相关基因表达,从而抑制凋亡有关.