晚期糖基化终产物在动脉粥样硬化中的作用

2型糖尿病患者动脉粥样硬化的发病率明显增高。糖尿病通过增加常规的危险因素(如血脂异常、高血压)或糖尿病特有的危险因子(如晚期糖基化终产物AGEs),促进动脉粥样硬化的发展。AGEs作为蛋白质或脂质与还原糖糖基化的终产物,在血管细胞中通过与RAGE结合促进炎症因子的表达,参与动脉粥样硬化的发展。近年来,关于AGEs及其受体(RAGE)对糖尿病动脉粥样硬化影响的研究较为深入。本文旨在对近年来有关AGEs/RAGE在糖尿病加速的动脉粥样硬化中作用的研究进展作一综述。     

吡哆胺对体外晚期糖基化及其终产物形成的抑制作用

目的体外观察吡哆胺对晚期糖基化和晚期糖基化终产物(AGEs)形成的抑制作用。方法应用牛血清白蛋白-葡萄糖试验和N-乙酰-甘氨酰-赖氨酸甲基酯-核糖两种体外试验,观察吡哆胺对糖基化反应及AGEs形成的抑制效果。结果牛血清白蛋白-葡萄糖试验显示,吡哆胺对糖基化反应具有明显抑制效果。在50 mmol/L和200 mmol/L葡萄糖浓度下,当吡哆胺浓度为50 mmol/L时,相对抑制率均在50%以上。200 mmol/L吡哆胺对糖基化的抑制作用最强,其相对抑制率分别达到92.12%和86.73%。N-乙酰-甘氨酰-赖氨酸甲基酯-核糖试验证明,吡哆胺能明显抑制晚期糖基化产物AGEs的形成。随着吡哆胺剂量的增大,吡哆胺对AGEs形成的抑制作用明显增强。结论吡哆胺对体外晚期糖基化反应和AGEs形成有明显抑制作用。     

晚期糖基化终产物诱导大鼠腹膜间皮细胞上皮-间叶转化

目的探讨晚期糖基化终产物对大鼠腹膜间皮细胞上皮-间叶转化(EMT)的影响,建立大鼠腹膜间皮细胞EMT模型。方法体外培养的大鼠腹膜间皮细胞经含40 mmol/L晚期糖基化终产物(AGEs)、80 mmol/L AGEs的M199培养基分别培养48、72 h;以正常M199培养基和含80 mmol/LBSA的M199培养基为对照。采用相差显微镜观察细胞形态学改变,应用实时定量PCR法检测间皮细胞E-cadherin、α-SMA、Collagen I、TGF-β1、VEGF mRNA的表达;应用Western blot检测E-cadher-in、α-SMA蛋白的表达;应用ELISA法检测间皮细胞TGF-β1、VEGF蛋白表达水平。结果①AGEs(40 mmol/L、80 mmol/L)刺激后,大鼠腹膜间皮细胞由典型的上皮细胞形态逐渐变为梭形及不规则形,类似肌成纤维细胞;②AGEs(40 mmol/L、80mmol/L)刺激后,大鼠腹膜间皮细胞α-SMA、Collagen I、TGF-β1、VEGF mRNA和α-SMA、TGF-β、VEGF蛋白表达水平显著增加(P<0.05);③AGEs(40 mmol/L、80 mmol/L)刺激后,大鼠腹膜间皮细胞E-cadherin mRNA和E-cadherin蛋白表达水平显著下降(P<0.05)。结论 AGEs能上调α-SMA、Collagen I、TGF-β、VEGF表达和下调E-cadherin表达,AGEs诱导大鼠腹膜间皮细胞EMT。     

microRNA-192在晚期糖基化终产物诱导人腹膜间皮细胞上皮-间叶转化中的作用

目的探讨microRNA-192(miR-192)对晚期糖基化终产物(AGEs)诱导人腹膜间皮细胞上皮-间叶转化(EMT)的调控作用。方法人腹膜间皮细胞、转染miR-192抑制物后人腹膜间皮细胞和转染miR-192抑制物阴性对照的人腹膜间皮细胞在含AGEs的培养基培养72 h,以M199培养基和含80 m M BSA的M199培养基为对照,然后运用实时荧光定量PCR法检测miR-192和mRNA的表达情况,运用蛋白质印迹法检测蛋白的表达情况。结果在AGEs刺激后,人腹膜间皮细胞miR-192、胶原蛋白I(Collagen I)mRNA、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)mRNA和蛋白表达水平显著上升(P0.05),而E-钙黏蛋白(E-cadherin)mRNA和蛋白表达水平显著下降(P0.05)。与转染miR-192抑制物阴性对照的人腹膜间皮细胞相比,转染miR-192抑制物的人腹膜间皮细胞miR-192、Collagen I mRNA、α-SMAmRNA和蛋白表达水平显著下降(P0.05),而E-cadherin mRNA和蛋白表达水平显著上升(P0.05)。结论 AGEs可能通过上调miR-192表达诱导人腹膜间皮细胞EMT。miR-192抑物可能通过下调miR-192表达阻止AGEs诱导人腹膜间皮细胞EMT。miR-192在AGEs诱导人腹膜间皮细胞EMT中起重要调控作用。     

β-淀粉样蛋白和糖基化终产物的血清含量与脑血管病的关系

目的研究人急性脑梗死（acute cerebral infarction，ACI）、脑出血（intracerebral hemorrhage，ICH）后血清β-淀粉样蛋白（β-amyloid protein，Aβ）和糖基化终产物（advanced goycosylation end products，AGEs）的含量变化。探讨二者与脑血管病发病的可能机制。方法采集ACI、ICH患者血清标本，应用放射免疫分析法检测AB，流动注射分析法测定AGEs，同时与正常对照组比较。结果ACI组患者AB（1．39±0．27）mg／ml，AGEs（13．28±1．22）μg／ml，ICH组AB（1．32±0．19）mg／ml，AGEs（12．97±1．43）μg／ml，正常对照组AB（1．05±0．17）mg／ml，AGEs（10．01±1．36）μg／ml，脑血管病组均高于正常对照组，差异具有显著性，P〈0．05；且AB和AGEs之间呈正相关关系（r=0．740，P〈0．01）。结论AB与AGEs可能是脑血管病发病的共同危险因素，推测两因素参与脑血管损伤导致脑血管病。     

晚期糖基化终产物在糖尿病诱发动脉粥样硬化中的作用

糖尿病的发病率正日益提高。高血糖作为糖尿病的重要指征,通过非酶促的糖基化反应促进晚期糖基化终产物（AGEs）的生成。而AGEs在血液和组织中沉积,通过直接修饰蛋白质使基质功能和脂质代谢紊乱,通过受体介导的信号传导机制与参与动脉粥样硬化的细胞作用,促进动脉粥样硬化病变。     

线粒体功能障碍在晚期糖基化终产物致肾小球内皮细胞通透性增加中的作用机制

目的 探讨晚期糖基化终产物(AGEs)对大鼠肾小球内皮细胞(r GEn C)通透性的影响及线粒体功能障碍在其中的作用。方法 采用原代培养的r GEn C,予AGEs 80 mg/L作用24 h,采用跨内皮细胞电阻抗和异硫氰酸荧光素标记的牛血清白蛋白滤过率观察通透性的变化,Mito SOX试剂盒检测细胞内活性氧,JC-1荧光标记法检测线粒体膜电位(△Ψm),荧光素酶检测系统测定三磷酸腺苷(ATP)的生成,蛋白免疫印迹法检测NF-E2相关因子2(Nrf2)的表达。结果 AGEs可引起r GEn C通透性升高,活性氧产生增加,采用叔丁基对苯二酚(t BHQ)(20μmol/L)、N-乙酰半胱氨酸(NAC)(10 mmol/L)和抗AGE受体抗体(100 mg/L)预处理后,上述AGEs作用被抑制。AGEs可引起r GEn C△Ψm下降,ATP和Nrf2减少,而anti-RAGE抗体可抑制△Ψm下降和ATP减少,t BHQ则能抑制△Ψm下降和Nrf2减少。结论 AGEs可导致r GEn C线粒体功能障碍,引起活性氧产生增加,从而导致r GEn C间通透性增加。     

晚期糖基化终产物检测在慢性血液透析病人中的意义

晚期糖基化终产物(AGE)的水平在糖尿病患者的循环和组织中明显增高，其结果将引起各种组织的病理改变，最终导致糖尿病的慢性并发症。近年来发现慢性肾功能衰竭(CRF)病人的循环和组织中AGE水平亦明显增加，其程度甚至高于肾功能正常的糖尿病患者，提示AGE可能参与了CRF远期并发症的发生。本研究对规律血液透析(HD)的糖尿病和非糖尿病CRF患者同时进行AGE检测，旨在探讨其临床意义。     

肥胖儿童血清晚期糖基化终产物的变化及其临床意义

目的 评价肥胖儿童血清晚期糖基化终产物(AGEs)在肥胖儿童心血管病中的临床意义.方法 采用标准方法 进行体重分组,检测血压,以RF-540荧光分光光度计测定20例肥胖儿童及20例肥胖伴高血压和20名正常体重儿童(对照组)的血清AGEs含量.结果 肥胖组、肥胖伴高血压组及正常对照组AGEs分别为(7.373±1.816)、(10.971±0.861)、(4.830±1.056)mg/L,肥胖儿童组及肥胖伴高血压组儿童血清AGEs明显高于对照组,差异均有统计学意义(t值分别为5.41,20.16,P均<0.05).肥胖组与肥胖伴高血压组比较血清AGEs亦升高且差异有统计学意义(t=8.01,P<0.05).结论 肥胖及肥胖伴高血压儿童血清AGEs明显升高,AGEs可能参与了儿童心血管疾病的发生.     

晚期糖基化终产物与冠心病发病机制的研究进展

晚期糖基化终产物(AGEs)密切参与了血管平滑肌细胞(VSMCs)分化与增殖以及冠心病等心血管疾病的病理生理过程。AGEs能通过单核细胞趋化蛋白(ERK)、丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶(Akt)信号通路来诱导VSMCs的自噬作用,可依赖骨髓基质细胞衍生因子-1(SDF-1)/趋化因子受体CXCR4轴信号通路促进心肌微血管内皮细胞(CMECs)的增生。AGEs-2和AGEs-3上调了单核细胞AGEs受体(RAGE)的表达。AGEs能抑制内皮祖细胞(EPCs)的增殖、迁移和黏附功能并诱导EPCs凋亡;能增加平滑肌细胞结缔组织因子(CTGF)mRNA和蛋白质的表达,刺激心肌成纤维细胞增殖并分泌转化生长因子-β1(TGF-β1),同时诱导Smad2及Smad4的表达。羧甲基赖氨酸(CML)/RAGE轴通过主动脉平滑肌成骨细胞的分化,诱导巨噬细胞凋亡,从而使AGEs在糖尿病动脉粥样硬化中发挥重要作用。可溶性RAGE(sRAGE)可作为RAGE配体的诱饵来防止动脉粥样硬化,其灵敏度和阴性预测值在判定冠状动脉介入治疗(PCI)术后再狭窄方面均高于AGEs/sRAGE比值。ALT-711是一种AGEs的裂解剂,能明显抑制AGEs介导的活性氧(ROS)产生、细胞外信号调节激酶磷酸化及环氧合酶-2的表达;色素上皮衍生因子(PEDF)能抑制AGEs诱导的血小板CD40配体(CD40L)表达,从而有可能成为预防冠心病的一个治疗靶点。他汀类药物亦能抑制AGEs诱导主动脉平滑肌细胞的增殖及ROS的产生。通过以上诸多因素的研究,可揭示冠心病的某些发病机制,为相应干预药物的研究及调整临床治疗策略提供依据和方向。     

Aβ25-35致PC12细胞核酸、蛋白质氧化损伤及依达拉奉的保护作用

目的 研究依达拉奉对淀粉样β蛋白25-35（Aβ25-35）诱导的PC12细胞核酸、蛋白质氧化损伤的保护作用。方法 实验对象分为三组：依达拉奉保护组（依达拉奉20μmol／L,Aβ25-35 30 μmol／L）、Aβ25-35干预组（Aβ25-35 30 μmol／L）和正常对照组。采用MTT法测定细胞生存率；慧星法测定DNA单链损伤；ELISA法测定羰基蛋白含量；比色法测定羟自由基（．OH）并计算，OH清除率。结果 与正常对照组相比，Aβ25-35干预组细胞生存率降低。DNA单链损伤明显加重，细胞内羰基蛋白含量升高（P均〈0．001）。依达拉奉保护组与Aβ25-35干预组相比，细胞生存率明显升高，DNA单链损伤明显减轻，细胞内羰基蛋白含量减低（P〈0．001或P〈0．01），但都未达到正常水平。依达拉奉对．OH的有效清除率可高达79．98％。结论 依达拉奉能够通过清除．OH来减轻DNA损伤。并能减少细胞内蛋白质氧化产物的生成，具有神经保护作用。     

Targeting the receptor for advanced glycation end products (RAGE) in type 1 diabetes

Type 1 diabetes (T1D) is one of the most common chronic diseases manifesting in early life, with the prevalence increasing worldwide at a rate of approximately 3% per annum. The prolonged hyperglycaemia characteristic of T1D upregulates the receptor for advanced glycation end products (RAGE) and accelerates the formation of RAGE ligands, including advanced glycation end products, high-mobility group protein B1, S100 calcium-binding proteins, and amyloid-beta. Interestingly, changes in the expression of RAGE and these ligands are evident in patients before the onset of T1D. RAGE signals via various proinflammatory cascades, resulting in the production of reactive oxygen species and cytokines. A large number of proinflammatory ligands that can signal via RAGE have been implicated in several chronic diseases, including T1D. Therefore, it is unsurprising that RAGE has become a potential therapeutic target for the treatment and prevention of disease. In this review, we will explore how RAGE might be targeted to prevent the development of T1D.     

依达拉奉对淀粉样β蛋白25～35致PC12细胞氧化损伤的神经保护作用

目的：观察特异性清除羟自由基的神经保护剂依达拉奉对淀粉样β蛋白25-35诱导的PC12细胞氧化损伤的保护作用。方法：实验于2005-03／07在吉林大学中日联谊医院神经内科进行。将培养的PC12细胞分为3组：①正常对照组：加入含体积分数0．25的胎牛血清的DMEM维持液培养。②依达拉奉预处理组：加入依达拉奉20μmol／L预处理12h，然后加入淀粉样β蛋白25～35 30μmol／L继续孵育24h。③淀粉样B蛋白25～35干预组：淀粉样β蛋白25～35 30μmol／L孵育24h。采用MTT法测定细胞生存率；采用ELISA法测定羰基蛋白和晚期糖基化终产物的含量；硫代巴比妥酸法测定丙二醛的浓度。结果：①3组细胞生存率比较：正常对照组为（100．0&;#177;5.7）％，依达拉奉预处理组显著高于淀粉样β蛋白25～35干预组[（86．4&;#177;17．7炀，（42．5&;#177;9．4）％，P〈0．001]。②3组细胞内羰基蛋白含量比较：正常对照组为（0．35&;#177;0．09）μmol／g，依达拉奉预处理组显著低于淀粉样β蛋白25～35干预组[（0．41&;#177;0．12），（0．81&;#177;0．17）μmol／g，P〈0.01]。③3组晚期糖基化终产物水平比较：正常对照组为（12．21&;#177;3．26）mg／L，依达拉奉预处理组显著低于淀粉样β蛋白25-35干预组[（14.65&;#177;4．25），（26．57&;#177;5，18）mg／L，P〈0．01]。④丙二醛浓度：正常对照组为（4．11&;#177;0．98）μmol／L，依达拉奉预处理组显著低于淀粉样β蛋白25～35干预组[（4．92&;#177;1．30），（7.58&;#177;1．01）μmol／L，P〈0.01]。结论：依达拉奉能够减少淀粉样β蛋白25～35对PC12细胞内蛋白质氧化产物、晚期糖基化终产物及脂氧化终末产物的生成，具有神经保护作用。     

依达拉奉对淀粉样β蛋白25～35致PC12细胞氧化损伤的神经保护作用

目的:观察特异性清除羟自由基的神经保护剂依达拉奉对淀粉样β蛋白25～35诱导的PC12细胞氧化损伤的保护作用。方法:实验于2005-03/07在吉林大学中日联谊医院神经内科进行。将培养的PC12细胞分为3组:①正常对照组:加入含体积分数0.25的胎牛血清的DMEM维持液培养。②依达拉奉预处理组:加入依达拉奉20μmol/L预处理12h,然后加入淀粉样β蛋白25～3530μmol/L继续孵育24h。③淀粉样β蛋白25～35干预组:淀粉样β蛋白25～3530μmol/L孵育24h。采用MTT法测定细胞生存率;采用ELISA法测定羰基蛋白和晚期糖基化终产物的含量;硫代巴比妥酸法测定丙二醛的浓度。结果:①3组细胞生存率比较:正常对照组为(100.0±5.7)%,依达拉奉预处理组显著高于淀粉样β蛋白25～35干预组[(86.4±17.7)%,(42.5±9.4)%,P<0.001]。②3组细胞内羰基蛋白含量比较:正常对照组为(0.35±0.09)μmol/g,依达拉奉预处理组显著低于淀粉样β蛋白25～35干预组[(0.41±0.12),(0.81±0.17)μmol/g,P<0.01]。③3组晚期糖基化终产物水平比较:正常对照组为(12.21±3.26)mg/L,依达拉奉预处理组显著低于淀粉样β蛋白25～35干预组[(14.65±4.25),(26.57±5.18)mg/L,P<0.01]。④丙二醛浓度:正常对照组为(4.11±0.98)μmol/L,依达拉奉预处理组显著低于淀粉样β蛋白25～35干预组[(4.92±1.30),(7.58±1.01)μmol/L,P<0.01]。结论:依达拉奉能够减少淀粉样β蛋白25～35对PC12细胞内蛋白质氧化产物、晚期糖基化终产物及脂氧化终末产物的生成,具有神经保护作用。     

罗格列酮对糖基化终产物诱导的大鼠心肌成纤维细胞及胶原蛋白合成的影响

目的探讨罗格列酮(RGZ)对糖基化终产物(AGEs)诱导的大鼠心肌成纤维细胞(CFs)及胶原蛋白合成的影响。方法采用胰酶消化法和差速贴壁分离法获取CFs,经AGEs诱导,并给予不同浓度RGZ干预48 h,收集培养上清液,应用四甲基偶氮唑盐比色法(MTT)检测不同浓度RGZ对AGEs作用下的CFs增殖的影响;应用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测干预前后胶原蛋白Ⅰ、Ⅲ含量。结果与AGEs 0 mg/L组比较,经不同浓度AGEs诱导后,各组CFs OD490 nm值有所升高,且随AGEs浓度的增加而呈递增趋势;与未干预组比较,各干预组OD490 nm值、胶原蛋白Ⅰ、Ⅲ含量均显著降低,且随RGZ浓度的增加呈递减趋势(P0.05或P0.01)。结论 RGZ对AGEs诱导的CFs增殖及促进胶原蛋白Ⅰ、Ⅲ合成作用具有明显的抑制效应,且抑制程度呈浓度依赖性,可有效改善心肌纤维化状态。     

骨形成蛋白-7对晚期糖基化终产物诱导大鼠腹膜间皮细胞上皮-间叶转化的影响

目的探讨骨形成蛋白-7(BMP-7)对晚期糖基化终产物诱导大鼠腹膜间皮细胞上皮-间叶转化(EMT)的影响。方法晚期糖基化终产物诱导发生上皮-间叶转化的体外培养大鼠腹膜间皮细胞,分别经含5 ng/mL及80 mmol/L晚期糖基化终产物的M199培养基和含10 ng/mL BMP-7及80 mmol/L晚期糖基化终产物的M199培养基培养48 h,以含80 mmol/L晚期糖基化终产物的M199培养基为对照,应用实时定量PCR法检测间皮细胞E-cadherin、α平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、Ⅰ型胶原(Collagen I)、转化生长因子β1(TGF-β1)、血管内皮生长因子(VEGF)mRNA的表达;应用Western印迹法检测E-cadherin、α-SMA蛋白的表达;应用ELISA法检测间皮细胞TGF-β1、VEGF蛋白表达水平。结果 BMP-7作用后,上皮-间叶转化的大鼠腹膜间皮细胞E-cadherin mRNA和E-cadherin蛋白表达水平显著增加(P<0.05)。BMP-7作用后,上皮-间叶转化的大鼠腹膜间皮α-SMA、Collagen I、TGF-β1、VEGFmRNA和α-SMA、TGF-β、VEGF蛋白表达水平显著下降(P<0.05)。结论 BMP-7能上调上皮-间叶转化的大鼠腹膜间皮细胞E-cadherin表达和下调α-SMA、Collagen I、TGF-β、VEGF表达,BMP-7能逆转晚期糖基化终产物诱导大鼠腹膜间皮细胞EMT。     

脂质体槲皮素对糖尿病大鼠视网膜糖基化终产物生成及受体表达的影响

目的观察脂质体槲皮素（LQ）对糖尿病（DM）大鼠视网膜糖基化终产物（AGEs）生成及受体（RAGEmRNA）表达的影响。方法采用蒸发-高压均质法制备LQ悬浊液,链脲佐菌素（STZ）法诱导DM大鼠模型,并随机分为DM模型组、LQ低、中、高剂量及氨基胍灌胃组;连续给药12周后,免疫荧光法、RT—PCR方法分别检测DM大鼠视网膜中AGEs沉积情况及RAGEmRNA的表达。结果与DM模型组结果（AGEs：0．922±0．005;RAGEmRNA：1．192±0．098）比较,LQ各组及氨基胍组视网膜中AGEs沉积减少,RAGEmRNA表达也降低（P〈0．05）,以LQ中剂量组（AGEs：0．734±0．007;RAGEmRNA：0．724±0．028）降低最为明显（P〈0．01）。结论LQ可通过有效减少DM大鼠视网膜中AGEs的沉积,下调RAGEmRNA的表达。